專利名稱：櫸樹組織培養快速繁殖方法
技術領域：
本發明屬于植物繁殖技術領域，具體涉及一種櫸樹的組培快繁方法。
背景技術：
棒樹schneideriana Hand.-Mazz.為偷科棒屬植物。是珍貴硬質闊葉用材樹種，櫸樹的木材材質堅硬有彈性，紋理美觀有光澤，且無特殊氣味，已成為許多家庭進行室內裝飾和制造高檔家具的首選材料，深受廣大消費者喜愛。同時，櫸樹的樹形美觀，樹葉會隨季節呈現不同的顏色，具有很高的造園和觀賞價值。而且，櫸樹病蟲害少，具有很強的抗病能力；樹冠和根系都很龐大，落葉量多，具有良好的水土保持和改良土壤效果，在保護和改善生態環境中起著十分重要的作用。但是，由于過多的砍伐和缺乏保護，櫸樹的野生資源已相當匱乏，櫸樹被列為國家二級保護植物。
隨著經濟的發展和人們對生活水平的新追求，目前全國各地宅區、公園、道路綠化方興未艾，我國市場對綠化苗木，特別是珍稀樹種的需求量越來越大，供需矛盾突出。加上我國人工林樹種單一化與“針葉化”現象非常嚴重，造成了生態系統失衡和經濟效益低下等一系列問題，發展優良硬質闊葉人工林已引起我國林業部門的高度重視。在新一代人工林樹種結構調整中，選擇材質優良的、速生性能和抗蟲能力較強的珍稀樹種如櫸樹造林已經成為專家們的共識，對優質速生櫸樹苗木的需求不斷增加。但是，對櫸樹的研究，如引種馴化、新品種選育、繁殖和推廣等方面的研究相對滯后，種子育苗良莠不齊現象非常嚴重，不能提供生產應用及市場供應的科技支撐。因此，對櫸樹的快速繁殖技術的研究尤為重要。目前關于櫸樹組織培養的研究報道主要有頂芽的組織培養和通過葉片誘導愈傷組織的組織培養。頂芽的組織培養得到的叢生芽苗木一致性比較差，繁殖系數低(27 125);葉片誘導愈傷組織的組織培養產生的再生植株與母株的一致性差。

發明內容
本發明旨在克服現有技術的不足，提供一種櫸樹組織培養快速繁殖的方法。為了達到上述目的，本發明提供的技術方案為
櫸樹組織培養快速繁殖方法，包括如下步驟
(1)將櫸樹幼嫩枝條用75%的酒精消毒25 35s，用無菌水沖洗，用O.1%升汞消毒8 12min，再用無菌水沖洗；
(2)將經步驟(I)處理后的枝條切成長O.8 1. 2cm至少含有一個腋芽的莖段，植入叢生芽誘導培養基中培養28 32天，獲得叢生芽；其中，所述叢生芽誘導培養基為WPM +
I.O 3. O mg. L 1 BA + O I. O mg. L 1NAA,瓊脂 6. 5 g. L 1 ,鹿糖 20 g. L \ pH 值為 5. 7 ；
(3)將經步驟(2)誘導培養后長出的叢生芽轉入繼代培養基中培養6(Γ65天，進行芽的增殖；其中，所述繼代培養基為=WPM + 2. 0 3· O mg. L-1 BA+1. 0 2· O mg. T1NAA,瓊脂6. 5g. L-1，鹿糖 20 g. I/1, pH 值為 5. 7 ；
(4)切取經步驟(3)繼代培養后長出的高度為2.O cm以上的櫸樹健壯苗，植入生根培養基中培養45 50天，獲得再生植株；其中，所述生根培養基為生根培養基為WPM +O. 5 I. O mg. Γ1 IBA+2. O g. L-1AC,瓊脂 7. O mg. L' 蔗糖 20 g. Λ pH 值為 5. 7 ；
(5)將經步驟(4)獲得的再生植株洗凈，移植到由泥炭土和珍珠巖組成的混合基質中煉苗培養7 10天，再室外培養9(Γ100天，即可移至大田栽培，大田栽培時遮蔭一周即可。優選地，步驟(I)所述櫸樹幼嫩枝條是當年生春季帶芽幼嫩枝條。優選地，步驟(I)所述櫸樹幼嫩枝條是將含腋芽的櫸樹冬季落葉的健壯枝條置于裝有蒸餾水的燒杯中，25°C下進行水培1(Γ15天后，由腋芽萌發而成的幼嫩枝條。優選地，步驟(5)所述的混合基質中泥炭土和珍珠巖的體積比為1:1。優選地，步驟(2)至(4)中的培養條件為室溫24 ± 2 °C，光照強度PPFD =65. 5 μ · moL. m 2· s S光照時間每天16小時。
