專利名稱：發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)酒糟生物飼料的菌種組合配方及篩選方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)酒糟生物飼料的菌種組合配方及篩選方法。
背景技術(shù)：
我國每年白酒糟產(chǎn)量高達(dá)2100多萬t，基于酒糟中含有一定的蛋白質(zhì)，豐富的氨基酸、維生素和多種微量元素等，傳統(tǒng)的做法是將鮮酒糟直接飼喂牲畜當(dāng)飼料原料，此方法有兩個弊端一是鮮酒糟內(nèi)粗纖維含量高、家畜適口性差、消化率低，霉?fàn)€酒糟易產(chǎn)生病蟲害；二是鮮酒糟含水率高，難運(yùn)輸，酸度高，易腐敗變質(zhì)。為此，人們對其資源化問題進(jìn)行了多方面的研究，如利用白酒糟制取甘油，培養(yǎng)食用菌，提取復(fù)合氨基酸及微量元素，提取植酸和植酸鈣，釀醋；利用酒精糟厭氧發(fā)酵回收沼氣，提取蛋白質(zhì)，生產(chǎn)干全飼料(DDGS)，制取單細(xì)胞蛋白(SCP)飼料，酒糟發(fā)酵生產(chǎn)燃料乙醇，生產(chǎn)粗酶制劑等。以上方法由于規(guī)模小、能源消耗大、營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化不充分等問題多數(shù)處于停頓狀態(tài)。為此我們采用微生物固態(tài)發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)生物飼料，此法有以下優(yōu)點(diǎn)微生物生長速度快，周期短、蛋白質(zhì)含量高，含豐富的必需氨基酸、B族維生素、輔酶等，生產(chǎn)不受氣候條件、產(chǎn)季節(jié)變化的影響，僅需少量土地、勞動力和能源，酒糟中營養(yǎng)物質(zhì)得到有效的利用。本試驗(yàn)特設(shè)計(jì)將班圖酒香酵母(Y1)、枯草芽孢桿菌(Y2)、綠色木霉(Y3)、嗜酸乳桿菌(Y4) 4種菌進(jìn)行不同的組合發(fā)酵白酒糟培養(yǎng)基，通過對各指標(biāo)的測定篩選出最佳組
八
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發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于，提供一種有效發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)酒糟生物飼料的菌種組合配方及篩選方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的能源消耗大、營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化不充分等不足。本發(fā)明的發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)酒糟生物飼料的菌種組合配方為它包括酒糟培養(yǎng)基和菌種，所述酒糟培養(yǎng)基的配方為鮮白酒糟60 %、玉米粉10 %、菜籽柏10 %、水20 %，此處的百分比指各配方占酒糟培養(yǎng)基的總重量之比；且每100 g酒糟培養(yǎng)基中另加硫酸亞鐵15mg、硫酸鋅12 mg、硫酸錳10 mg、硫酸銅15 mg、磷酸氫鈣2 g ;所述的菌種包括枯草芽孢桿菌、綠色木霉、嗜酸乳桿菌和班圖酒香酵母。所述枯草芽孢桿菌，針對其菌體生長過程中產(chǎn)生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短桿菌肽等活性物質(zhì)，這些活性物質(zhì)對致病菌或內(nèi)源性感染的條件致病菌有明顯的抑制作用、枯草芽孢桿菌迅速消耗環(huán)境中的游離氧，造成腸道低氧，促進(jìn)有益厭氧菌生長。