專利名稱：用于畜禽糞便發(fā)酵生產(chǎn)生物有機肥的微生物腐熟劑的制備方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明屬于微生物腐熟劑的制備，特別是指一種用于畜禽糞便發(fā)酵生產(chǎn)生物有機 肥的微生物腐熟劑的制備方法。
背景技術(shù)：
隨著我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，大量畜禽廢棄物也急劇增加，全國每年約有27 億噸畜禽糞便產(chǎn)生，畜禽糞便富含作物所需的營養(yǎng)元素，但同時也含有大量的重金屬、害蟲 卵等多種有害物質(zhì)，因而不能被直接利用，堆肥化處理是普遍采用的無害化處理方法，堆肥 的穩(wěn)定性和腐熟度是評價堆肥質(zhì)量和安全利用的重要依據(jù)，而目前尚無較為有效的專用堆 肥腐熟劑，導致在堆肥過程中腐熟速度較慢，影響了堆肥腐熟的質(zhì)量和速度。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于公開了一種用于畜禽糞便發(fā)酵生產(chǎn)生物有機肥的微生物腐熟 劑的制備方法。本發(fā)明的整體技術(shù)構(gòu)思是用于畜禽糞便發(fā)酵生產(chǎn)生物有機肥的微生物腐熟劑的制備方法，包括如下工藝步 驟Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414 Jf^Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854、分別接種于含有碳源、氮源和營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中進行發(fā)酵；將光 合菌_沼澤紅假單胞菌Rhodopseudomonaspalustris ASl. 2349接種于含有營養(yǎng)物質(zhì)的培 養(yǎng)基中進行發(fā)酵；B、將步驟A中制備的發(fā)酵液按啤酒酵母發(fā)酵液嗜酸乳桿菌發(fā)酵液沼澤紅假 單胞菌發(fā)酵液的體積比為50 25 25的比例混合，用米糠和麩皮的混合物為載體，吸附 混合后的發(fā)酵液，制作成固體腐熟劑。本發(fā)明的具體技術(shù)構(gòu)思還有載體優(yōu)選的實施方式是，所述的步驟B中米糠與麩皮按照質(zhì)量比為7 3的比例 進行混配。步驟A中的啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414的發(fā)酵包括如下步 驟將啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414經(jīng)過擴大培養(yǎng)后，將啤酒酵母 Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414 禾中〒 禾中i!H#。所述步驟A中的嗜酸乳桿菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854的發(fā)酵包括如 下步驟將嗜酸乳桿菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854分別經(jīng)過擴大培養(yǎng)后，將嗜 酸乳桿菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854種子液接種于培養(yǎng)液進行厭氧發(fā)酵。
所述步驟A中的光合菌-沼澤紅假單胞菌Rhodopseudomonas palustrisASl. 2349 的發(fā)酵包括如下步驟將光合菌-沼澤紅假單胞菌Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349采用光照培 養(yǎng)法經(jīng)過擴大培養(yǎng)后，按照體積比為種子液培養(yǎng)液=8% -10%的接種量接入發(fā)酵罐中 的培養(yǎng)液，進行微通風暗培養(yǎng)發(fā)酵。所述步驟A中啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414的擴大培養(yǎng)及發(fā)酵 包括如下工藝步驟I、由斜面菌種制備克氏瓶菌種將斜面菌種接種到克氏瓶培養(yǎng)基中制備克氏瓶菌種，30°C培養(yǎng)24小時，斜面培養(yǎng) 基及克氏瓶培養(yǎng)基包括如下質(zhì)量份的組分酵母膏或酵母粉0. 8-1. 2蛋白胨2-2. 5葡萄糖或蔗糖2_3瓊脂1. 8-2. 3pH = 6. O ；II、將克氏瓶菌種接種到種子培養(yǎng)基中擴培制備成一級種子培養(yǎng)條件為溫度30-31°C，壓力0. 05Mpa，接種8小時后開啟攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速180 轉(zhuǎn)/分鐘，按體積比的通風量0_6小時為1 0. 