專利名稱：一種腎臟保存液的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫療器械技術領域，是人體或動物的器官、組織或細胞的保存液，特別是一種腎臟的保存液。
背景技術：
我國腎移植工作的大規模開展始于上世紀70年代末80年代初，其中十分重要的一個推動力就是高滲枸櫞酸腺嘌呤(HCA)腎保存液的研制成功。該保存液可有效保存腎臟57小時。20多年來，該保存液在全國開展器官移植的醫療單位得到廣泛應用，在國內腎移植領域發揮了重要作用。(參考《腎臟保存實驗研究及臨床應用》中華泌尿外科雜志1982；3(1)17。)HCA液組成及主要技術參數(1000ml)如下K+80mmolNa+80mmolMgSO4 41mmol枸櫞酸鹽 55mmol甘露醇 30.2g腺嘌呤磷酸鹽 0.38mmolpH 7.14滲透壓 380mOsm/Kg
HCA腎保存液的主要特點有1、滲透壓高，防止細胞水腫的作用較強；2、含有腺嘌呤，為細胞提供一定的能量底物；3、含有硫酸鎂，有助于穩定細胞膜；4、價格低廉，公眾認同感較高。
但是該保存液也有其固有的不足1、硫酸鎂濃度較高，低溫下易析出，沉淀于保存液及腎血管中造成組織傷害；2、不含有效緩沖對，pH值不穩定，在長時間(24h以上)保存腎臟時不足以防止細胞酸化；3、含有較多生化制劑，純度達不到藥用標準。因此，在臨床實際應用中HCA液保存腎臟達24小時以上時，移植術后腎衰的發生率顯著升高。
美國威斯康星大學Belzer教授領導的科研小組于1987年研制成功的UW(University of Wisconsin)器官保存液是器官保存史上的一個突破，它大大提高了單純低溫灌洗法器官保存的效果，可保存胰或腎72小時，保存肝臟可達24小時。但是UW液的配方也并非無懈可擊，它粘滯度偏高，因而降溫速度慢，鉀離子含量過高，使用不當會引起術中心跳驟停，更為重要的是它價格非常昂貴，不適合我國國情。

發明內容
本發明提供一種酸堿度穩定、高滲、價廉、含有豐富能量底物、能防止缺血再灌注損傷并能有效保存腎臟達72小時的腎臟保存液。
本發明腎臟保存液的組分及主要技術參數如下
枸櫞酸鉀(C6H5K3O7·H2O) 20～30mmol/L枸櫞酸鈉(C6H5Na3O7·2H2O)20～30mmol/L硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 5～40mmol/L磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O) 10～20mmol/L磷酸二氫鈉(NaH2PO4·2H2O) 1～3mmol/L腺嘌呤核苷(C10H13N5O4) 1～10mmol/L左旋精氨酸(C6H14N4O2) 2～10mmol/L甘露醇(C6H14O6) 150～200mmol/L川芎嗪(C8H12N2·HCl·2H2O) 0～0.1mmol/L所配保存液的pH為7.3～8滲透壓為360±20mOsm/Kg本發明在配方組成上具有以下特點1、在溶液中添加磷酸鹽緩沖對，使溶液pH值穩定在7.3～8之間，有利于防止細胞乏氧代謝下迅速酸化導致的細胞損傷；2、添加腺苷作為能量底物，為缺氧條件下的細胞提供足夠的能量；3、添加左旋精氨酸，精氨酸是體內NO的生成底物，在NO合成酶(NOS)及其輔助因子作用下，精氨酸N端胍基脫氨氧化成NO，該通路稱為“L-精氨酸NO通路”。NO是一種脂溶性很強的小分子活性氮自由基，能自由通過細胞膜并減輕缺血再灌注損傷，并有效阻止細胞凋亡；4、維持溶液的高滲特性，溶液滲透壓340～380mOsm/Kg，有助于減輕細胞水腫；5、降低了MgSO4的濃度，減少其低溫下析出。6、原料全部為國產的符合國家藥典規范的藥用成分。7、配方中還可以加入中藥川芎嗪，川芎嗪具有抗脂質過氧化，提高SOD活性，抗自由基，抑制血小板聚集和活化以及維持TXA2/PGI2的平衡等作用，因此具有突出的抗缺血再灌注損傷的作用。