接種量為每100 g酒糟培養(yǎng)基接種其菌液I. 5ml，接種搖菌后第22 h的、活菌數(shù)達(dá)I. 33X1011cfu/mL。 所述綠色木霉，針對它是所產(chǎn)纖維素酶活性最高的菌株之一，所產(chǎn)生的纖維素酶對作物有降解作用，效果非常好，酒糟中纖維素含量很高，利用綠色木霉能很好的起到降解纖維的目的，提高飼料的適口性，及消化效率。接種量為每100 g酒糟培養(yǎng)基接種其菌液I. 5ml，接種搖菌后第36 h的、活菌數(shù)達(dá)7. 0X1010 cfu/ml。
所述嗜酸乳桿菌，針對它是一種能從發(fā)酵碳水化合物產(chǎn)酸的細(xì)菌，為腸道中的正常微生物。其作用歸納為產(chǎn)生有機(jī)酸拮抗病原微生物，調(diào)節(jié)動物消化道微生物區(qū)系平衡、活化免疫防御系統(tǒng)增強(qiáng)免疫力、合成維生素等營養(yǎng)物質(zhì)、產(chǎn)生消化酶，提高酶活性有利于飼料消化吸收、降低氨、胺等有害物質(zhì)的產(chǎn)生，控制腸毒素，增進(jìn)動物健康，有利于動物健康。接種量為每100 g酒糟培養(yǎng)基接種其菌液I. 5ml，接種搖菌后第16 h的、活菌數(shù)達(dá)2. I X1010 cfu/mLo所述班圖酒香酵母，針對它是一類非常重要的微生物，安全性好，含有豐富蛋白質(zhì)，含量一般占細(xì)胞干重的50%-55%以上，且氨基酸組成豐富。它還能合成豐富的B族維生素、乙醇、有機(jī)酸、酶類等多種營養(yǎng)成分和某些協(xié)同因子。接種量為每100 g酒糟培養(yǎng)基接種其菌液I. 5ml，接種搖菌后第32 h的、活菌數(shù)達(dá)3. 5 X IO11 cfu/mL。發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)酒糟生物飼料的菌種組合配方的篩選方法，包括以下過程
它包括以下過程所選菌種的確定、所選菌種是否能復(fù)合添加的確定、最佳接種時間的 確定、最佳發(fā)酵方式的確定，以l-4d有氧5-10d天厭氧進(jìn)行酒糟微生物固態(tài)發(fā)酵,發(fā)酵后成分的測定和篩選出最佳組合配方。所選菌種是否能復(fù)合添加的確定，是將班圖酒香酵母、枯草芽孢桿菌、綠色木霉、嗜酸乳桿菌4種菌兩兩組合分組，將每組的其中一種菌以10 _的間隔劃線接種于普通培養(yǎng)基上，然后取另外一種菌垂直劃一條直線，30 °C培養(yǎng)24 h，觀察十字交叉處是否有被抑制而發(fā)生菌落萎縮和消失的現(xiàn)象。各組菌種十字交叉處均未出現(xiàn)菌落萎縮和消失的現(xiàn)象，得出結(jié)論各菌間均不存在拮抗效應(yīng)，適合組合發(fā)酵酒糟培養(yǎng)基。最佳接種時間的確定，即測得嗜酸乳桿菌、班圖酒香酵母、綠色木霉、枯草芽孢桿菌的生長曲線得出最佳接種時間
最佳發(fā)酵方式的確定，是將班圖酒香酵母、枯草芽孢桿菌、綠色木霉、嗜酸乳桿菌4種菌分別接種一環(huán)斜面菌于100 mL液體培養(yǎng)基中，150 r/min、30 °C搖菌，此處搖菌即為振蕩培養(yǎng)。搖菌后將4種菌搭配共分為15組每組3個重復(fù)，每個重復(fù)所接各菌種體積相等，以每IOOg酒糟培養(yǎng)基總接種量為6ml菌液的比例接種到酒糟飼料發(fā)酵培養(yǎng)基中。接種后分別用2種方式發(fā)酵一種完全厭氧、另一種為1-4 d有氧，5-12 d為厭氧，溫度都為30 °C。分別于發(fā)酵后的3、6、9、12 d取樣檢測活菌數(shù)，確定最佳發(fā)酵方式及時間。以l-4d有氧5-10d天厭氧進(jìn)行酒糟微生物固態(tài)發(fā)酵將Y1-Y4的4種菌分別接種一環(huán)斜面菌于IOOml液體培養(yǎng)基中，150r/min、30°C搖菌。