專(zhuān)利名稱(chēng)：一種鳳仙花的高效試管開(kāi)花培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，尤其是一種鳳仙花的高效試管開(kāi)花培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
試管開(kāi) 花是指用組織培養(yǎng)的方法，使植物的開(kāi)花過(guò)程在培養(yǎng)容器中完成。由于花的發(fā)育是一個(gè)復(fù)雜的生理現(xiàn)象，整個(gè)發(fā)育過(guò)程可分為四階段(1)成花誘導(dǎo)由營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)向生殖生長(zhǎng)的轉(zhuǎn)變；(2)誘導(dǎo)狀態(tài)到分生組織的轉(zhuǎn)換花序分生組織的形成；(3)花的發(fā)端 花器官的決定；(4)花器官的形態(tài)發(fā)生花器官的形成與成熟?；ǖ男纬墒歉叩戎参锼赜械囊环N生理現(xiàn)象。在多數(shù)情況中，植物必須達(dá)到某種成熟階段才能開(kāi)始花的形成，利用試管開(kāi)花可以大大縮短植株從幼苗到開(kāi)花的時(shí)間，而且試管內(nèi)開(kāi)花不受季節(jié)的限制，可以隨時(shí)誘導(dǎo)隨時(shí)開(kāi)花，對(duì)降低栽培設(shè)施的投入具有十分重要的作用。鳳仙花(Impatiens balsamina L)俗稱(chēng)急性子、指甲花，為鳳仙花科鳳仙花屬一年生庭院觀賞性草本植物，其品種紛繁、花姿秀麗、株形多樣，有單瓣、重瓣等多種花型。鳳仙花不僅美麗可人，而且還是抗污染的理想花卉，能對(duì)家庭常見(jiàn)的廢氣、煤氣等起到消除作用，并且對(duì)氟化氫非常敏感，常作為監(jiān)測(cè)氟化氫污染的指示植物，特別是由于鳳仙花生長(zhǎng)周期短、染色體較少(2η = 14)，因此也是研究植物生理遺傳功能的良好實(shí)驗(yàn)材料。開(kāi)花是植物發(fā)育過(guò)程中重要的階段，關(guān)于植物試管開(kāi)花國(guó)內(nèi)外都有報(bào)道。研究試管開(kāi)花不僅可以為研究植物的花芽分化提供一個(gè)良好的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，還可為了解植物成花轉(zhuǎn)變即營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)向生殖發(fā)育的轉(zhuǎn)變，提供良好的實(shí)驗(yàn)材料。試管花具有一定的觀賞價(jià)值，也可作為旅游商品進(jìn)行開(kāi)發(fā)。鳳仙花生育期比較短，花色較鮮艷，目前還沒(méi)有關(guān)于其試管開(kāi)花的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種鳳仙花的高效試管開(kāi)花培養(yǎng)方法，本發(fā)明獲得了鳳仙花試管開(kāi)花的最佳技術(shù)方案，確定了植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑與最佳的培育條件，使鳳仙花的試管開(kāi)花具備了工業(yè)實(shí)用性。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)目的的技術(shù)方案如下一種鳳仙花的高效試管開(kāi)花培養(yǎng)方法，培養(yǎng)基為以1/8-1/2MS為基本培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中添加7. Og/L瓊脂粉和30g/L的蔗糖，培養(yǎng)基PH5. 8 ；培養(yǎng)基加入6-BA濃度設(shè)置為 0. 5-1. 5mg/L、NAA 為 0. 1-0. 2mg/L ；再加入活性炭，濃度為 l_2g/L ；培養(yǎng)條件為在25°C的條件下，每天光照12_14h，光照強(qiáng)度1500_2000Ιχ進(jìn)行開(kāi)花培養(yǎng)，培養(yǎng)75-75d。而且，所述培養(yǎng)基為以1/2MS為基本培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中添加7. Og/L瓊脂粉和 30g/L的蔗糖，培養(yǎng)基PH5. 8 ；培養(yǎng)基加入6-BA濃度設(shè)置為0. 5mg/L、NAA為0. 2mg/L ；再加入活性炭，濃度為2g/L;所述培養(yǎng)條件為在25°C的培養(yǎng)條件下，每天光照12_14h，光照強(qiáng)度1500_2000Ιχ 進(jìn)行開(kāi)花培養(yǎng)，培養(yǎng)75-75d。
