專利名稱：一種金線蓮的組培繁殖方法
技術領域：
本發明涉及植物組織培養方法，尤其是涉及一種金線蓮的組培快速繁殖方法。
背景技術：
由于金線蓮具備顯著的藥用功效，具有清熱、涼血、降血壓、抗菌、抗癌等功效，因此金線蓮的藥用價值已被世人所認可，并被廣泛地使用。但是金線蓮在自然條件下繁殖率低、生長速度很慢，加之自然條件的惡化和人類行為破壞，已導致其瀕臨滅絕，致使金線蓮供不應求。為滿足市場的需求，金線蓮的人工繁殖及培養技術被大量研究及應用。在種子繁殖、扦插繁殖和組培繁殖中，組培繁殖是最適合金線蓮人工培育的繁殖方法，組培繁殖技術 是實現金線蓮規模化、產業化培育和生產的最優技術。中國專利CN102090341A公開一種金線蓮的快繁方法，包括種苗消毒、芽誘導、芽增殖、幼苗培養、根誘導、試管苗移栽，所述芽增殖的培養基為去除肌醇的MS+ZnS04 · 7H206mg/L+KH2P04180mg/L+6-BA4mg/L+NAAlmg/L+2% 蔗糖。中國專利CN102100171A公開一種金線蓮水培方法，該方法將金線蓮種苗清洗消毒后，移植到培養盤中，置于裝有水培營養液的培養槽內培育，每IOL水培營養液中含有四水硝酸鈣65(T800mg，硝酸銨5(T60mg，硝酸鉀28(T350mg，磷酸二氫鉀10(Tl30mg，硫酸鎂35(T380mg,碘化鉀O. 5 O. 8mg,硫酸錳2 5mg，鑰酸鈉O. 2 O. 3mg,氯化鈷O. I O. 2mg,硼酸2 4mg,硫酸鋅O. 5 lmg,硫酸銅O. 3^0. 5mg,鐵鹽溶液3 5ml ;鐵鹽溶液是由水、七水硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二鈉配制而成。

發明內容
本發明的目的在于提供能夠快速促進金線蓮莖段的快速繁殖并生長的一種金線蓮的組培繁殖方法。本發明包括以下步驟I)取金線蓮的莖段作為外植體材料，將外植體消毒；2)莖段不定芽的誘導；3)組培苗的培育；4)組培苗移栽。在步驟I)中，所述金線蓮最好選用野生金線蓮；所述外植體為除去金線蓮葉片后的野生金線蓮莖段；所述外植體消毒的具體方法可為( I)將外植體置于流動水中沖洗；所述沖洗的時間可為I 3h。(2)對沖洗后的外植體浸潤滅菌；所述滅菌可在水平超凈工作臺內完成，外植體放置于已消毒的容器中并用酒精浸泡，所述浸泡的時間可為10 30s。(3)將步驟(2)浸潤滅菌后的外植體放入HgCl溶液滅菌，所述HgCl溶液的質量分數可為O. 1%，所述滅菌的時間可為5 20min。
(4)將步驟(3)處理后的外植體用無菌水進行涮洗，所述涮洗的條件可為涮洗5 10次,每次涮洗的時間可為I 5min。在步驟2)中，所述莖段不定芽的誘導方法可為將已消毒的外植體莖段切成3段，分別接種于MS培養基上，莖段不定芽誘導后，轉接到增殖培養基，培養后得到組培苗；所述切成3段可切成上段、中段和下段，所述上段切除莖尖，所述上段、中段和下段的長度可分別為O. 5 I. Ocm,所述上段、中段和下段最好每段均帶有I 2個節間；所述培養的時間可為2 4個月；所述增殖培養基的組分為MS培養基+細胞分裂素(6-芐氨基腺嘌呤，6-BA) O. I O. 5mg/L+激動素(6-糖基氨基嘌呤，KT) O. I O. 5mg/L+生長素Ca-萘乙酸，NAA>0. I O. 5mg/L+ 吲哚丁酸(IBA)O. I O. 5mg/L+ 水解酪蛋白(CH) O. 3 O. 5g/L+香蕉50 80g/L+活性碳O. 5 I. 5g/L+鹿糖25 40g/L+瓊脂6. 