專利名稱：一種以高效氯氟氰菊酯為底物的降解菌株的篩選方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物降解農(nóng)藥殘留領域，具體的說是一種以高效氯氟氰菊 酯為底物的降解菌株的篩選方法。 技術背景高效氯氟氰菊酯商品名為功夫菊酯，屬于擬除蟲菊酯類殺蟲劑中含氟 的一種新型農(nóng)藥。由于可兼治螨類，并且用量遠遠低于有機磷類殺蟲劑， 深受農(nóng)民的歡迎。在大量推行該類農(nóng)藥使用的同時，也發(fā)現(xiàn)了其負面效應。根據(jù)我國農(nóng) 藥毒性分級標準，功夫菊酯屬中等毒性殺蟲劑。對鳥類低毒，對蜜蜂、蠶、 魚類及水生生物劇毒。研究表明，功夫菊酯攻毒可以使鯉魚紅細胞的滲透脆性增加，降低紅細胞膜的流動性，抑制紅細胞ATP酶的活性，使紅細胞 形態(tài)發(fā)生改變，并使紅細胞核的核膜發(fā)生溶解。對魚類抗氧化系統(tǒng)損傷作 用明顯。蝦體受其影響表現(xiàn)為無氧代謝加強，有氧代謝和酯類降解代謝減 弱，正常的物質代謝平衡被破壞，機體所需能量減少，免疫力和抵抗外界環(huán)境的能力均明顯降低；由于功夫菊酯影響，有可能誘發(fā)蝦病的爆發(fā)或導 致蝦的大批量死亡。一般認為功夫菊酯對哺乳類動物是安全的，但是這類化學農(nóng)藥的大量 使用造成了環(huán)境的嚴重污染、生態(tài)平衡的嚴重破壞，從而危害了人類健康。 尤其是谷物、水果、蔬菜等食品中殘留的低濃度農(nóng)藥進入人體所造成的慢 性和亞慢性毒性問題，更不可忽視。為此，相關標準也有了嚴格的規(guī)定。歐盟在進口茶葉農(nóng)殘新標準中，將功夫菊酯殘留量定為lmg/kg。中華人民 共和國國家標準GB18406. 1-2001農(nóng)產(chǎn)品安全質量無公害蔬菜安全要求指 出，功夫菊酯在葉類菜農(nóng)藥中最高殘留量為0. 2mg/kg。由于功夫菊酯的大范圍使用，不僅使農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)受損，而且對水生生 物也造成了危害。因此，篩選出可以高效率降解功夫菊酯的微生物，降低 作物農(nóng)藥殘留量，減少對水生生物的影響，成為了迫切要求深入探討與解 決的問題。從目前殺蟲劑類微生物降解研究現(xiàn)狀來看，國內外對降解菌株的分離篩 選和代謝途徑研究取得了一些進展，但在擬除蟲菊酯類的微生物降解方面 研究相對比較薄弱，分離獲得能夠降解擬除蟲菊酯類的菌株很少。相關降 解菌劑，酶制劑未見報道。 發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于提供一種以高效氯氟氰菊酯為底物的降解菌株的篩 選方法。4為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所釆用的技術方案為 篩選方法1) 菌樣的富集馴化將5-10g菌樣接種于含高效氯氟氰菊酯的80-100ml 富集培養(yǎng)基中進行轉接培養(yǎng)，每次轉接培養(yǎng)條件為25-3(TC、 130-200r/min 搖床培養(yǎng)5-10天，共轉接4-7次，轉接量按體積百分比計每次培養(yǎng)液5-10% 接種于含高效氯氟氰菊酯逐漸增加的80-100ml富集培養(yǎng)基中，待用；其中高 效氯氟氰菊酯首次加入量25mg/L,而后以25-50mg/L逐漸增加，菌樣首次加 入富集培養(yǎng)基中同時加入10-20粒玻璃珠；2) 篩選按體積百分比5-20%的接種量將步驟1)中的富集培養(yǎng)菌液接 種于含終濃度為50-150mg/L高效氯氟氰菊酯的60-100ml基礎培養(yǎng)基中，進 行轉接培養(yǎng)，每次轉接培養(yǎng)條件為25-3(TC下以130-200r/min搖床培養(yǎng)5-10 天，共轉接4-7次,得到以高效氯氟氰菊酯為唯一碳源的混合菌液，待用；3) 分離純化將篩選所得的以高效氯氟氰菊酯為唯一碳源的混合菌液 稀釋1 05-1 09倍，涂布于普通培養(yǎng)基上，于25-3(TC培養(yǎng)2-4天，分別挑取 形態(tài)不同的菌落在普通培養(yǎng)基上劃線純化；4) 強化將步驟3)中分離純化好的單一菌株劃線到含終濃度為 50-150mg/L的高效氯氟氰菊酯的基礎培養(yǎng)基平板上，在25-3(TC下培養(yǎng)3-5 天，得到以高效氯氟氰菊酯為底物的降解菌株。