專利名稱：富含有機硒食用菌菌種及其制備方法、富含有機硒食用菌及其培植方法
技術領域：
本發明涉及食用菌及其培植，尤其涉及富含有機硒食用菌菌種及其制備方法、富含有機硒食用菌及其培植方法。
背景技術：
硒是人體和動物中一些抗氧化酶(谷胱甘肽過氧化物酶)和硒-P蛋白的重要組成部分，在體內起著平衡氧化還原氛圍的作用，研究證明硒具有提高動物免疫力及預防癌癥的作用，已被認為是人體必需的微量元素之一，亦常作為動物飼料微量添加劑或植物肥料中添加微量元素肥，其中以食用菌為載體將無機硒轉化為有機硒是人們在菌類保健食品領域的研究熱點之一。 CN 102511305A公開了一種培育食用菌高硒耐受性菌種的方法，其特征在于所述方法包括以下步驟(I)根據食用菌菌種選擇適應食用菌菌種生長的培養基，將食用菌菌種接入培養基中進行試管菌種培養得到初始菌懸液；(2)將培養基與硒源混合配制成梯度硒濃度的耐硒培養基，采用菌懸液接種方式將食用菌菌種接種到滅菌處理后的耐硒培養基上按照硒濃度從低到高的順序按照常用的食用菌菌種培養方式逐一硒濃度進行耐硒培養；根據步驟(2)得到的食用菌的最佳耐受硒濃度采用菌懸液接種方式，進行連續轉接培養，并確定菌種的耐硒性狀穩定，即得到食用菌高硒耐受性菌種。經過食用菌菌種的高硒耐受性培養后，其在液體深層培養的狀態下，對培養基中的硒含量的耐受性大幅提高。CN 102138440A公開了一種富硒食用菌培養基配方及富硒食用菌生產方法，所述方法包括培養基配置、調整、殺菌、接種培養、催菇等步驟，所述培養基原料包括以下重量比例組分豆桿粉O. 4%-0. 6%、樹葉粉O. 15%-0. 25%、硫酸鎂O. 05%-0. 1%、玉米粉O. 2%-0. 4%，還包括富硒水稻米糠O. 2%-0. 5%、銀杏葉粉O. 1%-0. 3%。液體菌種培養中，在培養液中添加有亞硒酸鈉成份，并在培養液中培養出菌種，用于菌種栽培。CN 1823570A公開了一種富硒食用菌的栽培方法，富硒食用菌原料由玉米芯、秸桿粉、米糠或麥麩、石膏、硫酸鎂、硫酸鋅、硒鹽、水等按重量份配比制成；裝袋，封口，滅菌，接入食用菌種，然后發酵，發菌時間在20-40天，菌絲長滿整個料面，即制成菌棒，然后噴施富硒營養液。CN 102369836A公開了一種富硒猴頭菇的培育方法，培養基由主料和輔料配合而成，培養基主料重量份為棉籽殼麥麩皮泥土 =7 I I。基輔料為混合溶液，其中各溶質的濃度為亞硒酸鈉400ppm、鑰酸銨lOOOppm、硫酸鋅500ppm、磷酸二氫|丐lOOOppm。一種富硒猴頭菇的培育方法的培養基的制備，是按重量比為主料輔料=5 I混合均勻，然后調節pH為4. O裝入塑料袋中，然后在50-80°C下滅菌3小時，降溫后進行猴頭菇菌種的接種，在23-28 V的溫度下經30-35天的培養后，移進出菇室進行保濕出菇，15-20天后采收可得富硒猴頭菇。

發明內容
本發明目的之一在于提供一種富含有機硒食用菌菌種及其制備方法。本發明目的之二在于提供一種富含有機硒食用菌及其培植方法。為達到上述目的之一，本發明采用如下技術方案一種富含有機硒食用菌菌種的制備方法，包括一級菌種的制備、二級菌種的制備和三級菌種的制備。 所述一級菌種的制備,采用一級菌種培養基。所述一級菌種培養基，每IOOOml的培養基中含有如下重量比例的原料組分土豆200g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀I. 5g、硫酸鎂3g、維生素bllOmg、磷酸氫二鉀I. 5g、蛋白胨2g、瓊脂20g、亞硒酸鈉O. Ig,其余為水。所述一級菌種培養基按照如下方法進行配制(I)將土豆投入水中煮，水沸后繼續煮5_15min，過濾棄渣，向濾液中加入瓊脂，文火加熱并不斷攪拌至瓊脂完全溶化，加入葡萄糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、維生素bl、磷酸氫二鉀、蛋白胨和亞硒酸鈉，攪拌均勻后加水補足，得到液體培養基。所述5_15min,例如可以是 5-7. 5min、6. 4-13. 2min、9. 7-15min、5min、6min、7min、
