專利名稱：團頭魴與翹嘴紅鲌間雜交品系的建立方法及翹嘴鳊的培育方法
技術領域：
本發明涉及魚類遠緣雜交育種方法，尤其涉及通過遠緣雜交技術建立兩性可育異源品系的方法及利用可育異源品系制備新型雜交魚的方法。
背景技術：
遠緣雜交可以使基因組從一個物種轉移到另一個物種中，從而導致雜交后代的表現型和基因型都發生改變，如果遠緣雜交能形成可育的異源品系，則為遺傳育種提供了重要的種質資源庫，這在遺傳育種方面具有重要意義。遠緣雜交可促進多倍體的發生并可能形成具有雜交優勢的雜交后代，且已被證明是形成兩性可育異源四倍體魚的有效方法。可
育異源四倍體魚不僅可作為進化生物學基礎研究上重要的模式動物，而且在生產應用上具有重要價值。利用四倍體魚與二倍體魚雜交可以實現不育三倍體魚的大規模制備，不育三倍體生物可用于繁殖的能量轉化到生長能量，形成生長快、個體大、肉肥味美、抗逆性強的經濟魚類，對控制養殖魚類的過度繁殖和保護天然種質資源也具有重要意義。可育異源品系的建立可為異源多倍體育種奠定堅實的基礎。如何利用和改進現有的生物學技術和方法來快速研制出新型可育異源魚類品系，已成為本領域技術人員長期面臨和需要解決的問題。翅嘴舶iErythroculter iIishaeformis)屬鯉形目，鯉科,舶亞科,舶屬；俗稱大白魚、翹殼、翹嘴巴等(英文名=Topmouth culter);翹嘴舶在我國各大水系均有分布，是長江流域優質經濟魚類，其個體大、生長快、肉質潔白、肉味質細嫩鮮美，素有“長江上等名魚”和“太湖三白”之首的美譽，為魚中上品，被列為我國淡水四大名魚之一。野生翹嘴紅舶是以活魚為主食的兇猛肉食性魚類，苗期以浮游生物翹嘴紅舶及水生昆蟲為主食，50克以上主要吞食小魚小蝦，也吞食少量幼嫩植物。翹嘴舶雄性一般2年性成熟，雌性2 3年性成熟。思年糊(Megalobrama ambIvcephala Z/A )屬鯉形目，鯉科,舶亞科,鮮屬；俗稱縮項鳊、武昌魚，平胸鳊(英文名Bluntsnout bream)。鮮是一種歷史名貴魚類,其肉質嫩滑，味道鮮美，是我國主要淡水養殖魚類之一，原產于長江中游一帶通江的湖泊，現已推廣到全國各地養殖。團頭魴以草食性為主，同時也能攝食部分湖底植物碎屑和少量浮游動物，因此食性范圍較廣，團頭魴雌雄均為2年性成熟。現有技術中，尚未見有利用遠緣雜交技術培育兩性可育異源魴舶品系及利用可育鮮舶品系制備翅嘴編的相關報道。

發明內容
本發明要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種團頭魴與翹嘴紅舶間雜交品系的建立方法，該方法可以獲得遺傳穩定、兩性可育的異源魴舶品系，還相應提供一種翹嘴鳊的培育方法，通過該培育方法以制備得到生長速度快、抗逆性強、肉質好、體形優美等特征的新型雜交魚一翅嘴鳊。為解決上述技術問題，本發明提出的方案為一種團頭魴與翹嘴紅舶間雜交品系的建立方法，包括以下步驟以團頭魴為母本，翹嘴紅舶為父本，經遠緣雜交后獲得魴舶雜交F1，對所述的魴舶雜交F1進行飼養，通過對魴舶雜交F1的倍性、育性進行檢測，篩選獲得兩性可育的二倍體魴舶雜交F1 ;然后以兩性可育的二倍體魴舶雜交F1為對象進行培育，當其達到性成熟年齡時，使兩性可育的二倍體魴舶雜交F1進行自交繁殖，再經孵化、養殖，獲得二倍體魴舶F2 ;對二倍體魴舶F2的倍性、育性進行檢測，篩選獲得高成活率的兩性可育且遺傳穩定的二倍體魴舶F2，完成了團頭魴與翹嘴紅舶間雜交品系的建立。通過rDNA基因序列分析，對魴舶雜交F1代及二倍體魴舶F2代的遺傳穩定性進行研究，確定了本發明方法獲得的雜交品系的遺傳穩定性，從而建立了魴舶雜交品系。所述遺傳穩定性研究特別體現在rDNA ITS序列在雜交后代中的遺傳穩定性。上述的團頭魴與翹嘴紅舶間雜交品系的建立方法中，所述自交繁殖優選包括人工催產和人工干法授精步驟。
