專利名稱：：一種治療傷痛的中藥制劑的質量控制方法
技術領域：
：本發明涉及一種中藥制劑的質量控制方法，尤其涉及一種治療傷痛的中藥制劑的質量控制方法。
背景技術：
：本發明制劑傷痛寧膠囊具有活血祛瘀，消腫止痛；加快骨痂生長；促進骨折早期愈合；促進創面損傷修復的功效，是對于骨傷的治療非常有效的一種中藥制劑。現有品種中，存在同品種不同劑型的傷痛寧制劑，但對于如何更好的控制它的質量，保證廣大患者的用藥安全卻鮮有人研究。本發明就是為了能夠更好的控制本品的質量，達到更好更安全的治療效果。資料表明，連續服用含有馬兜鈴酸的中藥時間最長不能超過一個月，否則會引起蓄積性中毒反應，這種中毒是隱匿性的，直接損害人體腎臟器官，嚴重者可能因腎功能衰竭而死亡。關于馬兜鈴酸造成腎臟損害的報告始于1993年，相繼有比利時、英國、波蘭、法國、R本等國的媒體披露了因服用含有馬兜鈴酸的中藥治療濕疹或減肥而導致腎功能異常的病例。經査，罪魁禍首就是關木通和廣防己等藥材中的馬先鈴酸。所以，為了保證本發明制劑中所用原料藥細辛中不含有馬兜鈴酸，我們通過含量測定的方法對細辛進行了檢查，發現并沒有檢出馬兜鈴酸，從而能更好地保證藥品的質量和廣大患者的用藥安全。
發明內容本發明的目的是提供一種治療傷痛的中藥制劑的質量控制方法，它是由原料藥制乳香、制沒藥、甘松、醋制延胡索、細辛、制香附、山柰、白芷所制備的傷痛寧膠囊的質量控制方法，以此來更好的保證藥品的穩定性，質量可控性，使用藥更為安全、有效。本發明的目的是通過如下的技術方案來實現的，包括以下的鑒別和/或顯微鑒別和/或細辛中馬兜鈴酸的限量測定延胡索的鑒別取本品內容物1.5-4.5g，加乙醚10-30m]，浸漬0.5-1.5小時，傾去乙醚液，加濃氨試液1.5-么5ml使濕潤，加乙醚10-30ml浸潰1.5-4.5小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇().5-1.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索乙素對照品，加無水乙醇制成每0.5-1.5ml中含0.05-0.15rag的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2.5-7.5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯一丙酮(8-25:1.5-4.5)為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑點顯色清晰，揮去碘后，置365mn紫外光下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。顯微鑒別取本品內容物，置顯微鏡下觀察淀粉粒多為單粒，類球形或三角形，常聚集成團，臍點人字形，層紋不明顯；導管多破碎，主為螺紋及梯紋導管，導管分子較長大；厚壁細胞，表面觀呈類多角形或類長方形，壁厚，紋孔不明顯；非腺毛，單細胞多分隔，淡黃色完整者較長，先端較尖，略彎曲；纖維多成束，黃色或黃棕色，韌型纖維微彎曲，末端尖或鈍圓，有明顯的單斜紋孔；石細胞，黃色，單個散離，呈類圓形，類方形，或作不規則分枝狀，類圓形者壁極厚，層紋細密，孔溝多不明顯；分枝狀石細胞的壁較薄，胞腔較大；色素塊黃色或黃棕色，多呈不規則形，散在；油細胞散在，無色或淡黃色，表面觀呈類圓形或類方形。傷痛寧膠囊的原材料細辛藥材中馬兜鈴酸的限量實驗，具體的試驗方法及結果如下1、儀器與試藥儀器島津LC一10ATVP高效液相色譜儀;C18(Hypersi]0DS20(M,6mm,5u，大連依利特公司)色譜柱。試劑甲醇為色譜試劑，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。對照品馬兜鈴酸為中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用，批號為0746—200103。2、色譜條件流動相參照文獻中馬先鈴酸測定方法的流動相，經試驗表明以甲醇_4%冰醋酸溶液(55:45)為流動相較好。檢測波長經對馬兜鈴酸的對照品溶液進行紫外掃描，其最大吸收波長在315nm，故選擇315nm作為檢測波長。馬先鈴酸對照品的紫外掃描圖見圖1。流速l.Oml/min.對照品、供試品、細辛藥材色譜圖分別見圖2、3、4。3、供試品溶液的制備參照文獻中馬先鈴酸含量測定的提取方法，確定本品供試品溶液的制備方法如下取本品內容物4.0g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，加甲醇100ml，密塞，稱定重量，超聲處理40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密吸取續濾液50.0ml，置蒸發皿中，水浴上蒸干，殘渣加0.1mol/L氫氧化鈉溶液30mi分次溶解，并轉移至分液漏斗中，用三氯甲垸提取6次，每次20ml，棄去三氯甲烷液，堿水溶液加5mol/L鹽酸溶液調節pH至2左右，再用三氯甲烷提取4次，每次20ml，合并三氯甲烷液，水浴上蒸干，殘渣加甲醇分次偉溶解，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得。