8.lmin、8. 9min、lOmin、10. 6min、llmin、12. 5min、13min、14min、14. 3min、15min ;優選為8-12min ;最優選為 lOmin。(2)將液體培養基趁熱倒入試管中，在120°C _130°C的溫度和O. 15MPa的壓力下高壓滅菌20-35min，然后將壓力降至為零；所述120 V -130 V，例如可以是 120 V -126. 5 °C>123. 7 V -128. 4 V、125 0C -130 0C、120 °C>121 V, 122 °C、122. 5 °C、123 °C、124 °C、125 °C、126 °C、127 °C、128 °C、129°C、130°C ;優選為 122°C _128°C ;最優選為 125°C。所述20-35min,例如可以是 20-27. 5min、26. 4-33. 2min、29. 7_35min、20min、20. 6min、22. 5min、25min、26. 4min、29min、30min、32min、34. 3min、35min ;優選為25-30min ;最優選為 30min。所述將壓力降至為零，優選采用緩慢降壓的方式。(3)溫度降至50°C -70°C時，將試管斜放，待冷卻后形成具有斜面的試管培養基，一級菌種培養基配制完畢，移至恒溫箱內1°C -4°c下保存，備用。所述500C _70°C，例如可以是 500C -63. 5°C>53. 7V -68. 4°C、61°C -70°C、50°C、52°C、55°C、584t、6(rC、607t、62t、635t、65t、66rC、69t、7(rC;優選為 55°C -65°C;最優選為60°C。所述rc -4°c，例如可以是 rc -1.5°C、1.7°C _3.4°C、2.6°C -4°C、1 °C、1. 5°C、2°C、2. 4°C、3°C、3. 5°C、4°C ;優選為;2V -3°C ;最優選為 2°C。優選地，所述斜面的長度為試管長度的2/5-1/2。一種富含有機硒食用菌菌種的制備方法，具體地包括如下步驟(I)制備一級菌種①從食用菌中分離孢子，接種至一級菌種培養基上，使其萌發、自由交配，在200C _28°C的溫度下培養，待孢子形成菌絲。優選地，所述分離孢子的方法為孢子分離法、基內分離法或組織分離法。
所述20°C -28°C，例如可以是 20°C -24. 5°C、23. 7°C _27.4°C、25°C _28°C、20°C、21°C、21. 5°C、22°C、23°C、24°C、25°C、26°C、26. 5°C、27°C、28°C ;優選為 22°C -26°C ;最優選為 25。。。②挑選菌絲生長最快的菌種，接種至新的試管培養基上，作為原始種。所述新的試管培養基，其中亞硒酸鈉的含量為一級菌種培養基中亞硒酸鈉含量的2倍，其余與一級菌種培養基相同。③待試管內菌絲長滿，觀察菌絲和試管斜面，排除細菌污染和斜面污染，挑選出生長最好者作為一級菌種。④將一級菌種接種至一級菌種培養基上進行擴大繁衍，恒溫箱內1-4°C的溫度下保存備用。
(2)制備二級菌種①根據食用菌菌種配制適合其生長的培養料。所述根據食用菌菌種配制適合其生長的培養料為本領域的常用技術手段，例如(a)適用于各種燕類生長的培養料每IOOOkg的培養料固體中含有如下重量比例的原料組分小麥粒(熟)980kg、石膏13. 3kg、碳酸鈣3. 3kg ;培養料的含水量為60wt%。(b)適用于草菇、金針菇、平菇、毛木耳等生長的培養料每IOOOkg的培養料固體中含有如下重量比例的原料組分棉籽殼970kg、蔗糖10kg、石膏IOkg ;培養料的含水量為60wt%。(c)適用于靈芝生長的培養料每IOOOkg的培養料固體中含有如下重量比例的原料組分木屑780kg、麩皮20kg、石膏粉1kg、黃豆粉Ikg ;培養料的含水量為60wt%。②將亞硒酸鈉溶于水中制成質量濃度為5wt%_30wt%的亞硒酸鈉水溶液，按照每IOOOkg的培養料固體中含有125g亞硒酸鈉的比例，將亞硒酸鈉水溶液噴灑在①的培養料表面，攪拌均勻；所述5wt%_30wt%,例如可以是 5wt%_14. 6wt%> 17. lwt%-21. 3wt%、23. 5wt%-30wt%>5wt%、6. 8wt%、7wt%、7. 6wt%、9wt%、10. 5wt%、12. 2wt%、15wt%、17. lwt%、19wt%、20wt%、22wt%、23. 9wt%、25wt%、28. 4wt%、30wt% ;優選為 10wt%_25wt% ;最優選為 20wt%。③在120°C _130°C的溫度和0. 15MPa的壓力下高壓滅菌I. 5_2h，然后降溫降壓至常溫常壓，配制成二級菌種培養料；所述I. 5-2h,例如可以是 I. 5-1. 9h、I. 65-1. 88h、I. 73_2h、I. 5h、I. 57h、I. 6h、I. 64h、l. 7h、l. 71h、l. 8h、l. 89h、l. 9h、l. 95h、2h ;優選為 I. 6-1. 9h ;最優選為 I. 8h。④無菌條件下，將步驟(I)④的一級菌種轉接到步驟(2)③的二級菌種培養料上，在20°C -28°C的溫度下培養；所述200C -28 °C，例如可以是 200C -24. 5 °C >23. 7 V -27. 4。。、25。。-28。。、20。。、21°C、21. 5°C、22°C、23°C、24°C、25°C、26°C、26. 5°C、27°C、28°C ;優選為 22°C -26°C ;最優選為 25。。。⑤待菌絲長滿之后，選擇性狀優良、無污染、生長速度快的菌種作為二級菌種，備用。