所述富集培養(yǎng)基為蛋白胨8-10g，NaC10. 8-1. Og， KH2P04 0. 8-1. Og,葡萄 糖1. 0-1. 2g, H20 1000ml， pH=6. 8-7. 2;所述基礎培養(yǎng)基為NH4NO30. 8-1. Og， MgS04 . 7H20 0. 4-0. 6g， (NH4) 2S04 0. 4—0. 6g， NaCl, 0. 4-0. 6g， KH2PO40. 4-0. 6g， K2HP041. 2-1. 8g， FeCl30. 005—0. 0 lg, H20 lOOOml， pH= 6. 8-7. 2;所述普通培養(yǎng)基為牛肉膏4. 0-6. 0g,蛋白胨8-12g，NaC14. 0-6. Og,瓊脂 15-20g, H201000ml, pH=7. 0-7. 2。將得到以高效氯氟氰菊酯為底物的降解菌株在普通培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng) 至00600=1. 0，而后按體積百分比計取5-15%的菌液，將菌液以 12000-6000r/min， 5-15min離心后接種到含高效氯氟氰菊酯終濃度為 50-150mg/L的80-lOOml基礎培養(yǎng)基中，25-30°C, 130-200r/min振蕩培養(yǎng)3-5 天，取菌液以12000-6000r/min, 5-15niin離心取上清液經(jīng)石油醚萃取，萃取 液釆用278腿下紫外和/或氣相色譜鑒定以高效氯氟氰菊酯為底物的降解菌 株的降解能力。所述氣相色譜條件為色譜柱HP-5, 30 x 0. 32隱毛細管 柱；柱溫程序升溫15(TC,保持2min，而后以6-8 °C /min速度升溫至 250-270 。C;進樣口溫度200-22(TC;檢測器溫度250-32(TC;載氣 氮氣，純度> 99. 999%，流速為1-10mL/min;不分流進樣。所述高效氯氟氰 菊酯先經(jīng)有機溶劑溶解，然后用0.22nm濾膜過濾，過濾后待有機溶劑揮發(fā)， 加入相應培養(yǎng)基。所述有機溶劑為丙酮、甲醇、正己烷或石油醚。所述基 礎培養(yǎng)基配制時將含有磷酸根的試劑與不含磷酸根的試劑分開滅菌。51. 本發(fā)明篩選方法簡易可行，經(jīng)濟實用，所得的菌株可用來制備降解 高效氯氟氰菊酯的菌劑以及進一步制備酶制劑，在實踐中有良好的使用前景。2. 本發(fā)明提供的紫外分光光度法與氣相色譜相結合測定降解活性的方法，在篩選大規(guī)模菌株時可降低成本，精確高效，可行性高。3. 本發(fā)明提供的降解高效氯氟氰菊酯菌株的篩選方法可用于其它菊酯 類降解菌株的篩選。


圖l為高效氯氟氰菊酯紫外測定標準曲線圖。 圖2為高效氯氟氰菊酯氣相色譜標準曲線圖。
具體實施方式