4、對照品溶液的制備精密稱取馬兜鈴酸對照品6mg，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5.0ml，置50ral量瓶中，加甲醉稀釋至刻度，搖勻，即得(每lml中含馬兜鈴酸12ug)5、測定法分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得。6、線性關系考察精密吸取濃度為12ug/ml的馬兜鈴酸對照品溶液l、2、4、6、8、10wl進祥，測定其峰面積積分值，以進樣量(ng)為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，其回歸方程為Y=2985.5427X+2943.633，r=0.99997。結果表明馬兜鈴酸在12—120ng范圍內具有良好的線性關系。數據見表l。標準曲線圖見圖5。表1線性關系考察結果表<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>7、最低檢測限精密吸取濃度為12yg/ml的馬兜鈴酸對照品溶液1.Oml，置100ml量瓶中，加甲醉稀釋至刻度，搖勻，吸取10yl注入液相色譜儀，測定，結果見圖6。馬兜鈴酸峰的信噪比(S/N)約為IO，最低檢測限為1.2ng。8、加樣試驗取本品(批號20040315)內容物4.0g，精密稱定，分別精密加入馬兜鈴酸對照品溶液(120ng/ml)l.Oml，B卩120ug，甲醇99ml，按上述檢査方法測定馬兜鈴酸，結果見圖7。結果表明馬兜鈴酸峰可與樣品中的其它色譜峰較好的分離。9、成品與藥材測定結果9.1藥材測定結果9取細辛粉末4.0g,精密稱定，按成品質量標準中馬兜鈴酸的檢查方法，測定馬兜鈴酸，結果本品所細辛中未檢測到馬充鈴酸，見圖4。本品所用細辛的來源為馬兜鈴酸科植物北細辛AsarumheterotropoidesFr.Schmidtvar.隨ndshuricum(Maxim.)Kitan.、的干燥全草。產地為遼寧。9.2成品測定結果按擬定的檢査方法測定6批成品中的馬兜鈴酸，結果均未檢測到馬兜鈴酸。根據最低檢測限，本品中的馬兜鈴酸寒含量在0.6ppm以下。在與對照品溶液相對比后，樣品馬兜鈴酸峰形與保留時間與對照品溶液相近，且陰性樣品無干擾。在經"線性關系實驗"、"最低檢測限"、"加樣試驗"后，證明該方法專屬性強，能夠準確地測定樣品中馬先鈴酸的含量。符合本發明質量標準的傷痛寧膠囊具有以下藥效傷痛寧膠囊系溫經通脈、活血化瘀之方劑。多用于治療跌打損傷、胃脘痛、痛經等病證。運用本藥的基本指征是傷處青紫腫痛、不敢觸碰，或脘腹冷痛，喜溫拒按，舌淡或紫，脈象弦澀。這些指征體現了氣滯血瘀，寒邪痹證經脈的病機，所以應用甚廣。如1、閃腰岔氣表現為傷處疼痛，活動受限，痛如針刺，或皮膚青紫，努傷咳嗽，呼吸痛甚，舌紅或暗，脈弦或澀。西醫學診斷之努傷、捩傷、軟組織損傷，見上述表現者，屬此范圍。2、痹證表現為關節疼痛如剌，遇寒尤甚，活動受限，喜溫喜暖，甚則腫脹，'舌淡脈細。西醫學診斷之風濕性關節炎、外傷性關節炎，見以上臨床表現者屬之。3、胃脘痛表現為胃脘痛，勢如針刺，喜溫拒按，大便黑如柏油，舌淡或暗，脈象弦細或弦澀。西醫學之胃潰瘍、十二指腸球部潰瘍等，見上述表現者，按此辨治。4、痛經表現為經來腹痛，其色紫黑，愆期而致，腹痛如刺，定處不移，喜溫拒按，舌暗有瘀斑，脈象弦澀。西醫學診斷之月經不調、附件炎等，見上述表現者，皆可用之。本發明的優點在于能夠通過對處方中多種原料藥的鑒別和含量測定，來有效地保證所生產出來的傷痛寧膠囊的藥效和穩定性，從而能夠更好地保護廣大患者用藥的安全。具體實施例具體實施例一延胡索的鑒別取本品內容物3g，加乙醚20ml，浸漬l小時，傾去乙醚液，加濃氨試液3ml使濕潤，加乙醚2()ml浸漬3小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇lml使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索乙素對照品，加無水乙醇制成每lml中含O.lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯一丙酮(17:3)為展開劑，展開，取出，晾千，置碘蒸汽中熏至斑點顯色清晰，揮去碘后，置紫外光下(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。