專利名稱：一種梔子花組織培育及其無公害種植方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及桅子花組培方法，屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體的說是一種桅子花組織培育及其無公害種植方法。
背景技術(shù)：
桅子花又名桅子，為龍膽目、茜草科、桅子屬的常綠灌木，喜歡溫暖濕潤和陽光充足的環(huán)境，較耐寒，耐半陰，怕積水，要求疏松、肥沃和酸性的沙壤土，原產(chǎn)于中國，其花枝葉繁茂，葉色四季常綠，花芳香素雅，除觀賞外，其花、果實、葉和根可入藥，有瀉火除煩，清熱利尿，涼血解毒之功效，作為園林觀賞植物和藥用植物在世界各地被廣泛應(yīng)用。目前公知的就桅子花栽培方法是采用扦插法、壓條法、分株和播種法進行繁殖，在歐美及日本等地區(qū)對桅子屬植物的分類、栽培及育種等方面有較為系統(tǒng)深入的研究，而我國對桅子屬種質(zhì)資源的利用和開發(fā)力度尚顯不足。在國內(nèi)各類文獻資料中只有少量的關(guān)于玉簪屬種質(zhì)資源及園林應(yīng)用、觀賞用桅子品種的組織培養(yǎng)等方面的報到，而關(guān)于桅子花的組織培養(yǎng)及種植的全套種植方法則未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)在技術(shù)的上述不足，本發(fā)明的目的在于提供一種桅子花組織培育及其無公害種植方法，操作簡單，繁殖率高，可大量生產(chǎn)桅子花試管苗。本發(fā)明所述的一種桅子花組織培育及其無公害種植方法，其特征在于將桅子花外植體消毒清洗，經(jīng)過愈傷組織誘導與分化，不定芽增殖，不定根誘導，煉苗，無公害種植即達到本發(fā)明的實驗?zāi)康?。為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，提供了如下具體技術(shù)方案a.外植體的選擇和消毒選用當年新發(fā)的葉片，剪下葉片經(jīng)水洗，在超凈工作臺上用70%的乙醇處理10s，再用0. 升汞消毒，浸泡并振蕩6 8min，無菌水清洗4 6 次，用濾水紙吸干水分備用；b.培養(yǎng)將消毒后的桅子花葉片剪成小塊，形成愈傷組織接種在MS培養(yǎng)基上培養(yǎng) 30天，培養(yǎng)溫度為20 25°C，光照強度2000LUX，每天光照14小時，進行愈傷組織誘導與分化；分化形成叢芽，培養(yǎng)的不定芽單個切開轉(zhuǎn)接在培養(yǎng)基上增殖培養(yǎng)，形成增殖體的幼苗轉(zhuǎn)接到1/2MS+IBA 0. 2mg/L的培養(yǎng)基中，25 30天即有愈傷組織分化形成的芽叢；c.生根培養(yǎng)將大而健壯的芽轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基MS+NAA0 0. 05mg/L 15 21天生根；d.煉苗是將試菅苗從組培室取出后置于溫棚中，放置5 7天，取出幼苗洗凈培養(yǎng)基后移植在裝有腐質(zhì)土和紅土 1 1并加少許腐質(zhì)葉為基質(zhì)的營養(yǎng)袋內(nèi)，澆水，在 1000 2000LX中光照8 12小時，濕度大于70%條件下練苗1個月，當葉達6 10片， 高達6 8cm時移栽種植；e.無公害種植是在天然條件下進行種植，選擇海拔800 2500m，林下，溝邊，瀑布兩旁或有遮陰條件的荒土；滿足日照年平均6小時/日、年平均最高溫度不高于18°C、月平均最高溫度在11 23°C、最低可達0°C的條件；滿足地下5cm 土溫年平均最高溫度不高于 16°C、月平均最高溫度在9 20°C、最低可達9°C以下的條件；建立隔離區(qū)，防牛馬進入而踏壞。所述愈傷組織誘導接種在MS培養(yǎng)基加含6-BA0. 25 0. 5mg/L, ΝΑΑ0. 2 0. 3mg/ L培養(yǎng)基上，光照10 16小時，濕度大于70%條件下直接誘導產(chǎn)生叢芽，25 30天開始萌動；再經(jīng)8 14天有叢芽出現(xiàn)；7 15天叢芽長葉。