2，6小時后為1 0.4;培養(yǎng)20小時后，鏡 檢菌體處于對數(shù)期生長，含菌量達到要求，無雜菌，即可轉(zhuǎn)種；III、將一級種子接種到種子培養(yǎng)基中經(jīng)過擴大培養(yǎng)制備成二級種子培養(yǎng)條件為溫度30-31°C，壓力0. 05Mpa，接種8小時后開啟攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為 960轉(zhuǎn)/分鐘，按體積比的通風量0-6小時為1 0.48，6-12小時為1 0. 6，12小時后為 1 0.7;培養(yǎng)20小時后，鏡檢菌體處于對數(shù)期生長，含菌量達到工藝要求，無雜菌，即可轉(zhuǎn) 種；IV、將二級種子轉(zhuǎn)接入發(fā)酵罐內(nèi)的培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)條件為溫度30-31°C，壓力0. 05Mpa，接種8小時后開啟攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為 730轉(zhuǎn)/分鐘，按體積比的通風量0-6小時為1 0.48，6-12小時為1 0. 6，12小時后為 1 0.7;培養(yǎng)24-30小時，鏡檢菌體生長結(jié)束，含菌量達到1億/毫升以上，無雜菌，PH = 5. O 士，即可放罐；所述的步驟II、III、IV中的種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下單位質(zhì)量份的組 分葡萄糖或蔗糖2-3蛋白胨2-2. 5酵母膏或酵母粉0. 8-1. 2硫酸鎂0. 1-0. 15 乙酸鈉 0. 2-0. 25 硫酸銨 0. 4-0. 6三氯化鐵0. 0002-0. 0005 磷酸二氫鉀 0. 15-0. 2硫酸鋅0. 0005-0. 0007 消泡劑 0. 1-0. 3 自然 pH種子罐、發(fā)酵罐的培養(yǎng)基采用按體積比為55%裝量。所述步驟A中嗜酸乳桿菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854的擴大培養(yǎng)及發(fā) 酵包括如下工藝步驟I、由斜面菌種制備搖瓶種子將斜面菌種接種到搖瓶培養(yǎng)基中制備搖瓶種子，其中斜面菌種的培養(yǎng)條件為溫 度37-40°C，培養(yǎng)周期1-2天；搖瓶種子的培養(yǎng)條件為采用IOOOml三角瓶中裝300ml培養(yǎng) 基進行搖床培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為160-180rpm，溫度為37_40°C，培養(yǎng)周期為24小時；
II、將搖瓶種子接種到種子培養(yǎng)基中擴培制備成種子液培養(yǎng)條件為采用體積比為70%裝量，溫度37-40°C，采用壓風厭氧發(fā)酵，pH = 6. 0，壓力為0. 05Mpa，攪拌轉(zhuǎn)速為960轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵24小時取樣鏡檢菌體形態(tài)良好，含菌量 達到10億/毫升以上，無雜菌，即可轉(zhuǎn)罐進入下一級培養(yǎng)；III、將種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵采用體積比為70%裝量，溫度37-40°C，采用壓風厭氧發(fā)酵，pH = 6.0，壓力為 0. 05Mpa，攪拌轉(zhuǎn)速為960轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵24小時取樣鏡檢菌體形態(tài)良好，含菌量達到10億/ 毫升以上，無雜菌，即終止培養(yǎng)；所述的步驟I、II、III、IV中的斜面培養(yǎng)基、搖瓶培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下單 位質(zhì)量份的組分蛋白胨0. 8-1. 2牛肉膏0. 8-1. 2酵母膏或酵母粉0. 5-0. 7葡萄糖或蔗糖0. 5-0. 8 吐溫-800. 1-0. 15 K2HPO4O. 2-0. 3Na 3HAC200. 5-0. 6 檸檬酸三鈉 0. 2-0. 25 MgS047H20 0. 02-0. 03MnSO4 · 4H20 0. 003-0· 005 瓊脂 1. 8-2. 2 pH = 6. 5-7. 0。所述步驟A中光合菌-沼澤紅假單胞菌Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349 的擴大及發(fā)酵培養(yǎng)包括如下工藝步驟I、由斜面菌種擴大培養(yǎng)制備種子液將斜面菌種接種到種子培養(yǎng)基中制備種子液，培養(yǎng)條件為采用1000毫升三角瓶 中裝200ml培養(yǎng)基光照培養(yǎng)，光照強度3000-4000勒克斯，靜止培養(yǎng)7天；II、將種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵采用體積比為80%裝量，按照體積比為8-10%的接種量接種，按體積比為1 0.2 的比例進行微通風暗培養(yǎng)發(fā)酵，發(fā)酵過程中定期攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為960轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)溫度 28-36 0C，培養(yǎng)周期10-15天。