實施例l粘質沙雷氏菌具有降解高效氯氟氰菊酯的作用。 高效氯氟氰菊酯降解菌的篩選1) 菌樣品釆集釆自遼寧省沈陽市蘇家屯區(qū)沙河鎮(zhèn)農(nóng)藥廠內土壤。2) 富集馴化將10g菌樣接種于含高效氯氟氰菊酯的100ml富集培養(yǎng) 基中進行轉接培養(yǎng)，每次轉接培養(yǎng)條件為3(TC、 180r/min搖床培養(yǎng)7天， 共轉接4次，轉接量按體積百分比計每次培養(yǎng)液10°/。接種于含高效氯氟氰菊 酯逐漸增加的100ml富集培養(yǎng)基中，待用；其中高效氯氟氰菊酯以25mg/L 逐漸增加，4次轉接過程中高效氯氟氰菊酯分別為25， 50, 75， 100mg/L， 菌樣首次加入富集培養(yǎng)基中同時加入15粒玻璃珠；所述富集培養(yǎng)基為蛋白胨10g; NaCl 1. Og; KH2P04 1. Og;葡萄 糖1. Og; H20 1000ml ; pH=7. 0;高效氯氟氰菊酯為先經(jīng)丙酮溶解，然后 用孔徑0.22jum濾膜過濾，過濾后的高效氯氟氰菊酯待丙酮揮發(fā)后加入到 滅菌后的培養(yǎng)基中。2) 篩選按體積百分比20%的接種量將種步驟1)中的富集培養(yǎng)菌液接 種于含終濃度為150mg/L髙效氯氟氰菊酯的100ml基礎培養(yǎng)基中，進行轉接 培養(yǎng)，每次轉接培養(yǎng)條件為3(TC下以180r/min搖床培養(yǎng)7天，共轉接7次，每 次轉接時的基礎培養(yǎng)基中高效氯氟氰菊酯量不變，得到以高效氯氟氰菊酯 為唯一碳源的混合菌液，待用；基礎培養(yǎng)基為麗4冊3 1. Og, MgS04 . 7H20 0. 5g, (NH4)2S04 0, 5g, NaCl 0.5g; KH2P04 0.5g; K2HP041. 5g ; FeCl3 0. 006g; &0 1000ml; pH= 7.0;每次轉接的基礎培養(yǎng)基中含高效氯氟氰菊酯的濃度相同；基礎培養(yǎng)基 配制時將含磷酸根與不含有磷酸根試劑分開滅菌(滅菌條件為12rc， 20min)。3) 分離純化將篩選所得的以高效氯氟氰菊酯為唯一碳源的混合菌液 稀釋1 05-109倍，涂布于普通培養(yǎng)基固體平板上，于3(TC培養(yǎng)3天，分別挑取形態(tài)不同的菌落在普通培養(yǎng)基上劃線純化；普通培養(yǎng)基為牛肉膏5. 0g,蛋白胨10g， NaC15. Og,瓊脂20g， H20 1000ml， pH 7.0-7.2。4)強化將步驟3 )中分離純化好的單一菌株劃線到含終濃度為100mg/L的高效氯氟氰菊酯的基礎培養(yǎng)基平板上,在3(TC下培養(yǎng)3天，生長出的菌落即為得到以高效氯氟氰菊酯為底物的16株降解菌。 實施例2菌株降解能力的鑒定1.紫外分光光度法 l)標準曲線繪制將高效氯氟氰菊酯標準品溶于正己烷中，配制成不 同濃度(參見表l)標準溶液，在278nra下測定吸光度，繪制標準曲線為 y=0. 0041x+0. 0012 R2=0. 9999 (參見圖1)。表l標準曲線測定值濃度mg/1278nm吸光值0. 00220200. 1100080. 00660. 055040. 00230. 27520. 003251. 3760. 00726. 880. 026534. 40. 13691720. 701152)鑒定降解活性將篩選出的以高效氯氟氰菊酯為底物的16株降解 菌在普通培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)至OD600=1. 0，而后按體積百分比計取10%的菌 液，將菌液離心(6000r/min, 10min)后接種到含高效氯氟氰菊酯終濃度 為100rag/L的100ml基礎培養(yǎng)基中，3(TC, 180r/min振蕩培養(yǎng)3天，取菌 液離心(6000r/min, 10min )取2ml上清液，將上清液用石油醚以4ml, 4ml， 3ml分別萃取，待石油醚相揮發(fā)后用正己烷定容至10ml,經(jīng)278nm下測定 吸光度，通過標準曲線換算高效氯氟氰菊酯濃度(參見表2),計算降解率 (計算公式)。對照樣品殘留量-處理樣品殘留量降解率/%= - xlOO%對照樣品殘留量16株菌株中降解率較高的菌株Xs降解率為68.58%。通過菌株形態(tài)觀察、 生理生化實驗鑒定、16s rDNA序列測定和Neighbor-Joining方法構建系統(tǒng) 發(fā)育樹綜合分析得出鑒定結果，Xs菌為粘質沙雷氏菌(Serra"a ffl3rcesce/]s )。表2紫外檢測篩選菌株對高效氯氟氰菊酯的降解率菌種降解率菌種降解率
