專利名稱：一種厚樸皮再生劑及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于林業生物技術領域，具體提供了一種促進厚樸新皮生長的再生劑及其制備方法和應用。
背景技術：
厚樸officinalisRehcL et Wils)是木蘭科(Magnoliaceae)木蘭屬(Magnolia)落葉喬木,包括原亞種厚樸officinalis subsp. officinalD^W亞種凹葉厚樸officinalis subsp. biloba、。厚樸樹皮、根皮、枝皮是我國特有的常用中藥材，為國家重點保護的中藥材，具有祛濕、消痰、健脾、寬中下氣、除滿之功效，主治高血壓、濕滯傷中、腔腹吐瀉、食積氣滯、腹脹 便秘、痰飲喘咳、腹痛瀉痢等癥。尤其是近幾年，國內外學者通過厚樸的主要活性成分研究，證明其具有抗癌、消炎、抑制病毒等藥理作用。厚樸主要活性成分為厚樸酚、和厚樸酚，其藥材品質優劣主要反映在這兩種成份的差異上。過去厚樸的采收慣用伐樹取皮，每株只能剝皮一次，樹體即會死亡。這種殺雞取卵的方法使我國本來不多的厚樸資源更加緊缺。近年來經有關科技工作者的研究，采用環狀剝皮或帶狀剝皮，剝皮之后能重新生長出新的樹皮，使剝皮再生成功，在一株樹上實現多次剝皮的愿望。但是若是剝皮后不采取特殊的處理，新皮再生速度緩慢，常需4、5年后方可再次剝皮，有些甚至新皮再生失敗；另外新皮中活性物質含量較低，造成產品質量較差。最接近的現有技術中CN1086382A公開了一種植物增皮素，由生長素、細胞分裂素、抗菌素、殺蟲劑和營養素組成，主要用于杜仲的新皮生長，其中生長素和細胞分裂素的質量比例為I : I。這種植物增皮素智能促進新皮生長，不能提高新皮中的藥效成分含量。

發明內容
本發明為了解決厚樸剝皮后新皮生長緩慢、新皮中活性物質含量低的問題，提供了一種適用于厚樸皮再生的再生劑及其制備方法和應用，該厚樸皮再生的再生劑可以提高新皮再生速度和新皮中活性物質含量。為實現上述目的，本發明的技術方案是
一種厚樸皮再生劑，每IOOOmL再生劑中主要含有以下重量的組分
細胞分裂素50-200mg
生長素1000-2000mg
生物素50-100mg
瑞毒霉500-1200mg
不含瓊脂和蔗糖的MS干粉培養基4-5g
其余為水。優選所述每IOOOmL再生劑中主要含有以下重量的組分
細胞分裂素100-200mg生長素1500-2000mg
生物素70-100mg
瑞毒霉700-1000mg
不含瓊脂和蔗糖的MS干粉培養基4. 74g
其余為水。所述細胞分裂素優選為6-芐氨基腺嘌呤和玉米素中的一種或兩種。 所述生長素優選為a_萘乙酸和吲哚丁酸中的一種或兩種。本發明的厚樸皮再生劑的制備方法為按照所述比例，先用O. 8M-1. 2M的NaOH或KOH分別將細胞分裂素、生長素、生物素助溶，得助溶液，所述NaOH或KOH的用量以固體物質剛好完全溶解為準；再將瑞毒霉和MS干粉培養基分別用水溶解，得混合液；然后將上述助溶液與混合液混合，攪拌均勻，加水定容，得所述濃度的厚樸皮再生劑。本發明還提供了所述厚樸皮再生劑在作為植物剝皮后新皮生長促進劑方面的應用。本發明的于厚樸皮再生的再生劑若需長期保存應置于4°C冰箱中。下面對本發明做進一步解釋和說明