其中，本發明步驟(2)中叢生芽的誘導率為8(Γ90%;步驟(3)中芽增殖培養的芽增殖系數為7 10 ;步驟(4)中生根培養的生根率為86、5% ;步驟(5)中移栽至大田栽培的存活率為95 100%。與現有技術相比，本發明的有益效果為
I、本發明方法選擇帶芽莖段為外植體，并選擇合適的各階段培養基，進行組織培養，能夠得到保持母株優良性狀的大量苗木，可以100%保持原植株基因型及其所有的優良特性。2、本發明可實現工廠化育苗，并大批量生產整齊一致的櫸樹苗木，大幅度提高繁殖系數(343 1000)。繁殖系數的計算是繁殖一次時間是4個月，一年12個月可繁殖3次，一次的增殖系數是疒10，那么一年的繁殖系數為7X7X7 IOX IOX 10 (343 1000)。
具體實施例方式以下結合實施例對本發明作進一步的詳細說明。實施例I
(1)將選取的櫸樹當年生春季帶芽幼嫩枝條用75%的酒精消毒3(T35s，用無菌水沖洗3次，用O. 1%升汞消毒8min,再用無菌水沖洗3次；
(2)將經步驟(I)處理后的枝條切成長Icm至少含有一個腋芽的莖段，植入芽誘導培養基中培養28 30天，獲得叢生芽；其中，所述芽誘導培養基為WPM + 3.0 mg. Γ1 BA，瓊脂6. 5g. L—1，蔗糖20 g. L—1，pH值為5. 7，培養基高壓滅菌20min ;叢生芽的誘導率為84 90% ；
(3)將經步驟(2)誘導培養后長出的叢生芽轉入繼代培養基中培養60天，進行芽的增殖，芽增殖系數為8 10 ;其中，所述繼代培養基為WPM + 3.0 mg. L-1 BA+2. O mg. T1NAA,瓊脂6. 5 g. L-1，蔗糖20 g. L-1，pH值為5. 7，培養基高壓滅菌20min ；
(4)切取經步驟(3)繼代培養后長出的高度為2.Ocm以上的櫸樹健壯苗，植入生根培養基中培養45天，獲得再生植株，生根率為89、5%;其中，所述生根培養基為生根培養基為WPM + O. 5 mg. I/1 IBA+2. O g. L^1AC,瓊脂 7. O mg Γ1，蔗糖 20 g. Λ pH 值為 5. 7，培養基高壓滅菌20min ；
(5)將經步驟(4)獲得的再生植株洗凈，移植到由泥炭土和珍珠巖按體積比1:1組成的混合基質中煉苗培養7天，再室外培養90天，即可移至大田栽培，大田栽培時遮蔭一周即可，移栽成活率為100%。上述步驟(2)至(4)中的培養條件為室溫24 ± 2 °C，光照強度PPFD = 65. 5μ . moL. m_2· s_S光照時間每天16小時。試驗結果表明，能夠得到保持母株優良性狀的大量苗木，可以100%保持原植株基因型及其所有的優良特性，具有較高的繁殖系數(512 1000)。實施例2
將含腋芽的櫸樹冬季落葉的健壯枝條置于裝有蒸餾水的燒杯中，25°C下進行水培15 30天后，取得腋芽萌發而成的幼嫩枝條，然后進行如下步驟；
(1)將櫸樹幼嫩枝條用75%的酒精消毒25 30s，用無菌水沖洗3次，用O.1%升汞消毒12min,再用無菌水沖洗3次；
(2)將經步驟(I)處理后的枝條切成長I.2cm至少含有一個腋芽的莖段，植入叢生芽誘導培養基中培養3(Γ32天，獲得叢生芽；其中，所述叢生芽誘導培養基為WPM+ 1.0 mg. Γ1BA+1. O mg. L-1NAA,瓊脂 6. 5 g. L-1 ,鹿糖 20 g. L-1, pH 值為 5. 7,培養基高壓滅菌 20min ；
(3)將經步驟(2)誘導培養后長出的叢生芽轉入繼代培養基中培養65天進行芽的增殖培養，芽增殖系數為7 9 ;其中，所述繼代培養基為WPM +2.0 mg. L—1 BA+1. O mg. T1NAA,瓊脂6. 5 g. L-1，蔗糖20 g. L-1，pH值為5. 7，培養基高壓滅菌20min ；