Xs68. 58%FfH35. 64%
Fh3-145. 34%Ffl-231. 44%
Fw344. 67%Fs323. 60%
Ffl-2-144. 49%FH-2-223. 33%
Fs2復93%Fhl17. 61%
Fsl39. 45%Fwl17. 15%
Fh237. 26%Fh311. 20%
Ff337. 26%Ff48. 33%
2.氣相色譜檢測:
1) 標準曲線將髙效氯氟氰菊酯溶于色譜純正己烷，配制成l, 10， 50， 100mg/L標準溶液，繪制標準曲線為y-379402x-262219 112=1(參見圖2 )。
2) 樣品處理將篩選出的以高效氯氟氰菊酯為底物的16株降解菌在 普通培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)至OD600=1. 0,而后按體積百分比計取10%的菌液， 將菌液離心(6000r/min, lOmin )后接種到含高效氯氟氰菊酯終濃度為 100mg/L的100ml基礎培養(yǎng)基中，30°C, 180r/min振蕩培養(yǎng)3天，取菌液 離心(6000r/min, 10min )取2ml上清液，將上清液用石油醚以4ml ， 4ml， 3ml分別萃取，氮氣吹干后，經(jīng)弗羅里矽柱處理，之后再經(jīng)氮氣吹干，用色 譜純正己烷定容至5ml而后經(jīng)氣相色譜測定(參見3),計算降解率(按照上 述公式計算)。16株菌株中降解率較高的菌株Xs降解率為82.74%。通過 菌株形態(tài)觀察、生理生化實驗鑒定、16s rDNA序列測定和Neighbor-Joining 方法構建系統(tǒng)發(fā)育樹綜合分析得出鑒定結果，Xs菌為粘質沙雷氏菌
(Serra"'a脳rcesce/is )。
表3氣相色譜檢測篩選菌株對高效氯氟氰菊酯的降解率
菌種降解率菌種降解率
Xs82. 74%Ffl-l41. 36%
Fh3-162. 59%FH-237. 89%
Fw360. 48%Fs329. 93%
Ffl-2-l59. 73%Ffl-2-229. 08%
Fs254. 31%Fhl20. 81%
Fsl49. 79%Fwl20. 79%
Fh245. 12%Fh314. 38%
Ff344. 92%Ff412. 58%
所述氣相色譜條件色譜柱HP-5, 30 x 0. 32腿毛細管柱；柱溫程 序升溫15(TC (保持2min)以6。C /min速度升溫至270 。C (保持8min); 進樣口溫度20(TC;檢測器溫度32(TC;載氣氮氣，純度> 99. 999%, 流速為lmL/min;不分流進樣。
上述菌株降解能力的鑒定可采用紫外分光光度法或氣相色譜法，或同時
8采用紫外分光光度法和氣相色譜法。 實施例3
與實施例1不同之處在于
1) 富集馴化將5g菌樣接種于含高效氯氟氰菊酯的80ral富集培養(yǎng)基中 進行轉接培養(yǎng)，每次轉接培養(yǎng)條件為25'C、 130r/min搖床培養(yǎng)5天，共轉接7 次，轉接量按體積百分比計每次培養(yǎng)液5%接種于含高效氯氟氰菊酯逐漸增 加的80ml富集培養(yǎng)基中，待用；其中高效氯氟氰菊酯以30mg/L逐漸增加，7 次轉接過程中高效氯氟氰菊酯分別為25， 55， 85, 115、 145、 175、 205mg/L， 菌樣首次加入富集培養(yǎng)基中同時加入10粒玻璃珠；所述富集培養(yǎng)基為蛋 白胨8g, NaCl 0. 8g, KH2PO40. 8g,葡萄糖1. Og， H20 1000ml， pH=6. 8。