所述不定芽增殖接種在1/2MS+IBA 0. 2mg/L的培養(yǎng)基中，25 30天便可形成幼苗；增殖培養(yǎng)產(chǎn)生的新叢芽，葉變綠，2 3cm時，進一步轉(zhuǎn)接進行增殖培養(yǎng)或繼代培養(yǎng)。所述生根培養(yǎng)是接至生根培養(yǎng)基MS+NAA 0 0. 05mg/L 15 21天生根，練苗后移栽。本發(fā)明所述的一種桅子花組織培育及其無公害種植方法，有益效果在于可獲得大批組培苗滿足種植需要，并采用天然林區(qū)種植克服農(nóng)藥及重金屬污染，成活率達95.5%， 單株重量高于同年野生和無繁種植藥材2倍，并有效成分含量高于同年野生藥材；并滿足制藥企業(yè)對原藥材的需求，既可成批培育又可全面積種植組培苗，并且提早二年獲得無公害藥材，具有實用價值。
具體實施例方式通過本發(fā)明的實施例，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再做進一步的詳細說明實施例1:1.外植體材料的采取和處理選擇桅子花6月生長茂盛無病的母株新發(fā)幼嫩葉片葉為外殖體材料，采集野生或家種桅子花全株移種在花盒中，用清水洗葉，待新葉長出，從母株上剪下活葉片用自來水沖洗15分鐘，除去葉表面的塵土和絨毛，將葉片放入70%的乙醇中翻轉(zhuǎn)20秒鐘，除去葉表面的蠟質(zhì)物后用清水沖洗葉面除去乙醇，放入0. 升汞液中浸泡15分鐘消毒，無菌水洗凈后剪成Icm2小方塊，葉背面平放于培養(yǎng)基中，每瓶放4塊外植體，蓋緊瓶蓋，用保鮮袋封好瓶口，在無菌操作臺上完成接種；2.愈傷組織誘導與分化，不定芽增殖和不定根誘導①愈傷組織誘導與分化在無菌條件下，從消毒后葉片上剪下lcm2小葉塊，接種在MS培養(yǎng)基加含6-BA 0. 25mg/L+NAA 0. 2mg/L培養(yǎng)基上，在25°C，光照lOOOLx，光照12小時，濕度大于70%條件下直接誘導產(chǎn)生叢芽，30天開始萌動；再經(jīng)14天有叢芽出現(xiàn)，15天叢芽長葉；②不定芽增殖取出已長葉叢芽單個切開，在MS培養(yǎng)基加含6-BAO. 5mg/L+NAA 0. 3 0. 4mg/L培養(yǎng)基上，進行增殖培養(yǎng)；40 60天便可形成幼苗，取其高4 5cm的幼苗進行生根培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)產(chǎn)生的新叢芽，葉變綠，2 3cm，可一進轉(zhuǎn)接進行增殖培養(yǎng)或繼代培養(yǎng)；③不定根誘導取出增殖培養(yǎng)長出高4 5cm的幼苗，單個切開，轉(zhuǎn)接到 1/2MS+IBA 0. ang/L培養(yǎng)中，轉(zhuǎn)接后15 21天，開始生根，40 60天根達3條以上，葉6 10片，高6 8cm的試菅苗可取出練苗；
3.煉苗將試菅苗從組培室取出后置于溫棚中，放置5天，取出幼苗用清水洗凈培養(yǎng)基移植在營養(yǎng)袋中，營養(yǎng)袋內(nèi)裝有腐質(zhì)土和紅土 1 1混均，加少許腐質(zhì)葉為基質(zhì)，繞清水，保濕控制光照2000LX，光照12小時，濕度大于70%條件下，練苗1月成活達92. 5%，葉10片，高 6cm移栽在大田中；4.天然條件下種植選擇海拔800 2500m，林下，溝邊，瀑布兩旁或有遮陰條件的成遍土地，滿足日照要求0. 8小時/日，年平均6小時/日，株行距依環(huán)境而定，可稀，可密；氣候條件氣溫年平均最高溫度不高于18°C，月平均最高溫度在11 23°C，最低達0°C。地下5cm 土溫最高溫度年平均不高于16°c，月平均最高溫度在9 20°C，最低達9°C以下。濕度最高達90 %，最低不低于70 %，月平均濕度在70 90 %之間，天然樹遮陰。天然條件下種植，建立隔離區(qū)，防牛馬進入而踏壞。
權(quán)利要求
