專利名稱：一種家兔精液稀釋保存液的制作方法
技術領域：
本發明涉及的是一種家兔精液稀釋保存液。
背景技術：
家兔是草食性動物，是目前國家促進畜牧業產業結構調整重點發展扶持的農業項目，同時也是目前我國農村增收致富的特色產業。近30年來，我國畜牧業取得了長足的發展，但家兔產業技術水平相比較于其它畜禽業還相對滯后，特別是繁殖技術方面，豬、牛、雞等早已實現人工授精進行繁殖，但目前家兔產業還基本采用自然交配的方式進行繁殖，嚴重制約了家兔產業的發展。長期以來，由于家兔的繁殖技術問題沒有得到突破性進展，導致家兔生產效益較低，不能充分體現規模化養殖效益。因此，改進家兔繁殖技術，采用人工授精，實現同期發 情、同期分娩、同期斷奶、同期上市的全進全出周期化生產模式顯得尤為必要；搞人工授精首先要解決的是公兔精液體外保存問題，精液稀釋保存液的研發又是重中之重，精液能有效的體外保存是人工授精技術成功的前提，同時也是該技術應用推廣的保障。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的不足提供一種家兔精液稀釋保存液。本發明的技術方案如下一種家兔精液稀釋保存液，組分為檸檬酸2. 13g，Tris3. Hg,無水葡萄糖0. 60g，溶解于IOOml蒸餾水中，然后進行高壓滅菌處理，待滅菌完冷卻后，將其放入無菌操作臺，加入2ml卵黃，青霉素20萬IU，鏈霉素20萬IU。試驗結果表明，自配的精液稀釋保存液能在4°C體外保存公兔精液60h以上，且活力大于0. 5 (活力0. 5是保證能正常進行人工授精的指標)。其在體外保存能力遠遠高于5%葡萄糖溶液和生理鹽水。同時進行的人工授精試驗(活力0. 5時)的受胎率在75%左右，試驗結果也表明，該稀釋液配方在體外保存家兔精液60h以內均可進行人工授精。


圖I為自配稀釋保存液體外保存精液IOh時間內，活力均為0. 8，無變化，但畸形率升高了 0. 78個百分點，A :正常精子；B :畸形精子。
具體實施例方式以下結合具體實施例，對本發明進行詳細說明。I試驗材料與方法I. I試驗動物選擇健康無病、繁殖力正常的I 2周歲的成年齊卡大型新西蘭公兔30只。
1.2試驗儀器與試劑試驗儀器顯微鏡、電子天平、PH計、恒溫水浴鍋、高壓滅菌鍋、冰箱、無菌操作臺、微量移液槍、采精器、血球計數板等其它玻璃儀器。試驗試劑考馬氏亮藍染色液、Tris、檸檬酸、無水葡萄糖(分析純)、卵黃、青霉素、鏈霉素、蒸餾水、5% (重量百分比)葡萄糖溶液、生理鹽水、3% (重量百分比)Nacl溶液等。1.3精液品質測 定I. 3. I精液采集采用人工制作的假陰道采精器進行人工采精。1.3.2 射精量用2. 5ml注射器進行測定，排除注射器內空氣后進行讀數、計數。1.3.3 PH 值測定采用PH計進行直接測定。I. 3. 4精子活力通過目測法以十級制評估精子的活力。I. 3. 5精子密度將采集的新鮮精液用3% Nacl做100倍體積比稀釋，搖勻稀釋精液，采用血球計數板進行計數測定。Iml原精液的精子數=5個大方格內的精子數X5X10X1000X100。I. 3. 6精子畸形率采用考馬氏亮藍染色劑染色，在1000倍下觀察計數。精子畸形率=畸形精子數/300X100%1.4精液體外保存試驗I. 4. I稀釋保存液配制電子天平準確稱取朽1檬酸2. 13g, Tris3. 17g,無水葡萄糖0. 60g,溶解于IOOml蒸餾水中，然后進行高壓滅菌處理。待滅菌完冷卻后，將其放入無菌操作臺，加入2ml卵黃，青霉素20萬IU，鏈霉素20萬IU。1.4.2體外保存研究將鮮精液用稀釋保存液稀釋，稀釋后的濃度為30X 106/ml。同時用5%葡萄糖溶液、生理鹽水做對照，原精液不做任何處理對照。將稀釋后的精液、純精液在4°C下保存。在稀釋后的 2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h、36h、48h、60h、72h 進行觀察測定。I. 5人工授精試驗采用自配稀釋保存液，稀釋后的精液，活力在0. 5時間點進行人工授精試驗，根據體外保存試驗結果，選擇在體外保存60小時時間點進行人工授精。選擇500只初配母兔(齊卡大型新西蘭)連續進行4胎人工授精，每只母兔輸精濃度為15X106。配種后采用摸胎法進行妊娠檢查。I. 6試驗數據用Excel軟件進行處理后，采用SPSS14. 0統計軟件，結果均以平均數土標準差表
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2結果與分析2. I鮮精液質量表I顯示，其射精量、活力、PH值、密度、畸形率分別為1.43ml、0.81、7. 23、3. 84XioVml>8. 87%。表I精液質量測定結果
權利要求
1.一種家兔精液稀釋保存液，其特征在于，組分為檸檬酸2. 13g，Tris3. 17g，無水葡萄糖0. 60g，溶解于IOOml蒸餾水中，然后進行高壓滅菌處理，待滅菌完冷卻后，將其放入無菌操作臺，加入2ml卵黃，青霉素20萬IU,鏈霉素20萬IU。
全文摘要
本發明公開了一種家兔精液稀釋保存液，組分為檸檬酸2.13g，Tris3.17g，無水葡萄糖0.60g，溶解于100ml蒸餾水中，然后進行高壓滅菌處理，待滅菌完冷卻后，將其放入無菌操作臺，加入2ml卵黃，青霉素20萬IU，鏈霉素20萬IU。試驗結果表明，自配的精液稀釋保存液能在4℃體外保存公兔精液60h以上，且活力大于0.5(活力0.5是保證能正常進行人工授精的指標)。其在體外保存能力遠遠高于5％葡萄糖溶液和生理鹽水。同時進行的人工授精試驗(活力0.5時)的受胎率在75％左右，試驗結果也表明，該稀釋液配方在體外保存家兔精液60h以內均可進行人工授精。
文檔編號A01N1/02GK102845413SQ20121036122
公開日2013年1月2日 申請日期2012年9月18日 優先權日2012年9月18日
發明者任永軍, 鄭潔, 楊超, 鄺良德, 謝曉紅, 雷岷, 李叢艷, 郭志強, 張翔宇, 鄧小東, 張翠霞 申請人:四川省畜牧科學研究院