(3)制備三級菌種①按照與步驟(2)①-步驟(2)③相同的方法配制成三級菌種培養料。②無菌條件下，將步驟(2)⑤的二級菌種轉接到步驟(3)①的三級菌種培養料上，在20°C -28°C的溫度下培養；所述20°C -28°C，例如可以是 20°C -24. 5°C、23. 7°C _27.4°C、25°C _28°C、20°C、21°C、21. 5°C、22°C、23°C、24°C、25°C、26°C、26. 5°C、27°C、28°C ;優選為 22°C -26°C ;最優選為 25。。。③待菌絲長滿之后，選擇性狀優良、無污染、生長速 度快的菌種作為三級菌種，SP得到了富含有機硒食用菌菌種。上述富含有機硒食用菌菌種的制備方法，可用如圖I所示的工藝流程圖表示。通常培養基中一定濃度的硒會對許多食用菌的菌絲具有有抑制作用，而本發明的方法通過長期馴化、選育使得無機硒(亞硒酸鈉)轉化成為了菌種內的有機硒，獲得了適應性較好的有機硒食用菌菌種，其菌絲生長速度快、抗逆性強、積硒能力強，利用本發明的富含有機硒食用菌菌種可以培植出硒元素含量高、質量高、產量高的有機硒食用菌子實體。為達到上述目的之二，本發明采用如下技術方案一種富含有機硒食用菌的培植方法，采用上述本發明提供的富含有機硒食用菌菌種，并且在培養料中加入亞硒酸鈉。具體地，根據食用菌的種類，采用常規的裝袋、滅菌、接菌、發苗、轉化、出菇、采收等步驟，即可培植出富含有機硒食用菌。本發明的富含有機硒食用菌的培植方法工藝流程如圖2所示。所述培養料根據食用菌的種類進行配制，為本領域的常用技術手段，例如(a)適用于平燕栽培的培養料每IOOOkg的培養料固體中含有如下重量比例的原料組分玉米芯390kg、棉籽殼490kg、麩皮100kg、石膏10kg、石灰IOkg ;培養料的含水量為60wt%。(b)適用于香燕栽培的培養料每IOOOkg的培養料固體中含有如下重量比例的原料組分雜木屑780kg、麩皮200kg、石膏10kg、鹿糖Ikg ;培養料的含水量為55wt%_60wt%。(c)適用于靈芝栽培的培養料每IOOOkg的培養料固體中含有如下重量比例的原料組分雜木屑728kg、麩皮250kg、黃豆粉20kg、生長調節劑2kg ;培養料的含水量為60wt%-65wt%。優選地，所述培養料的含水量為50wt%_70wt%，例如可以是50wt%_64. 6wt%、57. lwt%_68wt%、63. 5wt%_70wt%、50wt%、51wt%、54. 9wt%、55wt%、56. 4wt%、58wt%、60wt%、60. lwt%、62. 6wt%、65wt%、66. 5wt%、67wt%、69. 2wt%、70wt% ;優選為 55wt%_65wt% ;最優選為60wt%o所述亞硒酸鈉在培養料固體中的質量濃度優選為O. 001wt%-0. 055wt%，例如可以是 O. 001wt%-0. 025wt%、0. 01lwt%-0. 048wt%、0. 033wt%-0. 055wt%、0. 001wt%、0. 015wt%>0. 01wt%、0. 015wt%、0. 02wt%、0. 025wt%、0. 003wt%、0. 035wt%、0. 04wt%、0. 045wt%、0. 05wt%>0. 055wt% ;進一步優選為 0. 015wt%-0. 035wt% ;最優選為 0. 025wt%。優選地，所述亞硒酸鈉是以亞硒酸鈉水溶液的形式加入到培養料中的。
進一步優選地，所述亞硒酸鈉水溶液的質量濃度為5wt%_30wt%,例如可以是5wt%-14. 6wt%>17. lwt%-21. 3wt%> 23. 5wt%-30wt%> 5wt%>6. 8wt%、7wt%、7. 6wt%、9wt%、10. 5wt%>12. 2wt%>15wt%>17. lwt%>19wt%> 20wt%> 22wt%>23. 9wt%、25wt%、28. 4wt%>30wt% ；優選為10wt%-25wt% ;最優選為20wt%。本發明利用具有一定硒含量的培養料進行食用菌的培植，杜絕了以往人工葉面噴灑無機硒、外部強制提高硒元素含量的情況，硒元素的利用率和轉化率均大為提高；培植出的富含有機硒食用菌不僅硒含量提高，且有機硒占全硒的99. 9%以上，氨基酸的含量亦顯著提高，子實體形體飽滿、健壯、色澤鮮嫩，品質優越，食用安全性亦大為提高。經食用實踐證明本發明提供的富含有機硒食用菌產品可顯著提高人體免疫功能，具有防毒、解毒、清血毒、抗污染、抗核輻射、抗氧化、延緩衰老、防癌抗癌等 多重功效，對于冠心病、克山病、大骨節病、肝炎、糖尿病、眼病等多種疾病均有良好的預防和治療作用。


