專利名稱：一種胚挽救和離體誘導相結合構建異源多倍體水稻的方法
技術領域：
本發明涉及一種野生稻與栽培稻雜交育種的方法，特別是一種野生稻與栽培稻雜交后通過胚挽救和離體誘導加倍相結合構建異源多倍體水稻的品種選育方法，屬于現代農業的作物新品種選育技術領域。
背景技術：
面臨世界糧食危機的挑戰，急需大幅度增產糧食的技術和思路。然而，長期以來，稻類作物主要通過同一物種內的不同品種間雜交來選育新品種。由于栽培物種在長期進化和人工選擇中，原本存在于野生物種的許多優良基因被淘汰，導致雜交親本間遺傳基礎越來越窄，遺傳的多樣性越來越貧乏(孟金陵.植物生殖遺傳，1995 ;Khush GS.Disease andinsect resistance in rice.Adv Agron, 1977, 29:265-341),從而造成幾十年來水稻選育品種的相似性很高，增產的幅度很難超過5%。因此，開拓育種新思路，充分利用20多個野生稻物種極為豐富的遺傳多樣性和許多寶貴的抗病蟲、抗逆境和高產優質的基因，將成為超級稻育種的重要方向(湯圣祥，顏輝煌.國外對野生稻優良性狀的利用進展.水稻文摘，1992，11(1): 5-8)。可是，由于有性雜交原理的限制，A基因組的栽培稻很難與BB，CC,BBCC, (XDD，EE, FF, GG, HHKK, HHJJ等9個基因組的野生稻種間雜交(王愛云，陳冬玲，蔡得田.遠緣雜交和異源多倍體化技術在水稻育種中的應用.武漢植物學研究，2005，23(5): 491-495)，分布于野生稻中的有利基因很難被結合到A基因組的栽培稻中。所以，建立栽培稻與野生稻不同基因組物種間雜交獲得異源雜交種或異源多倍體雜種的技術是十分必要和具有重要意義的。本發明涉及的是一種栽培稻與野生稻雜交，構建異源多倍體水稻的技術。發明內容
本發明的目的是建立栽培稻與野生稻雜交，通過胚挽救培養與秋水仙素處理相結合構建異源多倍體水稻的新品種(系)選育方法。
本發明的技術方案為:a.暗處理野生稻會聚栽培稻開花期；b.栽培稻與野生稻雜交；c.雜交后噴灑幼胚發育促進液；d.胚挽救培養；e.雜交胚生長出芽苗或愈傷組織；f.秋水仙素處理芽苗或愈傷組織；g.處理后芽苗或愈傷組織的恢復培養；h.芽苗的生根培養或愈傷組織的分化培養組培苗的移植異源雜種苗的選擇；k.異源四倍體或異源六倍體水稻的確定。
本發明的具體過程 a.暗處理野生稻使其會聚栽培稻開花期 由于野生稻是典型的短日照植物，在亞熱帶到溫帶地區自然情況下，絕大多數野生稻物種不能在栽培稻多數品種7月 8月開花時開花，給雜交工作造成很大困難。為了使兩類親本的開花期相遇，因此，必須對野生稻進行短日照處理，即采用紅黑雙層布將具7片葉以上的野生稻苗罩起來，使光照時期控制在8.5hr 9.0hr/日，處理時間從6月初至7月初共30天，這樣野生稻均可進入生殖生長期相繼在7月中旬 8月中旬開花，與栽培稻品種的花期相遇。
b.栽培稻與野生稻雜交 考慮到野生稻凌晨開花，而花粉在30分鐘內失活的特點和野生稻容易落粒的特性，以栽培稻為母本，于雜交前一日的下午去雄后套袋，以野生稻為父本，于開花當日的凌晨5:00 8:30取野生稻的開花穗，將花粉抖落在已去雄的栽培稻穗子上完成授粉，然后套袋注明雜交的父母本及日期。
c.雜交后噴灑幼胚發育促進液 授粉后的第2天 12天，每天下午打開雜交袋向稻穗噴灑10mg/l 30mg/l 2，4一D+50mg/l 100mg/lGA3的幼胚發育促進激素溶液，促進雜交胚的發育。
d.胚挽救培養 授粉后的第7天一 12天取出雜交子房，經消毒處理后，接種在N6 + 0.5mg/l 2.0mg/I NAA + 0.5mg/l 1.0mg/l 6-BA + 5%蔗糖+ 0.75%瓊脂的胚挽救培養基中，置于25°C，暗條件下培養。
