專利名稱：一種用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面及制備方法
技術領域：
本發明屬于細胞培養表面處理技術領域，具體涉及一種用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面及其制備方法。
背景技術：
隨著現代科學的不斷發展，尤其是生物醫學的快速進步，細胞培養成為很多研究及應用領域中十分重要的基礎性工作。一直以來，人們普遍采用聚苯乙烯材質的培養板或培養瓶作為細胞培養的工具。 聚苯乙烯是一種無色透明的熱塑性塑料，通常為無毒、無臭、無色的透明顆粒，似玻璃狀脆性材料，通式是[(CH2CHC6H5)n]，英文名稱為Polystyrene，簡稱PS。其制品具有優越的抗水、 防潮性。在人們的生產生活中，聚苯乙烯的用途十分廣泛，作為細胞培養材料便是其中的一大用途。聚苯乙烯材質的細胞培養表面為非極性，親水性很差，不利于細胞的貼壁生長。因此，人們在培養細胞之前常常會對培養表面進行改性處理，并由此衍生出生命科學領域中一個新的研究方向——細胞培養表面處理技術。在過去的研究和應用中，針對細胞貼壁培養采用最多的方法是在培養基中添加血清成分來增強細胞貼壁能力，如間質干細胞(MSC)、肝癌細胞OfepG^等；然而，這種方法所獲得的細胞不能滿足臨床應用的要求，這主要是因為血清用于細胞培養存在成份不明確、 來源復雜及每個批次之間由于個體的不同差異性較大等問題，給細胞培養的試驗研究及臨床應用增加了較大的風險。此外，在無血清培養體系下增強細胞粘附能力的方法主要有在培養表面進行生物蛋白包被，如在神經干細胞培養中以層粘連蛋白(Laminin)對培養表面進行包被；或通過一些物理化學的方法對培養表面進行改性，如采用等離子體處理細胞培養表面，引入含氧、氮等元素的基團來改善其表面的親水性，通過提高親水性來改善細胞在其表面的貼壁性能；而這些傳統的方法也都同樣存在一些客觀上的不足首先，用作表面基底包被材料的各種包被蛋白(如Laminin)價格昂貴，對任何相關的課題中有限的經費都是一項嚴峻的考驗，并且這些蛋白一般是動物來源的蛋白，會給人類臨床治療帶來一定的風險；其次，而單純采用等離子體技術的改性處理，在無血清培養條件下細胞貼壁效果并不
王困相此外，目前國內有關無血清細胞培養耗材研發的相關文獻較多，但無相關產品推出市場；國外類似的研究性文章也層出不窮，但直到目前為止，只有一家公司推出了細胞無血清培養板，其工藝是將培養板經等離子體處理后，在其表面涂覆一層含有羧基的化學試齊U，然后通過羧基經縮合試劑將含有氨基的多肽共價接枝到培養板表面，實現多肽的修飾表面，使所培養的細胞能特異識別并與接枝多肽結合，從而達到促進細胞在無血清條件下貼壁生長目的。然而，采用這種方式在進行培養板表面修飾的過程中，或多或少都會引入一些有機試劑來輔助完成這些特定多肽序列的接枝，而這些有機試劑同樣會給后續的細胞培養帶來尚未可知的風險。
因此，在細胞培養領域，急需一種使用簡便、儲存方便、表面成分明確、不引入各種有害試劑、適合細胞無血清培養的細胞培養耗材。

發明內容
為了克服現有技術的缺點與不足，本發明的首要目的在于提供一種用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面。首先，該多肽生物納米表面采用無異源性或弱異源性的人工合成的設計型序列多肽來替代傳統的異源蛋白包被表面。與傳統的異源蛋白包被表面相比，該多肽包被表面降低了臨床應用風險。其次，在該設計型多肽的末端引入雙鍵，并采用 UV光照的方法，在不引入其他交聯試劑的條件下使該多肽迅速共價接枝到細胞培養表面。 再次，引入自組裝多肽序列，使自組裝后的多肽雙鍵末端接枝到培養板表面，而多肽的功能性末端更好的暴露在培養板表面，從而使得培養板表面的功能性末端更容易與細胞相互作用，提高改性表面對細胞貼壁的促進作用。本發明的另一目的在于提供上述用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面的制備方法，該方法簡單易行，降低了能耗，有利于工業化的連續生產。本發明的再一目的在于提供上述用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面的用途。