圖I是本發明的富含有機硒食用菌菌種的制備方法工藝流程2是本發明的富含有機硒食用菌的培植方法工藝流程圖。下面結合附圖并通過具體實施方式
對本發明作進一步詳細說明。但下述的實施例僅僅是本發明的簡易例子，并不代表或限制本發明的權利保護范圍，本發明的權利范圍以權利要求書為準。
具體實施例方式為更好地說明本發明，便于理解本發明的技術方案，本發明的典型但非限制性的實施例如下實施例I :按照如下步驟配制一級菌種培養基(I) 土豆去皮，去芽眼，稱取200g，削成薄片，放入鋁鍋，加入IOOOml水，煮沸后再煮lOmin。用4-6層紗布過濾棄渣，濾液倒回鋁鍋，加入瓊脂20g，邊用文火加熱邊用玻璃棒攪拌，至瓊脂溶化后加入葡萄糖20g、磷酸二氫鉀I. 5g、硫酸鎂3g、維生素bllOmg、磷酸氫二鉀I. 5g、蛋白胨2g和亞硒酸鈉O. Igo趁熱倒入量筒，加水補足至1000ml，得到液體培養基。(2)將漏斗安放在鐵架臺的夾子上，漏斗下口連接乳膠管，管上夾一彈簧夾，作為控制開關，管下接尖嘴玻璃管。將液體培養基趁熱倒入漏斗中，將尖嘴玻璃管插入試管內，開放彈簧夾，讓液體培養基流入試管，每個試管內裝液體培養基約8ml，試管口加塞棉塞。多個試管捆成一把，用牛皮紙將塞有棉塞的一端包好，用線繩扎緊，將試管立放在鐵絲筐中，以備滅菌。(3)在手提式高壓鍋中加入3000_35000ml水，將小鐵絲筐置于鋁筒內，在小鐵絲筐上蓋幾層報紙，蓋好蓋，擰緊加熱至125°C。水沸騰后排氣5-10min，再關閉放氣閥門，使壓力逐漸上升。當壓力達到O. 15MPa時，開始計時，維持恒壓30min后，關閉熱源，讓壓力慢慢下降至零。(4)打開鍋蓋，待溫度降至60°C時，將試管口的一段擱在木條上，另一端擱在桌面上，形成一定的斜度。待培養基冷卻后即成具有斜面的試管培養基，斜面長度為試管長度的2/5，一級菌種培養基配制完畢，移至恒溫箱內1°C _4°C下保存，備用。實施例2 按照如下步驟制備富含有機硒平菇菌種(I)制備一級菌種①采用孢子分離法從平菇中分離孢子，接種至實施例I的一級菌種培養基上，使其萌發、自由交配，在25°C的溫度下培養，待孢子形成菌絲。②挑選菌絲生長最快的菌種，接種至新的試管培養基(其中亞硒酸鈉的含量提升至O. 2g)上，作為原始種。③待試管內菌絲長滿，觀察菌絲和試管斜面，排除細菌污染和斜面污染，挑選出生 長最好者作為一級菌種；④將一級菌種接種至一級菌種培養基上進行擴大繁衍，恒溫箱內1-4°C的溫度下保存備用；(2)制備二級菌種①配制適用于平菇生長的培養料 每IOOOkg的培養料固體中含有如下重量比例的原料組分棉籽殼970kg、蔗糖10kg、石膏IOkg ;培養料的含水量為60wt%。②按照每IOOOkg的培養料固體中含有125g亞硒酸鈉的比例稱取亞硒酸鈉，溶于水中制成質量濃度為20wt%的亞硒酸鈉水溶液，噴灑在①的培養料表面，攪拌均勻后將培養料分裝于菌種瓶中，每個菌種瓶中培養料的體積占菌種瓶體積的1/2，裝完后將菌種瓶擦拭干凈。③采用臥式高壓滅菌鍋進行高壓滅菌。裝高壓滅菌鍋時，瓶口朝上，擺放不要過緊。高壓鍋內水沸騰后，先打開放氣閥lOmin，再關上。壓力控制在O. 15MPa左右，保持125°C恒溫2h。然后，將熱源關閉，降溫降壓至常溫常壓，配制成二級菌種培養料。④無菌條件下，將步驟(I)④的一級菌種轉接到步驟(2)③的二級菌種培養料上，在25 °C的溫度下培養。⑤待菌絲長滿之后，選擇性狀優良、無污染、生長速度快的菌種作為二級菌種，備用。(3)制備三級菌種①按照與步驟(2)①-步驟(2)③相同的方法配制成三級菌種培養料。②無菌條件下，將步驟(2)⑤的二級菌種轉接到步驟(3)①的三級菌種培養料上，在25 °C的溫度下培養。③待菌絲長滿之后，選擇性狀優良、無污染、生長速度快的菌種作為三級菌種，SP得到了富含有機硒平菇菌種。實施例3 按照如下步驟制備富含有機硒香菇菌種(I)制備一級菌種①采用基內分離法從香菇中分離孢子，接種至實施例I的一級菌種培養基上，使其萌發、自由交配，在25°C的溫度下培養，待孢子形成菌絲。②挑選菌絲生長最快的菌種，接種至新的試管培養基(其中亞硒酸鈉的含量提升至O. 2g)上，作為原始種。
