專利名稱：豬苓人工栽培菌種和蜜環菌及豬苓菌種菌核化生產方法
技術領域：
本發明涉及中藥材豬苓，具體地說是一種豬苓人工栽培菌種和伴生蜜環菌及豬苓 菌種菌核化生產方法。
背景技術：
豬苓是我國傳統的稀有中藥材，目前豬苓采用野生菌核作種半人工栽培技術(文 獻1.郭順星，徐錦堂，蕭培根.豬苓生物學研究進展。中國中藥雜志，1996，(9) :515-517)。 由于醫藥市場的擴大和出口，野生產品資源銳減，難以滿足市場需求。采用野生菌核作種 的栽培方式，需要大量的野生菌核(灰苓即豬苓的第2年產品)(文獻2.許廣波，傅偉 杰.趙旭奎，我國豬苓研究的進展。菌物研究，2003，1(1) :58-61;文獻3.許廣波，傅偉杰， 李如亮等.長白山區豬苓半人工栽培技術體系的研究。延邊大學農學學報，2004，MG) 241-244)，導致人工栽培種源困難，致使人工栽培成本上升，已成為制約豬苓人工栽培技術 大面積實施的主要瓶頸(文獻4.程顯好.豬苓和蜜環菌人工培養及影響幾種有效成分產 生因素的研究。中國博士學位論文，2006-09-27 :1-181 ；文獻5.邢曉科.豬苓與伴生菌相 互作用的研究。中國博士學位論文，2006-10-13 :1-154)；同時由于中國蜜環菌種類多達14 種，許多并不是豬苓栽培的適宜伴生菌(文獻6.趙俊，趙杰.中國蜜環菌的種類及其在天 麻栽培中的應用。食用菌學報，2007，14(1) :67-72;文獻7.李福后，王偉霞，許冰.蜜環菌 的研究進展。安徽農業科學2007，35 (25) :7741-7742)。因此，研究選育豬苓菌種和配套的 蜜環菌，對于開展豬苓人工大面積栽培生產具有重要的經濟意義。

發明內容
本發明的目的在于提供一種生產成本低，菌核形成快豬苓人工栽培菌種和伴生蜜 環菌及豬苓菌種菌核化生產方法。為實現上述目的，本發明采用的技術方案為一種豬苓人工栽培菌種，命名為林研豬苓3號，保藏單位中國微生物菌種保藏 管理委員會普通微生物中心，地址北京市朝陽區大屯路中國科學院微生物研究所，保藏編 號 CGMCC No. 3109。分類名稱豬苓 Grifulaumbelleta ；一種蜜環菌，其為與豬苓菌配套的伴生菌，命名為林研3號，保藏單位中國微生 物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址北京市朝陽區大屯路中國科學院微生物研 究所，保藏編號CGMCC No. 3108。分類名稱蜜環菌Armillaria mellea ；所述豬苓菌種菌核化快速生產方法，1) 一級培養基配方組成為10-50g玉米粉、10_20g蔗糖或葡萄糖、l_3g牛肉 膏、15-22g瓊脂、水IOOOml ；滅菌后接種豬苓菌種，豬苓菌種與培養基以體積比例為 16-25 100的比例混合，進行豬苓菌的一級培養，培養條件為20-27°C培養14-20天，在試 管斜面上形成大量菌核，得一級菌種；2)按重量比，以20-60%玉米馇、80-40%闊葉樹木屑和/或直徑0. l_2cm、長3-5cm的小木段混合制成二級培養基，加水攪拌均勻，使培養基的重量含水量達55-60 % ；滅 菌后同時接種豬苓菌種的一級種和蜜環菌，在20-25°C條件下培養30-45天，即得到可大量 繁殖的二級菌種；豬苓菌種和蜜環菌于二級培養基中的接種量為，豬苓菌種和蜜環菌分別與培養基 的體積比例為0.5-5 100。將含水量55-60%的二級培養基裝入聚丙烯塑料袋內，滅菌后接種步驟幻得到的 二級菌種，在20-25°C條件下培養30-45天，即得到可大量繁殖的三級菌種。