5 8g/L ;增殖培養基的pH可為5. 8 6。在步驟3)中，所述組培苗的培育方法可為將組培苗接種于生根培養基上，經過 培育得到生根組培金線蓮苗，培育的環境條件為溫度(24±2)°C，光照時間llh/d，光照強度900 20001UX，培育時間為2 3個月；所述生根培養基的組分為1/2MS培養基+細胞分裂素(6-芐氨基腺嘌呤，6-BA) O. I O. 5mg/L+激動素(6-糖基氨基嘌呤，KT) O. I O. 5mg/L+生長素(a-萘乙酸，NAA) O. I O. 5mg/L+水解酪蛋白(CH)O. 3 O. 5g/L+香蕉100 120g/L+活性碳I I. 5g/L+鹿糖15 30g/L+瓊脂6. 5 8g/L ;生根培養基的pH可為5. 8 6。在步驟4)中，所述組培苗移栽方法可為將生根組培金線蓮苗移栽大棚，大棚的基質按質量比的原料組成為泥炭土 菜園土 蛭石=2 : I : I。本發明提供了一套金線蓮的組培快速繁殖的方法，其優點在于I.本發明選用不含頂芽和長根的中間莖段作為培養對象，成活率高，不定芽增殖率高。2.在培養基中加入香蕉對于促進幼苗生長非常有利，葉片凈增量、發根數和鮮重凈增量高。3.經過組培試驗，增殖率可達5. 7倍。
具體實施例方式以下通過實施例對本發明做進一步說明。實施例I :選取除去金線蓮葉片后的野生金線蓮莖段作為外植體，本實施例通過以下四步進行組培。I)取野生金線蓮的莖段作為外植體材料，將外植體進行消毒。2)莖段不定芽的誘導。3)組培苗的培育。4)組培苗移栽。在外植體消毒過程需要準備的器材及物品已消毒的燒杯、玻璃棒、70%酒精、
O.1%的HgCl溶液、無菌水、秒表等。具體的消毒過程為第一步，將外植體置于流動的自來水中沖洗約2h ；
第二步，對沖洗后的外植體浸潤滅菌。滅菌過程在水平超凈工作臺內完成，外植體放置于已消毒的燒杯中并用70%酒精浸泡10 30s。第三步，滅菌劑處理。將經過第二步處理后的外植體放入O. 1%的HgCl溶液滅菌約 IOmin。第四步，無菌水涮洗。對經過第三步處理后的外植體用無菌水進行涮洗，涮洗8次，每次3min。莖段不定芽的誘導過程為將消毒好的外植體(莖段)按上段(切除莖尖)、中段和下段切成長約(O. 5 I. O) cm、并帶有I 2個節間的小段，分別接種于MS培養基上。莖段不定芽誘導后，轉接到增殖培養基，3個月后得到組培苗。組培苗的培育過程為將組培苗接種于生根培養基上，經過培育得到生根組培金線蓮苗。本過程培育的環境條件為溫度(24±2) °C，光照時間llh/d，光照強度900 20001ux。培育時間為2 3個月。組培苗移栽過程為將生根組培金線蓮苗移栽大棚，大棚的基質原料及比例為泥炭土 菜園土 蛭石=2 : I : I。所述增殖培養基的組分及配比見表I。表I增殖培養基的組分
權利要求
1.一種金線蓮的組培繁殖方法，其特征在于包括以下步驟 1)取金線蓮的莖段作為外植體材料，將外植體消毒； 2)莖段不定芽的誘導； 3)組培苗的培育； 4)組培苗移栽。
2.如權利要求I所述的一種金線蓮的組培繁殖方法，其特征在于在步驟I)中，所述金線蓮選用野生金線蓮。
3.如權利要求I所述的一種金線蓮的組培繁殖方法，其特征在于在步驟I)中，所述外植體為除去金線蓮葉片后的野生金線蓮莖段。
4.如權利要求I所述的一種金線蓮的組培繁殖方法，其特征在于在步驟I)中，所述外植體消毒的具體方法為 (1)將外植體置于流動水中沖洗； (2)對沖洗后的外植體浸潤滅菌； (3)將步驟(2)浸潤滅菌后的外植體放入HgCl溶液滅菌； (4)將步驟(3)處理后的外植體用無菌水進行涮洗。
