專利名稱：一種枇杷茶快速繁殖的方法
技術領域：
本發明屬于植物快速繁殖技術領域，具體涉及一種枇杷茶快速繁殖的方法。
背景技術：
批把茶(Cameliasinensis cv. Chongqing pipacha)屬于山茶科(Theaceae)山茶屬(Camelia)常綠喬木，主要分布在四川省崇州市、大邑縣等地區。枇杷茶產量高、品質好，是四川省茶樹良種委員會認定的省級傳統良種之一，且被評為四川省地理標志農產品。 除此之外，枇杷茶花冠大，花蕊金黃色，具有濃烈的芳香氣，且其花期較長，幾乎在整個冬季都開放，具有很好的觀賞價值。目前，枇杷茶的繁殖手段還主要依靠傳統的種子繁殖和扦插繁殖。這兩種方法都存在如下缺陷(I)繁殖的周期長，扦插繁殖一般需要12-14個月，種子繁殖的周期更長；
(2)繁殖系數比較低，尤其是扦插繁殖；(3)由種子自然育種不易于優良性狀的保持；(4)容易受季節和地域限制，因栽種枇杷茶需要充足的水分和適宜的pH?，F有技術中雖然有少量的有關植物快速繁殖方法的報道，但I)目前還沒有關于枇杷茶離體快繁的信息；2)鑒于各植物品種的基因特性，公開的快繁方法無法直接用于枇杷茶的快繁中。

發明內容
本發明的目的是針對現有技術存在的缺陷，提供一種枇杷茶快速繁殖的方法。本發明提供的一種枇杷茶快速繁殖的方法，其特征在于該方法的操作步驟和條件如下I)選取室內枇杷茶扦插苗帶芽莖段l-2cm作為組織培養的外植體；2)將外植體先用肥皂水清洗15_20min，然后用質量百分濃度為O. 5%的多菌靈浸泡15-25min，再用流水沖洗l_3h，吸干外植體表面水分，去掉芽外層及莖段上的小葉片；3)將外植體先在無菌條件下用體積百分濃度為70-75%的酒精消毒30_40s，然后用質量百分濃度為O. 08-0. 12%的升汞消毒9-llmin，無菌水沖洗4_5遍,再用質量百分濃度為O. 04-0. 06%的升萊消毒3-4min,無菌水沖洗4_5遍,將消毒后的外植體接種在MS培養基中，于溫度23-25°C，光照強度1000-15001X，每天光照12h的條件下，培養15天，篩選出存活的無菌材料；4)將獲得的無菌材料轉接在啟動培養基中，于溫度23-25 °C，光照強度 1000-15001x，每天光照12h的條件下，培養15-30天，誘導成芽；5)將發芽的無菌材料轉接到增殖培養基中，于溫度23-25 °C，光照強度 1000-15001x,每天光照12h的條件下，培養20-60天，即得平均增殖系數為3. 31-4. 86的叢生芽。所獲得的叢生芽既可分離進行后續的生根培育、栽種，也可將該叢生芽再反復進行第4)、5)步驟的培育，以獲得更多的叢生芽，然后再進行后續的生根培育、栽種。
以上方法中所述的啟動培養基的組成為在MS培養基中添加6-芐基腺嘌呤2 3mg/L、n引哚乙酸 O. 05 O. 5mg/L、赤霉素 O. 5 I. Omg/L。以上方法中所述的增殖培養基的組成為在MS培養基的基礎上添加噻苯隆 l-2mg/L,赤霉素 O. 5-1. Omg/L。在啟動培養基和增殖培養基中添加的植物激素單位mg/L是指每升培養基中添加激素為多少mg。本發明具有如下優點I.由于本發明選取的枇杷茶扦插苗帶芽莖段是在室內培育的，本身帶菌較之室外培育的少，加之選取滅菌方式和條件適當，因而可獲得滅菌存活率高達88. 5%的無菌材料。2.由于本發明同時采用了既有利于芽啟動的培養基，又有利于芽增殖的增殖培養基，因而不僅使出芽時間短，而且增殖速度快，可在三個月時間內獲得平均增殖系數高達 4. 86的叢生芽，其增殖速度大大高于枇杷茶的現有繁殖手段。3.由于本發明增殖產生的芽和枝干都是由外植體原本存在的營養分生組織發育而來，因而可保持原無性系的基因型和表現型的優良性狀。4.由于本發明是在室內操作完成，因而不受季節和地域限制。