本發明組分間無配伍禁忌，所形成的腎保存液為無色透明的液體，性質穩定，可以高溫高壓消毒，可在-20℃～50℃條件下貯存，制備、運輸及使用均十分簡單方便。動物(犬)實驗表明本發明保存液可有效保存腎臟達72小時，試驗證明本發明保存液保存的腎臟質量顯著優于HCA液，并與UW液相當。
原料及其來源1、枸櫞酸鉀(potassium citrate)廣東臺山市新寧制藥廠產品。分子式C6H5K3O7·H2O。分子量324.41。
2、枸櫞酸鈉(sodium citrate)陜西西安市第四制藥廠產品。分子式C6H5Na3O7·2H2O。分子量294.10。
3、硫酸鎂(magnesium sulfate)上海寶達化工有限公司產品。分子式MgSO4·7H2O。分子量246.48。
4、磷酸氫二鈉(disodium phosphate)上海精化科技研究所產品。分子式Na2HPO4·12H2O。分子量358.14。
5、磷酸二氫鈉(sodium biphoophate)上海精化科技研究所產品。分子式NaH2PO4·2H2O。分子量156.01。
6、腺嘌呤核苷(adenosine)廣東肇慶市星湖公司產品。分子式C10H13N5O4。分子量267.25。
7、左旋精氨酸(L-Arginine)上海菲雅科技發展公司產品。分子式C6H14N4O2。分子量174。
8、川芎嗪(tertram ethylpyrazine)大同市惠達藥業有限責任公司產品。分子式C8H12N2·HCl·2H2O。分子量208.69。
9、甘露醇(mannitol)山東結晶集團有限公司產品。分子式C6H8(OH)6。分子量182.17。
具體實施例方式
現結合實施例，對本發明腎臟保存液的制備方法作詳細描述。
實施例1配制保存液I(1000ml)。
1、向1000ml容器內加入800ml雙蒸水；2、加入6488mg枸櫞酸鉀，攪拌使其溶解；3、加入6764mg枸櫞酸鈉，攪拌使其溶解；4、加入2465mg硫酸鎂，攪拌使其溶解；5、加入5372mg磷酸氫二鈉，攪拌使其溶解；6、加入270mg磷酸二氫鈉，攪拌使其溶解；7、加入535mg腺嘌呤核苷，攪拌使其溶解；8、加入350mg L-精氨酸，攪拌使其溶解；9、加入30g甘露醇，攪拌直至完全溶解；10、容量調整加入雙蒸水直至溶液總體積為1000ml，攪拌使溶液呈均勻、無色、澄明的液體；11、活性炭過濾后將濾液封裝，高溫高壓(109℃，45分鐘)消毒即可。
實施例2配制保存液II(1000ml)。
1、向1000ml容器內加入800ml雙蒸水；2、加入2578mg枸櫞酸鉀，攪拌使其溶解；
3、加入10284mg枸櫞酸鈉，攪拌使其溶解；4、加入5679mg硫酸鎂，攪拌使其溶解；5、加入5372mg磷酸氫二鈉，攪拌使其溶解；6、加入270mg磷酸二氫鈉，攪拌使其溶解；7、加入1070mg腺嘌呤核苷，攪拌使其溶解；8、加入350mg L-精氨酸，攪拌使其溶解；9、加入川芎嗪4mg，攪拌使其溶解；10、加入30g甘露醇，攪拌直至完全溶解；11、容量調整加入雙蒸水直至溶液總體積為1000ml，攪拌使溶液呈均勻、無色、澄明的液體；12、活性炭過濾后將濾液封裝，高溫高壓(109℃，45分鐘)消毒即可。
實施例3配制保存液III(1000ml)。
1、向1000ml容器內加入800ml雙蒸水；2、加入6488mg枸櫞酸鉀，攪拌使其溶解；3、加入6764mg枸櫞酸鈉，攪拌使其溶解；4、加入14790mg硫酸鎂，攪拌使其溶解；5、加入5372mg磷酸氫二鈉，攪拌使其溶解；6、加入270mg磷酸二氫鈉，攪拌使其溶解；7、加入1605mg腺嘌呤核苷，攪拌使其溶解；8、加入700mg L-精氨酸，攪拌使其溶解；9、加入30g甘露醇，攪拌直至完全溶解；
10、容量調整加入雙蒸水直至溶液總體積為1000ml，攪拌使溶液呈均勻、無色、澄明的液體；11、活性炭過濾后將濾液封裝，高溫高壓(109℃，45分鐘)消毒即可。
動物實驗為研究本發明保存液的腎臟保存效果，以實施例1配制的保存液I為例，采用單純灌洗冷卻犬腎自體移植模型，以生理鹽水、HCA液以及UW液為對照，每組5只動物，進行72小時腎臟保存后自體移植實驗。