5.如權利要求4所述的一種金線蓮的組培繁殖方法，其特征在于在步驟(I)中，所述沖洗的時間為I 3h ;在步驟(2)中，所述滅菌在水平超凈工作臺內完成，外植體放置于已消毒的容器中并用酒精浸泡，所述浸泡的時間為10 30s ;在步驟(3)中，所述HgCl溶液的質量分數為O. 1%,所述滅菌的時間為5 20min ;在步驟(4)中，所述涮洗的條件為涮洗5 10次,每次涮洗的時間為I 5min。
6.如權利要求I所述的一種金線蓮的組培繁殖方法，其特征在于在步驟2)中，所述莖段不定芽的誘導方法為將已消毒的外植體莖段切成3段，分別接種于MS培養基上，莖段不定芽誘導后，轉接到增殖培養基，培養后得到組培苗。
7.如權利要求6所述的一種金線蓮的組培繁殖方法，其特征在于所述切成3段是切成上段、中段和下段，所述上段切除莖尖，所述上段、中段和下段的長度可分別為O. 5 I. 0cm，所述上段、中段和下段最好每段均帶有I 2個節間；所述培養的時間可為2 4個月。
8.如權利要求6所述的一種金線蓮的組培繁殖方法，其特征在于所述增殖培養基的組分為MS培養基+細胞分裂素(6-芐氨基腺嘌呤，6-BA)0. I O. 5mg/L+激動素(6-糖基氨基嘌呤，ΚΤ)0. I O. 5mg/L+生長素(a-萘乙酸，ΝΑΑ)0. I O. 5mg/L+吲哚丁酸(IBA)O. I O. 5mg/L+水解酪蛋白(CH)O. 3 O. 5g/L+香蕉50 80g/L+活性碳O. 5 I. 5g/L+鹿糖25 40g/L+瓊脂6. 5 8g/L ;增殖培養基的pH可為5. 8 6。
9.如權利要求I所述的一種金線蓮的組培繁殖方法，其特征在于在步驟3)中，所述組培苗的培育方法為將組培苗接種于生根培養基上，經過培育得到生根組培金線蓮苗，培育的環境條件為溫度24±2°C，光照時間llh/d，光照強度900 20001UX，培育時間為2 3個月；所述生根培養基的組分為1/2MS培養基+細胞分裂素(6-芐氨基腺嘌呤，6-BA)O. I O. 511^/1+激動素(6-糖基氨基嘌呤，1(1')0· I O. 5mg/L+生長素(a-萘乙酸，NAA)O. I O. 5mg/L+ 水解酪蛋白(CH) O. 3 O. 5g/L+ 香蕉 100 120g/L+ 活性碳 I I. 5g/L+鹿糖15 30g/L+瓊脂6. 5 8g/L ;生根培養基的pH可為:5· 8 6。
10.如權利要求I所述的一種金線蓮的組培繁殖方法，其特征在于在步驟4)中，所述組培苗移栽方法為將生根組培金線蓮苗移栽大棚，大棚的基質按質量比的原料組成為 泥炭土 菜園土 蛭石=2:1:1。
全文摘要
一種金線蓮的組培繁殖方法，涉及植物組織培養方法。提供能夠快速促進金線蓮莖段的快速繁殖并生長的一種金線蓮的組培繁殖方法。取金線蓮的莖段作為外植體材料，將外植體消毒；莖段不定芽的誘導；組培苗的培育；組培苗移栽。選用不含頂芽和長根的中間莖段作為培養對象，成活率高，不定芽增殖率高。在培養基中加入香蕉對促進幼苗生長非常有利，葉片凈增量、發根數和鮮重凈增量高。經過組培試驗，增殖率可達5.7倍。
文檔編號A01H4/00GK102907327SQ20121044259
公開日2013年2月6日 申請日期2012年11月7日 優先權日2012年11月7日
發明者方金鎮, 鄭志紅, 方加強 申請人:廈門加晟生物科技有限公司