專利名稱：一種雞油菌液體菌種的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及食用菌菌種制作技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種雞油菌液體菌種的制備方法。
背景技術(shù)：
雞油菌(CafliAareJJe1S cibarius Fr.)是世界著名的食用菌之一，子實(shí)體肉質(zhì)，喇叭形，杏黃色至蛋黃色，菌肉蛋黃色，香氣濃郁，具有杏仁味，質(zhì)嫩而細(xì)膩，鮮美，又名雞蛋黃、杏菌。菌蓋直徑3 9cm，最初扁平后下凹，邊緣波狀，常裂開內(nèi)卷。菌柄內(nèi)實(shí)，光滑，長2 6cm,直徑O. 5 I. 8cm。雞油菌含有豐富的胡蘿卜素、維生素C、蛋白質(zhì)、I丐、磷、鐵等營養(yǎng)成分，性味甘、寒，具有清目、利肺、益腸胃的功效。常食此菌可預(yù)防視力下降、眼炎、皮膚干燥等病。另外，據(jù)國外臨床驗(yàn)證，雞油菌還具有一定的抗癌活性，對(duì)癌細(xì)胞的增長和擴(kuò)散有一定的抑制作用。雞油菌通過菌根菌與林木形成共生關(guān)系，并可以促進(jìn)林木的生長與發(fā)育。目前，人們對(duì)其在大自然中的促生作用，如維持生態(tài)平衡、環(huán)境監(jiān)測等方面比較重視。雞油菌作為一種外生菌根真菌，既具有重要的經(jīng)濟(jì)作用，也具有重要的生態(tài)功能。雞油菌子實(shí)體帶有種類較多的真菌和數(shù)量龐大的細(xì)菌，由于受到菌種培養(yǎng)技術(shù)的制約，雞油菌引種馴化工作一直沒有得到突破性進(jìn)展，存在菌種污染率高、生長周期長、工藝復(fù)雜的問題，導(dǎo)致其開發(fā)利用僅限于野生資源，從而使得雞油菌資源開發(fā)利用基本上處于“自然生長、自由采集、自發(fā)貿(mào)易”的狀態(tài)，每到采收季節(jié)，采菌的人們掠奪式地采集雞油菌，嚴(yán)重?fù)p害了雞油菌賴以生存、生長的自然環(huán)境，雞油菌產(chǎn)量逐年減少，在某些區(qū)域甚至面臨瀕危滅絕的境地。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有雞油菌的開發(fā)利用基本靠野生資源、現(xiàn)有菌種培養(yǎng)的污染率高、生長周期長、工藝復(fù)雜等缺陷，提供一種雞油菌液體菌種的制備方法，工藝簡便、菌種純、污染少、周期短，該液體菌種可用于仿野生栽培雞油菌。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案
本發(fā)明雞油菌液體菌種的制備方法包括如下步驟
Cl)培養(yǎng)基制備將松針150 250g、土豆150 250g切成小塊，加IOOOml水煮沸20 40min，濾去松針和土豆殘?jiān)瑸V液中加入氯化鈣O. 05 O. 15g、氯化銨O. 45 O. 55g、硫酸鎂O. 25 O. 35g、磷酸二氫鉀O. 8 I. 2g、氯化鐵O. 008 O. 012g、葡萄糖O. 45
O.55g、維生素B1 O. 045 O. 055mg、蛋白胨4 6g、牛肉膏8 12g和尿素15 25g,定容至1000ml，在O. I O. 15,118 125°C下用高壓蒸氣滅菌25 35min，置于25 35°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)，無菌生長的培養(yǎng)基留存?zhèn)溆茫?br> (2)接種取雞油菌菌蓋與菌柄相接處的雞油菌組織接種入步驟(I)所制備的培養(yǎng)基 中；
(3)菌種培養(yǎng)接種后的培養(yǎng)基在26 30°C、100 120r/ min的條件下?lián)u床培養(yǎng)7 10d，即得雞油菌液體菌種。優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基制備為將松針200g、土豆200g切成小塊，加IOOOml水煮沸30min,濾去松針和土豆殘洛,濾液中加入氯化韓O. lg、氯化銨O. 5g、硫酸鎂O. 3g、磷酸二氫鉀lg、氯化鐵O. Olg、葡萄糖O. 5g、維生素B1 O. 05mg、蛋白胨5g、牛肉膏IOg和尿素20g,定容至1000ml，在O. 103Mpa、121°C下用高壓蒸氣滅菌30min，置于30°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，無菌
