專利名稱：一種粉花長壽花試管花卉的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種粉花長壽花的栽培方法，特別涉及一種粉花長壽花試管花卉的制作方法。
背景技術：
試管花卉是當前市場上較為流行的迷你攜帶花卉，因其植株小，培養在精致的小試管或玻璃瓶內而得名。它是利用植物克隆技術，在人工控制的相對或絕對無菌環境條件下，將事先培養好的植物幼苗植株在拇指大的透明試管或藝術化的玻璃瓶等相對密封空間里生長的一系列迷你微型植物總稱。外形美觀的試管玻璃瓶等容器為幼小植物提供了安全的生長空間，試管花卉又被稱為“天使花房”或“試管花屋”。它是建立在組織培養技術之上的新興花卉。目前被稱為“手指玫瑰”的迷你花卉在韓國、英國都很流行，甚至遠銷日本和新加坡等地。但試管花卉的發展仍然受到培養材料的限制，不是所有材料均適合做試管花卉，因此只有不斷豐富迷你花卉的植物材料，才能推動試管花卉的產業快速發展。長壽花iKalanchoe blossfeldiana)是景天科伽藍菜屬的觀葉和觀花植物，又名矮生伽藍菜、壽星花、假川蓮，一直深得消費者喜愛。長壽花為短日照植物，花期為冬、春兩季；植株形態矮小、株型緊湊，多分支；株高15-20 cm，株幅10-20 cm ；葉對生，肉質、肥厚， 葉色深綠或紅綠色；花較小，有紅、橙紅、桃紅、黃、白色及雜色等花色品種。每個聚傘花序著生10-20個小花，形成一個個花團，整體觀賞效果好。長壽花通過扦插繁殖，受季節影響遠遠不能滿足市場需求，因此，利用組織培養方法可大大加快繁殖速度，并已成為一種育苗手段。如，關艷清等人以長壽花幼嫩葉片為材料，以2，4-D，6-BA，NAA為主要研究因子，研究不同激素配比對長壽花愈傷組織生長、分化及其芽增殖情況的影響(長壽花葉片愈傷組織培養及植株再生的研究[J].遼寧農業職業技術學院學報，2008，10 (3) :19-22)。李玉梅也公開了一種長壽花的快速繁殖方法(長壽花的快速繁殖[J].廣西熱帶農業，2009，(4) :65-66).然而，目前粉花長壽花試管花卉的制作在現有技術中未見報道。

發明內容
鑒于長壽花具有花色多、花期長、植株矮小和生長速度慢等特點，因此本發明的目的在于提供一種粉花長壽花試管花卉的制作方法。通過本發明，我們建立了粉花長壽花試管內花芽誘導的方法，制作了粉花長壽花試管花卉，為試管花卉產業進一步發展奠定基礎。本發明的目的是這樣實現的
一種粉花長壽花試管花卉的制作方法，包括如下步驟
(1)以粉花長壽花莖段為材料，在快繁培養基中繼代培養，在生根培養基中進行繁殖， 獲得無菌苗；
(2)在溫度13 18°C，光周期6 lOhrs/d的條件下培養無菌苗60天 90天，使花芽分化；
3(3)將帶有花芽的莖段接種在生根培養基中，并在培養基中添加色素，培養后獲得彩色長壽花試管花卉；
其中，所述的快繁培養基的配制方法為在1升MS培養基中，分別添加濃度為0. 5mg/ mL的6-芐氨基嘌呤2毫升、濃度為0. 5mg /mL的萘乙酸0. 2毫升；所述的生根培養基的配制方法為在1升MS培養基中，添加濃度為0. 5mg/mL的萘乙酸0. 4毫升。所述的粉花長壽花試管花卉的制作方法，其中步驟(1)所述的繼代培養次數為 4 5次。所述的粉花長壽花試管花卉的制作方法，其中步驟(3)中所述的色素為檸檬黃、葡萄紫、蘋果綠或胭脂紅。優選地，所述的色素濃度為檸檬黃0.05g/mL，或葡萄紫0.05 g/ mL，或蘋果綠5g/ mL，或胭脂紅0. 05g/mL。進一步優選地，步驟(3)中每升培養基添加色素的量為2 10mL。所述的粉花長壽花試管花卉的制作方法，其中繼代培養前對粉花長壽花莖段滅菌處理。本發明任何地方所述的培養基中，其中