e.雜交胚生長出芽苗或愈傷組織 培養3 4周后，雜交胚一方面長出芽苗，另一方面會誘導出愈傷組織，此時放在光照2000 LX, 10hr-12hr/d、25°C下培養7 10天，讓芽苗長叢芽或愈傷組織旺盛長大。
f.秋水仙素處理芽苗或愈傷組織 將生長旺盛的叢芽苗置于N6 + 0.5mg/l 1.0mg/1 NAA + 1.5mg/l 2.0mg/1 6-BA+3%蔗糖+ 500mg/l 750mg/l秋水仙素的芽苗加倍培養基中；或者將生長旺盛的愈傷組織置于N6 + 0.3mg/l 0.5mg/l NAA + 0.5mg/l 1.0mg/1 6-BA +1.0mg/1 1.5mg/l 2,4-D+ 5%蔗糖+ 500mg/l 750mg/l秋 水仙素的愈傷組織加倍培養基中，置于溫室(25°C)，每分鐘50轉-60轉搖床上處理48hr_60hr.g.處理后芽苗或愈傷組織的恢復培養 取出加倍處理的芽苗或愈傷組織用無菌水沖洗三次，無菌濾紙吸干表面水分后，將芽苗轉接于 N6 + 0.5mg/l 1.0mg/1 NAA + 1.5mg/l 2.0mg/1 6-BA + 3%蔗糖 + 0.75%瓊脂的芽苗恢復培養基中，將愈傷組織轉接于N6 + 0.3mg/l 0.5mg/l NAA + 0.5mg/l 1.0mg/1 6-BA +1.0mg/1 1.5mg/l 2,4-D+ 5%蔗糖+ 0.75%瓊脂的愈傷組織恢復培養基中恢復培養7-10天。
h.芽苗的生根培養或愈傷組織的分化培養 將恢復的芽苗接種到 1/2MS+0.3mg/l 0.5mg/l 6-BA +0.3mg/l 0.5mg/l NAA+2%sucrose+0.75% agar的生根培養基中生根,7天 15天芽苗分化長根而成為完整的小植株；將恢復的愈傷組織接種到MS+0.3mg/l 0.5mg/l NAA +1.5mg/l 2.0mg/1 6-BA+0.5mg/l 1.0mg/1 KT +3% sucrose + 0.75% agar 的分化培養基中，15 天 25 天后分化出苗，再轉接到芽苗生根培養基中分化出根而成為小植株。
1.組培苗的移植 將組培苗的瓶塞打開，加入IOml 15ml的無菌水，置于實驗室(20°C 25°C)，煉苗2天后，于下午4:30后，將組培苗用清水洗凈根部后移植于整平細的小苗床的水田中，罩上遮陽網，保持苗床濕潤，并于中午向遮陽網內噴施1/10MS大量元素和微量元素溶液連續5天，使秧苗正常生長后打開遮陽網。
j.異源雜種苗的選擇 比較觀察栽培稻和野生稻親本及其雜種苗，從植株形態，葉片大小，葉鞘顏色，稻穗形狀，穎殼大小，芒的有無和長短等形狀差異，初步挑選出栽培稻/野生稻異源雜種苗。
k.異源四倍體或異源六倍體水稻的確定 利用根尖染色制片技術，觀察異源雜種苗的根尖染色體數目，確定雜種是異源四倍體(如栽培稻(AA)與斑點野生稻(BB)雜種2n=4X=AABB=48)，或異源六倍體(如栽培稻(AA)與高桿野生稻(CXDD )的雜種，2n=6X=AA(XDD=72 )，然后再用基因組原位雜交技術(GISH)或不同基因組專有的分子標記確定雜種是否為異源多倍體。
本發明通過調整野生稻花期使其與栽培稻開花相遇而雜交，經過激素處理促進雜交胚發育，并通過胚挽救培養促進雜種生長成芽苗或誘導出愈傷組織，再通過秋水仙素處理芽苗或愈傷組織而獲得染色體加倍的芽苗或愈傷組織，經過組培苗移栽而成為水稻植株，再通過形態特征觀察、細胞染色體數檢查、基因組原位雜交(GISH)和基因組專有標記檢測而確定為異源雜種和異源多倍體。利用本發明已獲得6個基因組間20多個物種的異源雜種和異源多倍體，為開拓栽培稻/野生稻雜交育種新途徑和充分利用野生稻有利基因提供了技術支持。