所述的步驟I、II中的斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下單位質(zhì)量 份的組分乙酸鈉0. 2-2. 5 硫酸胺 0. 1-0. 15 磷酸二氫鉀 0. 03-0. 05磷酸氫二鉀0. 04-0. 06 硫酸鎂 0. 02-0. 03 氯化鈉 0. 008-0· 01。利用本發(fā)明所制備的產(chǎn)品是這樣使用的腐熟劑稍經(jīng)脫水后與畜禽糞便等有機肥原料均勻混合，即可進行堆肥腐熟發(fā)酵。 固體腐熟劑在有機原料中的接種劑量為原料的0. 5% (質(zhì)量比)。在堆肥過程中使用利用本發(fā)明所制備的產(chǎn)品的實驗結(jié)果畜禽糞便經(jīng)收集、脫水處理后，調(diào)整C/N，調(diào)節(jié)水分至55%，加入微生物腐熟劑，堆 積成1. 5米寬、1米高、根據(jù)需要確定長度的梯形長條堆，進行堆積發(fā)酵。從第二天開始每天 定時測量料溫，3-5天后料溫達到55-60°C以上，以后每隔三天翻堆一次，至14天，再堆積一 周后，翻堆，測量相關數(shù)據(jù)，判定發(fā)酵結(jié)果。堆肥過程中腐熟度評價的指標很多，堆肥原料不同指標也不一樣，且不能根據(jù)單 一指標來衡量，因此，堆肥腐熟度評價方法是以堆肥現(xiàn)場實用為基礎，對堆肥效果、施用安 全性進行綜合評價并與生物方法有效地結(jié)合，這樣可適用于一般小型常規(guī)化驗室操作。在本發(fā)明中，主要采用了比較直觀的物理參數(shù)如溫度、顏色、氣味以及腐熟度生物評價指標種子發(fā)芽指數(shù)幾個重要指標來判定，同時用定性和定量的理化分析做驗證。在加入定量微生物腐熟劑的堆肥發(fā)酵過程中，和傳統(tǒng)堆肥相比，前期堆肥溫度達 到最高值的時間平均提前1. 5-2天，高溫維持時間平均長4-5. 5天，種子發(fā)芽指數(shù)GI14天 全部達到0.5以上，20天時最高可以達到0. 87。本發(fā)明所取得的實質(zhì)性特點和顯著的技術(shù)進步在于選擇了啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae ASl. 2414)、嗜酸乳桿菌 (Saccharomyces cerevisiae ASL 1854)、光合菌-沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349)三種具有不同功效和多種生物學功能的微生物菌株作為微生物腐熟 劑，通過生物工程發(fā)酵生產(chǎn)出高活菌含量及有效代謝產(chǎn)物含量均比較豐富的腐熟劑供堆肥 腐熟使用。經(jīng)實驗證明，在堆肥過程中使用微生物腐熟劑可以達到減少堆肥時間，提高堆肥 腐熟度和生產(chǎn)效率的目的。
具體實施例方式以下結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步描述，但不作為對本發(fā)明的限定，本發(fā)明的保 護范圍以權(quán)利要求限定的內(nèi)容為準。實施例1用于畜禽糞便發(fā)酵生產(chǎn)生物有機肥的微生物腐熟劑的制備方法，包括如下工藝步 驟Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414 Jf^Saccharomyces cere visiae ASl. 1854、分別接種于含有碳源、氮源和營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中進行發(fā)酵；將光 合菌_沼澤紅假單胞菌Rhodopseudomonaspalustris ASl. 2349接種于含有營養(yǎng)物質(zhì)的培 養(yǎng)基中進行發(fā)酵；B、將步驟A中制備的發(fā)酵液按啤酒酵母發(fā)酵液嗜酸乳桿菌發(fā)酵液沼澤紅假 單胞菌的發(fā)酵液的體積比為50 25 25的比例混合，用米糠和麩皮的混合物為載體，吸 附混合后的發(fā)酵液，制作成固體腐熟劑。所述的步驟B中米糠與麩皮按照質(zhì)量比為7 3的比例進行混配。所述步驟A中啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414發(fā)酵包括如下步 驟將啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414經(jīng)過擴大培養(yǎng)后，將啤酒酵母 Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414 禾中〒 禾中i!H#。