檢驗三批樣品均符合規定，陰性溶液無干擾。具體實施例二顯微鑒別取本品'內容物，置顯微鏡下觀察淀粉粒多為單粒，類球形或三角形，常聚集成團，臍點人字形，層紋不明顯；導管多破碎，主為螺紋及梯紋導管，導管分子較長大；厚壁細胞，表面觀呈類多角形或類長方形，壁厚，紋孔不明顯；非腺毛，單細胞多分隔，淡黃色完整者較長，先端較尖，略彎曲；纖維多成束，黃色或黃棕色，韌型纖維微彎曲，末端尖或鈍圓，有明顯的單斜紋孔；石細胞，黃色，單個散離，呈類圓形，類方形，或作不規則分枝狀，類圓形者壁極厚，層紋細密，孔溝多不明顯；分枝狀石細胞的壁較薄，胞腔較大；色素塊黃色或黃棕色，多呈不規則形，散在；油細胞散在，無色或淡黃色，表面觀呈類圓形或類方形。具體實施例三細辛中馬兜鈴酸的含量測定含量測定，照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-4%冰醋酸溶液(55:45)為流動相；檢測波長為315nm，理論板數按馬兜鈴酸峰計應不低于3000;對照品溶液的制備精密稱取馬兜鈴酸對照品適量，加甲醇制成每lml中含10ug的溶液，即得；供試品溶液的制備:.取本品內容物4.0g,精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，加甲醇100ml，密塞，稱定重量，超聲處理40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重要，搖勻，濾過；精密吸取續濾液50.0ral，置蒸發皿中，水浴上蒸干，殘渣加0.lmol/L氫氧化鈉溶液30ml分次溶解，并轉移至分液漏斗中，用三氯甲烷提取6次，每次20ml，棄去三氯甲烷液，堿水溶液加5mol/L鹽酸溶液調節PH至2左右，再用三氯甲烷提取4次，每次20ml，合并三氯甲烷，水浴上蒸干，殘渣加甲醇分次使溶解，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，進行測定。用上述方法，不得檢出馬兜鈴酸。1、(1)圖1為馬兜鈴酸對照品紫外掃描(2)圖2為馬兜鈴酸對照品HPLC色譜(3)圖3為傷痛寧膠囊供試品HPLC色譜(4)圖4為細辛藥材HPLC色譜(5)圖5為馬兜鈴酸對照品標準曲線(6)圖6為馬兜鈴酸對照品最低檢測限HPLC色譜(7)圖7為傷痛寧膠囊供試品加馬兜鈴酸對照品的HPLC色譜圖。權利要求1、一種治療傷痛的中藥制劑的質量控制方法，該中藥制劑由原料藥制乳香、制沒藥、甘松、醋制延胡索、細辛、制香附、山柰、白芷所制備，其特征在于通過對延胡索的鑒別和/或顯微鑒別和/或細辛中馬兜鈴酸的限量測定來進行質量控制。2、如權利要求l所述的一種治療傷痛的中藥制劑的質量控制方法，其特征在于所述的中藥制劑是傷痛寧膠囊。3、如權利要求l所述的一種治療傷痛的中藥制劑的質量控制方法，其特征在于它所用延胡索的薄層色譜法是通過實施以下的具體鑒別方法來實現控制藥品質量的目的的延胡索的鑒別取本品內容物1.5-4.5g，加乙醚10-30inl，浸漬0.5-1.5小時，傾去乙醚液，加濃氨試液1.5-4.5ml使濕潤，加乙醚10-30ml浸漬1.5-4.5小時，濾過，濾液蒸千，殘渣加無水乙醇0.5-1.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索乙素對照品，加無水乙醇制成每0.5-1.5ml中含0.05-0.15mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2.5-7.5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以比例為8-25:1.5-4.5的苯一丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑點顯色清晰，揮去碘后，置365nni紫外光下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。4、如權利要求3所述的一種治療傷痛的中藥制劑的質量控制方法，其特征在于它所用延胡索的薄層色譜法是通過實施以下的具體鑒別方法來實現控制藥品質量的目的的延胡索的鑒別取本品內容物3g，加乙醚20m]，浸漬l小時，傾去乙醚液，加濃弒試液3ml使濕潤，加乙醚20ml浸漬3小時'，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇Jml使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索乙素對照品，加無水乙醇制成每lml中含O.lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以比例為17:3的苯一丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑點顯色清晰，揮去碘后，置365nm紫外光下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。