圖1為本發明胚挽救培養圖片， 圖2為本發明雜交胚生長出芽苗及愈傷組織圖片， 圖3為本發明秋水仙素處理愈傷組織圖片， 圖4為本發明組織培養得到完整植株圖片， 圖5為本發明栽培稻/斑點野生稻的異源雜種苗(AB)圖片， 圖6為本發明異源四倍體水稻染色體數目觀察(2n=4X=AABB=48)圖片， 圖7為本發明基因組原位雜交(異源四倍體水稻AABB)圖片， 圖8為本發明栽培稻/高桿野生稻的異源雜種苗(ACD)圖片， 圖9為本發明異源六倍體水稻根尖染色體觀察(2n=6X=AACXDD=72)圖片。
`具體實施方式
下面以實施例對本發明進一步說明: 1.栽培稻/斑點野生稻(AABB)異源四倍體的選育 a.暗處理野生稻會聚栽培稻開花期 斑點野生稻(Oryza punctata")是典型的短日照植物，在亞熱帶到溫帶地區自然情況下，不能在栽培稻品種開花時開花。為了使兩類親本的開花期相遇，對斑點野生稻進行短日照處理，即采用紅黑雙層布罩將具7片葉以上的斑點野生稻苗罩起來，使光照時期控制在8.5hr/d，共處理30天后，斑點野生稻進入生殖生長期而在8月上旬開花，與栽培稻品種Sgdts96、HN2026和日本晴的花期相遇。
b.栽培稻與野生稻雜交 考慮到斑點野生稻凌晨開花、花粉在30分鐘內失活和容易落粒的特性，以栽培稻Sgdts96、HN2026和日本晴為母本，于雜交前一日的下午去雄后套袋，以斑點野生稻為父本，于開花當日的凌晨5:00 6:30取野生稻的開花穗，將花粉抖落在已去雄的栽培稻穗子上完成授粉，然后套袋注明雜交的父母本及日期。
c.雜交后噴灑幼胚發育促進液 授粉后的第2天 12天，每天下午打開雜交袋向稻穗噴灑10mg/l 30mg/l2,4-D+50mg/l 100mg/lGA3的幼胚發育促進液,促進雜交胚的發育。
d.胚挽救培養 授粉后的第7天 12天取出雜交子房,經消毒處理后,接種到N6 + 0.5mg/l 2.0mg/I 6-BA +0.5mg/l 2.0mg/1 NAA + 5%蔗糖+ 0.75%瓊脂的胚挽救培養基中，置于25°C，暗條件下培養(圖1)。
e.雜交胚生長出芽苗或愈傷組織 培養3 4周后，雜交胚一方面長出芽苗，另一方面會誘導出愈傷組織。此時在光照2000 LX, 10hr-12hr/d 25°C下培養7 10天，讓芽苗長叢芽或愈傷組織旺盛長大(圖2)。
f.秋水仙素處理芽苗或愈傷組織 將生長旺盛的叢芽苗置于N6 + 0.5mg/l 1.0mg/1 NAA + 1.5mg/l 2.0mg/1 6-BA+ 3%蔗糖+ 500mg/l 750mg/l秋水仙素的芽苗加倍培養基中；或者將生長旺盛的愈傷組織置于 N6 + 0.3mg/l 0.5mg/l NAA + 0.5mg/l 1.0mg/1 6-BA+1.0mg/1 1.5mg/I 2，4-D+ 5%蔗糖+ 500mg/l 750mg/l秋水仙素的愈傷組織加倍培養基中，置于溫室(25°C )，每分鐘50轉 60轉搖床處理48hr 60hr (圖3).g.處理后芽苗或愈傷組織的恢復培養 取出加倍處理的芽苗或愈傷組織用無菌水沖洗三次，無菌濾紙吸干表面水分后，將芽苗轉接于 N6 + 0.5mg/l 1.0mg/1 NAA +1.5mg/l 2.0mg/1 6-BA + 3% 蔗糖 + 0.75%瓊脂的芽苗恢復培養基中，將愈傷組織轉接于N6 + 0.3mg/l 0.5mg/l NAA + 0.5mg/l 1.0mg/1 6-BA +1.0mg/1 1.5mg/l 2,4-D+ 5%蔗糖+ 0.75%瓊脂的愈傷組織恢復培養基中恢復培養7 10天。