步驟2、中所采用的蜜環菌是采用一級培養基培養增殖后的蜜環菌，一級培養基 配方組成為10-50g玉米粉、10-20g蔗糖或葡萄糖、1- 牛肉膏、15-22g瓊脂水IOOOml ；滅 菌后接種蜜環菌菌種，其培養條件為，將蜜環菌菌種與培養基以體積比例為16-25 100的 比例混合，20-27°C培養14-20天，得蜜環菌。所述二級培養基配制時，玉米馇需要預先用水浸泡12-16小時，進行預濕再與闊 葉樹木屑和/或小木段混合；所述闊葉樹為柞樹、板栗、楓樹、榆樹中的一種或多種。本發明具有如下優點1.生產成本低。采用野生豬苓菌核半人工栽培法栽培，每畝豬苓菌核成本為 15000元(按每畝用300kg野生菌核、栽培600穴計算)。由于豬苓菌核價格高，同時又難 以保證生產大量需要和及時供應，極大地制約了豬苓大面積栽培。利用本發明方法生產的 豬苓菌種進行人工栽培，每畝需要豬苓菌種300kg、成本600元、栽培600穴，其他菌棒等材 料和成本與以往的栽培方法相同。采用本發明所生產的豬苓菌種進行人工栽培，每畝比傳統方法可節省14400元， 栽培成本是傳統方法的4%，具有明顯的經濟效益，可高效、及時地滿足大規模生產的需要。2.菌核形成快。以往培養豬苓菌種多采用PDA培養基為一級培養基，豬苓菌絲生 長慢、形成菌核少，菌核形成需要30天以上。經過申請人對豬苓C、N源研究，所研制的豬苓 菌種一級培養基配方，可在14天形成大量菌核，比PDA培養基快16天，同時解決了二級菌 種的擴大培養配方和三級豬苓菌種繁殖技術。在二級種擴繁的同時接種豬苓菌和蜜環菌， 在35-40天內能形成可供生產中應用的豬苓菌種，由于使用玉米粉和玉米馇、蔗糖木屑及 小木段等低成本材料生產出可大量形成菌核的豬苓菌種，替代半人工栽培過程中使用的野 生菌核，極大地降低了生產成本。一種豬苓人工栽培菌種，命名為林研豬苓3號，保藏單位中國微生物菌種保藏 管理委員會普通微生物中心，地址北京市朝陽區大屯路中國科學院微生物研究所，保藏編 號CGMCC No. 3109。分類名稱豬等Grifulaumbelleta ；保藏日期2009年05月25日；一種蜜環菌，其為與豬苓菌配套的伴生菌，命名為林研3號，保藏單位中國微生 物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址北京市朝陽區大屯路中國科學院微生物研 究所，保藏編號CGMCC No. 3108o分類名稱蜜環菌Armillaria mellea ；保藏日期2009年 05月25日；
具體實施例方式以下實施例中采用的豬苓菌和蜜環菌為遼寧省林科院經3年的研究，分離、培 養、選育出適宜豬苓人工栽培技術使用的專用豬苓菌種林研豬苓3號(中國微生物菌種保 藏管理委員會普通微生物中心CGMCC No. 3109)和配套使用的蜜環菌林研3號(中國微生4物菌種保藏管理委員會普通微生物中心CGMCC No. 3108)。它們是從遼寧省寬甸縣豬苓野生菌核中分離培養選育出適宜豬苓人工技術的專 用豬苓菌種和配套使用的蜜環菌菌種，可以在培養室內大量擴繁生產，解決了以往豬苓人工栽培過程中采用野生菌核作種需要大量野生菌核的矛盾。國 內未見豬苓人工選育的菌種和配套的親和力強的蜜環菌菌株。同時由于中國蜜環菌種類多 達14種，許多并不是豬苓栽培的適宜伴生菌。