專利名稱：：一種利用生物疫苗浸種技術(shù)防治水稻條紋葉枯病的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及水稻病害防治領(lǐng)域，具體涉及水稻條紋葉枯病的防治方法。
背景技術(shù)：
：水稻條紋葉枯病是由灰飛虱等害蟲(chóng)傳播條紋病毒(RSV)引起的一種病毒病。自上世紀(jì)末，該病毒病在江蘇以及周邊地區(qū)重新抬頭，最近幾年已成為江蘇地區(qū)水稻生產(chǎn)上最重要的病害，給江蘇省的水稻生產(chǎn)和農(nóng)民的經(jīng)濟(jì)利益造成了災(zāi)難性影響。這幾年因灰飛虱引起的條紋葉枯病一項(xiàng)，就給江蘇地區(qū)的經(jīng)濟(jì)每年造成近100億元的損失。由于水稻品種和栽培制度的多樣化、以及條紋病毒毒源的不斷累積，水稻條紋葉枯病的發(fā)生態(tài)勢(shì)還將會(huì)持續(xù)嚴(yán)重。在生產(chǎn)上，為了防治這種病毒病，在沒(méi)有好的病毒鈍化劑的背景下，不得不采取"治蟲(chóng)防病、切斷毒源"的策略。為此，在大麥田、小麥田、秧池田以及本田，不得不大量和重復(fù)使用吡蟲(chóng)啉、銳勁特等化學(xué)農(nóng)藥防治灰飛虱。雖然在水稻一個(gè)生育期要用多次乃至10多次殺蟲(chóng)劑，仍然不能解決病毒病流行的問(wèn)題。因?yàn)橹灰獨(dú)埓?0%或20%的灰飛虱帶毒個(gè)體，它們?nèi)阅茉诙虝r(shí)間內(nèi)傳毒并導(dǎo)致稻株嚴(yán)重發(fā)病。不但如此，化學(xué)農(nóng)藥的大量使用還造成了灰飛虱抗藥性的上升、稻田生態(tài)系統(tǒng)的嚴(yán)重破壞和農(nóng)民們生產(chǎn)成本的不斷加大。由于對(duì)條紋葉枯病付出了沉重的代價(jià)和成本，農(nóng)民們現(xiàn)在對(duì)這個(gè)病害已是深?lèi)和唇^，防治效果不好后又怨聲載道。因此，研制和開(kāi)發(fā)防病與控病效果極佳的新型生物農(nóng)藥，對(duì)于控制條紋葉枯病的發(fā)生流行有重要的現(xiàn)實(shí)意義和深遠(yuǎn)的歷史意義。國(guó)內(nèi)外研究表明，引起水稻條紋葉枯病的條紋病毒(Ricestripevirus，RSV)是纖細(xì)病毒屬(Tenuivirus)的代表成員。日本對(duì)其分離物進(jìn)行了全序列測(cè)定，基因組全長(zhǎng)為17145bp，由4種單鏈RNA組成，除RNA1采用負(fù)鏈編碼外，RNA2RNA4皆采用雙義(Am-bisense)的編碼策略。至目前止，條紋病毒的基因組結(jié)構(gòu)和序列已很明確，相關(guān)功能基因的功能也基本明確。在此基礎(chǔ)上，梁國(guó)華等已研制并生產(chǎn)出防治條紋病毒的干擾病毒基因表達(dá)載體(中國(guó)專利申請(qǐng)200610038267.5)，作為生物疫苗。然而，由基因干擾技術(shù)(RNAi)研制的生物疫苗目前只能以注射、飼喂、基因槍、轉(zhuǎn)基因等方式進(jìn)入目標(biāo)生物體內(nèi)，這對(duì)于防治一些動(dòng)物的病毒病會(huì)有較好效果，而對(duì)于生產(chǎn)上防治水稻條紋葉枯病帶來(lái)了不可操作性。
