專利名稱：快速繁殖庫拉索蘆薈的培養基的制作方法
技術領域：
本發明涉及對蘆薈進行繁殖的培養基。
蘆薈目前被廣泛用于藥物原料、化妝品成分和食品保健品等方面。特別是庫拉索蘆薈由于葉厚，產量高，生物活性功能成分豐富而受到社會重視，需求量越來越大。但由于它本身無法完成有性繁殖，靠無性繁殖(扦插或分株)完成擴充速度太慢，而對庫拉索蘆薈進行組織培養可更快的繁殖種苗，雖然國內外均開始研究，但要真正運用工廠化生產仍需在工藝、效率及配方上進一步細化。
本發明的目的旨在提供一種可對庫拉索蘆薈進行快速繁殖，可進行工廠化生產，工藝效率高的快速繁殖庫拉索蘆薈的培養基。
本發明的目的是通過下述方式實現的本發明將組織培養過程細分為三步即叢生芽的誘導階段、快速增殖階段和生根培養階段，每步相對應的培養基分別為誘導小苗分化培養基含有MS常規基本培養基、6芐基腺嘌呤2毫克/升、吲哚乙酸0.1毫克/升，瓊脂0.65％，蔗糖3.0％；快速增殖階段的增殖培養基含有MS常規基本培養基、6芐基腺嘌呤2毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升、瓊脂0.65％、蔗糖3％；生根培養基含有1/2MS常規基本培養基、2.4毫克/升吲哚乙酸、瓊脂0.65％、蔗糖3.0％，其中瓊脂、蔗糖均指質量含量。
將每步中的培養基調整PH為5.8～6.0。
下面結合附圖
對本發明作進一步詳細說明。
附圖為本發明的工藝流程圖。
參見附圖所示，利用本發明培養庫拉索蘆薈的過程為1、培養基的配參見附圖所示，利用本發明培養庫拉索蘆薈的過程為1、培養基的配制，分別將三種培養基按比例進行配制，MS(Marashige&Sroog)為常規基本培養基。將配制好的培養基(有關成分含量見表I)加熱溶解后調整PH值為5.8～6.0，裝入洗凈的圓柱瓶中，封口后高壓在120℃左右蒸氣下滅菌15分鐘左右。
表I各階段培養基中激素、蔗糖及瓊脂含量 *IBA-吲哚乙酸，NAA-荼乙酸，BA-6芐基腺嘌呤2，外植體選擇與處置。
選擇生長健壯、無病無蟲、著葉緊湊、高約30厘米的庫拉索蘆薈苗嫩莖作培養的外植體，清水洗去表面雜物，再用飽和洗衣粉搖動5分鐘轉入清水漂洗進入接種室，先用75％酒精滅菌5秒，立即用0.15％HgCL2滅菌10分鐘，無菌水沖洗4次，瀝干后切成0.6厘米厚的小段，用于接種。
3、叢生芽誘導培養。
將外植體接種在分化培養基上，直徑8厘米的圓柱瓶每瓶接種3段，培養條件為26℃+(-)2℃，照光12h，光強1500lx(勒克司)。發現被菌類污染的及時揀出，45天左右即長許多叢生小芽(每外植體四周著生21個左右)，用于增殖或繼代培養。
4、快速增殖。
將叢生芽分開，轉入增殖培養基中，每培養瓶接種18～25個，溫光不變，25天，葉長至2cm以上。
5、生根培養。
將快速增殖培養的苗轉入生根培養基中，在照光12H，光照2000lx下培養，長出5～6根(15天左右)后，轉入煉苗。
6、試管苗的移植。
移植前先將培養瓶在普通房間內敞口3天，洗去根部培養基，晾干后移植在大棚的苗床中。
下面將通過一些具體實驗情況來說明本發明所述為培養基為培養庫拉索蘆薈為最適宜配比。
首先是生長物質對試管苗芽分化的影響。
為了尋找最有效的生長物質，以便誘導愈傷組織分化出更多的芽，我們對生長物質的種類和濃度進行了實驗，表II是在有激動素BA(2ppm)的情況下，加入NAA或IBA后芽形成情況。
表II 生長素對試管苗芽分化的影響
上表表明IBA0.10ppm對庫拉索蘆薈芽增殖系數最高。
另外是生長素對試管苗生根的影響。
試管苗的生根數及成活率是影響大田栽培成活和生產成本的關鍵因素，而不同生長素對此的影響有差別(表III)，我們的工作表明，2.4ppm的IBA是最適當的一種方法。
表III 生長素對試管苗生根的影響
瓊脂濃度對繁殖的影響。
組培過程中，瓊脂使用量較大，其作用又僅僅是作為營養物的載體，因此，探索其最低的有效用量是降低生產成本的重要措施，我們的實踐表明，0.65％的瓊脂用量是實行蘆薈組培的經濟方式，單項成本節約近20％。
表IV 瓊脂濃度對繁殖速度的影響
綜上所述，本發明將組織培養過程細分為三步，每步對應配有相應的培養基，可直接運用到工廠化生產，工藝、效率、配方上進行了細化，具有準確定量，成本低，擴繁速度快，生產效率高特點。首批生產周期為85-95天，增殖系數為20左右，正常生產后生產周期為60天，并且具有可調性。
權利要求
1.快速繁殖庫拉索蘆薈的培養基，組織培養過程細分為三步即叢生芽的誘導階段、快速增殖階段和生根培養階段，每步相對應的培養基分別為誘導小苗分化培養基含有MS常規基本培養基、6芐基腺嘌呤2毫克/升、吲哚乙酸0.1毫克/升，瓊脂0.65％，蔗糖3.0％；快速增殖階段的增殖培養基含有MS常規基本培養基、6芐基腺嘌呤2毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升、瓊脂0.65％、蔗糖3％；生根培養基含有1/2MS常規基本培養基、2.4毫克/升吲哚乙酸、瓊脂0.65％、蔗糖3.0％，其中瓊脂、蔗糖均指質量含量。
2.如權利要求1所述的快速繁殖庫拉索蘆薈培養基，每步中的培養基調整PH為5.8～6.0。
全文摘要
快速繁殖庫拉索蘆薈培養基,誘導小苗分化培養基含有MS常規基本培養基、6芐基腺嘌呤2毫克/升、吲哚乙酸0.1毫克/升,瓊脂0.65%,蔗糖3.0%;快速增殖階段的增殖培養基含有MS常規基本培養基、6芐基腺嘌呤2毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升、瓊脂0.65%、蔗糖3%;生根培養基含有1/2MS常規基本培養基、2.4毫克/升吲哚乙酸、瓊脂0.65%、蔗糖3.0%,其中瓊脂、蔗糖均指質量含量。可對庫拉索蘆薈進行快速繁殖,可實現工廠化生產及工藝效率高的特點。
文檔編號A01H4/00GK1389102SQ0111450
公開日2003年1月8日 申請日期2001年5月31日 優先權日2001年5月31日
發明者楊力, 蔣臘才, 龔石洋 申請人:湖南金正方生物科技有限公司