實施例11、以IOg玉米粉、20g蔗糖、3g牛肉膏、22g瓊脂、水1000ml，配制一級培養基；在 1.5個大氣壓、121°C條件下，滅菌20分鐘；1)在無菌環境下接種豬苓菌種，豬苓菌種與培養基的體積比例為25 100，20°C 培養20天制成一級菌種，在試管斜面上形成大量菌核；2)以一級培養基配方滅菌后，直立試管冷卻25°C，轉接蜜環菌，菌種與培養基的 體積比例為％ 100，培養條件同豬苓菌種，得蜜環菌菌種；2、以20%玉米馇、80%柞樹木屑的重量比例配制成含水量60%的二級培養基，玉 米馇使用前預先經12-16小時泡水預濕；然后將二級培養基裝入罐頭瓶并用聚丙烯薄膜封 口，在121°C條件下，高壓滅菌90分鐘；待冷卻到25°C以下，同時接種步驟“1”得到的豬苓 一級菌種和蜜環菌菌種，接種的豬苓菌種和蜜環菌分別與培養基的體積比例為2 100，在 20°C條件下培養45天，即得到可大量繁殖的二級菌種；3、用聚丙烯槊料袋裝入二級培養基，按步驟“2”的方法滅菌后，接種二級菌種并培 養45天，接種的二級菌種與培養基的體積比例為2 100，培養條件同步驟“2”的方法，即 得到三級菌種。實施例21、以50g玉米粉、IOg葡萄糖、Ig牛肉膏、15g瓊脂、水IOOOml，配制一級培養基；在 1.5個大氣壓、121°C條件下，滅菌20分鐘；1)在無菌環境下接種豬苓菌種，豬苓菌種與培養基的體積比例為20 100，27°C 培養20天制成一級菌種，在試管斜面上形成大量菌核；2)以一級培養基配方滅菌后，直立試管冷卻25°C，轉接蜜環菌，菌種與培養基的 體積比例為20 100，培養條件同豬苓菌種；2、以重量比例60%玉米馇、40%闊葉樹楓樹和榆樹直徑0. l_2cm、長3_5cm的小 木段配制成含水量55%的二級培養基，玉米馇使用前預先經12-16小時泡水預濕；然后將 二級培養基裝入罐頭瓶并用聚丙烯薄膜封口，在121°C條件下，高壓滅菌90分鐘；待冷卻到 25°C以下，同時接種步驟“1”得到的豬苓一級菌種和蜜環菌菌種，接種的豬苓一級菌種和蜜 環菌分別與培養基的體積比例為4 100，在25°C條件下培養30天，即得到可大量繁殖的 二級菌種；3、用聚丙烯槊料袋裝入二級培養基，按步驟“2”的方法滅菌后，接種二級菌種并培 養35天，接種的二級菌種與培養基的體積比例為5 100，培養條件同步驟“2”的方法，即 得到三級菌種。實施例31、以30g玉米粉、15g蔗糖或葡萄糖、2g牛肉膏、18g瓊脂、水1000ml，配制一級培養基；在1. 5個大氣壓、121°C條件下，滅菌20分鐘；1)在無菌環境下接種豬苓菌種，豬苓菌種與培養基的體積比例為16 100，25°C 培養18天制成一級菌種，在試管斜面上形成大量菌核；2)以一級培養基配方滅菌后，直立試管冷卻25°C，轉接蜜環菌，菌種與培養基的 體積比例為16 100，培養條件同豬苓菌種；2、以30%玉米馇、70%板栗木屑的重量比例配制成含水量58%的二級培養基，玉 米馇需要提前12-16小時泡水預濕；然后將二級培養基裝入罐頭瓶并用聚丙烯薄膜封口， 在121°C條件下，高壓滅菌90分鐘；待冷卻到25°C以下，同時接種步驟“1”得到的豬苓一級 菌種和蜜環菌菌種，接種的豬苓一級菌種和蜜環菌分別與培養基的體積比例為1 100，在 23°C條件下培養40天，即得到可大量繁殖的二級菌種；3、用聚丙烯槊料袋裝入二級培養基，按步驟“2”的方法滅菌后，接種二級菌種并培 養40天，接種的二級菌種與培養基的體積比例為1 100，培養條件同步驟“2”的方法，即 得到三級菌種。本發明上述實例所獲得的二級菌種或三級菌種即可用于豬苓生產性栽培。