生長的培養(yǎng)基留存?zhèn)溆谩＿M(jìn)一步的，前述雞油菌液體菌種的制備方法中，在培養(yǎng)基制備時(shí)，在定容至IOOOml前，加入麥粒8 12g，優(yōu)選加入IOg麥粒。在搖床培養(yǎng)過程中，菌絲附著生長在麥粒周圍，可以縮短培養(yǎng)時(shí)間。優(yōu)選的，前述方法中所述菌種培養(yǎng)為接種后的培養(yǎng)基在28°C、110r / min的條件下?lián)u床培養(yǎng)7 10d，即得雞油菌液體菌種。與現(xiàn)有技術(shù)相比，將雞油菌組織接種于獨(dú)特的培養(yǎng)基中搖床培養(yǎng)，所得液體菌種中雞油菌菌絲體的干重達(dá)183. 8mg/200ml,比普通方法(145. 2 mg/200ml)處理的重38. 6mg/200ml，本發(fā)明方法工藝簡便、污染少、菌種純、操作簡單、培養(yǎng)周期短(培養(yǎng)周期只有7 10天)，將所得液體菌種接種于栽培袋，然后仿野生栽培來生產(chǎn)雞油菌，接種后菌絲體的萌發(fā)率為80. 3%，比普通方法(56. 5%)高23. 8%，可以實(shí)現(xiàn)規(guī)?；?、產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，另外還可以在培養(yǎng)基中加入麥粒，在搖床培養(yǎng)過程中，菌絲附著生長在麥粒周圍，從而可進(jìn)一步有效縮短培養(yǎng)時(shí)間。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :
培養(yǎng)基配方松針200g，土豆200g，氯化鈣O. I g，氯化銨O. 5 g，硫酸鎂O. 3 g，磷酸二氫鉀I g，氯化鐵O. 01 g,葡萄糖O. 5 g,維生素B1 O. 05 mg,蛋白胨5. Og,牛肉膏IOg,尿素20g、麥粒10g，pH值5. 5，水定容至1000 ml。(I)雞油菌采集5 9月份雞油菌子實(shí)體成熟時(shí)采集；
(2)清理去雜將附著于雞油菌子實(shí)體上的泥土及其它雜質(zhì)用酒精棉清理干凈，清理干凈的子實(shí)體放入冰箱保鮮層或直接進(jìn)行下一工序；
(3)培養(yǎng)基制備將松針洗凈、土豆切成小塊，放入鍋中，加水1000ml，煮沸30min，用紗布濾去松針和土豆殘?jiān)?，將濾液放回鍋中，加入氯化鈣，氯化銨，硫酸鎂，磷酸二氫鉀，氯化鐵，葡萄糖，維生素B1，蛋白胨，牛肉膏，尿素和麥粒，定容至1000ml，分裝于三角瓶內(nèi)，每瓶200ml，用棉塞蓋上，在O. 103Mpa、121°C下用高壓蒸氣滅菌30min，置于30°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，無菌生長的培養(yǎng)基留存?zhèn)溆茫?br> (4)接種將培養(yǎng)基及接種工具入超凈工作臺(tái)中，采用紫外燈滅菌30min，然后取步驟
(2)處理過的菌蓋與菌柄相接處雞油菌組織接種入培養(yǎng)基中；
(5)菌種培養(yǎng)接種后的培養(yǎng)基在28°C、110r/ min的條件下?lián)u床培養(yǎng)7 10d，培養(yǎng)基中長滿白色菌絲，即得雞油菌液體菌種。所得的液體菌種可用于仿野生栽培雞油菌，實(shí)現(xiàn)雞油菌的規(guī)?；?、產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。實(shí)施例2:
培養(yǎng)基配方松針150g，土豆250g，氯化鈣0. 05g,氯化銨0. 55g，硫酸鎂0. 35g，磷酸二氫鉀O. 8g,氯化鐵O. 008 g,葡萄糖O. 45g,維生素B1 O. 045 mg,蛋白胨6g,牛肉膏12g,尿素15g，麥粒8g，pH值5. 5，水定容至1000 ml。
(I)培養(yǎng)基制備將松針洗凈、土豆切成小塊，放入鍋中，加水1000ml，煮沸20min，用紗布濾去松針和土豆殘?jiān)?，將濾液放回鍋中，加入氯化鈣，氯化銨，硫酸鎂，磷酸二氫鉀，氯化鐵，葡萄糖，維生素B1,蛋白胨，牛肉膏，尿素和麥粒，定容至1000ml，分裝于三角瓶內(nèi)，每瓶200ml，用棉塞蓋上，在O. lMpa、125°C下用高壓蒸氣滅菌25min，置于35°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，無菌生長的培養(yǎng)基留存?zhèn)溆茫?br> (2)接種將培養(yǎng)基及接種工具入超凈工作臺(tái)中，采用紫外燈滅菌30min，取雞油菌菌蓋與菌柄相接處的雞油菌組織接種入培養(yǎng)基中；
(3)菌種培養(yǎng)接種后的培養(yǎng)基在26°C、120r/ min的條件下?lián)u床培養(yǎng)7 10d，培養(yǎng)基中長滿白色菌絲，即得雞油菌液體菌種。所制成的雞油菌液體菌種克服了現(xiàn)有雞油菌菌種污染率高、生長周期長、工藝復(fù)雜的問題，工藝簡便、污染少、菌種純、操作簡單、周期短(7 10d)。實(shí)施例3:
