專利名稱：草莓專用復合抗重茬劑的制備方法
技術領域：
本發明屬于微生物復配制劑的制備，特別是指一種草莓專用復合抗重茬劑的制備方法。
背景技術：
草莓漿果鮮紅艷麗，芳香多汁，甜酸可口，營養豐富，被視為果中珍品。目前全國已有栽培草莓面積近4萬公頃，產量20多萬噸。草莓重茬病是草莓生產的重要問題，國內外的研究表明，造成作物重茬的主要原因是土壤營養元素的缺乏和土傳病害所致，草莓在同一田塊上連作2年一般減產10-15%，連作3年減產20%-25%，連作4年以上減產40%以上， 嚴重者甚至絕收。草莓種植過程中，特別是連作種植極易造成土壤的營養元素缺乏，合理有效地補充相關元素是現代農業種植中的一項重要措施。草莓病害以土傳病害為主，常見的炭疽病、 灰霉病、白粉病和根腐病等都是由細菌和霉菌傳播的；病毒病主要有草莓斑駁病毒、草莓輕型黃邊病毒、草莓鑲脈病毒等多種植物病毒，主要由蚜蟲傳播；草莓的蟲害主要的有草莓芽線蟲、草莓根腐線蟲、紅蜘蛛和蚜蟲。目前草莓要連種普遍采用的方法就是化學熏蒸法。該方法使用成本高達每公頃一萬五千元以上，僅當年有效，同時熏蒸用化學物質大多是劇毒物，對大氣和土壤都有嚴重的破壞。在草莓產業化市場不斷擴大的情況下，對綠色無公害產品的需求也日益擴大。草莓重茬病的生物防治，對環保和綠色食品的要求，對提高草莓國際市場競爭力都具有非常重要的意義。隨著綠色食品、綠色農業的發展，生物肥料開始大規模使用于現代化農業種植上， 在生物肥料中，微生物肥料以其用量少、成本低、作用效果顯著而成為首選。具有解鉀作用的膠質芽孢桿菌和具有解磷作用的巨大芽孢桿菌制成的鉀磷復合肥是近年來生物肥料市場的廣泛使用的一種微生物活菌制劑。微生物肥料在培肥地力，提高化肥利用率，凈化和修復土壤，降低農作物病害發生，保護環境，以及提高農作物產品品質和食品安全等方面都表現出了不可替代的作用。細黃鏈霉菌micrcflav )是一株對多種病原菌有拮抗作用的抗生性放線菌，用此菌株生產的抗生菌肥，不但能抑制多種病原菌的生長，還具有刺激作物發芽、生根等作用。放線菌肥料在多年的使用中，取得了良好的抗病、增產效果。目前用細黃鏈霉菌生產抗生菌肥有固體和液體發酵兩種方法，固體發酵生產周期較長，產品質量不穩定；液體發酵產品以菌絲體的形式存在，不形成孢子，一方面不利于保藏和貯存，產品保質期短，另一方面在應用中菌絲體的效果也沒有孢子好。

發明內容
本發明的目的在于提供一種草莓專用復合抗重茬劑的制備方法，利用液體菌種和固體發酵相結合的方法，發酵生產細黃鏈霉菌抗生菌肥，保證了產品質量的穩定和大量的孢子形成。根據草莓的需肥特點添加微量元素，并與具有解磷解鉀功能的微生物菌肥—— 生物磷鉀肥復配，生產出多功能防治草莓重茬病的生物制劑——草莓專用復合抗重茬劑， 該產品既可以解決由土傳病菌引起的重茬問題，又可以解決由土壤缺素引起的重茬問題， 同時由于加入了解磷解鉀菌株，在植物根部形成了有益微生物菌群，改善了土壤的微生態環境，也為草莓生長提供了磷鉀營養元素。本發明的整體技術構思是
草莓專用復合抗重茬劑的制備方法，包括如下工藝步驟
A、細黃鏈霉菌抗生菌劑的制備 Al、液體種子的制備
將原始菌種接種至滅菌后的液體培養基中進行搖床培養制成液體種子，培養條件為轉速180轉/分鐘、培養溫度-30°C、培養周期M小時；接種時加入約5毫升無菌水在試管菌種中，用接種針刮起菌苔，制成菌懸液，每支斜面接種3-5個三角瓶； 上述液體培養基由如下質量百分比的原料組成 玉米粉1. 8%-2%,豆餅粉2%-2. 5%，淀粉0. 8%-1. 2%，余量為水； 原始菌種選用菌株細黃鏈霉菌micrcflav )，其保藏編號為 CGMCC4. 891 ； A2、固體發酵
A2-1曲盤培養將步驟Al中制備的液體種子接種到滅菌后的曲盤培養基進行培養，接種量為液體種子與滅菌后的曲盤培養基的質量比等于5%-8%，培養條件為溫度-30 濕度50%-70%、培養周期5-6天，待基質全部出現粉色孢子，香味濃郁時出料； 曲盤培養的培養基由如下質量百分比的原料組成