MS是國際通用的培養基，其成分和配制方法參見文獻(譚文澄、戴策剛主編，觀賞植物組織培養技術，北京中國國林業出版社，1991)
BA也縮寫為6-BA，化學成分為6-芐氨基嘌呤，使用時配置成高濃度母液，即0. 5mg/mL。 具體配置方法稱取50毫克6-BA，先用少量95%酒精溶解，然后用蒸餾水定容至100毫升， 即可使用。NAA的化學成分為萘乙酸，使用時配置成0.5mg /mL的母液。具體配置方法稱取 50毫克NAA，先用少量95%酒精溶解，然后用蒸餾水定容至100毫升，即可使用。與現有技術相比，本發明涉及的粉花長壽花試管花卉的制作方法具有如下優點和顯著地進步
(1)粉花長壽花試管花卉觀賞期較長。通過試驗結果分析，長壽花觀賞期與容器的大小相關，250mL容器中，開花觀賞期2個月，從蕾期到花朵凋謝可達6個月。500mL容器中觀賞期達2. 5個月，從蕾期到花朵凋謝可持續觀賞10個月之久。(2)環保型強。粉花長壽花莖段消毒采用84消毒液消毒，培養基均是常用培養基， 彩色培養基的顏色均是用食品色素調配，因此長壽花試管花制作及培養過程所用的試劑對環境沒有任何污染。(3)生根率高，內生菌感染率小。在生根培養基中培養莖段2周左右即可全部生根，同時內生菌感染的幾率較小。(4)經濟效益和社會效益高。建立了粉花長壽花試管內花芽誘導的方法，制作了粉花長壽花試管花卉，為試管花卉產業進一步發展奠定基礎。
具體實施例方式以下是本發明涉及的具體實施例，對本發明的技術方案做進一步作描述，但是本發明的保護范圍并不限于這些實施例。凡是不背離本發明構思的改變或等同替代均包括在本發明的保護范圍之內。
實施例1粉花長壽花試管花卉的栽培條件篩選與制作 1材料和方法 1. 1試驗材料
實驗材料購買于湖北省武漢市雄楚大街花卉市場，盆栽粉花長壽花。1. 2試驗方法
1.2. 1外植體消毒
取粉花長壽花帶腋芽莖段在流水下沖洗，揉搓掉葉表面的泥土，用75%酒精浸泡Imin 后，再用20% 84消毒液(市售，產于溫州)滅菌20min，放在無菌水中清洗3次。1. 2. 2無菌苗的獲得
將消毒過的莖段剪去變色的傷口部分，剪成帶有一個腋芽的莖段，分別接種在擴繁培養基MSl :MS+BA 1. Omg/L+NAA 0. lmg/L 和生根培養基 MS2 MS+NAA 0. 2mg/L 中繼代培養， 每瓶一枝，各接種50枝，40天繼代一次，每次繼代后觀察并記錄污染情況，4次繼代后獲得無菌苗。1. 2. 3花芽誘導培養
將長壽花無菌苗在生根培養基MS2中培養40天，材料生根后，分3組實驗，第I組溫度22° C，光周期12hrs/d;第II組溫度22° C光周期8hrs/d ；第III組溫度16° C， 光周期arrs/d，其余條件一樣，定期觀察花芽分化情況，計算分化率。1. 3試管花卉的培養基制備
在生根培養基MS+NAAO. 2mg/L中添加四種不同色素即檸檬黃(0. 05g/mL )、葡萄紫 (0. 05g/ mL)、蘋果綠(5g/mL)和胭脂紅(0. 05g/mL)，每升培養基添加量分別為4 mL、4mL、 5mL和8mL，獲得具有觀賞價值的彩色培養基，所有色素均是食品添加劑，對環境沒有污染。1. 4制作試管花卉