培養(yǎng)基配方松針250g，土豆150g，氯化鈣O. 15g，氯化銨O. 45g，硫酸鎂O. 25g，磷酸二氫鉀I. 2g,氯化鐵O. 012 g,葡萄糖O. 55g,維生素B1 O. 055 mg,蛋白胨4g,牛肉膏8g,尿素25g，pH 值 5. 5，水定容至 1000 ml。(I)培養(yǎng)基制備將松針洗凈、土豆切成小塊，放入鍋中，加水1000ml，煮沸40min，用紗布濾去松針和土豆殘?jiān)?，將濾液放回鍋中，加入氯化鈣，氯化銨，硫酸鎂，磷酸二氫鉀，氯化鐵，葡萄糖，維生素B1,蛋白胨，牛肉膏，尿素和麥粒，定容至1000ml，分裝于三角瓶內(nèi)，每瓶200ml，用棉塞蓋上，在O. 15Mpa、118°C下用高壓蒸氣滅菌35min，置于25°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，無菌生長的培養(yǎng)基留存?zhèn)溆茫?br> (2)接種將培養(yǎng)基及接種工具入超凈工作臺(tái)中，采用紫外燈滅菌30min，取雞油菌菌蓋與菌柄相接處的雞油菌組織接種入培養(yǎng)基中；
(3)菌種培養(yǎng)接種后的培養(yǎng)基在30°C、100r/ min的條件下?lián)u床培養(yǎng)7 10d，培養(yǎng)基中長滿白色菌絲，即得雞油菌液體菌種，用于下一步接種栽培。
權(quán)利要求
1.一種雞油菌液體菌種的制備方法，其特征在于包括如下步驟 (1)培養(yǎng)基制備將松針150 250g、土豆150 250g切成小塊，加IOOOml水煮沸20 40min，濾去松針和土豆殘?jiān)瑸V液中加入氯化鈣O. 05 O. 15g、氯化銨O. 45 O. 55g、硫酸鎂O. 25 O. 35g、磷酸二氫鉀O. 8 I. 2g、氯化鐵O. 008 O. 012g、葡萄糖O. 45 O. 55g、維生素B1 O. 045 O. 055mg、蛋白胨4 6g、牛肉膏8 12g和尿素15 25g,定容至1000ml，在O. I O. 15,118 125°C下用高壓蒸氣滅菌25 35min，置于25 35°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)，無菌生長的培養(yǎng)基留存?zhèn)溆茫? (2)接種取雞油菌菌蓋與菌柄相接處的雞油菌組織接種入步驟(I)所制備的培養(yǎng)基中； (3)菌種培養(yǎng)接種后的培養(yǎng)基在26 30°C、100 120r/ min的條件下?lián)u床培養(yǎng)7 10d，即得雞油菌液體菌種。
2.按照權(quán)利要求I所述雞油菌液體菌種的制備方法，其特征在于所述培養(yǎng)基制備為將松針200g、土豆200g切成小塊，加IOOOml水煮沸30min，濾去松針和土豆殘?jiān)?，濾液中加入氯化鈣O. lg、氯化銨O. 5g、硫酸鎂O. 3g、磷酸二氫鉀lg、氯化鐵O. Olg、葡萄糖O. 5g、維生SB1 O. 05mg、蛋白胨5g、牛肉膏IOg和尿素20g，定容至1000ml，在O. 103Mpa、121°C下用高壓蒸氣滅菌30min,置于30°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h,無菌生長的培養(yǎng)基留存?zhèn)溆谩?br> 3.按照權(quán)利要求I或2所述雞油菌液體菌種的制備方法，其特征在于培養(yǎng)基制備時(shí)，在定容至IOOOml前，加入麥粒8 12g。
4.按照權(quán)利要求3所述雞油菌液體菌種的制備方法，其特征在于所述麥粒的加入量為 IOgo
5.按照權(quán)利要求I所述雞油菌液體菌種的制備方法，其特征在于所述菌種培養(yǎng)為接種后的培養(yǎng)基在28°C、110r / min的條件下?lián)u床培養(yǎng)7 10d，即得雞油菌液體菌種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種雞油菌液體菌種的制備方法，包括培養(yǎng)基制備、將雞油菌菌蓋與菌柄相接處的雞油菌組織接種入培養(yǎng)基中、搖床培養(yǎng)步驟，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明將雞油菌組織接種于獨(dú)特的培養(yǎng)基中搖床培養(yǎng)，工藝簡便、污染少、菌種純、操作簡單、培養(yǎng)周期短(培養(yǎng)周期只有7～10天)，將所得液體菌種接種于栽培袋，然后仿野生栽培來生產(chǎn)雞油菌，可以實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，另外還可以在培養(yǎng)基中加入麥粒，在搖床培養(yǎng)過程中，菌絲附著生長在麥粒周圍，從而可進(jìn)一步有效縮短培養(yǎng)時(shí)間。
文檔編號(hào)A01G1/04GK102612995SQ20121009541
公開日2012年8月1日 申請(qǐng)日期2012年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月1日
發(fā)明者任春光, 孫超, 賀紅早 申請(qǐng)人:貴州省生物研究所