1.一種桅子花組織培育及其無公害種植方法，其特征在于具體技術(shù)方案為a.外植體的選擇和消毒選用當年新發(fā)的葉片，剪下葉片經(jīng)水洗，在超凈工作臺上用 70%的乙醇處理10s，再用0. 1 %升汞消毒，浸泡并振蕩6 8min，無菌水清洗4 6次，用濾水紙吸干水分備用；b.培養(yǎng)將消毒后的桅子花葉片剪成小塊，形成愈傷組織接種在MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)30 天，培養(yǎng)溫度為20 25°C，光照強度2000LUX，每天光照14小時，進行愈傷組織誘導與分化；分化形成叢芽，培養(yǎng)的不定芽單個切開轉(zhuǎn)接在培養(yǎng)基上增殖培養(yǎng)，形成增殖體的幼苗轉(zhuǎn)接到V2MS+IBA 0. 2mg/L的培養(yǎng)基中，25 30天即有愈傷組織分化形成的芽叢；c.生根培養(yǎng)將大而健壯的芽轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基MS+NAA0 0.05mg/L15 21天生根；d.煉苗是將試菅苗從組培室取出后置于溫棚中，放置5 7天，取出幼苗洗凈培養(yǎng)基后移植在裝有腐質(zhì)土和紅土 1 1并加少許腐質(zhì)葉為基質(zhì)的營養(yǎng)袋內(nèi)，澆水，在1000 2000Lx中光照8 12小時，濕度大于70%條件下練苗1個月，當葉達6 10片，高達6 8cm時移栽種植；e.無公害種植是在天然條件下進行種植，選擇海拔800 2500m，林下，溝邊，瀑布兩旁或有遮陰條件的荒土；滿足日照年平均6小時/日、年平均最高溫度不高于18°C、月平均最高溫度在11 23°C、最低可達0°C的條件；滿足地下5cm土溫年平均最高溫度不高于16°C、 月平均最高溫度在9 20°C、最低可達9°C以下的條件；建立隔離區(qū)，防牛馬進入而踏壞。
2.如權(quán)利要求1所述一種桅子花組織培育及其無公害種植方法，其特征在于愈傷組織誘導接種在MS培養(yǎng)基加含6-BA0. 25 0. 5mg/L+NAA 0. 2 0. 3mg/L培養(yǎng)基上，光照 10 16小時，濕度大于70%條件下直接誘導產(chǎn)生叢芽，25 30天開始萌動；再經(jīng)8 14 天有叢芽出現(xiàn) ’7 15天叢芽長葉。
3.如權(quán)利要求1所述一種桅子花組織培育及其無公害種植方法，其特征在于不定芽增殖接種在6-BAO. 5mg/L+NAA 0. 3 0. 4mg/L培養(yǎng)基中，25 30天便可形成幼苗；增殖培養(yǎng)產(chǎn)生的新叢芽，葉變綠，2 3cm時，進一步轉(zhuǎn)接進行增殖培養(yǎng)或繼代培養(yǎng)。
4.如權(quán)利要求1所述一種桅子花組織培育及其無公害種植方法，其特征在于生根培養(yǎng)是接至生根培養(yǎng)基1/2MS+IBA 0. 2mg/L 15 21天生根，練苗后移栽。
全文摘要
本發(fā)明涉及梔子花組培方法，屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體的說是一種梔子花組織培育及其無公害種植方法。其特征在于將梔子花外植體消毒清洗，經(jīng)過愈傷組織誘導與分化，不定芽增殖，不定根誘導，煉苗，無公害種植即達到本發(fā)明的實驗?zāi)康?。有益效果在于可獲得大批組培苗滿足種植需要，并采用天然林區(qū)種植克服農(nóng)藥及重金屬污染，成活率達95.5％，單株重量高于同年野生和無繁種植藥材2倍，并有效成分含量高于同年野生藥材；并滿足制藥企業(yè)對原藥材的需求，既可成批培育又可全面積種植組培苗，并且提早二年獲得無公害藥材，具有實用價值。
文檔編號A01G9/10GK102405838SQ20111028852
公開日2012年4月11日 申請日期2011年9月22日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月22日
發(fā)明者董永武 申請人:董永武