專利名稱：一種組織培養總統鐵線蓮的方法
技術領域：
本發明涉及一種植物組培方法，尤其是涉及一種組織培養‘總統’鐵線蓮的方法。
背景技術：
鐵線蓮為毛茛科鐵線蓮屬植物，原產中國，廣布于北半球，原種200余種，經多年的人工雜交出現大量園藝品種，花色清爽淡雅、花大色鮮，花期長、因品種不同可從5月陸續開到11月。開花場面壯觀受世人歡迎，是目前國內十分熱銷的庭院藤本材料。鐵線蓮‘總統’為園藝品種，木質藤本長約1-2米。莖棕色或紫紅色，單葉，常對生； 花單生，紫色。花期6-9月。是通過人工選育獲得的優異新品種，因為其分株速度慢，扦插繁殖率低，品種易退化，無法滿足市場大量的需求。一些企業直接從國外進口裸根苗進行銷售，成本高，利潤小，因此，如何提高產量并降低培養用成本是現在亟待解決的一個難題。

發明內容
本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種持原有的母本性狀，實現育苗工廠化的組織培養‘總統’鐵線蓮的方法。本發明的目的可以通過以下技術方案來實現一種組織培養總統鐵線蓮的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)獲取無菌原材料摘取鐵線蓮‘總統’嫩芽后用自來水沖洗池，在超凈工作臺上依次用濃度為75wt%的乙醇浸泡25-3 ，lw%。的升汞浸泡10-15min，用無菌水沖洗5_6 次后吸干表面水份，取嫩芽基部，切成Icm長后接種于芽誘導培養基上；(2)芽的分化和增殖嫩芽接種于芽誘導培養基5周后，芽基部開始膨大并出現黃綠色突起，繼續培養3周后可見明顯的愈傷組織，再培養1個月，切下帶芽的愈傷組織接種于不定芽增殖培養基上；(3)不定芽的壯苗培養在不定芽增殖培養基上誘導出的叢生芽，每叢有2-3株伸長，將其分成小叢或單芽后接種于壯苗培養基上，不定芽20天后可以長到2-3cm ；(4)生根培養取2_3cm的不定芽植株，將其轉接入生根培養基中誘導生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后根原基長至4-6cm ；(5)植株煉苗與移栽步驟(4)得到的根原基繼續生根培養20-30天，選擇根系發達生長健壯的無菌苗于室內開瓶煉苗5天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后移栽室外并給予肥水管理，即可得到鐵線蓮‘總統’植株。所述的芽誘導培養基的成分為MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA3mg/ L+NAAO. 3mg/L 或 MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L。所述的不定芽增殖培養基的成分為MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L,MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L 或 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。所述的壯苗培養基的成分為MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA1. Omg/ L+NAAO. lmg/L 或 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
所述的生根培養基的成分為MS+NAAO. lmg/L+IBAl. Omg/L、MS+NAAO. 3mg/ L+IBA3. Omg/L 或 MS+NAAO. 5mg/L+IBA5. Omg/L。所述的培養基成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，該培養基的pH值為5. 6-6. 0，培養溫度為M_26°C，光照條件采用70-90 μ mol/ms。此外，所述的芽誘導培養基的成分優選MS+6-BA3. Omg/L+NAAO. 3mg/L0所述的不定芽增殖培養基的成分優選MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L。所述的壯苗培養基的成分優選MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L。所述的生根培養基的成分優選MS+NAAO. 3mg/L+IBA3. Omg/L。與現有技術相比，本發明通過組培技術，提高苗木繁殖速度和苗的整齊度，且更好地保持原有的母本性狀，實現育苗工廠化，從而能夠保證市場供應需求。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明進行詳細說明。實施例1一種組織培養‘總統’鐵線蓮的方法，該方法包括以下步驟(1)獲取無菌原材料摘取鐵線蓮‘總統’嫩芽后用自來水沖洗池，在超凈工作臺上依次用濃度為75wt%的乙醇浸泡25s，lw%。