具體實施例方式下面給出實施例以對本發明作更詳細的說明，有必要指出的是以下實施例不能理解為對本發明保護范圍的限制，該領域的技術熟練人員根據上述本發明內容對本發明作出的一些非本質的改進和調整仍屬本發明的保護范圍。值得說明的是，I)以下實施例和比較例中酒精的濃度為體積百分濃度；多菌靈和升汞的濃度為質量百分濃度。2)以下實施例和比較例中的MS為基本培養基；BA為6-芐基腺嘌呤'Ikk為吲哚乙酸；GA3為赤霉素；TDZ為噻苯隆。實施例I取培養室內枇杷茶扦插苗上新萌發的帶芽莖段l-2cm，先放入肥皂水中振搖清洗 15min，然后放入O. 5%多菌靈浸泡15min，流水沖洗2h，用濾紙吸干外植體表面水分，去掉芽外層及莖段上的小葉片；將外植體先在無菌操作臺上用濃度70%的酒精消毒30s，然后用濃度O. 08%的升汞消毒9min，無菌水沖洗4遍，將莖段基部切去，再用濃度O. 04%的升汞消毒3. 5min,無菌水沖洗4遍；將消毒后的外植體接種在加有MS培養基的IOOml三角瓶里，每瓶接種I個外植體，每次接種15瓶，重復2次，然后放入組培室內，于溫度24°C，光照強度15001x，每天光照12h的條件下進行培養以篩選無菌材料，第7和15天后統計結果，污染率分別為15. 3 %、20. 3 %，褐化率分別為3. 5 %、5. 7 %，存活率分別為84. 2 %、74. O %。實施例2取培養室內枇杷茶扦插苗上新萌發的帶芽莖段l-2cm，先放入肥皂水中振搖清洗 18min，然后放入O. 5%多菌靈浸泡25min，流水沖洗3h，用濾紙吸干外植體表面水分，去掉芽外層及莖段上的小葉片；將外植體先在無菌操作臺上用濃度75%的酒精消毒40s，然后用濃度O. 12%的升汞消毒llmin，無菌水沖洗4遍，將莖段基部切去，再用濃度O. 06%的升汞消毒4min，無菌水沖洗5遍；將消毒后的外植體接種在加有MS培養基的IOOml三角瓶里， 每瓶接種I個外植體，每次接種15瓶，重復2次，然后放入組培室內，于溫度23°C，光照強度12001x,每天光照12h的條件下進行培養以篩選無菌材料，第7和15天后統計結果，污染率分別為5. O %、7. 7 %，褐化率分別為7. 5 %、13. O %，存活率分別為87. 5 %、79. 3 %。實施例3取培養室內枇杷茶扦插苗上新萌發的帶芽莖段l-2cm，先放入肥皂水中振搖清洗 20min，然后放入O. 5%多菌靈浸泡20min，流水沖洗lh，用濾紙吸干外植體表面水分，去掉芽外層及莖段上的小葉片；將外植體先在無菌操作臺上用濃度72%的酒精消毒35s，然后用濃度O. 10%的升汞消毒lOmin，無菌水沖洗5遍，將莖段基部切去，再用濃度O. 05%的升汞消毒3min，無菌水沖洗5遍；將消毒后的外植體接種在加有MS培養基的IOOml三角瓶里， 每瓶接種I個外植體，每次接種15瓶，重復2次，然后放入組培室內，于溫度25°C，光照強度 IOOOlx,每天光照12h的條件下進行培養以篩選無菌材料，第7和15天后統計結果，污染率分別為2. 5%、3. 3%，褐化率分別為4. 5%、7. 7%，存活率分別為93. 0%、88. 5%。實施例4將以上實施例1-3所獲得的無菌材料轉接在加有組成為MS+2. 5mg/lBA+0. 05mg/ 1IAA+1. 0mg/lGA3的啟動培養基的IOOml三角瓶里，每瓶轉接I個無菌材料，轉接30瓶，然后放入組培室內，于溫度24°C，光照強度15001x，每天光照12h的條件下培養15天，誘導成芽；將發芽的無菌材料轉接到增殖培養基中，增殖培養基的組成為MS+1. Omg/ITDZ+O. 5mg/l GA3,然后放入組培室，于溫度23°C，光照強度ΙΟΟΟΙχ，每天光照12h的條件下培養30天，即得叢生芽的平均增殖系數為3. 31。實施例5將以上實施例1-3所獲得的無菌材料轉接在加有組成為MS+3. 0mg/lBA+0. Img/ 1IAA+0. 