專利名稱：抗植物病毒農用嘧肽霉素及其制備工藝的制作方法
技術領域：
本發明屬于微生物發酵工程技術領域，特別涉及一種抗植物病毒農用抗生素及其制備工藝領域。
農用抗生素作為一類生物農藥，因其具有低毒、高效、選擇性強、殘留時間短、無三致和公害等特點，正日益受到世界各國的重視。但是，農用抗生素在植物病毒病害防治領域卻是一個薄弱環節。20世紀70年代，日本報道了香菇菌發酵液Rentemin有抗病毒活性。國外關于放線菌次生代謝產物抗抑制植物病毒的報道也有許多，如月桂霉素、絲裂霉素、阿博霉素、桔霉素及諾卡霉素等，但均未達到農藥使用階段。我國研究人員從天然和合成兩方面開展了抗植物病毒藥劑的研制工作。90年代初，我國開發了食用菌蛋白多糖，1997年一種新的農用抗生素寧南霉素被報道，主要用于防治植物真菌病害，也對煙草花葉病毒有抑制作用，并獲得了臨時登記。但是，縱觀現有的抗病毒生物農藥其實際應用效果還不理想，遠不能滿足生產所需。
本發明所要解決的技術方案可依如下方式實現本發明抗植物病毒農用嘧肽霉素，其化學結構式為 上述抗植物病毒農用嘧肽霉素的制備工藝，其特征在于按如下步驟依次進行(A)菌種擴繁過程；采用小白鏈霉菌(Streptomyces albulus tz92)，在三角瓶及種子罐中加入下列基礎培養成分(重量百分含量)玉米粉 2.0花生餅粉3.0淀粉1.0酵母粉 0.05NaCl1.5(NH4)2SO40.02MgSO4·7H2O 0.002K2HPO40.0025；其余為水培養條件采用三角瓶培養結合種子罐培養30小時～60小時；其溫度控制在25℃～35℃，PH值7.0～7.4，壓強控制在0.05～0.2Mpa，滅菌20分鐘～40分鐘備用；(B)發酵抗生素生成過程；將A步驟形成的培養液送入發酵罐進行發酵；在發酵罐內加入下列培養基(重量百分含量)玉米粉 2.0淀粉 1.0葡萄糖 2.0花生餅粉 3.0酵母粉 0.2硫酸銨 0.4硫酸鈣 0.4碳酸鈣 0.4氯化鈉 0.3
其余為水；在上述物料放入發酵罐后，消毒前調整PH值使其控制在6.0～7.0，壓強控制在0.1～0.12Mpa，空氣流量1(0.2～1.0)；培養時間為50小時～70小時；(C)發酵后處理；按以下步驟依次進行1)放罐前，預先用蒸汽對送料管路進行消毒；2)通過加熱裝置對送料管路中的發酵液進行加熱使其溫度達到100℃；3)用空氣壓縮機將送料管路中的發酵液壓入板框過濾機，過濾得清液，用濃度為6N的HCl或草酸調整清液的PH值使其控制在4.0～5.0；4)將最終得到的清液抽入到濃縮罐中，在700mmHg真空度，蒸汽壓0.02～0.06Mpa，溫度在70℃～80℃條件下進行減壓濃縮，使濃縮液效價控制在15000單位/ml以上；5)加入穩定劑，助劑，抽樣測定生物效價后，得成品。
本發明的上罐接種量7.5％～15％(V/V)，液體種子的種齡30～40小時。
本發明在發酵罐中可加硅酮消泡劑0.5～0.8/萬(V/V)。
本發明在發酵后處理時，發酵液加入0.8％(重量百分含量)苯甲酸鈉或0.5～1.5％(重量百分含量)的尼泊金穩定劑；及Toween80助劑。
本發明具有如下優點；(A)具有穩定的原料來源，且成本低，適合大規模工業化生產。如發酵配方中所采用的原料主要有玉米粉、花生餅粉、酵母粉、葡萄糖等。
(B)產品質量穩定。在保證原料穩定的同時，可以通過嚴格控制各項發酵參數，來控制成品的質量，從而形成科學完整的質量體系，該產品對光、熱、酸等穩定，濃縮液在常溫下保存2年不失效。
(C)本產品低毒，對人、畜無毒害，對作物無藥害，不刺激皮膚、眼等，耐雨水沖刷。
(D)預防植物病毒病效果明顯。據遼寧省幾個市、縣及北京、吉林、黑龍江等地蔬菜、煙草、玉米等作物大田試驗，嘧肽霉素對辣椒花葉病、番茄蕨葉病、煙草花葉病、玉米矮花葉病平均預防效果達85.4％以上，明顯高于對照藥劑病毒A和植病靈。
(E)治療植物病毒病效果更為突出。據遼寧省5846畝辣椒、番茄大田試驗，在辣椒花葉病、番茄蕨葉病發生以后，噴施嘧肽霉素，平均防治效果達72.8％以上，顯著優于對照藥劑病毒A和植病靈。
