專利名稱：一種通過孢子分離來制作蟲草第一代母種的方法
技術領域：
本發明涉及生物技術領域，具體涉及到一種通過孢子分離來制作蟲草母第一代種的方法。
背景技術：
眾所周知，在北 蟲草的繁育過程中，其遺傳性狀極不穩定，受環境、營養和繁殖代數等影響，退化和變異不可預料的隨時出現，因而往往給蟲草產業造成十分驚人的損失，甚至因此導致一個好端端企業破產。所以說，在北蟲草栽培過程中，菌種的可靠性、穩定性是成敗的關鍵。生產過程選育培養優良、純正、健壯、適齡的菌種，是栽培北蟲草實現優質、高
產的基礎。而目前，眾多的蟲草栽培用戶都是通過外購蟲草試管母種來多代繁殖使用，菌種的退化和變異往往給這些用戶帶來很大的損失。有些用戶知道蟲草菌種容易退化和變異，他們不輕易用購買來的菌種進行多代繁殖，而是在生產過程中總是跟一些專業的菌種生產機構購買優良、純正、健壯、適齡的第一代蟲草菌種，這樣在生產上有效的避免了損失，但是購買第一代菌種價格昂貴，導致生產成本高，效益低下。目前制備優良、純正、健壯的第一代蟲草菌種主要是通過組織分離來實現，而通過組織分離制種的過程中技術工藝繁瑣，所得的菌種質量也不穩定。

發明內容
本發明的目的就是克服以上技術的不足而提供全新一種通過孢子分離來制作蟲草第一代母種的方法。具體包括選用瓶口直徑約6 8cm的廣口培養皿或平底罐頭瓶作為孢子采集容器，并裝上營養全面的培養基；采用即將成熟的蟲草子實體，將其放置于培養基上方，使蟲草子實體頭部彈射的孢子撒落在培養基上，并在合適的培養環境下萌發成菌絲，再經過提純復壯培養而得優良、純正、健壯、適齡的蟲草第一代母種。本發明是通過以下技術方案來實現的—種通過孢子分離來制作蟲草第一代母種的方法，技術方案中包括以下步驟I、孢子采集的容器選擇選用瓶口直徑約6 8cm的廣口培養皿或平底罐頭瓶作為孢子采集容器。2、1000毫升培養基的原料組成及制備方法馬鈴薯250克、葡萄糖20克、蠶蛹粉20克、瓊脂20克、蛋白胨5克、酵母膏(粉)6克、磷酸二氫鉀2克、硫酸鎂I克、VBj片、VB6I片、VB12I片、水IOOOml ;制備過程是首先將馬鈴薯削好皮并洗干凈，切成厚度為3 4暈米的片狀，然后同時和IOOOml水放入鍋中加熱煮沸到馬鈴薯酥而不爛，再通過過濾取得澄清液；接著依次往澄清液添加葡萄糖、蠶蛹粉、瓊脂、蛋白胨、酵母膏(粉)、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、VB1JB6' VB12,并將溶液的PH調節至6. 5 7，最后再次加熱至溶液沸騰而得培養基。3、培養基裝瓶滅菌趁熱將培養基分裝于各孢子采集容器瓶里，培養基裝入瓶中的厚度為0. 5 0. 8cm，瓶口安置上孢子分離所用的不銹鋼鐵鉤，瓶口先用13 15cm見方的高密度無紡布密封并扎上橡皮圈，再蓋上13 15cm見方的聚丙烯薄膜再扎上第二道橡皮圈封口防水，然后按常規滅菌后冷卻，使培養基凝固于瓶中。4 、用于孢子分離的子實體選擇選取能代表原始菌株性狀、健壯、產量高、形態好、孢子個頭大、即將成熟的蟲草子實體用于孢子分離。5、子實體上瓶在無菌環境下用鑷子夾斷子實體，夾取子實體孢子頭部，將孢子頭直接插于安置在瓶口的不銹鋼鐵鉤上，封好無紡布蓋，在封薄膜時不要全封，留一個小指頭大小的透氣的角孔。6、孢子分離將子實體已經上瓶的瓶子放于溫度是22 23°C、空氣相對濕度是75 80%、光照是3001x的環境中培養，3 4天后原先光潔的培養基表面會有孢子菌落出現，隨后的幾天會在培養基表面長滿白色菌絲.7、菌絲轉管提純在培養基表面基本布滿白色菌絲時，在無菌環境下將菌絲轉接于試管斜面上進行提純，提純時在培養基表面的菌絲生長均勻處用接種針(鉤)挑取0. 