權利要求
1.一種豬苓人工栽培菌種，其特征在于命名為林研豬苓3號，保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心， 地址北京市朝陽區大屯路中國科學院微生物研究所，保藏編號CGMCC No. 3109。
2.一種蜜環菌，其特征在于其為與豬苓菌配套的伴生菌，命名為林研3號，保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址 北京市朝陽區大屯路中國科學院微生物研究所，保藏編號CGMCC No. 3108。
3.一種豬苓菌種菌核化生產方法，其特征在于1)一級培養基配方組成為10-50g玉米粉、10-20g蔗糖或葡萄糖、1- 牛肉膏、15-22g 瓊脂、水1000ml;滅菌后接種豬苓菌種，豬苓菌種與培養基以體積比例為16-25 100的比 例混合，進行豬苓菌的一級培養，培養條件為20-27°C培養14-20天，在試管斜面上形成大 量菌核，得一級菌種；2)按重量比，以20-60%玉米馇、80-40%闊葉樹木屑和/或直徑0.l_2cm、長3_5cm的 小木段混合制成二級培養基，加水攪拌均勻，使培養基的重量含水量達陽-60% ；滅菌后同 時接種豬苓菌種的一級種和蜜環菌，在20-25°C條件下培養30-45天，即得到可大量繁殖的 二級菌種；豬苓菌種和蜜環菌于二級培養基中的接種量為，豬苓菌種和蜜環菌分別與培養基的體 積比例為0.5-5 100。
4.按照權利要求3所述生產方法，其特征在于將含水量55-60%的二級培養基裝入聚 丙烯塑料袋內，滅菌后接種步驟2、得到的二級菌種，在20-25°C條件下培養30-45天，即得 到可大量繁殖的三級菌種。
5.按照權利要求3所述生產方法，其特征在于步驟2)中所采用的蜜環菌是采用一級 培養基培養增殖后的蜜環菌，一級培養基配方組成為10-50g玉米粉、10-20g蔗糖或葡萄 糖、l_3g牛肉膏、15-22g瓊脂、水IOOOml ；滅菌后接種蜜環菌菌種，其培養條件為，將蜜環菌 菌種與培養基以體積比例為16-25 100的比例混合，20-27°C培養14-20天，得蜜環菌。
6.按照權利要求3所述生產方法，其特征在于所述二級培養基配制時，玉米馇需要預 先用水浸泡12-16小時，進行預濕再與闊葉樹木屑和/或小木段混合。
7.按照權利要求3所述生產方法，其特征在于所述闊葉樹為柞樹、板栗、楓樹、榆樹中 的一種或多種。
全文摘要
本發明涉及中藥材豬苓，具體地說是一種豬苓人工栽培菌種和伴生蜜環菌及豬苓菌種菌核化生產方法，豬苓菌種林研豬苓3號，伴生蜜環菌林研3號；豬苓菌種菌核化生產方法為，1)一級培養基為10-50g玉米粉、10-20g蔗糖或葡萄糖、1-3g牛肉膏、15-22g瓊脂、水1000ml；滅菌后接種豬苓菌種，培養得一級菌種；2)按重量比，以20-60％玉米馇、80-40％闊葉樹木屑和/或直徑0.1-2cm、長3-5cm小木段混合成二級培養基，加水攪拌均勻，培養基的含水量55-60％；滅菌后同時接種豬苓菌種一級種和蜜環菌，在20-25℃條件下培養30-45天，即得到可二級菌種。本發明生產成本低，菌核形成快。
文檔編號A01G1/04GK102037853SQ20091018799
公開日2011年5月4日 申請日期2009年10月21日 優先權日2009年10月21日
發明者云麗麗, 葉景豐, 欒慶書, 范俊崗, 金若忠, 陳罡, 馬冬菁, 高軍 申請人:遼寧省林業科學研究院