本發明的目的通過下述技術方案實現一種用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面，是在細胞培養表面接枝了特定多肽；本發明所述的細胞培養表面是指細胞培養器具(如培養皿、培養板、培養瓶等)在培養細胞時與細胞接觸的面；所述細胞培養的材質為聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚對苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸酯、聚甲醛或聚對苯二甲酸乙二醇酯-1，4-環己烷二甲醇酯中的一種；所述的特定多肽由自組裝多肽(RADA)j^P功能多肽組成；所述特定多肽的序列為(RADA) X-GGRGDS、(RADA) X_GGYIGSR、(RADA) X_GGIKVAV、(RADA) x_GGra⑶SGTOOTS、 (RADA) X-GGTAGSCLRKFSTM、(RADA) [GGFPGERGVEGPGP、(RADA) [GGKNRLTTELEVRT、 (RADA) X-GGFHRIKA、(RADA) [FFGFFGFFGPFSSTKT、(RADA) [FFGFFGFFGGPRGDSGYRGDS、 (RADA) X-FFGFFGFFGGPDSGRPDSGR、(RADA) X_PPGPPGPPGYRGDS、(RADA) X_GGPDSGR、 (RADA) X-GGRYVVLPR、(RADA) [GGALKRQGRTLYGF、(RADA) X_GGAASIKVAVSADR、(RADA) X-GGKAFDITYVRLKF、(RADA) [GGRKRLQVQLSIRT、(RADA) X_GGKKQRFRHRNRKG、(RADA) X-GGWQPPRARI、(RADA)X-GGSKPPGTSS 或(RADA)X_GGPFSSTKT 中的一種以上，χ 為 1_6 ；所述特定多肽的自組裝多肽(RADA)JIP^連接了 CH2 = CH-CONH-R-基團，基團中的R是乂CH2>y， y為0 14。上述用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面的制備方法，是通過等離子體預先處理細胞培養表面，使表面活化產生自由基；然后將細胞培養表面暴露在空氣或氧氣中，表面會迅速被氧氣氧化形成過氧化層；再將自組裝多肽溶液鋪展在細胞培養表面上，然后置于紫外光下照射，過氧化層及含有雙鍵的多肽會分別分解產生活性接枝位點，多肽即連接到過氧化層上，從而實現將多肽引入到培養板表面的目的，達到利用特殊多肽序列促進細胞在無血清表面貼壁生長的效果。上述用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面的制備方法，具體包括以下步驟(1)將細胞培養表面放入等離子體反應室進行預處理；(2)將預處理后的培養表面露置于空氣或氧氣中30s Mh ；(3)將特定多肽溶解于水中形成溶液A ；將溶液A均勻地鋪展到步驟(2)得到的培養表面形成薄的液面層；(4)對鋪有液面層的培養表面進行UV照射30s 30min ；(5)取出細胞培養表面，清洗，風干，得到用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面。步驟(1)所述等離子體反應室的工作參數為功率35 600W，壓強1 80Pa，氣體流速5 500cc/min，溫度25 45°C ；步驟(1)所述等離子體預處理的時間為30s IOmin ；步驟(3)所述的溶液A中，多肽的質量體積濃度為0. 05 ；步驟(3)所述液面層的厚度為0. 5mm Icm ；步驟⑷所述的UV照射，其相關參數是UV燈管功率300 1000W，照射時間 30s 30min，UV燈管與培養表面的距離3 13cm ；步驟(5)所述的清洗是用去離子水超聲清洗3次，每次lOmin。上述的用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面可以用于細胞無血清培養。