搖菌后將4種菌以單菌、雙菌、三菌、四菌搭配分為14組，連同對照組共分為15組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)所接各菌種體積相等，以每IOOg酒糟培養(yǎng)基總接種量為6ml菌液的比例接種到酒糟飼料發(fā)酵培養(yǎng)基中。綠色木霉接種搖菌后第36 h的，活菌數(shù)達(dá)到7. OX 101(lCfu/ml ;酵母菌接種搖菌后第32 h的，活菌數(shù)達(dá)到3. 5X10ncfu/ml ;乳酸菌接種搖菌后第16 h的，活菌數(shù)達(dá)到2. I X IO10Cfu/ml ;枯草芽孢桿菌接種搖菌后第22 h的，活菌數(shù)達(dá)到I. 33X 10ncfu/ml。接種后以l_4d有氧，5-10d天為厭氧，溫度都為30°C的方式發(fā)酵。具體分組為第I組對照組(發(fā)酵前的樣品，未接菌、未發(fā)酵)、第2組單接Y1、第3組單接Y2、第4組單接Y3、第5組單接Y4、第 6 組Y1+ Y2、第 7 組Y1+ Y3、第 8 組Y2+ Y3、第 9 組Y1+ Y4、第 10 組Y2+ Y4、第 11組Y3+ Y4、第 12 組Y1+ Y2+ Y4、第 13 組Y2+ Y3+ Y4、第 14 組Y1+ Y2+ Y3、第 15 組Y1+Y2+Y3+ Y4。總發(fā)酵時間為IOd0
發(fā)酵后成分的測定和篩選出最佳組合配方，包括酶活測定和酒糟發(fā)酵培養(yǎng)基各養(yǎng)分指標(biāo)測定；酶活測定是指發(fā)酵第7d取樣采用ELISA試劑盒測定蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纖維素酶活性濃度；酒糟發(fā)酵培養(yǎng)基各養(yǎng)分指標(biāo)測定是指將發(fā)酵前及發(fā)酵第IOd的飼料樣品混勻、烘干、粉碎制備成分析試樣進(jìn)行干物質(zhì)、粗灰分、粗蛋白、酸性洗滌纖維、中性洗滌纖維、氨基酸含量、脂肪酸含量的測定，確定最佳菌種組合。
測定結(jié)果比較各組發(fā)酵后第6-9d活菌數(shù)最高，第9d后開始下降。篩選出第15組為最佳組合，該組發(fā)酵第7d蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纖維素酶酶活濃度分別為317. 38U/g、350. 48U/g、116. 79U/g、89. 71U/g優(yōu)于其它組相比發(fā)酵前顯著提高；干物質(zhì)、粗蛋白、粗灰分(風(fēng)干基礎(chǔ))分別為95. 31%、23. 2%、11. 15%優(yōu)于其它組較發(fā)酵前顯著提高；酸性洗滌纖維、中性洗滌纖維(風(fēng)干基礎(chǔ))分別為6. 37%、12. 53%優(yōu)于其它組較發(fā)酵前顯著降低；C22:6n-3(DHA)、單不飽和脂肪酸之和、多不飽和脂肪酸之和分別為16. 20%,26. 47%,31. 86%優(yōu)于其它組較發(fā)酵前顯著提高；總氨基酸、總必須氨基酸、總鮮味氨基酸分別為18.31%、8. 15%、7. 27%僅次于第8組組較發(fā)酵前顯著提高。本發(fā)明有益效果本發(fā)明能將酒糟原料轉(zhuǎn)化為微生物菌體蛋白、生物活性小肽類氨基酸、功能性脂肪酸、微生物活性益生菌、復(fù)合酶制劑為一體的生物發(fā)酵飼料。該飼料產(chǎn)品不但可以彌補(bǔ)常規(guī)飼料中容易缺乏的氨基酸、脂肪酸，而且能使其中不易吸收等原料營養(yǎng)成份迅速轉(zhuǎn)化，達(dá)到提高家畜適口性增強(qiáng)消化吸收利用效果。解決了酒糟對環(huán)境污染造成的壓力、提高了酒糟的適口性及營養(yǎng)成分，解決了人畜爭糧的問題、為酒糟資源化利用提出了解決方案。具有以下的技術(shù)優(yōu)勢和積極效果
