專利名稱：一種動物養殖用乳酸菌液的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種動物養殖用乳酸菌液的制備方法。
背景技術：
乳酸菌是生豬和家禽養殖行業常用的有益菌。液體乳酸菌生產成本比較低，是一種應用比較廣泛的活菌制劑，主要通過飲水體系供動物飲用。傳統的乳酸菌制劑，不論是固態干粉還是瓶裝或者桶裝菌液，都是在純培養環境下生產的，生產過程的無菌條件要求很高，設備投資大，能耗高，原料需要高溫消毒滅菌，每噸液體制劑生產成本至少在5000元以上，導致乳酸菌制劑的推廣應用存在很大困難。

發明內容
本發明的目的是提供一種動物養殖用乳酸菌液的制備方法，包括如下步驟I)將乳酸菌發酵培養基加熱至95— 100°C滅菌5 — 20分鐘后，冷卻至38°C以下；2)將同型乳酸發酵菌的種子液按I: (2—50)的體積比接種至經步驟I)冷卻的所述發酵培養基中進行液體厭氧發酵；3)收集經步驟2)所述液體厭氧發酵的發酵液，獲得所述動物養殖用乳酸菌液；所述發酵培養基為同型乳酸發酵菌的發酵培養基；在上述方法中，發酵培養基的滅菌溫度為95— 100°C，不需要使用高壓罐等設備；大比例接種同型乳酸發酵菌的種子液使雜菌不易繁殖。在上述方法中，在進行所述液體厭氧發酵前先將接種所述同型乳酸發酵菌的種子液的所述發酵培養基分裝；由于同型乳酸發酵菌發酵不需氧氣，且發酵過程中不產生二氧化碳氣體，采用先分裝后發酵的方式既可提高發酵效率，又可降低污染率。在上述方法中，所述同型乳酸發酵菌的種子液中的所述同型乳酸發酵菌濃度為2X 10lclcfu/L—2X 1012cfu/L。在上述方法中，為了進一步降低成本，所述發酵培養基具體可為將去皮豆柏、水、紅糖或葡萄糖和糖蜜按35:400:20:20的質量比制成的溶液；具體可按照包括如下步驟的方法進行將所述去皮豆柏用水浸泡后磨成粉狀，再用水提取，收集所有水提液與所述紅糖或葡萄糖和所述糖蜜混合制成溶液；所述浸泡的溫度可為常溫(15 — 35°C)，時間可為20-30小時；另外，由于豆柏中含有豐富的植物蛋白，無抗生素成分，發酵后的產物用于飼喂動物更安全。在上述方法中，步驟2)所述液體厭氧發酵的溫度為18 — 40°C，如18 — 28°C或28-40。。。在上述方法中，步驟2)所述液體厭氧發酵的時間可為4-21天，根據同型乳酸發酵菌種類和發酵溫度的不同而不同。在上述方法中，步驟2)所述同型乳酸發酵菌的種子液是將所述同型乳酸發酵菌用所述發酵培養基進行液體厭氧發酵獲得的所有發酵產物。
在上述方法中，所述同型乳酸發酵菌具體可為糞腸球菌(Enterococcusfaecal is)、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)或屎腸球菌(Enterococcusfaecom)。實驗證明利用本發明方法制備得到的同型乳酸發酵菌液在17 38°C下保存30天，活菌數量基本不變，存放3個月，活菌殘留比例在80%以上，活菌數檢測過程中雜菌含量均在5. Ocfu/mL以下；在生豬養殖過程中，飼喂含3mL/kg同型乳酸發酵菌液的日糧，可使斷奶仔豬糞便中的蛋白殘留量減少17%，豬舍氨氣濃度明顯降低；同時可明顯提高仔豬的平均日增重和飼料轉化效率。使用本發明所提供的方法制備動物養殖用乳酸菌液的優點如下獲得的乳酸菌液可應用于生豬和家禽養殖的直接飲用，對設備的要求低，生產成本低(每噸成品的生產成本不超過3000元)，獲得的乳酸菌液質量穩定，有利于乳酸菌液在養殖業中的推廣應用，提高動物生產性能的同時提高動物源性食品的安全。
具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。下述實施例所使用的乳酸菌來源如下糞腸球菌(Enterococcus faecalis):中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，編號為CGMCC1. 101 ；嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus):中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，編號為CGMCC I. 1855 ；屎腸球菌(Enterococcus faecom):中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心,編號為CGMCC1. 2025。下述實施例所采用的原料來源如下豆柏東海糧油集團有限公司，“四?！迸?。葡萄糖濟南德佳化工有限公司，食品級，“西王”牌。甜菜糖蜜北京銀天使國際貿易有限公司，含糖量46%。紅糖嘉興古鄉紅糖食品科技有限公司，“古鄉”牌。