3 0. 5cm見方且帶培養基的菌絲體，轉接于試管斜面上，并按常規培養至菌絲長滿試管斜面。8、試管種轉色貯存將通過轉管提純且菌絲長滿試管斜面的試管放置在溫度是22 23°C、空氣相對濕度是75 80%、光照是200 3001x的環境中培養，并培養至試管內菌絲的色澤轉變為桔紅色，將轉色正常、無污染的試管母種放置于冰箱2 4°C環境中冷藏貯存。與現有的技術相比，本發明既有如下優點I、本發明所提出的方法工藝新穎、簡單、易實施。。2、本發明在實施過程中，只需將子實體孢子頭部夾取插于安置在瓶口的不銹鋼鐵鉤上即可進行孢子分離，方便快捷；而傳統的子實體組織分離，還要將子實體外皮剝丟后只取里面的肉塊組織作為菌種，工序多且繁瑣。3、經本發明所培養出來的蟲草菌絲優良、純正、健壯、適齡，生長速度快；明顯優于傳統組織分離的試管菌種。4、經本發明培育出來的的菌種成功率能達到99%。5、通過實施本發明，實現生產栽培北蟲草優質、高產奠定了扎實的基礎，值得大力推廣。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明的方法進一步說明。一種通過孢子分離來制作蟲草第一代母種的方法，具體實施方法如下I、孢子采集的容器選擇選用瓶口直徑約6 8cm的廣口培養皿或平底罐頭瓶作為孢子采集容器。2、1000毫升培養基的原料組成及制備方法馬鈴薯250克、葡萄糖20克、蠶蛹粉20克、瓊脂20克、蛋白胨5克、酵母膏(粉)6克、磷酸二氫鉀2克、硫酸鎂I克、VBj片、VB6I片、VB12I片、水IOOOml ;制備過程是首先將馬鈴薯削好皮并洗干凈，切成厚度為3 4暈米的片狀，然后同時和IOOOml水放入鍋中加熱煮沸到馬鈴薯酥而不爛，再通過過濾取得澄清液；接著依次往澄清液添加葡萄糖、蠶蛹粉、瓊脂、蛋白胨、酵母膏(粉)、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、VB1JB6' VB12,并將溶液的PH調節至6. 5 7，最后再次加熱至溶液沸騰而得培養基。3、培養基裝瓶滅菌趁熱將培養基分裝于各孢子采集容器瓶里，培養基裝入瓶中的厚度為0. 5 0. 8cm，瓶口安置上孢子分離所用的不銹鋼鐵鉤，瓶口先用13 15cm見方的高密度無紡布密封并扎上橡皮圈，再蓋上13 15cm見方的聚丙烯薄膜再扎上第二道橡皮圈封口防水，然后按常規滅菌后冷卻，使培養基凝固于瓶中。4、用于孢子分離的子實體選擇選取能代表原始菌株性狀、健壯、產量高、形態好、孢子個頭大、即將成熟的蟲草子實體用于孢子分離。5、子實體上瓶在無菌環境下用鑷子夾斷子實體，夾取子實體孢子頭部，將孢子頭直接插于安置在瓶口的不銹鋼鐵鉤上，封好無紡布蓋，在封薄膜時不要全封，留一個小指頭大小的透氣的角孔。6、孢子分離將子實體已經上瓶的瓶子放于溫度是22 23°C、空氣相對濕度是75 80%、光照是3001x的環境中培養，3 4天后原先光潔的培養基表面會有孢子菌落出現，隨后的幾天會在培養基表面長滿白色菌絲.7、菌絲轉管提純在培養基表面基本布滿白色菌絲時，在無菌環境下將菌絲轉接于試管斜面上進行提純，提純時在培養基表面的菌絲生長均勻處用接種針(鉤)挑取0. 3 0. 5cm見方且帶培養基的菌絲體，轉接于試管斜面上，并按常規培養至菌絲長滿試管斜面。8、試管種轉色貯存將通過轉管提純且菌絲長滿試管斜面的試管放置在溫度是22 23°C、空氣相對濕度是75 80%、光照是200 3001x的環境中培養，并培養至試管內菌絲的色澤轉變為桔紅色，將轉色正常、無污染的試管母種放置于冰箱2 4°C環境中冷藏貯存。權利要求
