專利名稱：一種酶法制備不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法
技術領域：
一種酶法制備不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法，屬于磷脂領域。
背景技術：
磷脂主要包括磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸及磷脂酰丙醇等。近來研究發現磷脂酰丙醇具有重要的生物學功能及在醫藥工業上得到愈來愈廣泛的應用，而磷脂酰丙醇在自然界中存在稀少。因而利用酶法來制備磷脂酰丙醇成為近來研究的熱點。但到目前的研究為止，所有報道的酶法制備磷脂酰丙醇都是在含水體系中進行的，這種含水體系可以是有機溶劑和水的雙相體系，也可以是微水體系，使得產品中含有不希望的溶血磷脂和磷脂酸。本發明一種酶法制備不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法，可以方便實現不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的制備。

發明內容
本發明的目的 在于提供一種酶法制備不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法。大豆混合磷脂溶于無水的有機溶劑中，加入丙醇，在經處理的花生磷脂酶D催化下進行堿基交換，經過48小時反應，混合磷脂轉化為磷脂酰丙醇，反應物通過水洗有機相，經脫水脫溶后，用500毫升丙酮充分洗滌，分離出丙酮不溶物，干燥得產品。經過HPLC測定，產品磷脂酰丙醇的含量大于75 %，而且產品中不含有溶血磷脂和磷脂酸，從而完成了本發明。花生磷脂酶D的預處理:花生磷脂酶D在使用前進行預處理，其方法為取2.72g磷酸二氫鉀溶于IOOmL去離子水中，加入少量磷酸氫二鈉，調節pH至5.6。取Ig花生磷脂酶D溶于SOmL磷酸緩沖液中，得到pH5.6花生磷脂酶D酶液，加入49克氯化鉀并溶解，完全冷凍后于真空度70Pa，溫度_40°C條件下凍干48小時，得到經處理的花生磷脂酶D。本發明的技術方案:一種酶法制備不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法，所用的大豆磷脂原料來自于油廠油脂加工的副產品，并經進一步加工所得到的醇溶性混合磷脂，且大豆磷脂磷脂酰膽堿含量為75%。通過處理的花生磷脂酶D在無水的有機溶劑中與丙醇進行酶促堿基交換反應，反應完成后，通過水洗有機相，經脫水脫溶，丙酮洗滌，干燥得到本產品。所使用的有機溶劑是氯仿。主要的工藝條件為:有機溶劑:混合磷脂:丙醇:經處理的花生磷脂酶D的
V: W: W: W 為 5-20: 0.5-2: 1-10: 0.0005-0.005。反應溫度在 20°C-60°C，時間為24-48小時。本發明的有益效果:一種由大豆混合磷脂為原料采用無水體系花生磷脂酶D酶法制備不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法，為制備不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇提供了一種可行的方法，使用該方法可以方便的制備在醫藥工業，脂質體工業及保健食品工業具有廣泛用途的磷脂酰丙醇。由于該方法中沒有水的存在，因而產品中不含有溶血磷脂和磷脂酸等磷脂酰丙醇產品中不希望含有的成分。
表1:該方法所得產品指標
權利要求
1.一種酶法制備不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法，其特征是所用的大豆磷脂原料來自于油廠油脂加工的副產品，并經進一步加工所得到的醇溶性混合磷脂，且大豆磷脂磷脂酰膽堿含量為75%。通過處理的花生磷脂酶D在無水的有機溶劑中與丙醇進行酶促堿基交換反應，反應完成后，通過水洗有機相，經脫水脫溶，丙酮洗滌，干燥得中磷脂酰丙醇的含量大于75 %，而且同時不含有溶血磷脂和磷脂酸的產品。 主要的工藝條件為:有機溶劑:混合磷脂:丙醇:經處理的花生磷脂酶D的V: W: W: W 為 5-20: 0.5-2: 1-10: 0.0005-0.005。反應溫度在 20°C-60°C，時間為24-48小時。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征是所用有機溶劑為氯仿。
3.—種如權利要求1所述的由大豆混合磷脂為原料采用無水體系花生磷脂酶D酶法制備不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法，其特征是制備了一種不含溶血磷脂和磷脂酸的高純大豆磷脂酰丙醇產品。
4.一種如權利要求1所述的由大豆混合磷脂為原料采用無水體系花生磷脂酶D酶法制備不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法，其特征是以大豆混合磷脂為原料，經過酶促反應得 到產品。
全文摘要
一種由大豆混合磷脂為原料采用無水體系花生磷脂酶D酶法制備不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法，屬于磷脂領域。本發明采用無水體系，混合磷脂與丙醇通過經處理的花生磷脂酶D催化得到了不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇產品，其產品中磷脂酰丙醇含量大于75％，從而完成了本發明。
文檔編號C12P9/00GK103074390SQ20111034296
公開日2013年5月1日 申請日期2011年11月2日 優先權日2011年11月2日
發明者史蘇佳, 曹棟, 曹沛 申請人:江南大學