上述的團頭魴與翹嘴紅舶間雜交品系的建立方法中，所述人工催產的具體操作優選包括以下步驟在繁殖季節，將達到性成熟年齡的可育的二倍體魴舶雜交F1置于20°C 26°C的水溫環境中，先對該二倍體魴舶雜交F1的母本親魚注射黃體素釋放激素類似物、絨毛膜促性腺激素及地歐酮的混合催產劑進行催產，再對該二倍體魴舶雜交F1的父本親魚注射黃體素釋放激素類似物和絨毛膜促性腺激素進行催產；注射完畢后按I : 2 3的數量比將該二倍體魴舶雜交F1的母、父本親魚投放到產卵池中，先向產卵池中沖水，然后讓二倍體魴舶雜交F1的母、父本親魚在靜水中催產，直至其開始順利產卵和產精。上述的團頭魴與翹嘴紅舶間雜交品系的建立方法，優選的，所述母本親魚的黃體素釋放激素類似物的注射劑量為8 μ g/kg 10 μ g/kg，絨毛膜促性腺激素的注射劑量為400IU/kg 800IU/kg，地歐酮的注射劑量為lmg/kg ;所述父本親魚的黃體素釋放激素類似物的注射劑量和絨毛膜促性腺激素的注射劑量均為母本親魚注射劑量的一半。作為一個總的技術構思，本發明還提供一種翹嘴鳊的培育方法，包括以下步驟利用上述建立方法中獲得的兩性可育的二倍體魴舶雜交F1和二倍體魴舶F2，與團頭魴進行回交育種，獲得雜交魚翹嘴鳊。該翹嘴鳊具有生長速度快、抗逆性強、經濟性狀整齊、肉質鮮美、嘴巴上翹等特點。上述的翹嘴鳊的培育方法中，所述回交育種優選包括人工催產和人工干法授精步驟。上述的翹嘴鳊的培育方法中，所述人工催產的具體操作優選包括以下兩種方式。根據人工催產選擇的父、母本親魚的不同，第一種方式優選包括以下步驟在繁殖季節，選擇腹部膨脹、輕壓能擠出墨綠色卵粒的雌性團頭魴作為母本親魚，選擇輕壓腹部能擠出白色精液的雄性二倍體魴舶雜交F1和雄性二倍體魴舶F2作為父本親魚，將前述回交用的母本親魚和父本親魚置于20°C 26°C的水溫環境中，先對母本親魚注射黃體素釋放激素類似物、絨毛膜促性腺激素及地歐酮的混合催產劑進行催產，再對父本親魚注射黃體素釋放激素類似物和絨毛膜促性腺激素進行催產；注射完畢后按I : 3 5的數量比將母、父本親魚投放到產卵池中，先向產卵池中沖水,然后讓前述母、父本親魚在靜水中催產,直至其開始順利產卵和產精。所述雌性團頭魴的黃體素釋放激素類似物的注射劑量優選為8 μ g/kg 10 μ g/kg，絨毛膜促性腺激素的注射劑量優選為500IU/kg 1000IU/kg，地歐酮的注射劑量優選為lmg/kg ;所述父本親魚的黃體素釋放激素類似物的注射劑量和絨毛膜促性腺激素的注射劑量均為前述雌性團頭魴注射劑量的一半。根據人工催產選擇的父、母本親魚的不同，第二種方式優選包括以下步驟在繁殖季節，選擇腹部膨脹、輕壓能擠出墨綠色卵粒的雌性二倍體魴舶雜交F1作為母本親魚，選擇輕壓腹部能擠出白色精液的雄性團頭魴，將前述回交用的母本親魚和父本親魚置于20°C 26°C的水溫環境中，先對母本親魚注射黃體素釋放激素類似物、絨毛膜促性腺激素及地歐酮的混合催產劑進行催產，再對父本親魚注射黃體素釋放激素類似物和絨毛膜促性腺激素進行催產；注射完畢后按I : 2 3的數量比將母、父本親魚投放到產卵池中，先向產卵池中沖水，然后讓前述母、父本親魚在靜水中催產，直至其開始順利產卵和產精。所述雌性二倍體魴舶雜交F1的黃體素釋放激素類似物的注射劑量優選為8 μ g/kg 10 μ g/kg,絨毛膜促性腺激素的注射劑量優選為400IU/kg 800IU/kg，地歐酮的注射劑量優選為lmg/kg ;所述父本親魚的黃體素釋放激素類似物的注射劑量和絨毛膜促性腺激素的注射劑量均為前述雌性二倍體魴舶雜交F1注射劑量的一半。在上述的技術方案中，所述倍性生物學特征的檢測方法優選是指外周血細胞培養染色體倍性檢測方法，所述育性生物學特征的檢測方法優選是指組織石蠟切片技術。