步驟A中的嗜酸乳桿菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854發(fā)酵包括如下步 驟將嗜酸乳桿菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854分別經(jīng)過擴大培養(yǎng)后，將嗜 酸乳桿菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854種子液接種于培養(yǎng)液進行厭氧發(fā)酵。步驟A中的光合菌-沼澤紅假單胞菌Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349的 發(fā)酵包括如下步驟將光合菌-沼澤紅假單胞菌Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349采用暗培養(yǎng) 法經(jīng)過擴大培養(yǎng)后，按照體積比為8% -10%的接種量接入發(fā)酵罐中的培養(yǎng)液，進行微通風 暗培養(yǎng)發(fā)酵。
步驟A中啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414的擴大培養(yǎng)及發(fā)酵包括 如下工藝步驟I、由斜面菌種制備克氏瓶菌種將斜面菌種接種到克氏瓶培養(yǎng)基中制備克氏瓶菌種，30°C培養(yǎng)24小時。斜面培養(yǎng) 基及克氏瓶培養(yǎng)基包括如下質(zhì)量份的組分酵母膏或酵母粉0. 8-1. 2蛋白胨2-2. 5葡萄糖或蔗糖2_3瓊脂1. 8-2. 3 pH = 6. 0 ；II、將克氏瓶菌種接種到種子培養(yǎng)基中擴培制備成一級種子培養(yǎng)條件為溫度30_31°C，壓力0. 05Mpa。接種8小時后開啟攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速180 轉(zhuǎn)/分鐘，按體積比的通風量0_6小時為1 0. 2，6小時后為1 0.4 ；培養(yǎng)20小時后，鏡 檢菌體處于對數(shù)期生長，含菌量達到要求，無雜菌，即可轉(zhuǎn)種；III、將一級種子接種到種子培養(yǎng)基中經(jīng)過擴大培養(yǎng)制備成二級種子培養(yǎng)條件為溫度30-31°C，壓力0. 05Mpa。接種8小時后開啟攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為 960轉(zhuǎn)/分鐘，按體積比的通風量0-6小時為1 0.48，6-12小時為1 0. 6，12小時后為 1 0.7;培養(yǎng)20小時后，鏡檢菌體處于對數(shù)期生長，含菌量達到工藝要求，無雜菌，即可轉(zhuǎn) 種；IV、將二級種子轉(zhuǎn)接入發(fā)酵罐內(nèi)的培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)條件為溫度30-31°C，壓力0. 05Mpa。接種8小時后開啟攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為 730轉(zhuǎn)/分鐘，按體積比的通風量0-6小時為1 0.48，6-12小時為1 0. 6，12小時后為 1 0.7;培養(yǎng)24-30小時，鏡檢菌體生長結(jié)束，含菌量達到1億/毫升以上，無雜菌，PH = 5.0士，即可放罐；上述的步驟II、III、IV中的種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下單位質(zhì)量份的組 分葡萄糖或蔗糖2-3蛋白胨2-2. 5酵母膏或酵母粉0. 8-1. 2硫酸鎂0. 1-0. 15 乙酸鈉 0. 2-0. 25 硫酸銨 0. 4-0. 6三氯化鐵0. 0002-0. 0005 磷酸二氫鉀 0. 15-0. 2硫酸鋅0. 0005-0. 0007 消泡劑 0. 1-0. 3 自然 pH種子罐、發(fā)酵罐的培養(yǎng)基采用按體積比為55%裝量。步驟A中嗜酸乳桿菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854的擴大培養(yǎng)及發(fā)酵包 括如下工藝步驟I、由斜面菌種制備搖瓶種子將斜面菌種接種到搖瓶培養(yǎng)基中制備搖瓶種子，其中斜面菌種的培養(yǎng)條件為溫 度37-40°C，培養(yǎng)周期1-2天；搖瓶種子的培養(yǎng)條件為采用IOOOml三角瓶中裝300ml培養(yǎng) 基進行搖床培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為160-180rpm，溫度為37_40°C，培養(yǎng)周期為24小時；II、將搖瓶種子接種到種子培養(yǎng)基中擴培制備成種子液培養(yǎng)條件為采用體積比為70%裝量，溫度37_40°C，采用壓風厭氧發(fā)酵，pH = 6. 0，壓力為0. 05Mpa，攪拌轉(zhuǎn)速為960轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵24小時取樣鏡檢菌體形態(tài)良好，含菌量 達到10億/毫升以上，無雜菌，即可轉(zhuǎn)罐進入下一級培養(yǎng)；III、將種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵
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采用體積比為70%裝量，溫度37_40°C，采用壓風厭氧發(fā)酵，pH = 6.0，壓力為 0. 05Mpa，攪拌轉(zhuǎn)速為960轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵24小時取樣鏡檢菌體形態(tài)良好，含菌量達到10億/ 毫升以上，無雜菌，即終止培養(yǎng)；所述的步驟I、II、III、IV中的斜面培養(yǎng)基、搖瓶培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下單 位質(zhì)量份的組分蛋白胨0. 8-1. 2牛肉膏0. 8-1. 2酵母膏或酵母粉0. 5-0. 7葡萄糖或蔗糖0. 5-0. 8 吐溫-800. 1-0. 15 K2HPO4O. 2-0. 3Na 3HAC20 0. 5-0. 6 檸檬酸三鈉 0. 2-0. 25 MgS047H20 0. 02-0. 03MnSO4 · 4H 20 0. 003-0· 005 瓊月旨 1. 8-2. 2 pH = 6. 5-7. 0。步驟A中光合菌-沼澤紅假單胞菌Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349的擴 大及發(fā)酵培養(yǎng)包括如下工藝步驟I、由斜面菌種擴大培養(yǎng)制備種子液將斜面菌種接種到種子培養(yǎng)基中制備種子液，培養(yǎng)條件為采用1000毫升三角瓶 中裝200ml培養(yǎng)基光照培養(yǎng)，光照強度3000-4000勒克斯，靜止培養(yǎng)7天；II、將種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵采用體積比為80%裝量，按照體積比為8-10%的接種量接種，按體積比為1 0.2 的比例進行微通風暗培養(yǎng)發(fā)酵，發(fā)酵過程中定期攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為960轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)溫度 28-36 0C，培養(yǎng)周期10-15天。所述的步驟I、II中的斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下單位質(zhì)量 份的組分乙酸鈉0. 2-2. 5 硫酸胺 0. 1-0. 15 磷酸二氫鉀 0. 03-0. 05磷酸氫二鉀0. 04-0. 06 硫酸鎂 0. 02-0. 03 氯化鈉 0. 008-0· 01。實施例2用于畜禽糞便發(fā)酵生產(chǎn)生物有機肥的微生物腐熟劑的制備方法，包括如下工藝步 驟Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414 Jf^Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854、分別接種于含有碳源、氮源和營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中進行發(fā)酵；將光 合菌_沼澤紅假單胞菌Rhodopseudomonaspalustris ASl. 2349接種于含有營養(yǎng)物質(zhì)的培 養(yǎng)基中進行發(fā)酵；B、將步驟A中制備的發(fā)酵液按啤酒酵母發(fā)酵液嗜酸乳桿菌發(fā)酵液沼澤紅假 單胞菌的發(fā)酵液的體積比為50 25 25的比例混合，用米糠和麩皮的混合物為載體，吸 附混合后的發(fā)酵液，制作成固體腐熟劑。所述的步驟B中米糠與麩皮按照質(zhì)量比為7 3的比例進行混配。所述步驟A中啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414發(fā)酵包括如下步 驟將啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414經(jīng)過擴大培養(yǎng)后，將啤酒酵母 Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414 禾中〒 禾中i!H#。步驟A中的嗜酸乳桿菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854發(fā)酵包括如下步 驟