發(fā)明內(nèi)容為了解決生物疫苗在生產(chǎn)上大規(guī)模運(yùn)用的技術(shù)難題，本發(fā)明提供了一種新的方法，即通過(guò)"生物疫苗"浸種技術(shù)防治水稻條紋葉枯病。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是一種利用生物疫苗浸種防治水稻條紋葉枯病的方法，是在水稻浸種時(shí)以"生物疫苗"加滲透性強(qiáng)的制劑代替水，以浸種的方式讓"生物疫苗"自動(dòng)滲透入稻谷，并在稻苗體內(nèi)表達(dá)。水稻播種前需要浸種催芽，本發(fā)明利用這一基本的農(nóng)事操作，在水稻浸種時(shí)將生物疫苗加一些滲透性強(qiáng)的制劑以浸種的方式，讓其自動(dòng)滲透入稻谷，并在稻苗體內(nèi)表達(dá)，從而有效地阻斷了水稻植株體內(nèi)條紋病毒的增殖。本發(fā)明中所說(shuō)的生物疫苗是專門(mén)用于防治條紋病毒RSV的疫苗。在上述方法中所說(shuō)的滲透劑，一般是常規(guī)的。但我們運(yùn)用系統(tǒng)學(xué)方法，研究了各種滲透劑的滲透作用，從中篩選出滲透性好、對(duì)水稻無(wú)副作用且價(jià)格低廉的幾種滲透劑，如月桂氮酮、高滲、有機(jī)硅等；滲透劑的添加量是在100體積單位生物疫苗中添加0.01到1.0體積單位的滲透劑。本發(fā)明具有以下有益效果A.所選用的幾種滲透劑滲透性強(qiáng)，對(duì)水稻生長(zhǎng)無(wú)影響。與不添加滲透劑的"生物疫苗"相比，添加了滲透劑的"生物疫苗"在稻株體內(nèi)能檢測(cè)到疫苗的存在;B.生物疫苗添加一定濃度的滲透劑后，對(duì)水稻發(fā)芽、出苗無(wú)影響。與對(duì)照相比，只要滲透劑添加濃度控制得當(dāng)，不會(huì)對(duì)水稻種子的發(fā)芽與出苗產(chǎn)生不良影響；C.控制條紋病毒的增殖效果顯著。室內(nèi)盆栽試驗(yàn)和大田試驗(yàn)以及通過(guò)系統(tǒng)檢測(cè)，表明以"生物疫苗"浸種技術(shù)防治水稻條紋葉枯病效果顯著。首先，通過(guò)系統(tǒng)檢測(cè)，生物疫苗在稻株體內(nèi)能維持40天以上；其次，將帶毒率達(dá)20%的灰飛虱接入經(jīng)生物疫苗浸種處理過(guò)的稻株上，或者以田間大面積發(fā)生的灰飛虱遷入經(jīng)生物疫苗浸種處理過(guò)的大田稻苗上，均能檢測(cè)到條紋病毒的存在;第三，在出苗后15天左右，開(kāi)始系統(tǒng)調(diào)査稻株發(fā)病情況，至出苗后83天結(jié)束。結(jié)果表明，經(jīng)生物疫苗浸種處理過(guò)的水稻，條紋葉枯病病穴(枝)率比對(duì)照減少65%以上，比不添加滲透劑的減少40%以上，顯示出防治條紋葉枯病的較好效果。具體實(shí)施例方式本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)，除非有另外說(shuō)明，一般具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義。下面結(jié)合具體的實(shí)施例，并參照數(shù)據(jù)進(jìn)一步詳細(xì)地描述本發(fā)明。在以下的實(shí)施例中，未詳細(xì)描述的各種過(guò)程和方法是本領(lǐng)域中公知的常規(guī)方法。所用試劑的來(lái)源、商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出現(xiàn)時(shí)標(biāo)明，其后所用相同試劑如無(wú)特歹朱說(shuō)明，均以首次標(biāo)明的內(nèi)容相同。下述實(shí)施例中所說(shuō)的生物疫苗是己公開(kāi)的水稻條紋葉枯病干擾病毒基因表達(dá)載體，可參照中國(guó)專利申請(qǐng)200610038267.5制備。在下述實(shí)施例中，A指滲透劑月桂氮酮，B指滲透劑高滲，C指滲透劑有機(jī)硅。實(shí)施例1-在水稻浸種時(shí)以生物疫苗添加不同劑量的滲透劑代替水，研究幾種滲透劑不同濃度對(duì)水稻發(fā)芽與出苗的影響(江蘇揚(yáng)州)，結(jié)果如表K2所示。