I、生物素，又稱VB7、維生素H、輔酶R，他們以輔酶的形式參與生物催化劑-酶系的活動，參與細胞蛋白質、脂肪、糖代謝等重要生命活動在脫羧-羧化反應和脫氨反應中起輔酶作用，其生理作用主要是由生物素酶引起的固碳作用及羧基轉移反應；生物素為正常長鏈脂肪酸的合成以及脂肪酸的基本代謝所必需；在蛋白質代謝中，生物素參與蛋白質的合成、氨基酸的脫氨基作用、嘌呤的合成以及核酸代謝。生物素含有硫，硫是硫氧還蛋白、鐵硫蛋白與固氮酶的組分，因而硫在光合、固氮等反應中起重要作用。另外，蛋白質中含硫氨基酸間的-SH基與-S-S-可互相轉變，這不僅可調節植物體內的氧化還原反應，而且還具有穩定蛋白質空間結構的作用。生物素參與代謝活動，影響植物細胞的分裂、形態發生和細胞分化，有利于植物的生長和發育。厚樸皮再生劑中使用生物素有利于樹干剝皮后形成層細胞的分裂和分化，形成新皮，有利于次生代謝物的生成。2、在細胞水平上，生長素可刺激形成層細胞分裂；刺激枝的細胞伸長，促進木質部、韌皮部細胞分化。生長素對生長的促進作用主要是促進細胞的生長，特別是細胞的伸長，同時生長素也能單獨引起細胞分裂。細胞分裂素的主要作用是促進細胞分裂，也可促進組織的分化和生長，通過細胞橫向擴大增粗，可以使細胞體積擴大。生長素與細胞分裂素在新皮再生中具有協同作用，兩者共同促進莖的增粗、皮的增厚。但是，生長素在植物體內的運輸是單方向的，只能從植物體形態學上端向形態學下端運輸，割掉一圈樹皮后需要外施生長素以促進新皮的形成。另外，莖對生長素的敏感性較低，需要使用較高濃度才能發揮作用。生長素還可以能夠改變植物體內的營養物質分配，在生長素分布較豐富的部分，得到的營養物質就多，有利于新皮的再生和活性物質的合成。因此，基于生長素和細胞分裂素的作用機制以及不同配比試驗，本厚樸皮再生劑中生長素與細胞分裂素的質量比例應大于5I比較合適。3、厚樸剝皮及再生劑的使用都在春天，且厚樸適宜栽培范圍在亞熱帶季風氣候、700以上的高山中，適生環境氣候溫和、雨量充沛、濕度較大。因此，剝皮后要重點防止創面滋生霉菌，產生病害。慶大霉素是一種氨基糖苷類抗生素，主要用于治療細菌感染，尤其是革蘭氏陰性菌引起的感染。慶大霉素不能抑制霉菌。多菌靈是一種高效、低毒、廣譜、內吸性殺菌劑，對子囊菌的許多病原菌和半知菌類的大多數病原菌有防治效果，而對卵菌和細菌引起的病害無效。瑞毒霉是一種新型的高效、低毒、內吸性殺菌劑。對霜霉、疫霉、腐霉等病原真菌引起的病害有良好的治療和預防作用，噴灑后能被植物的根、莖、葉各部分吸收，在植株體內具有向頂性和向基性雙向內吸傳導作用，30分鐘即可進入植物體內，并迅速上下移動傳導至各部位，施藥后不怕雨水沖刷，具有良好的保護和治療作用，殘效期較長，施藥間隔比其他殘效性的殺菌劑長得多，對植物安全，對人畜低毒。在發病前和發病初期用藥都能收到防病和治療效果。瑞毒霉還對殺滅囷卵綱的病原囷有特殊的效力。因此，本發明使用瑞毒霉作為殺菌劑，既可以殺菌又可以防蟲。4、MS干粉培養基為市購產品，一種營養兀素比較完全的培養基,含有植物生長必需的元素，包括大量元素碳、氫、氧、氮、磷、鉀、韓、鎂、硫和微量元素鐵、猛、鋅、硼、銅、鑰、 氯、鎳等。另外還含有氨基酸、維生素、肌醇等有機物質，他們以輔酶的形式參與生物催化劑——酶系的活動，參與細胞的蛋白質、脂肪、糖代謝等重要生命活動，參與細胞體內離子平衡作用，對植物組織的生長具有良好的促進作用。使用MS培養基，有利于皮的再生及新皮的生長，并有利于代謝產物的合成。5、本發明的厚樸皮再生劑能夠提高新皮中的有效成分含量，是跟試劑中添加的營養成分(MS液體培養基)、生物素、細胞分裂素和生長素有關系的，這些元素和物質協同作用，不但促進新皮的再生，還促進物質的代謝和轉運，刺激有效成分的合成，從而提高含量。6、生長素和生物素要先分別用IM NaOH溶解，是因為植物激素很難直接溶于水或者在水中的溶解度非常小，因此，要配成水溶液時需要使用助溶劑先溶解再加入水。與現有技術相比，本發明的優勢是
本發明的厚樸皮再生劑，一方面能夠促進厚樸剝皮后新皮的生長，縮短再生時間，2年后新皮厚度基本可以達到老皮厚度；另一方面能提高新皮中活性物質含量，新皮與老皮相t匕，厚樸總酚含量提高10%_40%以上，實現了厚樸可持續再生利用。