h.芽苗的生根培養或愈傷組織的分化培養 將恢復的芽苗接種到 1/2MS + 0.3mg/l 0.5mg/l 6BA +0.3mg/l 0.5mg/l NAA +2%sucrose + 0.75% agar的生根培養基中生根而成為完整的小植株(圖4);將恢復的愈傷組織接種到 MS + 0.3mg/l 0.5mg/l NAA +1.5mg/l 2.0mg/1 6BA + 0.5mg/l 1.0mg/I KT +3%sucrose + 0.75%agar的分化培養基中分化出苗，再轉接到芽苗生根培養基中分化出根而成為小植株。
1.組培苗的移植 將組培苗的瓶塞打開，加入15 ml無菌水，置于實驗室(20°C 25 V )，煉苗2天后，于下午4:30后，將組培苗用清水洗凈根部后移植于整平細的小苗床的水田中，罩上遮陽網，保持苗床濕潤，并于中午朝遮陽網內噴施1/10MS大量元素和微量元素溶液，連續5天，使秧苗正常生長后打開遮陽網。
j.異源雜種苗的選擇將雜種苗與栽培稻和斑點野生稻親本進行觀察比較，從植株形態，葉片大小，葉鞘顏色，稻穗形狀，穎殼大小，芒的有無和長短等性狀差異中，初步挑選出栽培稻/斑點野生稻的異源雜種苗(圖5)。
k.異源四倍體水稻的確定 利用根尖染色體制片技術，觀察異源雜種苗的根尖染色體數目，確定雜種是四倍體，即栽培稻(AA)與斑點野生稻(BB)雜種2n=4X=AABB=48 (圖6)。然后再用基因組原位雜交技術(GISH)(圖7)或BB基因組專有的分子標記進一步確定雜種為異源四倍體。
實施例2.栽培稻/高桿野生稻Wia)異源六倍體水稻的選育 a.暗處理野生稻會聚栽培稻開花期 高桿野生稻(&TM alta)是典型的短日照植物，在亞熱帶到溫帶地區自然情況下，不能在栽培稻品種開花時開花。為了使兩類親本的開花期相遇，對高桿野生稻進行短日照處理，采用紅黑雙層布罩將具7片葉以上的高桿野生稻苗罩起來，使光照時期控制在8.5 hr/d，共處理30天后，高桿野生稻進入生殖生長期而在8月上旬開花，與栽培稻品種Sgdts96、HN2026和日本晴的花期相遇。
b.栽培稻與野生稻雜交 考慮到高桿野生稻凌晨開花、花粉在30分鐘內失活和容易落粒的特性，以栽培稻Sgdts96、HN2026和日本晴為母本，于雜交前一日的下午去雄后套袋，以高桿野生稻為父本，于開花當日的凌晨5:00 6:30取野生稻的開花穗，將花粉抖落在已去雄的栽培稻穗子上完成授粉，然后套袋注明雜交的父母本及日期。
c.雜交后噴灑幼胚發·育促進液 授粉后的第2天 12天,每天下午打開雜交袋向稻穗噴灑10mg/l 30mg/l 2，4-D +50mg/1 100mg/lGA3的幼胚發育促進液,促進雜交胚的發育。
d.胚挽救培養 授粉后的第7天 12天取出雜交子房,經消毒處理后,接種到N6 + 0.5mg/l 2.0mg/I 6-BA +0.5mg/l 2.0mg/1 NAA + 5%蔗糖+ 0.75%瓊脂的胚挽救培養基中，置于25 °C，暗條件下培養。
e.雜交胚生長出芽苗或愈傷組織 培養3 4周后，雜交胚一方面長出芽苗，另一方面會誘導出愈傷組織。此時在光照2000 LX, IOhr 12hr/d 25°C下培養7 10天，讓芽苗長叢芽或愈傷組織旺盛長大。
f.秋水仙素處理芽苗或愈傷組織 將生長旺盛的叢芽苗置于N6 + 0.5mg/l 1.0mg/1 NAA + 1.5mg/l 2.0mg/1 6-BA+ 3%蔗糖+ 500mg/l 750mg/l秋水仙素的芽苗加倍培養基中；或者將生長旺盛的愈傷組織置于 N6 + 0.3mg/l 0.5mg/l NAA + 0.5mg/l 1.0mg/1 6-BA+l.0mg/1 1.5mg/l 2,4-D+ 5%蔗糖+ 500mg/l 750mg/l秋水仙素的愈傷組織加倍培養基中，置于溫室(25°C)，每分鐘50轉 60轉搖床處理48hr 60hr.g.處理后芽苗或愈傷組織的恢復培養 取出加倍處理的芽苗或愈傷組織用無菌水沖洗三次，無菌濾紙吸干表面水分后，將芽苗轉接于 N6 + 0.5mg/l 1.0mg/1 NAA +1.5mg/l 2.0mg/1 6-BA + 3% 蔗糖 + 0.75%瓊脂的芽苗恢復培養基中，將愈傷組織轉接于N6 + 0.3mg/l 0.5mg/l NAA + 0.5mg/l 1.0mg/1 6-BA +1.0mg/1 1.5mg/l 2,4-D + 5%蔗糖+ 0.75%瓊脂的愈傷組織恢復培養基中恢復培養7 10天。