本發明相對于現有技術具有如下的優點及效果(1)本發明所制備得到的多肽生物納米表面，首先利用自組裝多肽將含有活性末端的多肽序列進行自組裝呈納米纖維或納米顆粒，從而提高活性末端多肽序列的接枝效率；其次，利用多肽自帶雙鍵和表面過氧化物分解所產生的自由基直接共價接枝，處理工藝簡單，能耗低，容易實現工業化生產，并且不引進其他對細胞有害的試劑，提高了處理后細胞培養表面的生物相容性。(2)本發明所得到的多肽生物納米表面穩定，可在常溫下長時間儲存，接枝表面接枝成分明確，可以替代市面上常規的各種蛋白的包被表面，使細胞在無血清條件下實現良好的貼壁和增殖；與各種動物來源的蛋白包被表面相比，該化學合成多肽接枝表面大大降低了臨床應用風險，為后續的臨床應用打下了堅實的基礎。


圖1是聚苯乙烯培養板表面X射線光電子能譜(簡稱XPS)的碳譜分析結果圖。圖2是聚苯乙烯培養板經等離子體預處理后XPS的碳譜結果圖。圖3是實施例1制備得到的聚苯乙烯培養板多肽生物納米表面XPS的碳譜結果圖。圖4是實施例2制備得到的聚苯乙烯培養板多肽生物納米表面XPS的碳譜結果圖。圖5是實施例3制備得到的聚苯乙烯培養板多肽生物納米表面XPS的碳譜結果圖。圖6是聚苯乙烯培養板處理前后XPS的全譜結果圖。其中曲線A為未處理前聚苯乙烯表面；曲線B為等離子體預處理后聚苯乙烯表面；曲線C為實施例1處理后的聚苯乙烯表面；曲線D為實施例2處理后的聚苯乙烯表面；曲線E為實施例3處理后的聚苯乙烯表面。圖7是采用實施例1制備得到的聚苯乙烯培養板多肽生物納米表面培養神經干細胞的效果圖。圖8是采用實施例1制備得到的聚苯乙烯培養板多肽生物納米表面培養的神經干細胞巢蛋白表達水平示意圖。
具體實施例方式下面結合實施例及附圖對本發明作進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限于此。實施例1一種用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面的制備方法，具體包括以下步驟(1)將聚苯乙烯材質的細胞培養表面放入等離子體反應室進行預處理5min ’等離子體反應室的工作參數為功率35 600W，壓強1 80Pa，氣體流速5 500cc/min，溫度 25 45°C ；(2)將預處理后的培養表面露置于空氣中5min ；( 按文獻(胡春玲，唐尹萍，施婧妮等.鱉甲抗肝纖維化活性多肽的固相合成.醫藥導報.2011,30(5) :561-562.)方法合成多肽CH2 = CH-CONH-R-(RADA)4-GGIKVAV(其中 R 是4€112>^，y = ο)；(4)將所合成的多肽溶解于水中形成質量體積濃度為0. 5%的溶液A ；將溶液A均勻地鋪展到步驟( 得到的培養表面形成厚度為5mm的液面層；(5)對鋪有液面層的培養表面進行UV照射15min ；UV照射，其相關參數是UV燈管功率300 1000W，照射時間30s 30min，UV燈管與培養表面的距離3 13cm ；(6)取出細胞培養表面，用去離子水超聲清洗3次，每次lOmin，自然風干后得到用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面。對接枝前的聚苯乙烯培養板表面、等離子體預處理后的聚苯乙烯培養板表面和本實施例制備得到的聚苯乙烯培養板多肽生物納米表面進行X射線光電子能譜分析(簡稱 XPS)，結果如圖1、圖2、圖3和圖6所示。由圖6可知，接枝前的聚苯乙烯培養板表面(曲線A)經等離子體預處理后引入了大量的氧元素而形成了過氧化的材料表面(曲線B)；經實施例1進一步處理并接枝多肽后的表面C氮元素含量明顯增加，而整個處理過程只有多肽中含有氮元素，因此可以確定多肽被引入聚苯乙烯表面。此外，對比圖1、2、3可以看出， 經過多肽修飾后的表面出現明顯的O = C-NH基團分峰(酰胺鍵)，進一步證明了多肽序列已成功接枝到聚苯乙烯培養板表面。實施例2一種用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面的制備方法，具體包括以下步驟(1)將聚乙烯材質的細胞培養表面放入等離子體反應室進行預處理IOmin ’等離子體反應室的工作參數為功率35 600W，壓強1 80Pa，氣體流速5 500cc/min，溫度 25 45°C ；