(1)微生物生長速度快，周期短、蛋白質(zhì)含量高，含豐富的必需氨基酸、B族維生素、輔酶等；
(2)生產(chǎn)不受氣候條件、生產(chǎn)季節(jié)變化的影響，僅需少量土地和勞動力、能源消耗低，酒糟中營養(yǎng)物質(zhì)得到有效的利用。


圖I為本發(fā)明有效發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)酒糟生物飼料的菌種組合篩選流程圖。
具體實(shí)施例方式
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)酒糟生物飼料的菌種組合配方為菌種包括枯草芽抱桿菌 iBaciIlus subtiIis (Ehrenberg) Cohn )、綠色木霉(Trichodermaviride、、嗜酸乳桿菌{Lactobacillus acidophilus')、班圖酒香酵 ^^U^rGttanomycesCttSter1Siazw1S);酒糟培養(yǎng)基的配方為鮮白酒糟60 %、玉米粉10 %、菜籽柏10 %、水20 %,且每100 g酒糟培養(yǎng)基中另加硫酸亞鐵15 mg、硫酸鋅12 mg、硫酸猛10 mg、硫酸銅15 mg、磷酸氫鈣2 g0枯草芽孢桿菌接種量為每100 g酒糟培養(yǎng)基接種其菌液1.5ml，活菌數(shù)為
I.33X10ncfu/mL。綠色木霉接種量為每100 g酒糟培養(yǎng)基接種其菌液I. 5ml，活菌數(shù)為7. OX 101°cfu/mL0嗜酸乳桿菌接種量為每100 g酒糟培養(yǎng)基接種其菌液I. 5ml，活菌數(shù)為2. I X 101°cfu/mLo班圖酒香酵母接種量為每100 g酒糟培養(yǎng)基接種其菌液I. 5ml，活菌數(shù)為3. 5 X IO11 cfu/mLo如附圖I所示意，發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)酒糟生物飼料的菌種組合配方的篩選方法，包括以下過程所選菌種的確定、所選菌種是否能復(fù)合添加的確定、最佳接種時間的確定、最佳發(fā)酵方式的確定，以l-4d有氧5-10d天厭氧進(jìn)行酒糟微生物固態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵后成分的測定和篩選出最佳組合配方。

所選菌種的確定。針對發(fā)酵后酒糟要達(dá)到的目的彌補(bǔ)常規(guī)飼料中容易缺乏的氨基酸、脂肪酸，使其中不易吸收等原料營養(yǎng)成份迅速轉(zhuǎn)化，達(dá)到提高家畜適口性增強(qiáng)消化吸收利用效果，即干物質(zhì)、粗蛋白、多不飽和脂肪酸、氨基酸含量的提高；粗纖維含量降低。確定所選菌種。所選菌種是否能復(fù)合添加的確定，是將班圖酒香酵母、枯草芽孢桿菌、綠色木霉、嗜酸乳桿菌4種菌兩兩組合分組，將每組的其中一種菌以10 _的間隔劃線接種于普通培養(yǎng)基上，然后取另外一種菌垂直劃一條直線，30 °C培養(yǎng)24 h，觀察十字交叉處是否有被抑制而發(fā)生菌落萎縮和消失的現(xiàn)象。各組菌種十字交叉處均未出現(xiàn)菌落萎縮和消失的現(xiàn)象，得出結(jié)論各菌間均不存在拮抗效應(yīng)，適合組合發(fā)酵酒糟培養(yǎng)基。最佳接種時間的確定，即測得嗜酸乳桿菌(Y1)、班圖酒香酵母(Y2)、綠色木霉(Y3)、枯草芽孢桿菌(Y4)的生長曲線得出最佳接種時間；