③待試管內菌絲長滿，觀察菌絲和試管斜面，排除細菌污染和斜面污染，挑選出生長最好者作為一級菌種；④將一級菌種接種至一級菌種培養基上進行擴大繁衍，恒溫箱內1-4°C的溫度下保存備用；(2)制備二級菌種①配制適用于香菇生長的培養料 每IOOOkg的培養料固體中含有如下重量比例的原料組分小麥粒(熟)980kg、 石膏13. 3kg、碳酸鈣3. 3kg ;培養料的含水量為60wt%。將小麥粒制熟的方法如下選擇籽粒飽滿、無霉爛變質的小麥，除去雜質，淘洗干凈，加水浸泡12_24h。將水煮沸，沸騰后再煮至5-10min，使麥粒膨脹而不爛。濾去多余水分，攤在篩子上晾l_2h，不滴水為止。②按照每IOOOkg的培養料固體中含有125g亞硒酸鈉的比例稱取亞硒酸鈉，溶于水中制成質量濃度為30wt%的亞硒酸鈉水溶液，噴灑在①的培養料表面，攪拌均勻后將培養料分裝于菌種瓶中，每個菌種瓶中培養料的體積占菌種瓶體積的2/3，裝完后將菌種瓶擦拭干凈。③采用臥式高壓滅菌鍋進行高壓滅菌。裝高壓滅菌鍋時，瓶口朝上，擺放不要過緊。高壓鍋內水沸騰后，先打開放氣閥lOmin，再關上。壓力控制在O. 15MPa左右，保持128°C恒溫I. 5h。然后，將熱源關閉，降溫降壓至常溫常壓，配制成二級菌種培養料。④無菌條件下，將步驟(I)④的一級菌種轉接到步驟(2)③的二級菌種培養料上，在25 °C的溫度下培養。⑤待菌絲長滿之后，選擇性狀優良、無污染、生長速度快的菌種作為二級菌種，備用。(3)制備三級菌種①按照與步驟(2)①-步驟(2)③相同的方法配制成三級菌種培養料。②無菌條件下，將步驟(2)⑤的二級菌種轉接到步驟(3)①的三級菌種培養料上，在25 °C的溫度下培養。③待菌絲長滿之后，選擇性狀優良、無污染、生長速度快的菌種作為三級菌種，SP得到了富含有機硒香菇菌種。實施例4:按照如下步驟制備富含有機硒靈芝菌種(I)制備一級菌種①采用組織分離法從靈芝中分離孢子，接種至實施例I的一級菌種培養基上，使其萌發、自由交配，在25°C的溫度下培養，待孢子形成菌絲。②挑選菌絲生長最快的菌種，接種至新的試管培養基(其中亞硒酸鈉的含量提升至O. 2g)上，作為原始種。③待試管內菌絲長滿，觀察菌絲和試管斜面，排除細菌污染和斜面污染，挑選出生長最好者作為一級菌種；④將一級菌種接種至一級菌種培養基上進行擴大繁衍，恒溫箱內1-4°C的溫度下保存備用；(2)制備二級菌種
①配制適用于靈芝生長的培養料每IOOOkg的培養料固體中含有如下重量比例的原料組分木屑780kg、麩皮20kg、石膏粉1kg、黃豆粉Ikg ;培養料的含水量為60wt%。②按照每IOOOkg的培養料固體中含有125g亞硒酸鈉的比例稱取亞硒酸鈉，溶于水中制成質量濃度為5wt%的亞硒酸鈉水溶液，噴灑在①的培養料表面，攪拌均勻后將培養料分裝于菌種瓶中，每個菌種瓶中培養料的體積占菌種瓶體積的3/5，裝完后將菌種瓶擦拭干凈。③采用臥式高壓滅菌鍋進行高壓滅菌。裝高壓滅菌鍋時，瓶口朝上，擺放不要過緊。高壓鍋內水沸騰后，先打開放氣閥lOmin，再關上。壓力控制在O. 15MPa左右，保持120°C恒溫I. 8h。然后，將熱源關閉，降溫降壓至常溫常壓，配制成二級菌種培養料。④無菌條件下，將步驟(I)④的一級菌種轉接到步驟(2)③的二級菌種培養料上，在25 °C的溫度下培養。 ⑤待菌絲長滿之后，選擇性狀優良、無污染、生長速度快的菌種作為二級菌種，備用。(3)制備三級菌種①按照與步驟(2)①-步驟(2)③相同的方法配制成三級菌種培養料。②無菌條件下，將步驟(2)⑤的二級菌種轉接到步驟(3)①的三級菌種培養料上，在25 °C的溫度下培養。③待菌絲長滿之后，選擇性狀優良、無污染、生長速度快的菌種作為三級菌種，SP得到了富含有機硒靈芝菌種。實施例5:按照如下步驟培植富含有機硒平菇①配制適用于平菇栽培的培養料每IOOOkg的培養料固體中含有如下重量比例的原料組分玉米芯390kg、棉籽殼490kg、麩皮100kg、石膏10kg、石灰IOkg ;培養料的含水量為60wt%。②按照每IOOOkg的培養料固體中含有250g (10_350g)亞硒酸鈉的比例稱取亞硒酸鈉，溶于水中制成質量濃度為10wt%的亞硒酸鈉水溶液，噴灑在①的培養料表面，攪拌均勻，經多次翻堆，讓培養料充分吸收水分。③先將培養袋的一端用繩子扎好，將另一端口打開，放一層實施例2的富含有機硒平菇菌種于袋底，厚度約1cm，然后裝培養料至培養袋的下1/3處。再接種一層實施例2的富含有機硒平菇菌種，菌種接在袋內的邊緣，厚度約1cm，然后裝培養料至培養袋的上1/3處。再接種一層實施例2的富含有機硒平菇菌種，菌種接在袋內的邊緣，厚度約1cm，然后裝培養料至培養袋口。再在培養料表面播一層實施例2的富含有機硒平菇菌種，與底層的菌種量相同，最后將袋口扎緊。④在20°C -25°C的溫度下，注意通風換氣及避光，進行發菌。⑤待菌絲完全長滿后，再經7-10d轉化，空氣濕度為80%的條件下，把栽培袋口兩端打開，便可出菇。富含有機硒平菇適宜在春秋兩季進行栽培。春季出菇時，溫度為25°C _35°C，有機硒平菇干品的有機硒含量為110-130ppm。秋季出菇時，溫度為10°C _20°C，有機硒平菇干品的有機硒含量為220-250ppm。一般可出菇3_5潮。