將嗜酸乳桿菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854分別經(jīng)過擴大培養(yǎng)后，將嗜 酸乳桿菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854種子液接種于培養(yǎng)液進行厭氧發(fā)酵。步驟A中的光合菌-沼澤紅假單胞菌Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349的 發(fā)酵包括如下步驟將光合菌-沼澤紅假單胞菌Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349采用光照培 養(yǎng)法經(jīng)過擴大培養(yǎng)后，按照體積比為8-10 %的接種量接入發(fā)酵罐中的培養(yǎng)液，進行微通風 暗培養(yǎng)發(fā)酵。步驟A中啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414的擴大培養(yǎng)及發(fā)酵中斜 面培養(yǎng)基及克氏瓶培養(yǎng)基包括如下質(zhì)量份的組分酵母膏或酵母粉1. 2蛋白胨2. 5葡萄糖或蔗糖3瓊脂2. 3 pH = 6.0;種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下單位質(zhì)量份的組分葡萄糖或蔗糖3蛋白胨2. 5酵母膏或酵母粉1. 2硫酸鎂0. 15乙酸鈉0. 25硫酸銨0. 6三氯化鐵0. 0005磷酸二氫鉀0. 2硫酸鋅-0.0007消泡劑0.3自然pH。步驟A中嗜酸乳桿菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854的擴大培養(yǎng)及發(fā)酵中 的斜面培養(yǎng)基、搖瓶培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下單位質(zhì)量份的組分蛋白胨1.2牛肉膏1.2酵母膏或酵母粉0.7葡萄糖或蔗糖0. 8 吐溫-800. 15 K2HPO4O. 3Na3HAC2O 0. 6 檸檬酸三鈉 0. 25 MgS047H20 0. 03MnSO4 · 4Η200· 005 瓊脂 2.2 pH = 7. O。步驟A中光合菌-沼澤紅假單胞菌Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349的擴 大及發(fā)酵培養(yǎng)的斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下單位質(zhì)量份的組分乙酸鈉2. 5硫酸胺0. 15磷酸二氫鉀0. 05磷酸氫二鉀0. 06硫酸鎂0. 03氯化鈉0. 01。本實施例中其余反應條件同實施例1。
權(quán)利要求
用于畜禽糞便發(fā)酵生產(chǎn)生物有機肥的微生物腐熟劑的制備方法，其特征在于該方法包括如下工藝步驟A、將啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae AS1.2414、嗜酸乳桿菌Lactobacillus acidophilus AS1.1854、分別接種于含有碳源、氮源和營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中進行發(fā)酵；將光合菌 沼澤紅假單胞菌Rhodopseudomonaspalustris AS1.2349接種于含有營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中進行發(fā)酵；B、將步驟A中制備的發(fā)酵液按啤酒酵母發(fā)酵液∶嗜酸乳桿菌發(fā)酵液∶沼澤紅假單胞菌發(fā)酵液的體積比為50∶25∶25的比例混合，用米糠和麩皮的混合物為載體，吸附混合后的發(fā)酵液，制作成固體腐熟劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于畜禽糞便發(fā)酵生產(chǎn)生物有機肥的微生物腐熟劑的制備 方法，其特征在于所述的步驟B中米糠與麩皮按照質(zhì)量比為7 3的比例進行混配。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于畜禽糞便發(fā)酵生產(chǎn)生物有機肥的微生物腐熟劑的制備 方法，其特征在于所述步驟A中的啤酒酵母Saccharomyces cerev Isiae ASl. 2414的發(fā)酵 包括如下步驟將啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414經(jīng)過擴大培養(yǎng)后，將啤酒酵母 Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414 禾中〒 禾中i!H#。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于畜禽糞便發(fā)酵生產(chǎn)生物有機肥的微生物腐熟劑的制備 方法，其特征在于所述步驟A中的嗜酸乳桿菌Saccharomycescerevisiae ASl. 1854的發(fā)酵 包括如下步驟將嗜酸乳桿菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854分別經(jīng)過擴大培養(yǎng)后，將嗜酸乳 桿菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854種子液接種于培養(yǎng)液進行厭氧發(fā)酵。