此外，流式細胞技術、掃描和透射電鏡技術等生物學方法也可用于對魴舶群體倍性、育性等主要生物學特性進行檢測。與現有技術相比，本發明的優點在于通過采用本發明的方法，不僅可以獲得遺傳穩定、兩性可育的異源魴舶品系，同時還可培育得到具有生長速度快、抗逆性強等雜交優勢的新型雜交魚——翅嘴鳊。更重要的是，本發明方法獲得的異源魴舶品系在魚類遺傳育種和生物進化方面具有重要意義。在生產應用上，兩性可育異源魴舶品系的建立，為魴舶遺傳育種提供了優質的種質資源庫，如本發明中翹嘴鳊的培育，即是利用兩性可育的魴舶品系與團頭魴回交后制備得到，且獲得的翹嘴鳊具有生長速度快，耐低氧等顯著遺傳優勢，14月齡的翹嘴鳊平均可長到I. 2 I. 3kg，魴舶品系的建立也為后續多倍體魴舶遺傳育種奠定了基礎。通過進一步 選育，有望從中選育獲得四倍體魴舶品系，實現不育三倍體魴舶的大規模制備，為水產養殖提供理想的養殖品種。在生物進化上，雜交被認為是推動物種形成乃至物種大爆發的催化齊U，但是一直缺乏直接、有效的證據，而本發明獲得的穩定的魴舶雜交品系可能形成一個新的物種，從而為研究雜交與物種爆發的關系提供了理想的實驗模型。


圖I為本發明實施例中團頭魴(早)X翹嘴紅舶U )雜交獲得的魴舶雜交F1在I年齡時的外形照片。圖2為本發明實施例中團頭魴(早)X翹嘴紅舶U )雜交獲得的魴舶雜交F1的染色體圖(2n=48)。圖3為本發明實施例中團頭魴(早)X翹嘴紅舶U )雜交獲得的魴舶雜交F1在15月齡時的雌性卵巢石蠟切片圖。圖4為本發明實施例中團頭魴(早)X翹嘴紅舶U )雜交獲得的魴舶雜交F1在15月齡時的雄性精巢石蠟切片圖。圖5為本發明實施例中二倍體魴舶F2在6月齡時的外形照片。圖6為本發明實施例中二倍體魴舶F2的染色體圖(2n=48)。圖7為本發明實施例中雌性二倍體魴舶F2在15月齡時雌性卵巢石蠟切片圖。圖8為本發明實施例中雄性二倍體魴舶F2在15月齡時雄性精巢石蠟切片圖。圖9為本發明實施例中二倍體魴舶F1及魴舶F2與其原始親本團頭魴和翹嘴紅舶間rDNA ITSl序列比對圖。圖10為本發明實施例中團頭魴(早)X魴舶雜交F1及F2 ( )回交制備的翹嘴鳊在4月齡時的外形照片。
圖11為本發明實施例中團頭魴(早)Χ魴舶雜交F1及F2 ( )回交制備的翹嘴鳊的染色體圖(2η=48)。圖12為本發明實施例中魴舶雜交F1 (早)X團頭魴U )回交制備的翹嘴鳊在14月齡時的外形照片。圖13為本發明實施例中魴舶雜交F1 (早)X團頭魴U )回交制備的翹嘴鳊的染色體圖(2η=48)。
具體實施例方式以下結合說明書附圖和具體實施例對本發明作進一步描述。實施例
一種本發明的團頭魴與翹嘴紅舶間雜交品系的建立方法，包括以下步驟
I.魴舶雜交F1的制備及其篩選。以團頭魴為母本，翹嘴紅舶為父本，經遠緣雜交后獲得魴舶雜交F1，對該魴舶雜交F1進行飼養，通過對魴舶雜交F1的倍性、育性進行檢測，篩選獲得兩性可育的二倍體魴舶雜交卩1 ;魴舶雜交F1的獲得及篩選方法可參見CN101720698A號中國專利文獻。圖I為本實施例獲得魴舶雜交F1代在I年齡時的外形照片，圖2為本實施例獲得的二倍體魴舶雜交F1的染色體圖。從2月齡開始，每月定時取材，每次取4 6條魚，到其到達2年齡時停止取材，利用石蠟切片技術對其性腺發育情況進行檢測。