豆餅粉4%-5%，石灰1. 5%-2%，甘薯粉12%-15%，鋸末15%_20%，細土 33%-；35%，余量為水； A2-2后熟出料時翻動并打碎料塊，在40°C _45°C條件下，干燥至含水質量百分含量為 10%-15%，粉碎制成細黃鏈霉菌抗生菌劑；
B、微量元素添加劑的配制
按照NY14^-2007標準《微量元素水溶肥料》的要求配制微量元素添加劑，其中硼、鋅、 鉬、錳元素含量之和不低于微量元素添加劑總質量的10% ；
C、草莓專用復合抗重茬劑的復配
按照細黃鏈霉菌抗生菌劑微生物菌肥生物鉀磷復合肥微量元素添加劑的質量比 =30-34 :65-69. 2 :0. 8-1的比例，將上述物料混配均勻制成草莓專用復合抗重茬劑。本發明中具體的工藝步驟及技術參數是
所述的步驟Al中液體種子培養基的滅菌條件是溫度為121°C，時間為25-35分鐘。所述的步驟A2-1中曲盤培養基的滅菌條件是溫度為121°C，時間為50-60分鐘。所述的步驟A2-1的曲盤培養基中鋸末細度為10目-20目，細土的顆粒度為50 目-70目，其余固體物料的顆粒度為60目-80目。所述的步驟A2-1中曲盤培養出料前取樣并用平板計數法測定孢子含量，孢子含量不低于80億個/克。所述的步驟B的微量元素添加劑中的微量元素可以選用多種溶于水后硼、鋅、鉬、 錳元素以離子形態的化合物，并不脫離本發明的實質。其中較為優選的技術方案是，硼元素選自硼砂或硼酸中的一種，鋅元素選自硫酸鋅或氯化鋅中的一種，鉬元素選自鉬酸銨，錳元素選自硫酸錳。所述的步驟B的微量元素添加劑按照質量比為硼砂或硼酸硫酸鋅或氯化鋅鉬酸銨硫酸錳=45-55 25-35 15-25 10-20的比例配制。步驟C中微生物菌肥生物鉀磷復合肥選用執行GB2(^87_2006標準，微生物有效菌含量2億個/克以上的生物鉀磷或磷鉀微生物復合肥。較為優選的是微生物菌肥生物鉀磷復合肥選用河北省微生物研究所生產的“冀微”牌生物鉀磷肥或復合菌劑、湖南豫園生物科技有限公司生產的“豫園”牌通用型菌種粉、北京世紀阿姆斯生物技術有限公司生產的 “阿姆斯”牌生物磷鉀肥中的一種。利用本發明的方法所制備的草莓專用復合抗重茬劑的實驗結果如下
申請人在保定市郊選已經種植了二年草莓的連作大棚，進行抗重茬劑的使用效果試驗。草莓品種為豐香。對照組Ck用溴甲烷熏蒸，試驗組分別按每公頃60 (處理1)和 80 (處理2)公斤施用抗重茬劑，定植前均勻地施入定植穴內。在種植和生長期間管理和施肥都按常規方法進行。分次采收商品果并用電子天平稱重，統計總產量；用鐵氰化鉀法測定可溶性糖； 用標準氫氧化鈉滴定法測定可滴定酸；用2. 6—二氯靛酚法測定維生素C的含量；用折射儀法測定可溶性固形物。其中糖、酸和維生素C的測定方法均為植物生理生化實驗測定的常規方法，可溶性固形物的測定方法符合GB/T 12295-90《水果、蔬菜制品可溶性固形物含量的測定一折射儀法》的要求。試驗結果見表1:
表1 草莓專用復合抗重茬劑對連作草莓產量和質量的影響
權利要求
1.草莓專用復合抗重茬劑的制備方法，其特征在于包括如下工藝步驟A、細黃鏈霉菌抗生菌劑的制備 Al、液體種子的制備將原始菌種接種至滅菌后的液體培養基中進行搖床培養制成液體種子，培養條件為轉速180轉/分鐘、培養溫度-30°C、培養周期M小時；接種時加入約5毫升無菌水在試管菌種中，用接種針刮起菌苔，制成菌懸液，每支斜面接種3-5個三角瓶； 上述液體培養基由如下質量百分比的原料組成 玉米粉1. 8%-2%,豆餅粉2%-2. 5%，淀粉0. 8%-1. 2%，余量為水； 原始菌種選用菌株細黃鏈霉菌micrcflav )，其保藏編號為 CGMCC4. 