花生餅粉 3.0酵母粉0.2硫酸銨0.4硫酸鈣0.4碳酸鈣0.4氯化鈉0.3其余為水；在上述物料放入發酵罐后，消毒前調整PH值使其控制在6.0，壓強控制在0.1Mpa，空氣流量1∶0.2；培養時間為50小時；(C)發酵后處理；按以下步驟依次進行1)放罐前，預先用蒸汽對送料管路進行消毒；2)通過加熱裝置對送料管路中的發酵液進行加熱使其溫度達到100℃；3)用空氣壓縮機將送料管路中的發酵液壓入板框過濾機，過濾得清液，用濃度為6N的HCl調整清液的PH值使其控制在4.0；4)將最終得到的清液抽入到濃縮罐中，在700mmHg真空度，蒸汽壓0.02Mpa，溫度在70℃條件下進行減壓濃縮，使濃縮液效價控制在15000單位/ml以上；5)在發酵液中加入0.8％(重量百分含量)苯甲酸鈉或0.5％(重量百分含量)的尼泊金穩定劑及Toween80助劑，抽樣測定生物效價后，得成品。
本發明在發酵過程中上罐接種量7.5％(V/V)，液體種子的種齡30小時，發酵罐中加硅酮消泡劑0.5/萬(V/V)。
(A)菌種擴繁過程；采用小白鏈霉菌(Streptomyces albulus tz92)，在三角瓶及種子罐中加入下列基礎培養成分(重量百分含量)玉米粉 2.0花生餅粉 3.0淀粉 1.0酵母粉 0.05NaCl 1.5(NH4)2SO40.02MgSO4·7H2O 0.002K2HPO40.0025；其余為水培養條件采用三角瓶培養結合種子罐培養60小時；其溫度控制在35℃，PH值7.4，壓強控制在0.2Mpa，滅菌40分鐘備用；(B)發酵抗生素生成過程；將A步驟形成的培養液送入發酵罐進行發酵；在發酵罐內加入下列培養基(重量百分含量)玉米粉 2.0淀粉 1.0葡萄糖 2.0花生餅粉 3.0酵母粉 0.2硫酸銨 0.4硫酸鈣 0.4碳酸鈣 0.4氯化鈉 0.3其余為水；在上述物料放入發酵罐后，消毒前調整PH值使其控制在7.0，壓強控制在0.12Mpa，空氣流量1∶1.0；培養時間為50小時；(C)發酵后處理；按以下步驟依次進行1)放罐前，預先用蒸汽對送料管路進行消毒；2)通過加熱裝置對送料管路中的發酵液進行加熱使其溫度達到100℃；
3)用空氣壓縮機將送料管路中的發酵液壓入板框過濾機，過濾得清液，用草酸調整清液的PH值使其控制在5.0；4)將最終得到的清液抽入到濃縮罐中，在700mmHg真空度，蒸汽壓0.06Mpa，溫度在80℃條件下進行減壓濃縮，使濃縮液效價控制在15000單位/ml以上；5)在發酵液中加入0.8％(重量百分含量)苯甲酸鈉或1.5％(重量百分含量)的尼泊金穩定劑及Toween80助劑，抽樣測定生物效價后，得成品。
本發明上罐接種量15％(V/V)，液體種子的種齡40小時。在發酵罐中加硅酮消泡劑0.8/萬(V/V)。
實施例3本發明抗植物病毒農用嘧肽霉素，其化學結構式為 其分子式為C19H29N7O10其分子量為515；上述抗植物病毒農用嘧肽霉素的制備工藝，其特征在于按如下步驟依次進行(A)菌種擴繁過程；采用小白鏈霉菌(Streptomyces albulus tz92)，在三角瓶及種子罐中加入下列基礎培養成分(重量百分含量)玉米粉 2.0花生餅粉3.0淀粉1.0酵母粉 0.05NaCl1.5(NH4)2SO40.02MgSO4·7H2O 0.002K2HPO40.0025；其余為水培養條件采用三角瓶培養結合種子罐培養40小時；其溫度控制在30℃，PH值7.2，壓強控制在0.1Mpa，滅菌30分鐘備用；(B)發酵抗生素生成過程；