2) 篩選'.按體積百分比5%的接種量將種步驟1)中的富集培養(yǎng)菌液接 種于含終濃度為50mg/L高效氯氟氰菊酯的60ml基礎培養(yǎng)基中，進行轉接培 養(yǎng)，每次轉接培養(yǎng)條件為25'C下以130r/min搖床培養(yǎng)5天，共轉接5次，得到 以高效氯氟氰菊酯為唯一碳源的混合菌液，待用；基礎培養(yǎng)基為冊4冊3
0, 8g， MgS04 . 7H20 0. 4g, (NH4) 2S04 0. 4g， NaCl 0. 4g, KH2P04 0. 4g, K2HP04 1.2g, FeCl3 0. 005g， H20 1000ml， pH= 6.8。
實施例4
與實施例l不同之處在于
1) 富集馴化將7g菌樣接種于含高效氯氟氰菊酯的90ml富集培養(yǎng)基中 進行轉接培養(yǎng)，每次轉接培養(yǎng)條件為27'C、 200r/min搖床培養(yǎng)10天，共轉接 5次，轉接量按體積百分比計每次培養(yǎng)液5%接種于含高效氯氟氰菊酯逐漸 增加的90ml富集培養(yǎng)基中，待用；其中高效氯氟氰菊酯以50mg/L逐漸增加， 7次轉接過程中高效氯氟氰菊酯分別為25, 75, 125, 175、 225mg/L,菌樣 首次加入富集培養(yǎng)基中同時加入20粒玻璃珠；所述富集培養(yǎng)基為蛋白胨 10g, NaCl 1. Og, KH2P04 1. Og,葡萄糖1. 2g, H20 1000ml, pH=7. 2。
2) 篩選按體積百分比20"/。的接種量將種步驟l)中的富集培養(yǎng)菌液接 種于含終濃度為150mg/L高效氯氟氰菊酯的80ml基礎培養(yǎng)基中，進行轉接培 養(yǎng)，每次轉接培養(yǎng)條件為27'C下以200r/min搖床培養(yǎng)10天，共轉接7次，得到 以高效氯氟氰菊酯為唯一碳源的混合菌液，待用；基礎培養(yǎng)基為冊4,3
1. 0g,MgSO4.7H2O 0. 6g， (NH4)2SO40. 6g,NaCl 0. 6g，KH2PO40. 6g， K2HP04 1. 8g， FeCl3 0. Olg, H20 1000ml, pH= 7. 2。
實施例5
與實施例2不同之處在于將得到以高效氯氟氰菊酯為底物的降解菌株 在普通培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)至OD6004. 0，而后按體積百分比計取5%的菌液， 將菌液以12000r/min， 5min離心后接種到含髙效氯氟氰菊酯終濃度為 150mg/L的80ml基礎培養(yǎng)基中，25°C, 130r/min振蕩培養(yǎng)5天，取菌液以 12000r/min, 5min離心取上清液經(jīng)石油醚萃取，萃取液采用278nm下紫外和/ 或氣相色譜鑒定以高效氯氟氰菊酯為底物的降解菌株的降解能力。
權利要求
1.一種以高效氯氟氰菊酯為底物的降解菌株的篩選方法，其特征在于1)菌樣的富集馴化將5-10g菌樣接種于含高效氯氟氰菊酯的80-100ml富集培養(yǎng)基中進行轉接培養(yǎng)，每次轉接培養(yǎng)條件為25-30℃、130-200r/min搖床培養(yǎng)5-10天，共轉接4-7次，轉接量按體積百分比計每次培養(yǎng)液5-10％接種于含高效氯氟氰菊酯逐漸增加的80-100ml富集培養(yǎng)基中，待用；其中高效氯氟氰菊酯首次加入量25mg/L，而后以25-50mg/L逐漸增加，菌樣首次加入富集培養(yǎng)基中同時加入10-20粒玻璃珠；2)篩選按體積百分比5-20％的接種量將步驟1)中的富集培養(yǎng)菌液接種于含終濃度為50-150mg/L高效氯氟氰菊酯的60-100ml基礎培養(yǎng)基中，進行轉接培養(yǎng)，每次轉接培養(yǎng)條件為25-30℃下以130-200r/min搖床培養(yǎng)5-10天，共轉接4-7次，得到以高效氯氟氰菊酯為唯一碳源的混合菌液，待用；3)分離純化將篩選所得的以高效氯氟氰菊酯為唯一碳源的混合菌液稀釋105-109倍，涂布于普通培養(yǎng)基上，于25-30℃培養(yǎng)2-4天，分別挑取形態(tài)不同的菌落在普通培養(yǎng)基上劃線純化；4)強化將步驟3)中分離純化好的單一菌株劃線到含終濃度為50-150mg/L的高效氯氟氰菊酯的基礎培養(yǎng)基平板上，在25-30℃下培養(yǎng)3-5天，得到以高效氯氟氰菊酯為底物的降解菌株。