最佳發(fā)酵方式的確定，是將班圖酒香酵母、枯草芽孢桿菌、綠色木霉、嗜酸乳桿菌4種菌分別接種一環(huán)斜面菌于100 mL液體培養(yǎng)基中，150 r/min、30 °C搖菌。搖菌后將4種菌搭配共分為15組每組3個重復(fù)，每個重復(fù)所接各菌種體積相等，以每IOOg酒糟培養(yǎng)基總接種量為6ml菌液的比例接種到酒糟飼料發(fā)酵培養(yǎng)基中。接種后分別用2種方式發(fā)酵一種完全厭氧、另一種為1-4 d有氧，5-12 d為厭氧，溫度都為30 °C。分別于發(fā)酵后的3、6、9、
12d取樣檢測活菌數(shù)，確定最佳發(fā)酵方式及時間。以l-4d有氧5-10d天厭氧進(jìn)行酒糟微生物固態(tài)發(fā)酵將Y1-Y4的4種菌分別接種一環(huán)斜面菌于IOOml液體培養(yǎng)基中，150r/min、30°C搖菌。搖菌后將4種菌以單菌、雙菌、三菌、四菌搭配分為14組，連同對照組共分為15組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)所接各菌種體積相等，以每IOOg酒糟培養(yǎng)基總接種量為6ml菌液的比例接種到酒糟飼料發(fā)酵培養(yǎng)基中。綠色木霉接種搖菌后第36 h的，活菌數(shù)達(dá)到7. OX 101(lCfu/ml ;酵母菌接種搖菌后第32 h的，活菌數(shù)達(dá)到3. 5X10ncfu/ml ;乳酸菌接種搖菌后第16 h的，活菌數(shù)達(dá)到2. I X IO10Cfu/ml ;枯草芽孢桿菌接種搖菌后第22 h的，活菌數(shù)達(dá)到I. 33X 10ncfu/ml。接種后以l_4d有氧，5-10d天為厭氧，溫度都為30°C的方式發(fā)酵。具體分組為第I組對照組(發(fā)酵前的樣品，未接菌、未發(fā)酵)、第2組單接Y1、第3組單接Y2、第4組單接Y3、第5組單接Y4、第 6 組Y1+ Y2、第 7 組Y1+ Y3、第 8 組Y2+ Y3、第 9 組Y1+ Y4、第 10 組Y2+ Y4、第 11組Y3+ Y4、第 12 組Y1+ Y2+ Y4、第 13 組Y2+ Y3+ Y4、第 14 組Y1+ Y2+ Y3、第 15 組Y1+Y2+Y3+ Y4。總發(fā)酵時間為IOd0發(fā)酵后成分的測定和篩選出最佳組合配方，包括酶活測定和酒糟發(fā)酵培養(yǎng)基各養(yǎng)分指標(biāo)測定；酶活測定是指發(fā)酵第7d取樣采用ELISA試劑盒測定蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纖維素酶活性濃度；酒糟發(fā)酵培養(yǎng)基各養(yǎng)分指標(biāo)測定是指將發(fā)酵前及發(fā)酵第IOd的飼料樣品混勻、烘干、粉碎制備成分析試樣進(jìn)行干物質(zhì)、粗灰分、粗蛋白、酸性洗滌纖維、中性洗滌纖維、氨基酸含量、脂肪酸含量的測定，確定最佳菌種組合。
測定結(jié)果比較各組發(fā)酵后第6-9d活菌數(shù)最高，第9d后開始下降。篩選出第15組為最佳組合，該組發(fā)酵第7d蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纖維素酶酶活濃度分別為317. 38U/g、350. 48U/g、116. 79U/g、89. 71U/g優(yōu)于其它組相比發(fā)酵前顯著提高；干物質(zhì)、粗蛋白、粗灰分(風(fēng)干基礎(chǔ))分別為95. 31%、23. 2%、11. 15%優(yōu)于其它組較發(fā)酵前顯著提高；酸性洗滌纖維、中性洗滌纖維(風(fēng)干基礎(chǔ))分別為6. 37%、12. 53%優(yōu)于其它組較發(fā)酵前顯著降低；C22:6n-3(DHA)、單不飽和脂肪酸之和、多不飽和脂肪酸之和分別為16. 20%,26. 47%,31. 86%優(yōu)于其它組較發(fā)酵前顯著提高；總氨基酸、總必須氨基酸、總鮮味氨基酸分別為18. 31%、8. 15%、7. 27%僅次于第8組組較發(fā)酵前顯著提高。