h.芽苗的生根培養或愈傷組織的分化培養 將恢復的芽苗接種到 1/2MS+0.3mg/l 0.5mg/l 6BA + 0.3mg/l 0.5mg/l NAA +2%sucrose + 0.75% agar的生根培養基中生根而成為完整的小植株；將恢復的愈傷組織接種到 MS + 0.3mg/l 0.5mg/l NAA + 1.5mg/l 2.0mg/1 6BA +0.5mg/l 1.0mg/1 KT+3% sucrose + 0.75% agar的分化培養基中分化出苗，再轉接到芽苗生根培養基中分化出根而成為小植株。
1.組培苗的移植 將組培苗的瓶塞打開，加入15 ml無菌水，置于實驗室(20°C 25°C )，煉苗2天后，于下午4:30后，將組培苗用清水洗凈根部后移植于整平細的小苗床的水田中，罩上遮陽黑網，保持苗床濕潤，并于中午朝遮陽網內噴施1/10MS大量元素和微量元素溶液，連續5天，使秧苗正常生長后打開遮陽網。
j.異源雜種苗的選擇 將雜種苗與栽培稻和高桿野生稻親本進行觀察比較，從植株形態，葉片大小，葉鞘顏色，稻穗形狀，穎殼大小，芒的有無和長短等性狀差異中，初步挑選出栽培稻/野生稻的異源雜種苗(圖8)。
k.異源六倍體水稻的確定 利用根尖染色體制片技術，觀察異源雜種苗的根尖染色體數目，確定雜種是異源四倍體，即栽培稻(AA)與高桿野生稻(CXDD)雜種2n=6X=AA(XDD=72 (圖9)；,然后再用基因組原位雜交技術(GISH)或CXDD 基因組專有的分子標記進一步確定雜種為異源六倍體。
權利要求
1.一種胚挽救和離體誘導相結合構建異源多倍體水稻的方法，其特征在于該過程為: a暗處理野生稻會聚栽培稻開花期 由于野生稻是典型的短日照植物，在亞熱帶到溫帶地區自然情況下，絕大多數野生稻物種不能在栽培稻品種開花時開花； 為了使兩類親本的開花期相遇，對野生稻進行短日照處理，光照時間控制在8.5hr—.9.0hr/d，共處理30天，使野生稻進入生殖生長期相繼開花，與栽培稻品種的花期相遇； b栽培稻與野生稻雜交 考慮到野生稻凌晨開花，而花粉在30分鐘內失活的特點和野生稻容易落粒的特性，以栽培稻為母本，于雜交前一日下午去雄后套袋，以野生稻為父本，于開花當日的凌晨5:00-8:30取野生稻的開花穗，將花粉抖落在已去雄的栽培稻穗子上完成授粉，然后套袋注明雜交的父母本及日期； c雜交后噴灑幼胚發育促進液 授粉后的第2天 12天，每天下午打開雜交袋向稻穗噴灑10mg/l 30mg/l 2，4一D+50mg/1 100mg/lGA3的幼胚發育促進液,促進雜交胚的發育； d.胚挽救培養 授粉后的第7天 12天取出雜交子房,經消毒處理后,接種到N6 + 0.5mg/l 2.0mg/16-BA +0.5mg/l 2.0mg/l NAA + 5%蔗糖+ 0.75%瓊脂的胚挽救培養基中，置于25°C，暗條件下培養； e.雜交胚生長出芽苗或愈傷組織 培養3 4周后，雜交胚一方面長出芽苗，另一方面會誘導出愈傷組織，此時在光照.2000 LX, 10hr-12hr/d 25°C下培養7 10天，讓芽苗長叢芽或愈傷組織旺盛長大； f.