表l200粒稻谷發(fā)芽率與出苗率試驗(yàn)(稻種先經(jīng)漂洗滌除癟粒，3.10-18)處理<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表2高濃度滲透劑處理結(jié)果(100粒，3.10-18)(兩個(gè)對(duì)照200粒，其它均100粒)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>試驗(yàn)結(jié)果表明，在生物疫苗中添加滲透劑濃度在0.01%-0.1%(體積)之間，對(duì)水稻的發(fā)芽與出苗影響不大，但達(dá)到0.3%及以上時(shí)，對(duì)水稻的發(fā)芽與出苗就有一定影響。實(shí)施例2:水稻浸種出苗后"生物疫苗"在稻株體內(nèi)殘留測(cè)定(江蘇揚(yáng)州)桶栽以生物疫苗浸種處理的稻苗，于出苗后15天、35天以PCR技術(shù)檢測(cè)稻株體內(nèi)是否仍帶有"生物疫苗"。結(jié)果表明15天后對(duì)照疫苗(0/9)、對(duì)照水(0/9)、Cl(6/9)、C0.5(0/9)、C0.1(0/9)、Bl(1/9)、B0.5(0/9)、B0.1(6/9)、Al(7/9)、A0.5(3/9)、A0.1(1/9)(注1/9示測(cè)了9株稻苗，有l(wèi)株中帶疫苗)35天后:Cl(7/10)、C0.5(3/10)、C0.1(7/10)、Bl(2/10)、B0.5(5/10)、B0.1(7/10)、Al(6/10)、A0.5(4/10)、A0.1(7/10)(注1/10表示測(cè)了IO株稻苗，有l(wèi)株中帶疫苗，Cl表示添加了千分之l(體積)的c滲透劑，余類(lèi)推)實(shí)施伊j3:生物疫苗浸種技術(shù)防治條紋葉枯病的效果測(cè)定(江蘇揚(yáng)州)以水泥池為試驗(yàn)場(chǎng)所，播種不同處理的稻谷，出苗后系統(tǒng)檢查稻株發(fā)病情況。以下是苗后83天的檢査結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>上表說(shuō)明，以清水為對(duì)照，經(jīng)過(guò)生物疫苗浸種處理后對(duì)條紋葉枯病的校正防效在55.6%-100.0%之間，顯示出浸種處理的較好防效。(注處理A0.5表示在"生物疫苗"中添加千分之0.5(體積)的A滲透劑，余類(lèi)推；"疫苗"處理是指沒(méi)有添加任何滲透劑，僅是"生物疫苗")權(quán)利要求1、一種利用生物疫苗浸種防治水稻條紋葉枯病的方法，其特征在于是在水稻浸種時(shí)以生物疫苗加滲透劑代替水，以浸種的方式讓生物疫苗滲透入稻谷，并在稻苗體內(nèi)表達(dá)。2、根據(jù)權(quán)利要求1所說(shuō)的防治水稻條紋葉枯病的方法，其特征在于，其中所說(shuō)的滲透劑是月桂氮酮、高滲或有機(jī)硅。3、根據(jù)權(quán)利要求2所說(shuō)的防治水稻條紋葉枯病的方法，其特征在于，其中所說(shuō)的滲透劑的添加量為在100體積單位生物疫苗中添加0.01到1.0體積單位的滲透劑。全文摘要本發(fā)明涉及水稻病害防治領(lǐng)域，具體涉及水稻條紋葉枯病的防治方法。所說(shuō)的防治方法是在水稻浸種時(shí)以生物疫苗加滲透劑代替水，以浸種的方式讓生物疫苗滲透入稻谷，并在稻苗體內(nèi)表達(dá)。經(jīng)生物疫苗浸種處理過(guò)的水稻，條紋葉枯病病穴(枝)率比對(duì)照減少65％以上，比不添加滲透劑的減少40％以上，顯示出防治條紋葉枯病的較好效果。文檔編號(hào)A01C1/08GK101317506SQ200810022400公開(kāi)日2008年12月10日申請(qǐng)日期2008年7月11日優(yōu)先權(quán)日2008年7月11日發(fā)明者勇周,楊益眾,梁國(guó)華,爽王申請(qǐng)人:揚(yáng)州大學(xué)