權(quán)利要求
1.一種發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)酒糟生物飼料的菌種組合配方，其特征在于它包括酒糟培養(yǎng)基和菌種，所述酒糟培養(yǎng)基的配方為鮮白酒糟60 %、玉米粉10 %、菜籽柏10 %、水20 %，此處的百分比指各配方占酒糟培養(yǎng)基的總重量之比；且每100 g酒糟培養(yǎng)基中另加硫酸亞鐵15 mg、硫酸鋅12 mg、硫酸猛10 mg、硫酸銅15 mg、磷酸氫|丐2 g ;所述的菌種包括枯草芽孢桿菌、綠色木霉、嗜酸乳桿菌和班圖酒香酵母。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)酒糟生物飼料的菌種組合配方，其特征在每100 g酒糟培養(yǎng)基接種枯草芽孢桿菌菌液I. 5ml，活菌數(shù)為I. 33X 10ncfu/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)酒糟生物飼料的菌種組合配方，其特征在每100 g酒糟培養(yǎng)基接種綠色木霉菌液I. 5ml，活菌數(shù)為7. OX 101° cfu/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)酒糟生物飼料的菌種組合配方，其特征在每100 g酒糟培養(yǎng)基接種嗜酸乳桿菌菌液I. 5ml，活菌數(shù)為2. IXlO10 cfu/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)酒糟生物飼料的菌種組合配方，其特征在每100 g酒糟培養(yǎng)基接種班圖酒香酵母菌液I. 5ml，活菌數(shù)為3. 5X IO11 cfu/mL。
6.—種如權(quán)利要求I所述的發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)酒糟生物飼料的菌種組合配方的篩選方法，其特征在于它包括以下過程所選菌種的確定、所選菌種是否能復(fù)合添加的確定、最佳接種時間的確定、最佳發(fā)酵方式的確定，以l-4d有氧5-10d天厭氧進(jìn)行酒糟微生物固態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵后成分的測定和篩選出最佳組合配方。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)酒糟生物飼料的菌種組合配方的篩選方法，其特征在于所選菌種是否能復(fù)合添加的確定，是將班圖酒香酵母、枯草芽孢桿菌、綠色木霉、嗜酸乳桿菌4種菌兩兩組合分組，將每組的其中一種菌以10 mm的間隔劃線接種于普通培養(yǎng)基上，然后取另外一種菌垂直劃一條直線，30 °C培養(yǎng)24 h，觀察十字交叉處是否有被抑制而發(fā)生菌落萎縮和消失的現(xiàn)象；各組菌種十字交叉處均未出現(xiàn)菌落萎縮和消失的現(xiàn)象，得出結(jié)論各菌間均不存在拮抗效應(yīng)，適合組合發(fā)酵酒糟培養(yǎng)基。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)酒糟生物飼料的菌種組合配方的篩選方法，其特征在于最佳接種時間的確定，即測得嗜酸乳桿菌、班圖酒香酵母、綠色木霉、枯草芽孢桿菌的生長曲線得出最佳接種時間。