的升汞浸泡lOmin，用無菌水沖洗5次后吸干表面水份，取嫩芽基部，切成Icm長后接種于芽誘導培養基上，芽誘導培養基的成分為 MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L ；(2)芽的分化和增殖嫩芽接種于芽誘導培養基5周后，芽基部開始膨大并出現黃綠色突起，繼續培養3周后可見明顯的愈傷組織，再培養1個月，切下帶芽的愈傷組織接種于不定芽增殖培養基上，不定芽增殖培養基的成分為MS+6-BA2. Omg/L+NAAO. ang/L，基部雖然愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現象，在該培養中生長發育良好；(3)不定芽的壯苗培養在不定芽增殖培養基上誘導出的叢生芽，每叢有2株伸長，其余處于矮化狀態，將其分成小叢或單芽后接種于壯苗培養基上，不定芽20天后可以長到2cm，壯苗培養基的組成為MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L ；(4)生根培養取2cm的不定芽植株，將其轉接入生根培養基中誘導生根，該生根培養基的成分為MS+NAAO. lmg/L+IBAl. 0mg/L, 10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基， 30天后根原基長至km，須根眾多；(5)植株煉苗與移栽步驟⑷得到的根原基繼續生根培養20天，選擇根系發達生長健壯的無菌苗于室內開瓶煉苗5天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后移栽室外并給予肥水管理，即可得到鐵線蓮‘總統’植株。以上培養基成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，該培養基的pH值為5. 6，使用時控制培養溫度為，光照條件采用70 μ mol/ms0實施例2一種組織培養‘總統’鐵線蓮的方法，該方法包括以下步驟(1)獲取無菌原材料摘取鐵線蓮‘總統’嫩芽后用自來水沖洗池，在超凈工作臺上依次用濃度為75wt%的乙醇浸泡35s，lw%。的升汞浸泡15min，用無菌水沖洗6次后吸干表面水份，取嫩芽基部，切成Icm長后接種于芽誘導培養基上，芽誘導培養基的成分為 MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L ；(2)芽的分化和增殖嫩芽接種于芽誘導培養基5周后，芽基部開始膨大并出現黃綠色突起，繼續培養3周后可見明顯的愈傷組織，再培養1個月，切下帶芽的愈傷組織接種于不定芽增殖培養基上，不定芽增殖培養基的成分為MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. :3mg/L，基部雖然愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現象，在該培養中生長發育良好；(3)不定芽的壯苗培養在不定芽增殖培養基上誘導出的叢生芽，每叢有3株伸長，其余處于矮化狀態，將其分成小叢或單芽后接種于壯苗培養基上，不定芽20天后可以長到3cm，壯苗培養基的組成為MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L ；(4)生根培養取3cm的不定芽植株，將其轉接入生根培養基中誘導生根，該生根培養基的成分為MS+NAA0. 5mg/L+IBA5. 0mg/L, 10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基， 30天后根原基長至6cm，須根眾多；(5)植株煉苗與移栽步驟⑷得到的根原基繼續生根培養30天，選擇根系發達生長健壯的無菌苗于室內開瓶煉苗5天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后移栽室外并給予肥水管理，即可得到鐵線蓮‘總統’植株。以上培養基成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，該培養基的pH值為5. 6，使用時控制培養溫度為26°C，光照條件采用90 μ mol/ms。實施例3一種組織培養‘總統’鐵線蓮的方法，該方法包括以下步驟(1)獲取無菌原材料摘取鐵線蓮‘總統’嫩芽后用自來水沖洗池，在超凈工作臺上依次用濃度為75wt%的乙醇浸泡30s，lw%。的升汞浸泡15min，用無菌水沖洗6次后吸干表面水份，取嫩芽基部，切成Icm長后接種于芽誘導培養基上，芽誘導培養基的成分為 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L ；(2)芽的分化和增殖嫩芽接種于芽誘導培養基5周后，芽基部開始膨大并出現黃綠色突起，繼續培養3周后可見明顯的愈傷組織，再培養1個月，切下帶芽的愈傷組織接種于不定芽增殖培養基上，不定芽增殖培養基的成分為MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L，基部雖然愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現象，在該培養中生長發育良好；(3)不定芽的壯苗培養在不定芽增殖培養基上誘導出的叢生芽，每叢有3株伸長，其余處于矮化狀態，將其分成小叢或單芽后接種于壯苗培養基上，不定芽20天后可以長到3cm，壯苗培養基的組成為MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L ；(4)生根培養取3cm的不定芽植株，將其轉接入生根培養基中誘導生根，該生根培養基的成分為MS+NAA0. 