而且，培養(yǎng)的其實(shí)組織為鳳仙花無(wú)菌苗。而且，所述鳳仙花無(wú)菌苗的培養(yǎng)方法為在無(wú)菌條件下用75%的酒精漂洗鳳仙花種子30s，經(jīng)0. 升汞水溶液浸泡lOmin，然后用無(wú)菌水浸洗5_6次，每次約2min，最后接種于 MS培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度為25 士 2°C，每天光照12-14h，光照強(qiáng)度1500-2000Ιχ，經(jīng)過(guò)25d 后，形成具3-4片真葉的無(wú)菌苗。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果如下1、本發(fā)明得出細(xì)胞分裂素對(duì)花芽的形成具有重要作用，NAA配合使用對(duì)鳳仙花開(kāi)花具有良好的促進(jìn)作用，本發(fā)明詳細(xì)研究了 6-BA和NAA對(duì)開(kāi)花的重要作用，對(duì)其他細(xì)胞分裂素或者植物激素的作用研究具有較好的指導(dǎo)作用。2、本發(fā)明在培養(yǎng)中首次得出在鹽離子即無(wú)機(jī)鹽濃度減半，開(kāi)花率有所提高，試管花發(fā)育好，對(duì)試管開(kāi)花的進(jìn)一步研究提供理論和實(shí)踐依據(jù)。3、本發(fā)明提供的最優(yōu)培養(yǎng)條件為切取鳳仙花無(wú)菌苗接于以1/2MS為基本培養(yǎng)基，添加7. Og/L瓊脂粉和30g/L的蔗糖，培養(yǎng)基PH5. 8，另外加入兩種植物激素，6-BA濃度設(shè)置為0. 5mg/L，NAA為0. 2mg/L，再附加活性炭，使用濃度為2g/L，在25°C的培養(yǎng)條件下，每天光照12-14h，光照強(qiáng)度1500-2000IX進(jìn)行開(kāi)花培養(yǎng)，70d左右時(shí)間獲得100%的開(kāi)花率。


圖1為本發(fā)明在培養(yǎng)片中生長(zhǎng)中的鳳仙花；圖2為本發(fā)明在三角瓶中開(kāi)花的鳳仙花。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容做進(jìn)一步說(shuō)明；下述實(shí)施例是說(shuō)明性的，不是限定性的，不能以下述實(shí)施例來(lái)限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。一種鳳仙花的高效試管開(kāi)花培養(yǎng)方法，具體步驟和材料如下1. 1 材料鳳仙花Celosia cristata種子購(gòu)自曹莊花卉市場(chǎng)。1.2種子的處理在無(wú)菌條件下用75%的酒精漂洗鳳仙花種子30s，經(jīng)0. 升汞水溶液浸泡 IOmin,然后用無(wú)菌水浸洗5-6次，每次約2min，最后接種于MS培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度為(25 士 2) V，每天光照12-14h，光照強(qiáng)度1500-2000IX。經(jīng)過(guò)25d后，形成具3_4片真葉的無(wú)菌苗。1. 3不同細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的種類(lèi)及濃度處理切取切取帶有頂芽的無(wú)菌苗(帶2-3枚葉片)接于以MS為基本培養(yǎng)基，添加7. Og/ L瓊脂粉和30g/L的蔗糖，培養(yǎng)基PH5. 8，6-BA濃度設(shè)置為0、0· 5、1. 0、1. 5mg/L, NAA為0. 1 和0. 2mg/L,培養(yǎng)溫度為(25 士 2) °C，每天光照12_14h，光照強(qiáng)度1500_2000Ix，70d左右統(tǒng)計(jì)開(kāi)花率。1.4不同溫度的處理切取無(wú)菌苗接于以MS為基本培養(yǎng)基，加入相同的0. 5mg/L 6-BA+O. 2NAAmg/L激素，并添加7. Og/L瓊脂粉和30g/L的蔗糖，培養(yǎng)基PH5. 8，不同培養(yǎng)溫度的設(shè)置為20°C、 23°C、25°C、28°C，每天光照12_14h，光照強(qiáng)度1500-2000Ix，70d左右統(tǒng)計(jì)開(kāi)花率。