具體實施例方式以下結合實施例對本發明進行詳細說明。本發明實施例所述百分含量均指質量百分含量。所述不含瓊脂和蔗糖的MS干粉培養基為市購產品，如上海宇涵生物科技有限公司
坐寸ο實施例I :
原料配方
配制1000 mL厚樸皮再生劑原料用量為6_芐氨基腺嘌呤(6-BA)50mg，a_萘乙酸(NAA) 2000mg,生物素50mg,瑞毒霉IOOOmg, MS干粉培養基(不含鹿糖和瓊脂)4. 74g,水定容至 1000mL。制法a):先用少許IM NaOH分別將細胞分裂素、生長素、生物素助溶，得助溶液，以固體物質完全溶解為準；再將瑞毒霉和MS干粉培養基分別用水溶解，得混合液；b):上述助溶液與混合液混合均勻，加水定容至IOOOmL,攪拌均勻避光保存。再生劑使用方法采用帶狀剝皮法將厚樸樹皮剝去一部分，剝皮時注意刀和手都不要觸及形成層和木質部。剝皮后及時在剝皮表面噴灑此再生劑溶液，然后用塑料薄膜包扎剝面，上、下扎緊，中間重疊處用膠帶粘貼。全株新皮完整愈合后方可解膜。2年后，剝取同一樹干高度的老皮和新皮，分別測定皮厚度和厚樸總酚含量。老皮厚度2. 77mm，新皮厚度2. 59mm，基本達到老皮厚度；老皮中厚樸總酚含量3. 13%，新皮中厚樸總酚含量3. 58%，提高14. 37%。實施例2
原料配方
配制1000 mL厚樸皮再生劑原料用量為6_芐氨基腺嘌呤(6-BA) lOOmg，吲哚丁酸(IBA) IOOOmg,生物素IOOmg,瑞毒霉500mg, MS干粉培養基(不含鹿糖和瓊脂)4. 74g,水定容至 1000mL?！ぁげ捎脤嵤├齀同樣的配制方法，直接用上述再生劑對樹干剝皮后的剝面進行噴灑和處理。2年后，老皮厚度2. 92mm,新皮厚度2. 71mm,基本達到老皮厚度；老皮中厚樸總酚含量2. 94%，新皮中厚樸總酚含量3. 62%，提高23. 13%。實施例3
原料配方
配制1000 mL厚樸皮再生劑原料用量為6_芐氨基腺嘌呤(6-BA) 200mg，a_萘乙酸(NAA) 1500mg,生物素IOOmg,瑞毒霉IOOOmg, MS干粉培養基(不含鹿糖和瓊脂)4. 74g,水定容至 1000mL。采用實施例I同樣的配制方法，直接用上述再生劑對樹干剝皮后的剝面進行噴灑和處理。2年后，老皮厚度3. 06mm,新皮厚度2. 97mm,基本達到老皮厚度；老皮中厚樸總酚含量2. 79%，新皮中厚樸總酚含量3. 65%，提高30. 82%。實施例4
原料配方
配制1000 mL厚樸皮再生劑原料用量為6_芐氨基腺嘌呤(6-BA) 200mg，吲哚丁酸(IBA) 1500mg,生物素50mg,瑞毒霉500mg,MS干粉培養基(不含鹿糖和瓊脂)4. 74g,水定容至 1000mL。采用實施例I同樣的配制方法，直接用上述再生劑對樹干剝皮后的剝面進行噴灑和處理。2年后，老皮厚度2. 95mm,新皮厚度2. 83mm,基本達到老皮厚度；老皮中厚樸總酚含量3. 06%,新皮中厚樸總酚含量3. 69%，提高20. 59%。實施例5
原料配方
配制1000 mL厚樸皮再生劑原料用量為玉米素(ZT)50mg，吲哚丁酸(IBA)lOOOmg，生物素50mg,瑞毒霉IOOOmg, MS干粉培養基(不含鹿糖和瓊脂)4. 74g,水定容至1000mL。采用實施例I同樣的配制方法，直接用上述再生劑對樹干剝皮后的剝面進行噴灑和處理。2年后，老皮厚度3. 13mm,新皮厚度2. 89mm,基本達到老皮厚度；老皮中厚樸總酚含量3. 56%，新皮中厚樸總酚含量3. 94%，提高10. 67%。實施例6 原料配方
配制1000 mL厚樸皮再生劑原料用量為