將A步驟形成的培養液送入發酵罐進行發酵；在發酵罐內加入下列培養基(重量百分含量)玉米粉 2.0淀粉 1.0葡萄糖 2.0花生餅粉 3.0酵母粉 0.2硫酸銨 0.4硫酸鈣 0.4碳酸鈣 0.4氯化鈉 0.3其余為水；在上述物料放入發酵罐后，消毒前調整PH值使其控制在6.5，壓強控制在0.11Mpa，空氣流量1∶0.25；培養時間為60小時；(C)發酵后處理；按以下步驟依次進行；1)放罐前，預先用蒸汽對送料管路進行消毒；2)通過加熱裝置對送料管路中的發酵液進行加熱使其溫度達到100℃；3)用空氣壓縮機將送料管路中的發酵液壓入板框過濾機，過濾得清液，用濃度為6N的HCl調整清液的PH值使其控制在4.5；4)將最終得到的清液抽入到濃縮罐中，在700mmHg真空度，蒸汽壓0.04Mpa，溫度在75℃條件下進行減壓濃縮，使濃縮液效價控制在15000單位/ml以上；5)在發酵液中加入0.8％(重量百分含量)苯甲酸鈉或0.9％(重量百分含量)的尼泊金穩定劑及Toween80助劑，抽樣測定生物效價后，得成品。
本發明上罐接種量10％(V/V)，液體種子的種齡35小時。在發酵罐中加硅酮消泡劑0.6/萬(V/V)。
權利要求
1.一種抗植物病毒農用嘧肽霉素，其化學結構式為
2.一種制備如權利要求1所述抗植物病毒農用嘧肽霉素的制備工藝，其特征在于按如下步驟依次進行(A)菌種擴繁過程；采用小白鏈霉菌(Streptomyces albulus tz92)，在三角瓶及種子罐中加入下列基礎培養成分(重量百分含量)玉米粉 2.0花生餅粉3.0淀粉1.0酵母粉 0.05NaCl 1.5(NH4)2SO40.02MgSO4·7H2O 0.002K2HPO40.0025；其余為水培養條件采用三角瓶培養結合種子罐培養30小時～60小時；其溫度控制在25℃～35℃，PH值7.0～7.4，壓強控制在0.05～0.2Mpa，滅菌20分鐘～40分鐘備用；(B)發酵抗生素生成過程；將A步驟形成的培養液送入發酵罐進行發酵；在發酵罐內加入下列培養基(重量百分含量)玉米粉 2.0淀粉 1.0葡萄糖 2.0花生餅粉3.0酵母粉 0.2硫酸銨 0.4硫酸鈣 0.4碳酸鈣 0.4氯化鈉 0.3其余為水；在上述物料放入發酵罐后，消毒前調整PH值使其控制在6.0～7.0，壓強控制在0.1～0.12Mpa，空氣流量1(0.2～1.0)；培養時間為50小時～70小時；(C)發酵后處理；按以下步驟依次進行1)放罐前，預先用蒸汽對送料管路進行消毒；2)通過加熱裝置對送料管路中的發酵液進行加熱使其溫度達到100℃；3)用空氣壓縮機將送料管路中的發酵液壓入板框過濾機，過濾得清液，用濃度為6N的HC或草酸調整清液的PH值使其控制在4.0～5.0；4)將最終得到的清液抽入到濃縮罐中，在700mmHg真空度，蒸汽壓0.02～0.06Mpa，溫度在70℃～80℃條件下進行減壓濃縮，使濃縮液效價控制在15000單位/ml以上；5)加入穩定劑，助劑，抽樣測定生物效價后，得成品。
3.根據權利要求2所述抗植物病毒農用嘧肽霉素的制備工藝，其特征在于上罐接種量7.5％～15％(V/V)，液體種子的種齡30～40小時。
4.根據權利要求2或3所述抗植物病毒農用嘧肽霉素的制備工藝，其特征在于發酵罐中加硅酮消泡劑0.5～0.8/萬(V/V)。
5.根據權利要求2或3所述抗植物病毒農用嘧肽霉素的制備工藝，其特征在于發酵后處理時，發酵液加入0.8％(重量百分含量)苯甲酸鈉或0.5～1.5％(重量百分含量)的尼泊金穩定劑；及Toween80助劑。
6.根據權利要求4所述抗植物病毒農用嘧肽霉素的制備工藝，其特征在于發酵后處理時，發酵液加入0.8％(重量百分含量)苯甲酸鈉或0.5～1.5％(重量百分含量)的尼泊金穩定劑及Toween80助劑。
全文摘要
本發明屬于微生物發酵工程技術領域，特別涉及一種抗植物病毒農用抗生素及其制備工藝領域，其化學結構式為其制備工藝按如下步驟依次進行(A)菌種擴繁；采用三角瓶培養結合種子罐培養30小時～60小時；溫度控制在25C～35℃，pH值7.0～7.4，壓強在0.05～0.2Mpa，滅菌20分鐘～40分鐘備用；(B)發酵抗生素生成；(C)發酵后處理。
文檔編號A01N43/90GK1428429SQ01138949
公開日2003年7月9日 申請日期2001年12月28日 優先權日2001年12月28日
發明者貝納新, 吳元華, 杜春梅, 劉秋 申請人:吳元華