實施例6 按照如下步驟培植富含有機硒香菇①配制適用于香菇栽培的培養料每IOOOkg的培養料固體中含有如下重量比例的原料組分雜木屑780kg、麩皮200kg、石膏10kg、鹿糖1kg、亞硒酸鈉250g (10_350g);培養料的含水量為55wt%-60wt%。先將雜木屑和麩皮鋪在地面上，然后鋪上石膏、蔗糖的水溶液以及質量濃度為15wt%的亞硒酸鈉水溶液,用鐵鍬翻動拌均2次,再加井水、自來水或河流干凈水拌均,加水量以使培養料的含水量達到55wt%-60wt%為準。然后人工拌料，用鐵鍬翻料到另一側堆積山形，如此反復翻料2-3次，直道培養料干濕混合均勻為止。②將拌好的培養料及時裝袋。用規格為55cmX15cmX0. 05cm或 17cmX 55cmX O. 05cm的塑料袋作為培養袋，并且袋的一端事先熱合封口或者用繩扎封口，一般每個培養袋可裝干培養料約O. 9kg，可裝濕培養料約I. 8kg。因塑料袋的口徑較小，一般采用機械裝料的方式，用鐵鍬鏟取培養料倒入裝袋機料斗內，每I鏟的培養料即為裝I袋的料量，裝完后用塑料絲繩捆扎好袋口。③采用臥式高壓滅菌鍋進行高壓滅菌，擺放不要過緊，高壓鍋內水沸騰后，先打開放氣閥lOmin，再關上。壓力控制在O. 15MPa左右，保持125°C恒溫2h。然后，將熱源關閉，降溫降壓至常溫常壓時，方能打開鍋蓋。④采用開放式接種法進行接菌(a)菌棒冷卻。(b)消毒將實施例3的富含有機硒香菇菌種及其他物品放置在菌棒堆上，點燃氣霧消毒劑4-5盒(160-200g)，并用薄膜把菌棒覆蓋嚴密，消毒時間為3-6h。(C)接種前放氣開放式接種，先把房門打開，用塑料棚帳式接種的即把帳門打開，再將覆蓋料棒的薄膜掀開一部分，一直放到接種入員能夠忍耐，即可進行接種，接種時使用蕈菌接菌凈化器(SJH-H型)，在風區內操作。(d)打穴接種解開套袋扎繩，拉出菌棒，在菌棒表面同一方向均勻打3-4個接種穴，直徑I. 5cm左右，深2-2. 5cm，打穴棒要旋轉抽出，防止穴口膜與培養料脫空。注意抽出后的打穴棒不可平放在接種箱的底板上或菌棒上，而應將棒接觸培養料的一端朝上豎放在容器內或騰空懸掛在接種箱內，因為接種管經過氣霧消毒，但氣霧消毒劑只能殺死空間雜菌的營養體，而大部分黏附在底板上或菌棒上的真菌或細菌的芽孢卻未被殺死。接種時用手成塊掰下實施例3的富含有機硒香菇菌種塞入接菌穴，要求種塊與穴口膜接觸緊密，封死接種穴，逐孔接好后，套好套袋扎好袋口即可，換接另一袋。接種時注意不可用力地捏或搓菌種，以避免菌絲受損或水潰造成接種后菌絲難以恢復或死穴。⑤發菌(a)溫度保證菌袋最高溫度不超過30°C，以20°C _28°C為宜，注意加強通風、換氣、散熱、降溫。(b)光線應遮光，在黑暗或弱光條件下發菌。(C)濕度空氣相對濕度控制在80%以下。(d)空氣始終保持空氣流通，以利菌絲吸收氧氣，排出二氧化碳。⑥轉色管理待菌絲長滿后，進行轉色脫袋。
(a)溫度應控制在18°C _22°C，在脫袋的4_5d之內，要關閉好塑料大棚，進行保
濕管理。(b)濕度空氣相對濕度控制在80%左右。(C)光照加大光照強度。
(d)空氣始終保持空氣流通，以便菌絲吸收氧氣，排出二氧化碳。⑦出菇溫度控制在15°C _25°C之間，定量補水以保持濕度，加強通風換氣。富含有機硒香菇適宜在秋季進行栽培。有機硒香菇干品的有機硒含量為150_180ppm。實施例7:按照如下步驟培植富含有機硒靈芝①配制適用于靈芝栽培的培養料每IOOOkg的培養料固體中含有如下重量比例的原料組分雜木屑728kg、麩皮250kg、黃豆粉20kg、生長調節劑2kg、亞硒酸鈉150g(10-250g);培養料的含水量為60wt%-65wt%。先將雜木屑和麩皮鋪在地面上，然后鋪上黃豆粉、生長調節劑的水溶液以及質量濃度為25wt%的亞硒酸鈉水溶液,用鐵鍬翻動拌均2次,再加井水、自來水或河流干凈水拌均，加水量以使培養料的含水量達到60wt%-65wt%為準。然后人工拌料，用鐵鍬翻料到另一側堆積山形，如此反復翻料2-3次，直道培養料干濕混合均勻為止。②將拌好的培養料及時裝袋。用規格為55cmX15cmX0. 05cm或17cmX 55cmX O. 05cm的塑料袋作為培養袋，并且袋的一端事先熱合封口或者用繩扎封口，一般每個培養袋可裝干培養料約O. 9kg，可裝濕培養料約I. 