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于畜禽糞便發(fā)酵生產(chǎn)生物有機肥的微生物腐熟劑的制備 方法，其特征在于所述步驟A中的光合菌-沼澤紅假單胞菌Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349的發(fā)酵包括如下步驟將光合菌_沼澤紅假單胞菌Rhodopseudomonaspalustris ASl. 2349采用光照培養(yǎng)法 經(jīng)過擴大培養(yǎng)后，按照體積比為種子液培養(yǎng)液=8% -10%的接種量接入發(fā)酵罐中的培 養(yǎng)液，進行微通風暗培養(yǎng)發(fā)酵。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于畜禽糞便發(fā)酵生產(chǎn)生物有機肥的微生物腐熟劑的制備 方法，其特征在于所述步驟A中啤酒酵母Saccharomyces cerev Isiae ASl. 2414的擴大培 養(yǎng)及發(fā)酵包括如下工藝步驟I、由斜面菌種制備克氏瓶菌種將斜面菌種接種到克氏瓶培養(yǎng)基中制備克氏瓶菌種，30°C培養(yǎng)24小時，斜面培養(yǎng)基及 克氏瓶培養(yǎng)基包括如下質(zhì)量份的組分酵母膏或酵母粉0. 8-1. 2蛋白胨2-2. 5葡萄糖或蔗糖2-3瓊脂 1. 8-2. 3 pH = 6. O ；II、將克氏瓶菌種接種到種子培養(yǎng)基中擴培制備成一級種子培養(yǎng)條件為溫度30-31°C，壓力0. 05Mpa，接種8小時后開啟攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/ 分鐘，按體積比的通風量0_6小時為1 0. 2，6小時后為1 0. 4 ；培養(yǎng)20小時后，鏡檢菌 體處于對數(shù)期生長，含菌量達到要求，無雜菌，即可轉(zhuǎn)種；III、將一級種子接種到種子培養(yǎng)基中經(jīng)過擴大培養(yǎng)制備成二級種子培養(yǎng)條件為溫度30-31°C，壓力0. 05Mpa,接種8小時后開啟攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為960轉(zhuǎn)/ 分鐘，按體積比的通風量0_6小時為1 0.48，6-12小時為1 0.6，12小時后為1 0. 7 ； 培養(yǎng)20小時后，鏡檢菌體處于對數(shù)期生長，含菌量達到工藝要求，無雜菌，即可轉(zhuǎn)種；IV、將二級種子轉(zhuǎn)接入發(fā)酵罐內(nèi)的培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)條件為溫度30-31°C，壓力0. 05Mpa,接種8小時后開啟攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為730轉(zhuǎn)/ 分鐘，按體積比的通風量0_6小時為1 0.48，6-12小時為1 0.6，12小時后為1 0. 7 ； 培養(yǎng)24-30小時，鏡檢菌體生長結(jié)束，含菌量達到1億/毫升以上，無雜菌，PH = 5. 0士，即 可放罐；所述的步驟II、III、IV中的種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下單位質(zhì)量份的組分葡萄糖或蔗糖2-3蛋白胨2-2. 5酵母膏或酵母粉0. 8-1. 2硫酸鎂0. 1-0. 15乙酸鈉0. 2-0. 25硫酸銨0. 4-0. 6三氯化鐵0. 0002-0. 0005磷酸二氫鉀0. 15-0. 2硫酸鋅0. 0005-0. 0007消泡劑0. 1-0. 3自然pH種子罐、發(fā)酵罐的培養(yǎng)基采用按體積比為55%裝量。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于畜禽糞便發(fā)酵生產(chǎn)生物有機肥的微生物腐熟劑的制備 方法，其特征在于所述步驟A中嗜酸乳桿菌Lactobacillus acidophilus ASl. 1854的擴大 培養(yǎng)及發(fā)酵包括如下工藝步驟I、由斜面菌種制備搖瓶種子將斜面菌種接種到搖瓶培養(yǎng)基中制備搖瓶種子，其中斜面菌種的培養(yǎng)條件為溫度 37-40°C，培養(yǎng)周期1-2天；搖瓶種子的培養(yǎng)條件為采用IOOOml三角瓶中裝300ml培養(yǎng)基 進行搖床培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為160-180rpm，溫度為37_40°C，培養(yǎng)周期為24小時；II、將搖瓶種子接種到種子培養(yǎng)基中擴培制備成種子液培養(yǎng)條件為采用體積比為70%裝量，溫度37-40°C，采用壓風厭氧發(fā)酵，pH = 6. 