(2)將預處理后的培養表面露置于氧氣中5min ；( 按文獻(胡春玲，唐尹萍，施婧妮等.鱉甲抗肝纖維化活性多肽的固相合成.醫藥導報.2011,30(5) :561-562.)方法合成多肽CH2 = CH-CONH-R-(RADA)4-GGYIGSR(其中R是乂CH2Py，y = 14)；并將所合成的多肽溶解于水中形成質量體積濃度為0. 05%的溶液A ；將溶液A均勻地鋪展到步驟( 得到的培養表面形成厚度為Icm的液面層；(4)對鋪有液面層的培養表面進行UV照射15min ；UV照射，其相關參數是UV燈管功率300 1000W，照射時間30s 30min，UV燈管與培養表面的距離3 13cm ；(5)取出細胞培養表面，用去離子水超聲清洗3次，每次lOmin，自然風干后得到用于細胞無血清培養的多肽生物納米表面。對本實施例制備得到的聚苯乙烯培養板多肽生物納米表面進行XPS分析，結果如圖4所示。同實施例1中所分析，圖3中經多肽修飾后的培養板表面也出現明顯的酰胺鍵分峰，表明多肽序列已接枝到聚苯乙烯表面；此外，圖4中的酰胺鍵分峰高度略低于圖3中酰胺鍵分峰高度，這是因為實施例1中所使用的接枝多肽濃度大于實施例3，因此提高了多肽在聚苯乙烯表面的接枝量，從而提高了聚苯乙烯表面酰胺鍵的數量，這一結果進一步驗證了該接枝過程的有效性。實施例3一種用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面的制備方法，具體包括以下步驟(1)將聚乙烯材質的細胞培養表面放入等離子體反應室進行預處理IOmin ’等離子體反應室的工作參數為功率35 600W，壓強1 80Pa，氣體流速5 500cc/min，溫度 25 45°C ；(2)將預處理后的培養表面露置于氧氣中30s ；(3)按文獻(胡春玲，唐尹萍，施婧妮等.鱉甲抗肝纖維化活性多肽的固相合成·醫藥導報· 2011,30(5) :561-562.)方法合成多肽CH2 = CH-CONH-R-(RADA)4_GGAASIKVA
VSADR(其中1 是^2&，7 = 0)；并將所合成多肽溶解于水中形成質量體積濃度為0. 5%
的溶液A ；將溶液A均勻地鋪展到步驟(2)得到的培養表面形成厚度為Icm的液面層；(4)對鋪有液面層的培養表面進行UV照射30min ；UV照射，其相關參數是UV燈管功率300 1000W，照射時間30s 30min，UV燈管與培養表面的距離3 13cm ；(5)取出細胞培養表面，用去離子水超聲清洗3次，每次lOmin，自然風干后得到用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面。對本實施例制備得到的聚苯乙烯培養板多肽生物納米表面進行XPS分析，結果如圖5所示。同實施例1中所分析，圖5中經多肽修飾后的培養板表面出現明顯的酰胺鍵分峰，表明多肽序列已接枝到聚苯乙烯表面；此外，圖5中的酰胺鍵分峰高度略高于圖3中酰胺鍵分峰高度，這是因為實施例3所使用的接枝多肽序列長于實施例3，所接枝的每條多肽含有的酰胺鍵數量增多，因此提高了聚苯乙烯表面酰胺鍵的數量，這一結果也進一步驗證了該接枝過程的有效性。實施例4一種用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面的制備方法，具體包括以下步驟(1)將苯丙烯材質的細胞培養表面放入等離子體反應室進行預處理30s ；等離子體反應室的工作參數為功率35 600W，壓強1 80Pa，氣體流速5 500cc/min，溫度 25 45°C ；(2)將預處理后的培養表面露置于空氣中Mh ；(3)按文獻(胡春玲，唐尹萍，施婧妮等.鱉甲抗肝纖維化活性多肽的固相合成.醫藥導報.2011,30(5) :561-562.)方法合成多肽CH2 = CH-CONH-R-(RADA) 4-GGIKVAV (其中 R 是-^CH2 , y = 0)禾口 CH2 = CH-CONH-R-(RADA)4-GGSKPPGTSS (其中R是^€H2) — y = 0)；將兩種多肽溶解于水中形成多肽質量體積濃度為的溶液A ；將溶液A均勻地鋪展到步驟( 得到的培養表面形成厚度為0. 