8kg。因塑料袋的口徑較小，一般采用機械裝料的方式，用鐵鍬鏟取培養料倒入裝袋機料斗內，每I鏟的培養料即為裝I袋的料量，裝完后用塑料絲繩捆扎好袋口。③采用臥式高壓滅菌鍋進行高壓滅菌，擺放不要過緊，高壓鍋內水沸騰后，先打開放氣閥lOmin，再關上。壓力控制在O. 15MPa左右，保持125°C恒溫2h。然后，將熱源關閉，降溫降壓至常溫常壓時，方能打開鍋蓋。④采用開放式接種法進行接菌(a)菌棒冷卻。(b)消毒將實施例4的富含有機硒靈芝菌種及其他物品放置在菌棒堆上，點燃氣霧消毒劑4-5盒(160-200g)，并用薄膜把菌棒覆蓋嚴密，消毒時間為3-6h。(C)接種前放氣開放式接種，先把房門打開，用塑料棚帳式接種的即把帳門打開，再將覆蓋料棒的薄膜掀開一部分，一直放到接種入員能夠忍耐，即可進行接種，接種時使用蕈菌接菌凈化器(SJH-H型)，在風區內操作。(d)打穴接種解開套袋扎繩，拉出菌棒，在菌棒表面同一方向均勻打3-4個接種穴，直徑I. 5cm左右，深2-2. 5cm，打穴棒要旋轉抽出，防止穴口膜與培養料脫空。注意抽出后的打穴棒不可平放在接種箱的底板上或菌棒上，而應將棒接觸培養料的一端朝上豎放在容器內或騰空懸掛在接種箱內，因為接種管經過氣霧消毒，但氣霧消毒劑只能殺死空間雜菌的營養體，而大部分黏附在底板上或菌棒上的真菌或細菌的芽孢卻未被殺死。接種時用手成塊掰下實施例4的富含有機硒靈芝菌種塞入接菌穴，要求種塊與穴口膜接觸緊密，封死接種穴，逐孔接好后，套好套袋扎好袋口即可，換接另一袋。接種時注意不可用力地捏或搓菌種，以避免菌絲受損或水潰造成接種后菌絲難以恢復或死穴。⑤發菌(a)溫度保證菌袋最高溫度不超過30°C，以20°C _28°C為宜，注意加強通風、換氣、散熱、降溫。(b)光線應遮光，在黑暗或弱光條件下發菌。(C)濕度空氣相對濕度控制在80%以下。(d)空氣始終保持空氣流通，以利菌絲吸收氧氣，排出二氧化碳。⑥子實體栽培將菌袋埋于東西向陽畦的土中栽培，陽畦面積一般為5mX10m。將表土挖出，推于畦四周，拍緊，筑成土墻，北墻高40-50cm，南墻高10-20cm，東西兩側土墻隨 南北墻高度筑成北高南低的斜型墻。在南北兩側土墻上插入彎曲成弧形的毛竹片，筑成拱形架，拱形架中間離地面I. 7m左右。架上覆蓋塑料薄膜，膜頂蓋草簾。在陽畦內順東西長向筑寬I. 5m的兩個畦，畦間作業道70cm。菌袋入畦前，畦內地面先澆足水，菌袋在培養室長滿菌后移入陽畦，壺形袋由扎口處剪去薄膜，留2cm孔口，袋中部環割，脫去下半截塑料袋，立排于睦內，袋間距離3-4cm用混有10%棉籽殼的濕潤土壤填充,袋頂覆土 3cm左右巴平。土壤含水量應保持在22%左右。側面開孔的棒形袋橫臥于畦中，揭去膠布，覆土后隨即噴水。覆土層應逐步噴濕，I次噴水量不能過多，不使游離水分滲入到菌塊內部。每次噴水每平方米面積不超過1L。土干時每天可噴數次，直至達到土粒用于手指能捏扁、不黏糊為止。以后直到秋季出菇結束，覆土層的濕度基本上都要保持這個要求。⑦出菇管理(a)溫度靈芝子實體生長適宜的溫度為25°C _28°C。(b)濕度空氣相對濕度控制在90%_95%。(c)空氣始終保持空氣流通，以便菌絲吸收氧氣，排出二氧化碳。靈芝菌蕾形成需要比菌絲生長階段更好的空氣條件，而靈芝子實體開片時對空氣的要求比菌蕾期更高。(d)光照子實體發生時期光照強度須為IOOIx左右，子實體開片時期光照強度須為200Ix左右。⑧用普通套袋采粉法或機械吸風法采收靈芝孢子粉。⑨孢子粉干制可置烘房的烘盤內由低溫逐漸升高，最后60°C烘干。有機硒靈芝孢子粉的有機硒含量為100-130ppm。本發明提供的富含有機硒食用菌，建議食用量為3_4g/d。申請人:聲明，以上內容是結合具體的優選實施方式對本發明所作的進一步詳細說明，不能認定本發明的具體實施只局限于這些說明。對于本發明所屬技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，例如在本發明權利要求的精神和范圍內的富含有機砸的蛹蟲草、猴頭菌、金針燕、鳳尾燕、木耳等等品種及其培植，亦應當視為屬于本發明的保護范圍。因此，要求保護的技術方案的范圍不受所給出的任何特定示范教導的限制。
權利要求
1.一種富含有機硒食用菌菌種的制備方法，其特征在于，包括一級菌種的制備、二級菌種的制備和三級菌種的制備。
2.根據權利要求I所述的制備方法，其特征在于，所述一級菌種的制備采用一級菌種培養基； 所述一級菌種培養基，每IOOOml的培養基中含有如下重量比例的原料組分土豆200g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀I. 5g、硫酸鎂3g、維生素bllOmg、磷酸氫二鉀I. 5g、蛋白胨2g、瓊脂20g、亞硒酸鈉O. Ig,其余為水。