(4)切取經步驟(3)繼代培養后長出的高度為2.O cm以上的櫸樹健壯苗，植入生根培養基中培養50天，獲得再生植株，生根率為86% ;其中，所述生根培養基為生根培養基為WPM +1.0 mg. I/1 IBA+2. O g. L^1AC,瓊脂 7. O mg Γ1，蔗糖 20 g. Λ pH 值為 5. 7，培養基高壓滅菌20min ；
(5)將經步驟(4)獲得的再生植株洗凈，移植到由泥炭土和珍珠巖按體積比1:1組成的混合基質中煉苗培養10天，再室外培養100天，即可移至大田栽培，大田栽培時遮蔭一周即可，移栽成活率為95%。上述步驟(2)至(4)中的培養條件為室溫24 ± 2 °C，光照強度PPFD = 65. 5 μ . moL. m_2· s_S光照時間每天16小時。試驗結果表明，能夠得到保持母株優良性狀的大量苗木，可以100%保持原植株基因型及其所有的優良特性，具有較高的繁殖系數(343 729)。
權利要求
1.一種櫸樹組織培養快速繁殖方法，包括如下步驟 (1)將櫸樹幼嫩枝條用75%的酒精消毒25 35s，用無菌水沖洗，用0.1%升汞消毒8 12min，再用無菌水沖洗； (2)將經步驟(I)處理后的枝條切成長0.8^1. 2cm至少含有一個腋芽的莖段，植入叢生芽誘導培養基中培養28 32天，獲得叢生芽；其中，所述叢生芽誘導培養基為WPM + I. 0 3. 0 mg. L 1 BA + 0 I. 0 mg. L 1NAA,瓊脂 6. 5 g. L 1 ,鹿糖 20 g. L \ pH 值為 5. 7 ； (3)將經步驟(2)誘導培養后長出的叢生芽轉入繼代培養基中培養60飛5天，進行芽的增殖，；其中，所述繼代培養基為WPM + 2. 0 3. 0 mg. L-1 BA+1. 0 2. 0 mg. [1NAA,瓊脂6. 5g. L-1，鹿糖 20 g. I/1, pH 值為 5. 7 ； (4)切取經步驟(3)繼代培養后長出的高度為2.Ocm以上的櫸樹健壯苗，植入生根培養基中培養45 50天，獲得再生植株；其中，所述生根培養基為WPM + 0. 5 1.0 mg. T1IBA+2. 0 g. L-1AC,瓊脂 7. 0 mg L-1，蔗糖 20 g. L-1，pH 值為 5. 7 ； (5)將經步驟(4)獲得的再生植株洗凈，移植到由泥炭土和珍珠巖組成的混合基質中煉苗培養7 10天，再室外培養9(Tl00天，即可移至大田栽培。
2.如權利要求I所述櫸樹組織培養快速繁殖方法，其特征在于，步驟(I)所述櫸樹幼嫩枝條是當年生春季帶芽幼嫩枝條。
3.如權利要求I所述櫸樹組織培養快速繁殖方法，其特征在于，步驟(I)所述櫸樹幼嫩枝條是將含腋芽的櫸樹冬季落葉的健壯枝條置于裝有蒸餾水的燒杯中，25°C下進行水培15 30天后，由腋芽萌發而成的幼嫩枝條。
4.如權利要求I所述櫸樹組織培養快速繁殖方法，其特征在于，步驟(5)所述的混合基質中泥炭土和珍珠巖的體積比為1:1。
5.如權利要求I所述櫸樹組織培養快速繁殖方法，其特征在于，步驟(2)至(4)中的培養條件為室溫24 ± 2 °C，光照強度PPFD = 65.5 y . moL. m—2. s—1，光照時間每天16小時。
全文摘要
本發明公開了一種櫸樹組織培養快速繁殖方法，該方法選擇帶芽莖段為外植體，并選擇合適的各階段培養基，進行組織培養，能夠得到保持母株優良性狀的大量苗木，可以100％保持原植株基因型及其所有的優良特性，大幅度提高了繁殖系數。
文檔編號A01H4/00GK102792890SQ20121027310
公開日2012年11月28日 申請日期2012年8月3日 優先權日2012年8月3日
發明者金曉玲, 何平, 胡希軍, 張日清, 廖飛勇, 汪靈丹 申請人:中南林業科技大學