5mm的液面層；(4)對鋪有液面層的培養表面進行UV照射30s ；UV照射，其相關參數是UV燈管功率300 1000W，照射時間30s 30min，UV燈管與培養表面的距離3 13cm ；(5)取出細胞培養表面，用去離子水超聲清洗3次，每次lOmin，自然風干后得到用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面。實施例5(1)首先將小鼠神經干細胞(C57NSC，該細胞購買于賽業(廣州)生物科技有限公司)按常規操作進行復蘇，將復蘇后的細胞種植到TCT處理的(TCT = tissue culture treatment)聚苯乙烯培養瓶中，加入適量的神經干細胞完全培養基(購自賽業(廣州)生物科技有限公司，產品貨號是MUBNF-9011 ；下同)進行細胞擴增；(2)細胞擴增至足夠量時，吸出細胞及培養基進行離心獲得細胞，加入適量胰酶替代物(購自^witrogen公司，產品貨號是12563-011)進行消化，將細胞消化成單個細胞狀態，再次離心后去上清，并加入適量的神經干細胞完全培養基重懸，獲得細胞懸液，計數并準備接種細胞；(3)將計數后的細胞按照1 X IO4個細胞/cm2的數量接種到實施例1所制備得到的多肽生物納米表面在無血清條件下進行神經干細胞的培養，效果如圖7所示。由圖7可以看出，無血清條件下的小鼠神經干細胞(C57 NSC，該細胞購買于賽業(廣州)生物科技有限公司)在未進行多肽接枝處理的聚苯乙烯表面(TCT = tissue culture treatment表面)不能貼壁生長，而在Iaminin包被的表面和實施例1制備得到的細胞培養多肽修飾表面可以很好地貼壁生長；并且在多肽處理表面及Iaminin包被表面， 該細胞均能很好的增殖，達到了以本發明的細胞培養多肽修飾表面替代Iaminin包被表面的預期目的。在上述的培養過程中，Iaminin包被表面及多肽修飾表面神經干細胞貼壁后，經過免疫熒光的方法測得其巢蛋白表達水平如圖8所示。由圖8可以看出，Iaminin包被表面及多肽修飾表面神經干細胞巢蛋白分泌水平基本一致，熒光率超過90%，這表明該多肽修飾表面既能實現細胞在無血清條件下地貼壁，又能很好的維持神經干細胞的干細胞特性。本實施例僅以神經干細胞的無血清培養為例，但本發明的細胞培養多肽修飾表面同樣適用于腫瘤細胞、成纖維細胞、間質干細胞、胚胎干細胞等各種細胞的無血清培養。上述實施例為本發明較佳的實施方式，但本發明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化， 均應為等效的置換方式，都包含在本發明的保護范圍之內。
權利要求
1.一種用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面，其特征在于是在細胞培養表面接枝特定多肽；所述特定多肽的序列為(RADA) X-GGRGDS、(RADA) X_GGY I GSR、(RADA) X_GG IKVAV、 (RADA) X-GGPRGDSGYRGDS、(RADA) X_GGTAGSCLRKFSTM、(RADA) X_GGFPGERGVEGPGP、 (RADA) X-GGKNRLTTELEVRT、(RADA) [GGFHRIKA、(RADA) [FFGFFGFFGPFSSTKT、(RADA) X-FFGFFGFFGGPRGDSGYRGDS、(RADA) X_FFGFFGFFGGPDSGRPDSGR、(RADA) X_PPGPPGPPGYRGDS、 (RADA)X-GGPDSGR、 (RADA)「GGRYVVLPR、 (RADA)「GGALKRQGRTLYGF、 (RADA) X-GGAASIKVAVSADR、(RADA) [GGKAFDITYVRLKF、(RADA) X_GGRKRLQVQLSIRT、(RADA) X-GGKKQRFRHRNRKG、(RADA) X_GGWQPPRARI、(RADA) X_GGSKPPGTSS 或(RADA) X_GGPFSSTKT 中的一種以上，x為1-6 ；所述特定多肽的(RADA) x端均連接CH2 = CH-CONH-R-基團，基團中的R 是"^CH2 Xt■，y 為 0 14。