8mg/lGA3的啟動培養基的IOOml三角瓶里，每瓶轉接I個無菌材料，轉接30瓶，然后放入組培室內，于溫度23°C，光照強度12001X，每天光照12h的條件下培養30天，誘導成芽；將發芽的無菌材料轉接到增殖培養基中，增殖培養基的組成為MS+1. 0mg/lTDZ+0. 5mg/l GA3,然后放入組培室，于溫度24°C，光照強度12001X，每天光照12h的條件下培養40天，即得叢生芽的平均增殖系數為4. 22。實施例6將以上實施例1-3所獲得的無菌材料轉接在加有組成為MS+2. 0mg/lBA+0. 5mg/ 1IAA+0. 5mg/lGA3的啟動培養基的IOOml三角瓶里，每瓶轉接I個無菌材料，轉接30瓶，然后放入組培室內，于溫度25°C，光照強度ΙΟΟΟΙχ，每天光照12h的條件下培養25天，誘導成芽；將發芽的無菌材料轉接到增殖培養基中，增殖培養基的組成為MS+2. 0mg/lTDZ+l. 0mg/l GA3,然后放入組培室，于溫度25°C，光照強度15001x，每天光照12h的條件下培養60天，即得叢生芽的平均增殖系數為4. 86。
權利要求
1.一種枇杷茶快速繁殖的方法，其特征在于該方法的操作步驟和條件如下1)選取室內枇杷茶扦插苗帶芽莖段I 2cm作為組織培養的外植體；2)將外植體先用肥皂水清洗15 20min，然后用質量百分濃度為0.5%的多菌靈浸泡 15 25min，再用流水沖洗I 3h，吸干外植體表面水分，去掉芽外層及莖段上的小葉片；3)將外植體先在無菌條件下用體積百分濃度為70-75%的酒精消毒30 40s，然后用質量百分濃度為0. 08 0. 12%的升萊消毒9 Ilmin,無菌水沖洗4 5遍,再用質量百分濃度為0. 04-0. 06%的升萊消毒3 4min,無菌水沖洗4 5遍,將消毒后的外植體接種在MS培養基中，于溫度23 25°C，光照強度1000 15001x，每天光照12h的條件下，培養 15天，從中篩選出存活的無菌材料；4)將獲得的無菌材料轉接在啟動培養基中，于溫度23 25°C，光照強度1000 15001X，每天光照12h的條件下，培養15-30天，誘導成芽；5)將發芽的無菌材料轉接到增殖培養基中，于溫度23 25°C，光照強度1000 15001x,每天光照12h的條件下，培養20 60天，即得平均增殖系數為3. 31 4. 86的叢生芽。
2.根據權利要求I所述的枇杷茶快速繁殖的方法，其特征在于該方法中所述的啟動培養基的組成為在MS培養基中添加6-芐基腺嘌呤2 3mg/L、吲哚乙酸0. 05 0. 5mg/L、 赤霉素0. 5 I. Omg/Lo
3.根據權利要求I或2所述的枇杷茶快速繁殖的方法，其特征在于該方法中所述的增殖培養基的組成為在MS培養基的基礎上添加噻苯隆I 2mg/L，赤霉素0. 5 I. Omg/L。
全文摘要
本發明公開的一種枇杷茶快速繁殖的方法的操作步驟和條件是將室內枇杷茶扦插苗帶芽莖段的外植體依次用肥皂水清洗、用多菌靈浸泡、用流水沖洗后，吸干表面水分，去掉芽外層及莖段上的小葉片；再在無菌條件下依次用酒精和升汞消毒，無菌水沖洗，然后接種在MS培養基中培養并篩選出存活的無菌材料；將無菌材料轉接在啟動培養基中培養并誘導成芽；將發芽的無菌材料轉接到增殖培養基中繼續培養，即可獲得平均增殖系數為3.31-4.86的叢生芽。本發明方法不僅可獲得滅菌存活率高達88.5％的無菌材料，而且出芽時間短，增殖速度快，可在三個月內獲得平均增殖系數高達4.86的叢生芽，并能夠保持原無性系的基因型和表現型的優良性狀。
文檔編號A01H4/00GK102577975SQ20121006651
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月14日 優先權日2012年3月14日
發明者唐琳, 李晉宇, 胡洪沙, 陳放 申請人:四川大學, 成都傲佳農業科技發展有限公司