2. 按權利要求1所述的以高效氯氟氰菊酯為底物的降解菌株的篩選方 法，其特征在于所述富集培養(yǎng)基為蛋白胨8-10g，NaC10. 8-1. 0g，KH2PO4 0. 8-1. Og，葡萄糖1. 0-1. 2g，H20 1000ml，pH=6. 8-7. 2;所述基礎培養(yǎng)基為NH4NO30. 8-1. Og， MgS04 7H20 0. 4-0. 6g, (NH4) 2S0, 0. 4-0. 6g， NaCl， 0. 4-0. 6g， KH2PO40. 4-0. 6g， K2HP041. 2-1. 8g， FeCl30. 005-0. 0 lg, H20 1000ml, pH= 6. 8-7. 2;所述普通培養(yǎng)基為牛肉膏4. 0-6. 0g,蛋白胨8-12g，NaC14. 0-6. Og,瓊脂 15-20g, H2O1000ml，pH=7. 0-7. 2。
3. 按權利要求1所述的以髙效氯氟氰菊酯為底物的降解菌株的篩選方 法，其特征在于將得到以高效氯氟氰菊酯為底物的降解菌株在普通培養(yǎng) 基中振蕩培養(yǎng)至OD600-1. 0,而后按體積百分比計取5-15%的菌液，將菌液 以12000-6000r/min， 5-15min離心后接種到含高效氯氟氰菊酯終濃度為5 0-15 Omg/L的8 0-100m 1基礎培養(yǎng)基中，25-3(TC ， 13 0-2 00r /mi n振蕩培養(yǎng)3-5 天，取菌液以12000-6000r/min， 5-15min離心取上清液經(jīng)石油醚萃取，萃取 液采用278nm下紫外和/或氣相色譜鑒定以高效氯氟氰菊酯為底物的降解菌 株的降解能力。
4. 按權利要求3所述的以高效氯氟氰菊酯為底物的降解菌株的篩選方 法，其特征在于所述氣相色譜條件為色譜柱HP-5, 30xQ. 32隱毛細 管柱；柱溫程序升溫150°C,保持2min,而后以6-8 。C Aiiin速度升溫至250-270 °C;進樣口溫度200-22(TC;檢測器溫度250-320°C;載氣 氮氣，純度> 99. 999%,流速為l-10mL/min;不分流進樣。
5. 按權利要求1所述的以高效氯氟氰菊酯為底物的降解菌株的篩選方 法，其特征在于所述高效氯氟氰菊酯先經(jīng)有機溶劑溶解，然后用0.22 mm 濾膜過濾，過濾后待有機溶劑揮發(fā)，加入相應培養(yǎng)基。
6. 按權利要求5所述的以高效氯氟氰菊酯為底物的降解菌株的篩選方 法，其特征在于所述有機溶劑為丙酮、甲醇、正己烷或石油醚。
7. 按權利要求1所述的以高效氯氟氰菊酯為底物的降解菌株的篩選方 法，其特征在于所述基礎培養(yǎng)基配制時將含有磷酸根的試劑與不含磷酸 根的試劑分開滅菌。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物降解農(nóng)藥殘留領域，具體地說是一種以高效氯氟氰菊酯為底物的降解菌株的篩選方法。所述篩選方法為將采集的菌樣富集馴化、篩選、分離純化、強化得到以高效氯氟氰菊酯為唯一碳源生長的降解菌的方法。本發(fā)明提供的方法能高效，便捷地篩選出目的活性降解菌。為制備相關降解菌劑、酶制劑提供了菌種資源。
文檔編號C12N1/02GK101538605SQ20081001069
公開日2009年9月23日 申請日期2008年3月19日 優(yōu)先權日2008年3月19日
發(fā)明者張惠文, 張成剛, 張曉黎, 旭 李, 王秀娟, 蘇振成 申請人:中國科學院沈陽應用生態(tài)研究所