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)酒糟生物飼料的菌種組合配方的篩選方法，其特征在于最佳發(fā)酵方式的確定，是將班圖酒香酵母、枯草芽孢桿菌、綠色木霉、嗜酸乳桿菌4種菌分別接種一環(huán)斜面菌于100 mL液體培養(yǎng)基中，150 r/min、30 °C搖菌，此處搖菌即為振蕩培養(yǎng)；搖菌后將4種菌搭配共分為15組每組3個重復(fù)，每個重復(fù)所接各菌種體積相等，以每IOOg酒糟培養(yǎng)基總接種量為6ml菌液的比例接種到酒糟飼料發(fā)酵培養(yǎng)基中；接種后分別用2種方式發(fā)酵一種完全厭氧、另一種為1-4 d有氧，5-12 d為厭氧，溫度都為300C ,分別于發(fā)酵后的3、6、9、12 d取樣檢測活菌數(shù)，確定最佳發(fā)酵方式及時間。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)酒糟生物飼料的菌種組合配方的篩選方法，其特征在于以l-4d有氧5-10d天厭氧進(jìn)行酒糟微生物固態(tài)發(fā)酵，即將所選枯草芽孢桿菌、綠色木霉、嗜酸乳桿菌和班圖酒香酵母分別接種一環(huán)斜面菌于IOOml液體培養(yǎng)基中，150r/min、30°C搖菌，此處搖菌即為振蕩培養(yǎng)；搖菌后將4種菌搭配共分為15組每組3個重復(fù)；每個重復(fù)所接各菌種體積相等，以每IOOg酒糟培養(yǎng)基總接種量為6ml菌液的比例接種到酒糟飼料發(fā)酵培養(yǎng)基中；綠色木霉接種搖菌后第36 h的，活菌數(shù)達(dá)到7.0X101(lCfU/ml ;酵母菌接種搖菌后第32 h的，活菌數(shù)達(dá)到3. 5X10ncfu/ml ;乳酸菌接種搖菌后第16h的，活菌數(shù)達(dá)到2. I X 101(lCfu/ml ;枯草芽孢桿菌接種搖菌后第22 h的，活菌數(shù)達(dá)到1.33X10ncfu/ml ;接種后以l-4d有氧，5-10d天為厭氧，溫度都為30°C的方式發(fā)酵，總發(fā)酵時間為IOd0
11.根據(jù)權(quán)利要求6所述的發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)酒糟生物飼料的菌種組合配方的篩選方法，其特征在于發(fā)酵后成分的測定和篩選出最佳組合配方，包括酶活測定和酒糟發(fā)酵培養(yǎng)基各養(yǎng)分指標(biāo)測定；酶活測定是指發(fā)酵第7d取樣采用ELISA試劑盒測定蛋白酶、淀粉酶、月旨肪酶、纖維素酶活性濃度；酒糟發(fā)酵培養(yǎng)基各養(yǎng)分指標(biāo)測定是指將發(fā)酵前及發(fā)酵第IOd的飼料樣品混勻、烘干、粉碎制備成分析試樣進(jìn)行干物質(zhì)、粗灰分、粗蛋白、酸性洗滌纖維、中性洗滌纖維、氨基酸含量、脂肪酸含量的測定，確定最佳菌種組合。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種發(fā)酵白酒糟生產(chǎn)酒糟生物飼料的菌種組合配方及篩選方法。其菌種組合配方包括酒糟培養(yǎng)基和菌種，所述酒糟培養(yǎng)基的配方為鮮白酒糟60%、玉米粉10%、菜籽粕10%、水20%；且每100g酒糟培養(yǎng)基中另加硫酸亞鐵15mg、硫酸鋅12mg、硫酸錳10mg、硫酸銅15mg、磷酸氫鈣2g；所述的菌種包括枯草芽孢桿菌、綠色木霉、嗜酸乳桿菌和班圖酒香酵母，接種量均為1.5%，其中枯草芽孢桿活菌數(shù)為1.33×1011cfu/mL，綠色木霉活菌數(shù)為7.0×1010cfu/mL，班圖酒香酵母活菌數(shù)為3.5×1011cfu/ml，嗜酸乳酸菌活菌數(shù)為2.1×1010cfu/ml。
文檔編號A23K1/06GK102630809SQ20121014311
公開日2012年8月15日 申請日期2012年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月10日
發(fā)明者周碧君, 夏先林, 王開功, 郭素環(huán) 申請人:貴州大學(xué)