1· 5不同基本培養(yǎng)基處理分別以MS、1/2MS、1/4MS、1/8MS為基本培養(yǎng)基，添加相同的激素6-BAO. 5mg/ L+NAAO. 2mg/L添加7. Og/L瓊脂粉和30g/L的蔗糖，培養(yǎng)基PH5. 8，每處理50株，培養(yǎng)溫度為25°C，每天光照12-14h，光照強(qiáng)度1500-2000IX。需要說(shuō)明的數(shù)1/2MS、1/4MS和1/8MS是只有無(wú)機(jī)鹽減半，即大量元素、微量元素和鐵鹽的正常用量相應(yīng)減少到1/2、1/4和1/8。1.6活性炭的處理
切取無(wú)菌苗接于以V2MS為基本培養(yǎng)基，加入相同的0. 5mg/L 6-BA+O. 2NAAmg/L 激素，并添加7. Og/L瓊脂粉和30g/L的蔗糖，培養(yǎng)基PH5. 8，活性炭濃度設(shè)置為0、l、2、4g/ L，培養(yǎng)溫度為25°C，每天光照12-14h，光照強(qiáng)度1500-2000IX，70d左右統(tǒng)計(jì)開(kāi)花率。2結(jié)果與分析2. 1不同細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素處理對(duì)開(kāi)花的影響表1植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)鳳仙花試管開(kāi)花的作用
—激素配方(mg/L) 接種數(shù)開(kāi)花數(shù)開(kāi)花率(％) _ 06-BA+0. INAA__50__7__14_
0.56-BA+O. INAA — 503570
1.06-BA+0. INAA — 502142 1. 56-BA+O. INAA — 50 4 8 06-BA+0.2NAA — 50 6 12
0.56-BA+O. 2NAA — 504182
1.06-BA+0. 2NAA — 503264 1. 56-BA+O. 2NAA — 50 15 30 06-BA+0NAA 50 4 8試驗(yàn)結(jié)果(表1)，在不添加激素的MS培養(yǎng)基上，鳳仙花試管苗能開(kāi)花，但開(kāi)花率極低，葉片大，花朵較小，色淡。鳳仙花無(wú)菌苗在含有不同濃度NAA的試管MS培養(yǎng)基上均能誘導(dǎo)花芽出現(xiàn)，但在單獨(dú)使用時(shí)雖然能正常開(kāi)花，但開(kāi)花率不高。6-BA與NAA配合使用時(shí)，不但有利于花芽的形成，而且開(kāi)花率也高，表明生長(zhǎng)素 NAA能促進(jìn)試管苗的開(kāi)花。結(jié)果表明，在0. 5mg/L 6-BA+O. 2NAAmg/L組合培養(yǎng)基上誘導(dǎo)試管開(kāi)花率最高，達(dá)到82%。但在0. 5mg/L 6-BA+O. lmg/LNAA組合培養(yǎng)基上誘導(dǎo)試管開(kāi)花率雖然較低，但在較短時(shí)間內(nèi)即可實(shí)現(xiàn)正常開(kāi)花，NAA雖然能促進(jìn)試管苗的開(kāi)花，但會(huì)延長(zhǎng)開(kāi)花時(shí)間，分析原因可能由于較高濃度的NAA會(huì)誘導(dǎo)植株過(guò)早生根，從而消耗植株養(yǎng)分降低開(kāi)花的速度，導(dǎo)致開(kāi)花延后，因此在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)選定適合的NAA濃度。因?yàn)樵诒驹囼?yàn)中，0. 5mg/L 6-BA+O. 2NAAmg/L組合培養(yǎng)基雖然也產(chǎn)生過(guò)早生根現(xiàn)象，但在50天左右即可達(dá)到較高的開(kāi)花率，因此確定為最適合誘導(dǎo)開(kāi)花的濃度。2. 2不同培養(yǎng)溫度對(duì)鳳仙花試管開(kāi)花的影響表2不同培養(yǎng)溫度對(duì)鳳仙花試管開(kāi)花率的影響
_不同培養(yǎng)溫度°C 接種數(shù)開(kāi)花數(shù)開(kāi)花率(％)
20__50__32__64_
23— 50 — 3876
25一 50 一 4488
28I 50I 34I 68
從表2可以看出，適合的溫度能夠提高鳳仙花試管開(kāi)花率，隨著培養(yǎng)溫度的提高， 開(kāi)花率也隨著增大，當(dāng)達(dá)到25°C時(shí)開(kāi)花率最高，以后開(kāi)始下降。從開(kāi)花質(zhì)量來(lái)看，在溫度在 20-25°C時(shí)，植株生長(zhǎng)健壯，花色鮮艷，說(shuō)明較低溫度不但促進(jìn)開(kāi)花，對(duì)植株的生長(zhǎng)也十分有禾IJ，如果溫度過(guò)高，就會(huì)出現(xiàn)植株生長(zhǎng)加快，出現(xiàn)徒長(zhǎng)現(xiàn)象。分析原因可能是由于過(guò)高的溫度導(dǎo)致植物營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)加強(qiáng)，從而抑制了生殖生長(zhǎng)，使開(kāi)花率降低。2. 3不 同基本培養(yǎng)基(無(wú)機(jī)鹽濃度)對(duì)鳳仙花開(kāi)花的影響表3不同基本培養(yǎng)基(無(wú)機(jī)鹽濃度)對(duì)鳳仙花開(kāi)花率的影響