3mg/L+IBA3. 0mg/L, 10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基， 30天后根原基長至6cm，須根眾多；(5)植株煉苗與移栽步驟(4)得到的根原基繼續生根培養25天，選擇根系發達生長健壯的無菌苗于室內開瓶煉苗5天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后移栽室外并給予肥水管理，即可得到鐵線蓮‘總統’植株。以上培養基成分還包括蔗糖3(^/1、瓊脂68/1，該培養基的？!1值為5.68，使用時控制培養溫度為25°C，光照條件采用80 μ mol/ms。
權利要求
1.一種組織培養總統鐵線蓮的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)獲取無菌原材料摘取鐵線蓮‘總統’嫩芽后用自來水沖洗池，在超凈工作臺上依次用濃度為75wt%的乙醇浸泡25-3 ，lw%。的升汞浸泡10-15min，用無菌水沖洗5_6次后吸干表面水份，取嫩芽基部，切成Icm長后接種于芽誘導培養基上；(2)芽的分化和增殖嫩芽接種于芽誘導培養基5周后，芽基部開始膨大并出現黃綠色突起，繼續培養3周后可見明顯的愈傷組織，再培養1個月，切下帶芽的愈傷組織接種于不定芽增殖培養基上；(3)不定芽的壯苗培養在不定芽增殖培養基上誘導出的叢生芽，每叢有2-3株伸長， 將其分成小叢或單芽后接種于壯苗培養基上，不定芽20天后可以長到2-3cm ；(4)生根培養取2-3cm的不定芽植株，將其轉接入生根培養基中誘導生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后根原基長至4-6cm ；(5)植株煉苗與移栽步驟(4)得到的根原基繼續生根培養20-30天，選擇根系發達生長健壯的無菌苗于室內開瓶煉苗5天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后移栽室外并給予肥水管理，即可得到鐵線蓮‘總統’植株。
2.根據權利要求1所述的一種組織培養總統鐵線蓮的方法，其特征在于，所述的芽誘導培養基的成分為 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6_BA3mg/L+NAA0. 3mg/L 或 MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L。
3.根據權利要求1所述的一種組織培養總統鐵線蓮的方法，其特征在于，所述的不定芽增殖培養基的成分為 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L 或 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。
4.根據權利要求1所述的一種組織培養總統鐵線蓮的方法，其特征在于，所述的壯苗培養基的成分為 MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L 或 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
5.根據權利要求1所述的一種組織培養總統鐵線蓮的方法，其特征在于，所述的生根培養基的成分為 MS+NAA0. lmg/L+IBAl. 0mg/L、MS+NAA0. 3mg/L+IBA3. Omg/L 或 MS+NAA0. 5mg/L+IBA5. 0mg/L。
6.根據權利要求2或3或4或5所述的一種組織培養總統鐵線蓮的方法，其特征在于， 所述的培養基成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，該培養基的pH值為5. 6-6. 0，培養溫度為 24-260C，光照條件采用 70-90 μ mol/ms。
全文摘要
本發明涉及一種組織培養總統鐵線蓮的方法，摘取鐵線蓮‘總統’嫩芽為原材料，經過無菌處理、嫩芽的分化和增殖、不定芽的壯苗培養、根系的生根培養、植株煉苗與移栽等步驟后，獲得鐵線蓮‘總統’植株。與現有技術相比，本發明通過組培技術，提高苗木繁殖速度和苗的整齊度，且更好地保持原有的母本性狀，實現育苗工廠化，從而能夠保證市場供應需求。
文檔編號A01H4/00GK102265787SQ20101019312
公開日2011年12月7日 申請日期2010年6月4日 優先權日2010年6月4日
發明者沈勤, 陳建華, 黃建榮 申請人:上海上房園藝有限公司