玉米素(ZT) lOOmg, a-萘乙酸(NAA) 1500mg,生物素IOOmg,瑞毒霉500mg,MS干粉培養基(不含蔗糖和瓊脂)4. 74g，水定容至1000mL。采用實施例I同樣的配制方法，直接用上述再生劑對樹干剝皮后的剝面進行噴灑和處理。2年后，老皮厚度2. 85mm,新皮厚度2. 67mm,基本達到老皮厚度；老皮中厚樸總酚含量2. 84%，新皮中厚樸總酚含量3. 52%，提高23. 94%。實施例7
原料配方
配制1000 mL厚樸皮再生劑原料用量為玉米素(ZT) 200mg，吲哚丁酸(IBA) 2000mg， 生物素IOOmg,瑞毒霉500mg, MS干粉培養基(不含鹿糖和瓊脂)4. 74g,水定容至1000mL。采用實施例I同樣的配制方法，直接用上述再生劑對樹干剝皮后的剝面進行噴灑和處理。2年后，老皮厚度2. 67mm，新皮厚度2. 61mm，基本達到老皮厚度；老皮中厚樸總酚含量2. 55%，新皮中厚樸總酚含量3. 63%，提高42. 35%。實施例8
原料配方
配制1000 mL厚樸皮再生劑原料用量為玉米素(ZT) 200mg，a-萘乙酸(NAA) IOOOmg,生物素50mg,瑞毒霉IOOOmg, MS干粉培養基(不含鹿糖和瓊脂)4. 74g,水定容至1000mL。采用實施例I同樣的配制方法，直接用上述再生劑對樹干剝皮后的剝面進行噴灑和處理。2年后，老皮厚度2. 89mm,新皮厚度2. 72mm,基本達到老皮厚度；老皮中厚樸總酚含量3. 20%，新皮中厚樸總酚含量3. 73%，提高16. 56%。
權利要求
1.一種厚樸皮再生劑，其特征是，每IOOOmL再生劑中主要含有以下重量的組分 細胞分裂素50-200mg 生長素1000-2000mg 生物素50-100mg 瑞毒霉500-1200mg 不含瓊脂和蔗糖的MS干粉培養基 4-5g 其余為水。
2.根據權利要求I所述厚樸皮再生劑，其特征是，所述每IOOOmL再生劑中主要含有以下重量的組分 細胞分裂素100-200mg 生長素1500-2000mg 生物素70-100mg 瑞毒霉700-1000mg 不含瓊脂和蔗糖的MS干粉培養基4. 74g 其余為水。
3.根據權利要求I或2所述厚樸皮再生劑，其特征是，所述細胞分裂素為6-芐氨基腺嘌呤和玉米素中的一種或兩種。
4.根據權利要求I或2所述厚樸皮再生劑，其特征是，所述生長素為a-萘乙酸和吲哚丁酸中的一種或兩種。
5.權利要求I或2所述厚樸皮再生劑的制備方法，其特征是，具體步驟為按照所述比例，先用O. 8M-1. 2M的NaOH或KOH分別將細胞分裂素、生長素、生物素助溶，得助溶液，所述NaOH或KOH的用量以固體物質剛好完全溶解為準；再將瑞毒霉和MS干粉培養基分別用水溶解，得混合液；然后將上述助溶液與混合液混合，攪拌均勻，加水定容，得所述濃度的厚樸皮再生劑。
6.權利要求1-4之一所述厚樸皮再生劑在作為植物剝皮后新皮生長促進劑方面的應用。
全文摘要
本發明屬于植物皮再生劑領域，具體公開了一種厚樸皮再生劑。該再生劑由細胞分裂素、生長素、生物素、瑞毒霉、MS干粉培養基配制而成。該厚樸皮再生劑能促進厚樸剝皮后形成層細胞的分裂和生長，刺激新皮再生和新皮中活性物質的形成。使用本發明的厚樸皮再生劑2年后，再生新皮厚度基本可達到老皮厚度，新皮中厚樸總酚含量比老皮提高10%-40%以上，縮短了厚樸剝皮間隔時間，并保證了藥材的質量和藥效。
文檔編號A01N37/10GK102870792SQ201210407968
公開日2013年1月16日 申請日期2012年10月24日 優先權日2012年10月24日
發明者王曉明, 蔡能, 宋慶安, 蔣麗娟, 裴剛, 李永欣, 曾慧杰 申請人:湖南省林業科學院