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述一級菌種培養基按照如下方法進行配制 (1)將土豆投入水中煮，水沸后繼續煮5-15min，過濾棄渣，向濾液中加入瓊脂，文火加熱并不斷攪拌至瓊脂完全溶化，加入葡萄糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、維生素bl、磷酸氫二鉀、蛋白胨和亞硒酸鈉，攪拌均勻后加水補足，得到液體培養基； (2)將液體培養基趁熱倒入試管中，在120°C_130°C的溫度和O. 15MPa的壓力下高壓滅菌20-35min，然后將壓力降至為零； (3)溫度降至50°C-70°C時，將試管斜放，待冷卻后形成具有斜面的試管培養基，一級菌種培養基配制完畢，移至恒溫箱內1°C _4°C下保存，備用。
4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中所述斜面的長度為試管長度的2/5-1/2。
5.根據權利要求1-4之一所述的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟 (1)制備一級菌種 ①從食用菌中分離孢子，接種至一級菌種培養基上，使其萌發、自由交配，在200C _28°C的溫度下培養，待孢子形成菌絲； ②挑選菌絲生長最快的菌種，接種至新的試管培養基上，作為原始種；所述新的試管培養基，其中亞硒酸鈉的含量為一級菌種培養基中亞硒酸鈉含量的2倍，其余與一級菌種培養基相同； ③待試管內菌絲長滿，觀察菌絲和試管斜面，排除細菌污染和斜面污染，挑選出生長最好者作為一級菌種； ④將一級菌種接種至一級菌種培養基上進行擴大繁衍，恒溫箱內1-4°C的溫度下保存備用; (2)制備二級菌種 ①根據食用菌菌種配制適合其生長的培養料； ②將亞硒酸鈉溶于水中制成質量濃度為5wt%-30wt%的亞硒酸鈉水溶液，按照每IOOOkg的培養料固體中含有125g亞硒酸鈉的比例，將亞硒酸鈉水溶液噴灑在①的培養料表面，攪拌均勻； ③在120°C_130°C的溫度和O. 15MPa的壓力下高壓滅菌I. 5_2h，然后降溫降壓至常溫常壓，配制成二級菌種培養料； ④無菌條件下，將步驟(I)④的一級菌種轉接到步驟(2)③的二級菌種培養料上，在,20 0C -28 °C的溫度下培養； ⑤待菌絲長滿之后，選擇性狀優良、無污染、生長速度快的菌種作為二級菌種，備用；(3)制備三級菌種 ①按照與步驟(2)①-步驟(2)③相同的方法配制成三級菌種培養料； ②無菌條件下，將步驟(2)⑤的二級菌種轉接到步驟(3)①的三級菌種培養料上，在·20 0C -28 °C的溫度下培養； ③待菌絲長滿之后，選擇性狀優良、無污染、生長速度快的菌種作為三級菌種，即得到了富含有機硒食用菌菌種。
6.根據權利要求1-5之一所述的制備方法得到的富含有機硒食用菌菌種。
7.—種富含有機硒食用菌的培植方法，其特征在于，采用權利要求6所述的富含有機硒食用菌菌種，并且在培養料中加入亞硒酸鈉。
8.根據權利要求7所述的培植方法，其特征在于，所述培養料的含水量為50wt%-70wt% ;更優選為 55wt%-65wt% ;最優選為 60wt%。
9.根據權利要求7或8所述的培植方法，其特征在于，所述亞硒酸鈉在培養料固體中的質量濃度為 O. 001wt%-0. 055wt% ;優選為 O. 015wt%-0. 035wt% ;最優選為 O. 025wt% ； 優選地，所述亞硒酸鈉是以亞硒酸鈉水溶液的形式加入到培養料中的； 優選地，所述亞硒酸鈉水溶液的質量濃度為5wt%-30wt% ;更優選為10wt%-25wt% ;最優選為20wt%。
10.根據權利要求7-9之一所述的培植方法得到的富含有機硒食用菌。
全文摘要
本發明涉及富含有機硒食用菌菌種及其制備方法以及富含有機硒食用菌及其培植方法。主要是在培養基中加入亞硒酸鈉，通過三級菌種的制備使得無機硒轉化成為了菌種內的有機硒，杜絕了以往人工葉面噴灑無機硒、外部強制提高硒元素含量的情況，獲得了菌絲生長速度快、抗逆性強、積硒能力強的富含有機硒食用菌菌種；再以所述菌種培植出硒元素含量高、質量高、產量高的富含有機硒食用菌。本發明的富含有機硒食用菌產品可顯著提高人體免疫功能，對于多種疾病均有良好的預防和治療作用。
文檔編號A01G1/04GK102960184SQ20121047884
公開日2013年3月13日 申請日期2012年11月22日 優先權日2012年11月22日
發明者吳超, 吳慶旺 申請人:興隆縣慶旺富硒食用菌農民專業合作社