動物模型制作選取13～17kg雌性雜種犬，術前12h禁食，以戊巴比妥30mg/kg腹腔內注射麻醉。麻醉成功后，取腹正中切口，自劍突向下長約12cm，切開進腹。游離左腎及腎動靜脈、輸尿管，切斷輸尿管，長約8cm，在腎靜脈和腎動脈根部分別切斷之，立即取出腎臟置于各組指定的保存液(0℃)中，并以該保存液(0℃)200ml經腎動脈灌注腎臟，直至腎臟呈蒼白色，將腎臟連同500ml指定保存液置于腎袋中，在0～4℃條件下儲存。分別結扎實驗動物腎動靜脈及輸尿管殘端，關腹。術后立即給予頭孢曲松鈉1g靜脈滴注。72h后，同一實驗犬按同樣方法麻醉，按原切口打開腹腔，并向下延長至恥骨上方，游離右側髂外動靜脈，取出腎臟，腎靜脈與髂外靜脈以7-0prolene血管吻合線端側吻合，腎動脈與髂外動脈端端吻合，開放血流后徹底止血。切開膀胱，留置導尿管。輸尿管內置F4.5之雙J管，以5-0羊腸線與膀胱吻合。隨后切除實驗犬右腎，關腹，手術結束。術后予補液(每日10％葡萄糖500ml、平衡液500ml)及抗生素(頭孢曲松鈉1g)直至實驗動物開始自行進食。術后第3日抽靜脈血測定肌酐。術后觀察期為60天，達到60天的動物視為長期存活。
實驗結果如下表1自體腎移植術后犬存活時間(天)本發明保存液I 生理鹽水 HCA液 UW液1538 121257 606038 6060311606041460表2自體腎移植術后3天實驗犬血清肌酐值(μmol/L)本發明保存液I 生理鹽水 HCA液 UW液4981589889 87934510211056545455132311213436731645789 4534121456654 512注S-N-K方差分析顯示實驗組與UW液組實驗犬血清肌酐數值無統計學差異，其余各組之間數值均有統計學差異。
上述結果表明本發明腎保存液的腎臟保存效果與UW液相當，明顯優于HCA液及生理鹽水。
保存液II和III也做了相應的實驗，結果與上述實驗相近。
權利要求
1.一種腎臟保存液，其特征在于組分如下枸櫞酸鉀(C6H5K3O7·H2O) 20～30mmol/L枸櫞酸鈉(C6H5Na3O7·2H2O) 20～30mmol/L硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 5～40mmol/L磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O) 10～20mmol/L磷酸二氫鈉(NaH2PO4·2H2O) 1～3mmol/L腺嘌呤核苷(C10H13N5O4)1～10mmol/L左旋精氨酸(C6H14N4O2) 2～10mmol/L甘露醇(C6H14O6)150～200mmol/L川芎嗪(C8H12N2·HCl·2H2O)0～0.1mmol/LpH 7.3～8滲透壓 360±20mOsm/Kg。
2.按權利要求1所述腎臟保存液，其特征在于組分如下每1000ml液體中含有枸櫞酸鉀6488mg；枸櫞酸鈉6764mg；硫酸鎂2465mg；磷酸氫二鈉5372mg；磷酸二氫鈉270mg；腺嘌呤核苷535mg；左旋精氨酸350mg；甘露醇30g甘露醇。
3.按權利要求2所述腎臟保存液，其特征在于還含有川芎嗪，含量為0.1mmol/L。
全文摘要
本發明涉及人體或動物器官、組織或細胞的保存液，特別是一種腎臟保存液。其由枸櫞酸鉀、枸櫞酸鈉、硫酸鎂、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、腺嘌呤核苷、左旋精氨酸、川芎嗪及甘露醇等成分組成，具有高滲、酸堿度穩定、能有效防止缺血再灌注損傷等優點，能夠有效保存腎臟達72小時。
文檔編號A01N1/02GK1633848SQ20041008919
公開日2005年7月6日 申請日期2004年12月7日 優先權日2004年12月7日
發明者朱有華, 張純 申請人:中國人民解放軍第二軍醫大學