2.根據權利要求1所述的用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面，其特征在于所述細胞培養的材質為聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚對苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸酯、聚甲醛或聚對苯二甲酸乙二醇酯-1，4-環己烷二甲醇酯中的一種。
3.權利要求1或2所述的用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面的制備方法，其特征在于包括以下步驟通過等離子體預先處理細胞培養表面，接著將細胞培養表面暴露在空氣或氧氣中，再將多肽溶液鋪展在細胞培養表面上，然后置于紫外光下照射，得到用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面。
4.根據權利要求3所述的用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)將細胞培養表面放入等離子體反應室進行預處理；(2)將預處理后的培養表面露置于空氣或氧氣中30s Mh；(3)將特定多肽溶解于水中形成溶液A；將溶液A均勻地鋪展到步驟( 得到的培養表面形成薄的液面層；(4)對鋪有液面層的培養表面進行UV照射30s 30min；(5)取出細胞培養表面，用去離子水超聲清洗3次，每次lOmin，自然風干后得到用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面。
5.根據權利要求4所述的用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面的制備方法，其特征在于步驟(1)所述等離子體反應室的工作參數為功率35 600W，壓強1 80Pa，氣體流速5 500cc/min，溫度25 45"C。
6.根據權利要求4所述的用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面的制備方法，其特征在于步驟(1)所述等離子體預處理的時間為30s lOmin。
7.根據權利要求4所述的用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面的制備方法，其特征在于步驟(3)所述的溶液A中，多肽的質量體積濃度為0. 05% 1%。
8.根據權利要求4所述的用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面的制備方法，其特征在于步驟(3)所述液面層的厚度為0. 5mm 1cm。
9.根據權利要求4所述的用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面的制備方法，其特征在于步驟(4)所述的UV照射，其相關參數是UV燈管功率300 1000W，照射時間30s 30min，UV燈管與培養表面的距離3 13cm ；步驟(5)所述的清洗是用去離子水超聲清洗3次，每次lOmin。
10.權利要求1或2所述的用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面在細胞無血清培養中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面及其制備方法，該多肽生物納米表面由以下步驟制備得到通過等離子體預先處理細胞培養表面，接著將細胞培養表面暴露在空氣或氧氣中，再將多肽溶液鋪展在細胞培養表面上，然后置于紫外光下照射，得到用于無血清細胞培養的多肽生物納米表面。本發明所得到的多肽生物納米表面穩定，可在常溫下長時間儲存，接枝表面接枝成分明確，可以替代市面上常規的各種蛋白的包被表面，使細胞在無血清條件下實現良好的貼壁和增殖；與各種動物來源的蛋白包被表面相比，短肽具有無異源性或弱異源性的特點，因此該化學合成多肽接枝表面大大降低了臨床的應用風險，從而為后續的臨床應用打下了堅實的基礎。
文檔編號C12N5/00GK102533632SQ20121001417
公開日2012年7月4日 申請日期2012年1月17日 優先權日2012年1月17日
發明者任輝, 張曙光, 秦煒, 董友玉, 韓藍青 申請人:海貍納米科技(蘇州)有限公司