891 ； A2、固體發酵A2-1曲盤培養將步驟Al中制備的液體種子接種到滅菌后的曲盤培養基進行培養，接種量為液體種子與滅菌后的曲盤培養基的質量比等于5%-8%，培養條件為溫度-30 濕度50%-70%、培養周期5-6天，待基質全部出現粉色孢子，香味濃郁時出料； 曲盤培養的培養基由如下質量百分比的原料組成豆餅粉4%-5%，石灰1. 5%-2%，甘薯粉12%-15%，鋸末15%_20%，細土 33%-；35%，余量為水； A2-2后熟出料時翻動并打碎料塊，在40°C _45°C條件下，干燥至含水質量百分含量為 10%—15%，粉碎制成細黃鏈霉菌抗生菌劑；B、微量元素添加劑的配制按照NY14^-2007標準《微量元素水溶肥料》的要求配制微量元素添加劑，其中硼、鋅、 鉬、錳元素含量之和不低于微量元素添加劑總質量的10% ；C、草莓專用復合抗重茬劑的復配按照細黃鏈霉菌抗生菌劑微生物菌肥生物鉀磷復合肥微量元素添加劑的質量比 =30-34 :65-69. 2 :0. 8-1的比例，將上述物料混配均勻制成草莓專用復合抗重茬劑。
2.根據權利要求1所述的草莓專用復合抗重茬劑的制備方法，其特征在于所述的步驟 Al中液體種子培養基的滅菌條件是溫度為121°C，時間為25-35分鐘。
3.根據權利要求1所述的草莓專用復合抗重茬劑的制備方法，其特征在于所述的步驟 A2-1中曲盤培養基的滅菌條件是溫度為121°C，時間為50-60分鐘。
4.根據權利要求1所述的草莓專用復合抗重茬劑的制備方法，其特征在于所述的步驟 A2-1的曲盤培養基中鋸末細度為10目-20目，細土的顆粒度為50目-70目，其余固體物料的顆粒度為60目-80目。
5.根據權利要求1所述的草莓專用復合抗重茬劑的制備方法，其特征在于所述的步驟 A2-1中曲盤培養出料前取樣并用平板計數法測定孢子含量，孢子含量不低于80億個/克。
6.根據權利要求1所述的草莓專用復合抗重茬劑的制備方法，其特征在于所述的步驟 B的微量元素添加劑中硼元素選自硼砂或硼酸中的一種，鋅元素選自硫酸鋅或氯化鋅中的一種，鉬元素選自鉬酸銨，錳元素選自硫酸錳。
7.根據權利要求6所述的草莓專用復合抗重茬劑的制備方法，其特征在于所述的步驟 B的微量元素添加劑按照質量比為硼砂或硼酸硫酸鋅或氯化鋅鉬酸銨硫酸錳=45-55 25-35 15-25 10-20 的比例配制。
8.根據權利要求1所述的草莓專用復合抗重茬劑的制備方法，其特征在于所述的步驟 C中微生物菌肥生物鉀磷復合肥選用執行GB2(^87-2006標準，微生物有效菌含量2億個/ 克以上的生物鉀磷或磷鉀微生物復合肥。
9.根據權利要求1或8所述的草莓專用復合抗重茬劑的制備方法，其特征在于所述的步驟C中微生物菌肥生物鉀磷復合肥選用河北省微生物研究所生產的“冀微”牌生物鉀磷肥或復合菌劑、湖南豫園生物科技有限公司生產的“豫園”牌通用型菌種粉、北京世紀阿姆斯生物技術有限公司生產的“阿姆斯”牌生物磷鉀肥中的一種。
全文摘要
本發明屬于微生物復配制劑的制備，特別是指一種草莓專用復合抗重茬劑的制備方法。包括細黃鏈霉菌抗生菌劑的制備，微量元素添加劑的配制，將微生物菌肥生物鉀磷復合肥與細黃鏈霉菌抗生菌劑和微量元素添加劑按比例復配制成草莓專用復合抗重茬劑。本發明解決了現有技術存在的采用化學熏蒸法解決草莓重茬病所帶來的成本高、毒性大等問題，具有改善了土壤的微生態環境，為草莓生長提供了磷鉀營養元素。在草莓種植中使用本發明生產的專用抗重茬劑可以有效地實現增產，并可提高果品的可溶性固形物、含糖量、糖酸比等品質。
文檔編號C05G3/00GK102424635SQ201110276710
公開日2012年4月25日 申請日期2011年9月19日 優先權日2011年9月19日
發明者古述江, 唐兆宏, 李軍, 李賓, 秦艷梅, 章淑艷, 趙從波, 陳文杰, 馬清河, 魏亞新 申請人:河北省微生物研究所