5、如權利要求l所述的一種治療傷痛的屮藥制劑的質量控制方法，其特征在于它所用顯微鑒別是通過實施以下的方法來實現控制藥品質量的目的的取本品內容物，置顯微鏡下觀察淀粉粒多為單粒，類球形或三角形，常聚集成閉，臍點人字形，層紋不明顯；導管多破碎，主為螺紋及梯紋導管，導管分子較長大；厚壁細胞，表面觀呈類多角形或類長方形，壁厚，紋孔不明顯；非腺毛，單細胞多分隔，淡黃色完整者較長，先端較尖，略彎曲；纖維多成朿，黃色或黃棕色，韌型纖維微彎曲，末端尖或鈍圓，有明顯的單斜紋孔；石細胞，黃色，單個散離，呈類圓形，類方形，或作不規則分枝狀，類圓形者壁極厚，層紋細密，孔溝多不明顯；分枝狀石細胞的壁較薄，胞腔較大；色素塊黃色或黃棕色，多呈不規則形，散在；油細胞散在，無色或淡黃色，表面觀呈類圓形或類方形。6、如權利要求1-5所述的一種治療傷痛的中藥制劑的質量控制方法，其特征在于其對細辛中馬兜鈴酸的限量測定采用如下的方法來實現的含量測定，照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以比例為55:45的甲醇-4%冰醋酸溶液為流動相；檢測波長為315nm，理論板數按馬兜鈴酸峰計應不低于3000;對照品溶液的制備精密稱取馬兜鈴酸對照品適量，加甲醉制成每lmi中含l()ug的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品內容物2.0-6.0g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，加甲醇50-150ml，密塞，稱定重量，超聲處理20-60分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重要，搖勻，濾過；精密吸取續濾液25-75ml，置蒸發皿中，水浴上蒸干，殘渣加0.05-0.15moJ/L氫氧化鈉溶液15-45ml分次溶解，并轉移至分液漏斗中，川三氯甲烷提取3-9次，每次10-30ml,棄去三氯甲烷液，堿水溶液加2.5-7.5mol/L鹽酸溶液調節PH至1-3左右，再用三氯甲烷提取2-6次，每次10-30ml，合并三氯甲烷，水浴上蒸干，殘渣加甲醇分次使溶解，置10ml量瓶中，加甲醉至刻度，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5-15ul，注入液相色譜儀，進行測定。7、如權利要求6所述的一種治療傷痛的中藥制劑的質量控制方法，其特征在于它采用如下的方法對細辛中馬兜鈴酸的含量進行限定含量測定，照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以比例為55:45的甲醇-4%冰醋酸溶液為流動相；檢測波長為315nm,理論板數按馬兜鈴酸峰計應不低于3000;對照品溶液的制備:精密稱取馬兜鈴酸^t^品適量，加甲醉制成每lml中含10叫的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品內容物4.0g，精密稱定，置10()ml具塞錐形瓶中，加甲醇J00m丄，密塞，稱定重量，超聲處理40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醉補足減失的重要，搖勻，濾過；精密吸取續濾液5().0ml,置蒸發皿中，水浴上蒸千，》戔渣加().lmol/L氣氧化鈉溶液30ml分次溶解，并轉移至分液漏斗中，用三氯甲垸提取6次，每次20ml，棄去三氯甲烷液，堿水溶液加5mol/L鹽酸溶液調節PH至2左右，再用三氯甲垸提取4次，每次20m]，合并三氯甲烷，水浴上蒸千，殘渣加甲醇分次使溶解，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，進行測定；用上述方法，不得檢出馬兜鈴酸。全文摘要本發明公開了一種中藥制劑的質量控制方法，它是一種治療傷痛的傷痛寧膠囊的質量控制方法。本發明的質量控制方法是通過對處方中的蒲公英、狗脊、赤芍中的一種或多種原料藥進行鑒別或含量測定來達到有效控制產品質量的目的。見摘要附圖。本發明的優點在于能夠通過對處方中多種原料藥的鑒別和含量測定，來有效地保證所生產出來的傷痛寧膠囊的藥效和穩定性，從而能夠更好地保護廣大患者用藥的安全。文檔編號A61K9/48GK101357204SQ200810030998公開日2009年2月4日申請日期2008年4月3日優先權日2008年4月3日發明者王衡新申請人:王衡新