實施例I、動物養殖用糞腸球菌(Enterococcus faecalis)液的制備方案I 取35kg去皮豆柏，加入350kg水，常溫(15-35 V )浸泡20小時后用磨漿機磨碎(成粉狀)，離心去除沉淀，取所有水提液(即上清液)用抽水泵轉入到容積為1000升水罐中；再補加50kg水、20kg葡萄糖和20kg甜菜糖蜜,30 36rpm下低速攪拌；通蒸汽加熱到95°C滅菌20分鐘；在夾套通冷卻水降溫，同時12 15rpm下低速攪拌使培養基的溫度保持均勻；當罐內溶液溫度下降到38°C以下時,接入糞腸球菌(Enterococcus faecalis)種子液8升(即按體積比為1:50接種)，靜置5分鐘，然后分裝在容積為10升的塑料桶中，每個桶都裝滿，不留空隙。封閉上部裝料口，18 28°C下放置21天后，活菌含量為I. 2X1012cfu/L，獲得動物養殖用糞腸球菌(Enterococcusfaecalis)液。本方案中的糞腸球菌(Enterococcus faecalis)種子液的制備方法如下
I、制備純種單菌落按表I的配比配制I升培養基，加熱至80 90°C，充分攪拌，徹底溶解各組分，獲得組成均一的培養基。將培養基冷卻到70°C，分裝在500ml三角瓶中，每瓶250ml，瓶口用棉塞封口，外包牛皮紙。120°C滅菌20 30分鐘，待培養基冷卻至60°C，在無菌條件下把培養基倒入直徑為9. Ocm的培養皿中，每皿15 20ml，冷卻至室溫備用。在上述裝有培養基的平皿中分別加入O. 5ml經無菌生理鹽水稀釋至10_4、10_5和ICT6倍的糞腸球菌(Enterococcusfaecalis)，每個稀釋倍數3個重復，35 39°C下厭氧恒溫培養3天，獲得生長良好的純種單菌落。表I.固體培養基(以IOOOml為基準)組分
權利要求
1.一種動物養殖用乳酸菌液的制備方法，包括如下步驟 1)將乳酸菌發酵培養基加熱至95—100°C滅菌5 — 20分鐘后，冷卻至38°C以下； 2)將同型乳酸發酵菌的種子液按I:(2-50)的體積比接種至經步驟I)冷卻的所述發酵培養基中進行液體厭氧發酵； 3)收集經步驟2)所述液體厭氧發酵的發酵液，獲得所述動物養殖用乳酸菌液。
2.根據權利要求I所述的方法，其特征在于在進行所述液體厭氧發酵前先將接種所述同型乳酸發酵菌的種子液的所述發酵培養基分裝。
3.根據權利要求I或2所述的方法，其特征在于所述同型乳酸發酵菌的種子液中的所述同型乳酸發酵菌濃度為2X 101(lcfu/L— 2X 1012cfu/L。
4.根據權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于所述發酵培養基是將去皮豆柏、水、紅糖或葡萄糖和糖蜜按35:400:20:20的質量比制成的溶液。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于所述發酵培養基按照包括如下步驟的方法制成將所述去皮豆柏用水浸泡后磨成粉狀，再用水提取，收集所有水提液與所述紅糖或葡萄糖和所述糖蜜混合制成溶液。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于所述浸泡的溫度為15— 35°C，時間為20—30小時。
7.根據權利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于步驟2)所述液體厭氧發酵的溫度為 18 — 40°C。
8.根據權利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于步驟2)所述液體厭氧發酵的時間為4 一21天。
9.根據權利要求1-8中任一所述的方法，其特征在于步驟2)所述同型乳酸發酵菌的種子液是將所述同型乳酸發酵菌用所述乳酸菌發酵培養基進行液體厭氧發酵獲得的所有發酵產物。
10.根據權利要求1-9中任一所述的方法，其特征在于所述同型乳酸發酵菌為糞腸球菌(Enterococcus faecalis)、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)或屎腸球菌(Enterococcus faecom)。
全文摘要
本發明公開了一種動物養殖用乳酸菌液的制備方法。該方法包括如下步驟1)將發酵培養基加熱至95—100℃滅菌5—20分鐘后，冷卻至38℃以下；2)將同型乳酸發酵菌的種子液按1:(2—50)的體積比接種至經步驟1)冷卻的所述發酵培養基進行液體厭氧發酵；3)收集經步驟2)所述液體厭氧發酵的發酵液，獲得所述動物養殖用乳酸菌液。使用本發明所提供的方法制備動物養殖用乳酸菌液的優點如下對設備的要求低，生產成本低，獲得的乳酸菌液質量穩定，有利于乳酸菌液在養殖業中的推廣應用，提高動物生產性能的同時可提高動物源性食品的安全。
文檔編號A23K1/00GK102960537SQ20121049151
公開日2013年3月13日 申請日期2012年11月27日 優先權日2012年11月27日
發明者陸文清, 王春林, 王園, 劉緒同 申請人:北京同力興科農業科技有限公司