1.一種通過孢子分離來制作蟲草第一代母種的方法，其特征在于包括以下步驟 (1)孢子采集的容器選擇選用瓶口直徑約6 8cm的廣口培養皿或平底罐頭瓶作為孢子采集容器； (2)1000毫升培養基的原料組成及制備方法馬鈴薯250克、葡萄糖20克、蠶蛹粉20克、瓊脂20克、蛋白胨5克、酵母膏(粉)6克、磷酸二氫鉀2克、硫酸鎂I克、VB1S片、VB6I片、VB12I片、水IOOOml ;制備過程是首先將馬鈴薯削好皮并洗干凈，切成厚度為3 4暈米的片狀，然后同時和IOOOml水放入鍋中加熱煮沸到馬鈴薯酥而不爛，再通過過濾取得澄清液；接著依次往澄清液添加葡萄糖、蠶蛹粉、瓊脂、蛋白胨、酵母膏(粉)、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、VB1JB6' VB12,并將溶液的PH調節至6. 5 7，最后再次加熱至溶液沸騰而得培養基； (3)培養基裝瓶滅菌趁熱將培養基分裝于各孢子采集容器瓶里，培養基裝入瓶中的 厚度為O. 5 O. 8cm，瓶口安置上孢子分離所用的不銹鋼鐵鉤，瓶口先用13 15cm見方的高密度無紡布密封并扎上橡皮圈，再蓋上13 15cm見方的聚丙烯薄膜再扎上第二道橡皮圈封口防水，然后按常規滅菌后冷卻，使培養基凝固于瓶中； (4)用于孢子分離的子實體選擇選取能代表原始菌株性狀、健壯、產量高、形態好、孢子個頭大、即將成熟的蟲草子實體用于孢子分離； (5)子實體上瓶在無菌環境下用鑷子夾斷子實體，夾取子實體孢子頭部，將孢子頭直接插于安置在瓶口的不銹鋼鐵鉤上，封好無紡布蓋，在封薄膜時不要全封，留一個小指頭大小的透氣的角孔； (6)孢子分離將子實體已經上瓶的瓶子放于溫度是22 23°C、空氣相對濕度是75 80%、光照是300]^的環境中培養,3 4天后原先光潔的培養基表面會有孢子菌落出現,隨后的幾天會在培養基表面長滿白色菌絲； (7)菌絲轉管提純在培養基表面基本布滿白色菌絲時，在無菌環境下將菌絲轉接于試管斜面上進行提純，提純時在培養基表面的菌絲生長均勻處用接種針(鉤)挑取O. 3 O.5cm見方且帶培養基的菌絲體，轉接于試管斜面上，并按常規培養至菌絲長滿試管斜面； (8)試管種轉色貯存將通過轉管提純且菌絲長滿試管斜面的試管放置在溫度是22 23°C、空氣相對濕度是75 80%、光照是200 3001x的環境中培養，并培養至試管內菌絲的色澤轉變為桔紅色，將轉色正常、無污染的試管母種放置于冰箱2 4°C環境中冷藏貯存。
全文摘要
本發明涉及生物技術領域，具體涉及到一種通過孢子分離來制作蟲草母第一代種的方法。具體包括選用瓶口直徑約6～8cm的廣口培養皿或平底罐頭瓶作為孢子采集容器，并裝上營養全面的培養基；采用即將成熟的蟲草子實體，將其放置于培養基上方，使蟲草子實體頭部彈射的孢子撒落在培養基上，并在合適的培養環境下萌發成菌絲，再經過提純復壯培養而得優良、純正、健壯、適齡的蟲草第一代母種。通過實施本發明，實現生產栽培北蟲草優質、高產奠定了扎實的基礎，值得大力推廣。
文檔編號A01G1/04GK102626035SQ20121010907
公開日2012年8月8日 申請日期2012年4月12日 優先權日2012年4月12日
發明者何寒 申請人:何寒