權(quán)利要求
1.一種鳳仙花的高效試管開(kāi)花培養(yǎng)方法，其特征在于培養(yǎng)基為以1/8-1/2MS為基本培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中添加7. Og/L瓊脂粉和30g/L的蔗糖， 培養(yǎng)基PH5. 8 ；培養(yǎng)基加入6-BA濃度設(shè)置為0. 5-1. 5mg/L、NAA為0. 1-0. 2mg/L ；再加入活性炭，濃度為l_2g/L;培養(yǎng)條件為在25°C的條件下，每天光照12-14h，光照強(qiáng)度1500-2000IX進(jìn)行開(kāi)花培養(yǎng)，培養(yǎng)75-75d。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述鳳仙花的高效試管開(kāi)花培養(yǎng)方法，其特征在于所述培養(yǎng)基為以1/2MS為基本培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中添加7. Og/L瓊脂粉和30g/L的蔗糖， 培養(yǎng)基PH5. 8 ；培養(yǎng)基加入6-BA濃度設(shè)置為0. 5mg/L、NAA為0. 2mg/L ；再加入活性炭，濃度為 2g/L ；所述培養(yǎng)條件為在25°C的培養(yǎng)條件下，每天光照12-14h，光照強(qiáng)度1500-2000IX進(jìn)行開(kāi)花培養(yǎng)，培養(yǎng)75-75d。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述鳳仙花的高效試管開(kāi)花培養(yǎng)方法，其特征在于培養(yǎng)的其實(shí)組織為鳳仙花無(wú)菌苗。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述鳳仙花的高效試管開(kāi)花培養(yǎng)方法，其特征在于所述鳳仙花無(wú)菌苗的培養(yǎng)方法為在無(wú)菌條件下用75%的酒精漂洗鳳仙花種子30s，經(jīng)0. 升汞水溶液浸泡lOmin，然后用無(wú)菌水浸洗5-6次，每次約2min，最后接種于MS培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度為 25 士 2°C，每天光照12-14h，光照強(qiáng)度1500-2000IX，經(jīng)過(guò)25d后，形成具3_4片真葉的無(wú)菌田ο
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種鳳仙花的高效試管開(kāi)花培養(yǎng)方法，培養(yǎng)基為以1/8-1/2MS為基本培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中添加7.0g/L瓊脂粉和30g/L的蔗糖，培養(yǎng)基PH5.8；培養(yǎng)基加入6-BA濃度設(shè)置為0.5-1.5mg/L、NAA為0.1-0.2mg/L；再加入活性炭，濃度為1-2g/L；培養(yǎng)條件為在25℃的條件下，每天光照12-14h，光照強(qiáng)度1500-2000Ix進(jìn)行開(kāi)花培養(yǎng)，培養(yǎng)75-75d。本發(fā)明得出細(xì)胞分裂素對(duì)花芽的形成具有重要作用，NAA配合使用對(duì)鳳仙花開(kāi)花具有良好的促進(jìn)作用，本發(fā)明詳細(xì)研究了6-BA和NAA對(duì)開(kāi)花的重要作用，對(duì)其他細(xì)胞分裂素或者植物激素的作用研究具有較好的指導(dǎo)作用。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102440190SQ201110295440
公開(kāi)日2012年5月9日 申請(qǐng)日期2011年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月28日
發(fā)明者劉艷軍, 李雙躍, 李建科, 楊靜慧, 武春霞, 黃俊軒 申請(qǐng)人:天津農(nóng)學(xué)院