將帶有花蕾的長壽花花枝接種在配有彩色培養基的250mL和500mL容器當中，根據花枝實際生長情況保留葉片4-6枚，培養基填加量為容器的1/3，觀察記錄長壽花在容器中的觀賞時間。1. 5培養基和培養條件
除實驗特殊要求培養條件外，其余培養條件是基本培養基為MS,擴繁培養基白糖為 30g/L，生根培養基白沙糖為50g/L，瓊脂6g/L，pH5. 8-6. 2，培養溫度22° C，光強2000x1， 光照周期12hrs/d。2結果與分析
2.1無菌苗獲得結果分析
將莖段接種在不同培養基中，隨著繼代次數增加，污染率逐漸降低，如表1。觀察發現污染物為細菌，并且每次污染菌最先出現在莖段切口周圍，然后再擴散。 因此判斷長壽花植株帶有內生菌。在擴繁培養基MSl中，隨著繼代次數增加，污染率逐漸降低，四次繼代后污染率為 0%，獲得無菌苗。而在生根培養基MS2中，隨著繼代次數增多，污染率也在下降，但由于快速生根阻止切口處菌類擴散，雖然污染率降低，但脫毒速度較慢，四次繼代后仍有污染。因此無菌苗獲得應在擴繁培養基中進行，可以在4-5次繼代后得到完全脫毒的無菌苗，之后再
接種在生根培養基中進行繁殖。 表1長壽花莖段污染率統計表
權利要求
1.一種粉花長壽花試管花卉的制作方法，包括如下步驟(1)以粉花長壽花莖段為材料，在快繁培養基中繼代培養，在生根培養基中進行繁殖， 獲得無菌苗；(2)在溫度13 18°C，光周期6 lOhrs/d的條件下培養無菌苗60天 90天，使花芽分化；(3)將帶有花芽的莖段接種在生根培養基中，并在所述培養基中添加色素，培養后獲得彩色長壽花試管花卉；其中，所述的快繁培養基的配制方法為在1升MS培養基中，分別添加濃度為0. 5mg/ mL的6-芐氨基嘌呤2毫升、濃度為0.5mg /mL的萘乙酸0. 2毫升；所述的生根培養基的配制方法為在1升MS培養基中，添加濃度為0. 5mg/mL的萘乙酸0. 4毫升。
2.根據權利要求1的粉花長壽花試管花卉的制作方法，其特征在于步驟(1)所述的繼代培養次數為4 5次。
3.根據權利要求1的粉花長壽花試管花卉的制作方法，其特征在于步驟(3)中所述的色素為檸檬黃、葡萄紫、蘋果綠或胭脂紅。
4.根據權利要求3的粉花長壽花試管花卉的制作方法，其特征在于所述的色素濃度為檸檬黃0. 05g/mL,或葡萄紫0. 05 g/mL，或蘋果綠5g/mL，或胭脂紅0. 05g/mL。
5.根據權利要求4的粉花長壽花試管花卉的制作方法，其特征在于步驟(3)中每升培養基添加色素的量為2 10mL。
6.根據權利要求1-5任一項的粉花長壽花試管花卉的制作方法，其特征在于繼代培養前對粉花長壽花莖段滅菌處理。
全文摘要
本發明涉及一種粉花長壽花試管花卉的制作方法，包括如下步驟(1)以粉花長壽花莖段為材料，在快繁培養基中繼代培養，在生根培養基中進行繁殖，獲得無菌苗；(2)在溫度13～18℃，光周期6～10hrs/d的條件下培養無菌苗，使花芽分化；(3)將帶有花芽的莖段接種在生根培養基中，并添加色素，培養后獲得長壽花試管花卉，觀賞期可持續觀賞6-10個月。
文檔編號A01H4/00GK102293156SQ20111020791
公開日2011年12月28日 申請日期2011年7月25日 優先權日2011年7月25日
發明者柳俊, 段德君, 袁繼紅, 鄭新會, 齊迎春 申請人:華中農業大學