0，壓 力為0. 05Mpa,攪拌轉(zhuǎn)速為960轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵24小時取樣鏡檢菌體形態(tài)良好，含菌量達到10 億/毫升以上，無雜菌，即可轉(zhuǎn)罐進入下一級培養(yǎng)；III、將種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵采用體積比為70%裝量，溫度37-40°C，采用壓風厭氧發(fā)酵，pH = 6. 0，壓力為0. 05Mpa, 攪拌轉(zhuǎn)速為960轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵24小時取樣鏡檢菌體形態(tài)良好，含菌量達到10億/毫升以上， 無雜菌，即終止培養(yǎng)；所述的步驟I、II、III、IV中的斜面培養(yǎng)基、搖瓶培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下單位質(zhì) 量份的組分蛋白胨0. 8-1. 2牛肉膏0. 8-1. 2酵母膏或酵母粉0. 5-0. 7 葡萄糖或蔗糖 0. 5-0. 8 吐溫-800. 1-0. 15 K2HPO4O. 2-0. 3 Na3HAC 20 0. 5-0. 6 檸檬酸三鈉 0. 2-0. 25 MgS047H 20 0. 02-0. 03 MnSO4 · 4H20 0. 003-0. 005 瓊月旨 1. 8-2. 2 pH = 6. 5-7. 0。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于畜禽糞便發(fā)酵生產(chǎn)生物有機肥的微生物腐熟劑的制備 方法，其特征在于所述步驟A中光合菌-沼澤紅假單胞菌Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349的擴大及發(fā)酵培養(yǎng)包括如下工藝步驟I、由斜面菌種擴大培養(yǎng)制備種子液將斜面菌種接種到種子培養(yǎng)基中制備種子液，培養(yǎng)條件為采用1000毫升三角瓶中裝 200ml培養(yǎng)基光照培養(yǎng)，光照強度3000-4000勒克斯，靜止培養(yǎng)7天；II、將種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵采用體積比為80%裝量，按照體積比為8-10%的接種量接種，按體積比為1 0.2的 比例進行微通風暗培養(yǎng)發(fā)酵，發(fā)酵過程中定期攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為960轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)溫度 28-36 °C，培養(yǎng)周期 10-15。所述的步驟I、II中的斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下單位質(zhì)量份的 組分乙酸鈉0. 2-2. 5硫酸胺0. 1-0. 15磷酸二氫鉀0. 03-0. 05 磷酸氫二鉀0. 04-0. 06硫酸鎂0. 02-0. 03氯化鈉0. 008-0. 01。
全文摘要
本發(fā)明屬于微生物腐熟劑的制備，特別是指一種用于畜禽糞便發(fā)酵生產(chǎn)生物有機肥的微生物腐熟劑的制備方法。包括將啤酒酵母Sccharomycescerevisiae AS1.2414、嗜酸乳桿菌Saccharomyces cerevisiae AS1.1854、分別接種于含有碳源、氮源和營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中進行發(fā)酵；將光合菌-沼澤紅假單胞菌Rhodopseudomonas palustris AS1.2349接種于含有營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中進行發(fā)酵；按啤酒酵母發(fā)酵液∶沼澤紅假單胞菌發(fā)酵液∶沼澤紅假單胞菌發(fā)酵液的體積比為50∶25∶25的比例混合，用米糠和麩皮的混合物為載體，吸附混合后的發(fā)酵液，制作成固體腐熟劑。本發(fā)明解決了現(xiàn)有技術(shù)存在的堆肥過程中腐熟速度較慢，影響了堆肥腐熟的質(zhì)量和速度的問題。具有可以有效減少堆肥時間，提高堆肥腐熟度和生產(chǎn)效率等優(yōu)點。
文檔編號C05F17/00GK101905985SQ20101024723
公開日2010年12月8日 申請日期2010年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月30日
發(fā)明者唐兆宏, 李軍, 李賓, 章淑艷, 趙從波, 陳文杰, 馬清河, 魏亞新 申請人:河北省微生物研究所