秋水仙素處理芽苗或愈傷組織 將生長旺盛的叢芽苗置于N6 + 0.5mg/l 1.0mg/1 NAA + 1.5mg/l 2.0mg/1 6-BA+ 3%蔗糖+ 500mg/l 750mg/l秋水仙素的芽苗加倍培養基中；或者將生長旺盛的愈傷組織置于N6 + 0.3mg/l 0.5mg/l NAA + 0.5mg/l 1.0mg/1 6-BA+1.0mg/1 1.5mg/l 2,4-D+ 5%蔗糖+ 500mg/l 750mg/l秋水仙素的愈傷組織加倍培養基中，置于溫室(25°C)，每分鐘50轉-60轉搖床處理48hr_60hr.g.處理后芽苗或愈傷組織的恢復培養 取出加倍處理的芽苗 或愈傷組織用無菌水沖洗三次，無菌濾紙吸干表面水分后，將芽苗轉接于 N6 + 0.5mg/l 1.0mg/1 NAA +1.5mg/l 2.0mg/1 6-BA + 3% 蔗糖 + 0.75%瓊脂的芽苗恢復培養基中，將愈傷組織轉接于N6 + 0.3mg/l 0.5mg/l NAA + 0.5mg/l .1.0mg/1 6-BA +1.0mg/1 1.5mg/l 2,4-D+ 5%蔗糖+ 0.75%瓊脂的愈傷組織恢復培養基中恢復培養7-10天； h.芽苗的生根培養或愈傷組織的分化培養 將恢復的芽苗接種到 1/2MS + 0.3mg/l 0.5mg/l 6BA + 0.3mg/l 0.5mg/l NAA+ 2%sucrose + 0.75% agar的生根培養基中生根而成為完整的小植株；將恢復的愈傷組織接種到 MS + 0.3mg/l 0.5mg/l NAA +1.5mg/l 2.0mg/1 6BA +0.5mg/l 1.0mg/1KT +3%sucrose + 0.75% agar的分化培養基中分化出苗，再轉接到芽苗生根培養基中分化出根而成為小植株；.1.組培苗的移植 將組培苗的瓶塞打開，加入IOml 15ml無菌水，置于實驗室(20°C 25°C )煉苗2天，于下午4:30后，用清水洗凈組培苗根部后移植于整平細的小苗床水田中，罩上遮陽網，保持苗床濕潤，并于中午朝遮陽網內噴施1/10MS大量元素和微量元素溶液，連續5天，使秧苗正常生長后打開遮陽網； j.異源雜種苗的選擇 將雜種苗與栽培稻和野生稻親本進行觀察比較，從植株形態，葉片大小，葉鞘顏色，稻穗形狀，穎殼大小，芒的有無和長短等性狀差異中，初步挑選出栽培稻/野生稻的異源雜種苗； k.異源多倍體或異源六倍體水稻的確定 利用根尖染色體制片技術，觀察異源雜種苗的根尖染色體數目，確定雜種是異源四倍體(如栽培稻(AA)與斑點野生稻(BB)雜種2n=4X=AABB=48)，或異源六倍體(如栽培稻(AA)與高桿野生稻(CCDD)的雜種，2n=6X=AACCDD=72)，然后再用基因組原位雜交技術(GISH)或不同基因組專有的分子 標記確定雜種是否為異源多倍體。
全文摘要
本發明提出了一種“胚挽救和離體誘導相結合構建異源多倍體水稻的方法”，其步驟為a.暗處理野生稻使其會聚栽培稻開花期；b.栽培稻與野生稻雜交；c.雜交后噴灑幼胚發育促進液；d.胚挽救培養；e.雜交胚生長出芽苗或愈傷組織；f.秋水仙素處理芽苗或愈傷組織；g.處理后芽苗或愈傷組織的恢復培養；h.芽苗的生根培養或愈傷組織的分化培養；i.組培苗的移植；j.異源雜種苗選擇；k.異源四倍體或異源六倍體水稻的確定。利用本發明可以獲得多個基因組間多個物種的異源雜種和異源多倍體，為栽培稻/野生稻雜交育種和充分利用野生稻有利基因開拓了新途徑。
文檔編號A01H1/02GK103155854SQ20121044973
公開日2013年6月19日 申請日期2012年11月12日 優先權日2012年11月12日
發明者蔡得田, 王愛云, 楊春花, 杜超群, 張獻華, 陳冬玲, 宋兆建, 王維, 何玉池, 劉育華 申請人:湖北大學, 武漢多倍體生物科技有限公司