石蠟切片具體步驟為I)取實驗魚稱重解剖，取性腺用Bouin氏液固定I 2天；2)洗滌=Bouin氏液固定的材料直接換70%酒精更換數次即可；3)脫水采用70%、80%、95%、100%的酒精梯度脫水，其中，95%、100%酒精重復兩次，以保證組織中水分脫除干凈，各級酒精脫水的時間約45min Ih,然后入100%酒精與二甲苯的混合液(體積比I : l)30min 45min，再入二甲苯15min 30min，直到組織透明為止；4)透蠟透蠟以前做好準備工作，如準備蠟杯，事先熔蠟，放入溫箱，保持溫度55°C 60°C左右，注意勿使溫度過高防止組織發脆；將已經透明的組織放入二甲苯石蠟混合液內約20min 30min，然后入純蠟杯，每杯透錯45min Ih,共2h 3h透臘完畢；5)折紙盒按組織塊大小折成紙盒，盒上注明材料名稱、代號等；6)包埋準備好小鑷子、酒精燈、冷水等；將透蠟后的組織塊放入加熱后的熔融狀態的石蠟中(用小紙盒盛之)，待其冷卻凝固；7)修切和固著蠟塊；8)切片和烘片37°C烘片I 3天；9)染色二甲苯20min，兩次，100%酒精與二甲苯的混合液(體積比I : I)5min, 100%、95%、80%、70%的酒精各5min,蒸懼水5min,吸水紙吸干；蘇木精染20min 40min，水沖洗干凈；分色(1%HC1 3s IOs ;蒸餾水3s 10s，1%氨水3s 10s)，70%、80%、90%、95%(加O. 5%的伊紅)、95%、100%、100%的酒精脫水各2min，100%酒精與二甲苯的混合液(體積比I : I) 5min, 二甲苯5min,兩次；10)樹膠封片,鏡檢,拍照。15月齡時，解剖實驗魚，可看見雌性魴舶F1兩側卵巢均發育正常，卵巢呈長橢圓形，手觸后有松軟感，切片觀察發現卵巢發育至III期卵巢，其中存在大量處于II和III時相的卵母細胞(參見圖3);雄性魴舶F1的精巢兩邊對稱，外表呈乳白色，發育狀態良好，并且部分個體輕壓腹部可以擠出白色精液，石蠟切片觀察發現，其中精細小管內可觀察到精原細胞、精子細胞和大量的成熟精子(參見圖4)。在I年齡以后檢測的50個樣本中，除去7條三倍體，所有的二倍體魴舶雜交F1個體的性腺均表現為可育型，這些結果表明，魴舶雜交F1兩性發育正常，相比同類遠緣雜交試驗，本發明首先極大地提高團頭魴與翹嘴紅舶遠緣雜交后代中可育后代的比例，具有雌雄催產率高的特點。二倍體魴舶F2的制備。 以上述獲得的兩性可育的二倍體魴舶雜交F1為對象進行培育，當其達到性成熟年齡時，使兩性可育的二倍體魴舶雜交F1進行自交繁殖，自交繁殖包括魴舶雜交匕的人工催產和人工干法授精步驟，自交繁殖后再經孵化、養殖，獲得魴舶F2。圖5為魴舶F2在6月齡時的外形照片。魴舶雜交匕的人工催產具體包括以下步驟在繁殖季節(每年5月下旬至7月上旬間)，將達到性成熟年齡的兩性可育的二倍體魴舶雜交F1置于20°C 26°C的水溫環境中，先對二倍體魴舶雜交F1的母本親魚注射黃體素釋放激素類似物、絨毛膜促性腺激素及地歐酮的混合催產劑進行催產，黃體素釋放激素類似物的注射劑量為8 μ g/kg 10μ g/kg，絨毛膜促性腺激素的注射劑量為400IU/kg 800IU/kg，地歐酮的注射劑量為lmg/kg ;母本注射完后4h 5h，再對上述獲得的二倍體魴舶雜交F1代的父本親魚注射黃體素釋放激素類似物和絨毛膜促性腺激素進行催產，父本親魚中黃體素釋放激素類似物的注射劑量和絨毛膜促性腺激素的注射劑量均為前述母本親魚注射劑量的一半。注射完畢后按I:2 3的數量比將二倍體魴舶雜交F1代的母、父本親魚投放到產卵池中，先向產卵池中沖水，然后讓二倍體魴舶雜交F1代母、父本親魚在靜水中催產，直至其開始順利產卵和產精。孵化期間，對二倍體魴舶雜交F1雜交獲得的魴舶F2的受精率和孵化率進行統計，結果顯示，其受精率和孵化率分別為91. 6%和82. 3%，可見，利用魴舶雜交F1進行自交可獲得龐大的魴舶F2群體。相比同類遠緣雜交F2代的受精率和孵化率，本發明雜交方法的受精率和孵化率得到了顯著的提高。利用外周血細胞培養方法染色體制片法對本實施例制得的魴舶F2進行倍性檢測，外周血細胞培養的染色體倍性檢測方法的操作步驟包括1)在超凈工作臺中配制培養基，IOOml培養基含以下成分84ml RPMI-1640,15ml小牛血清，2支PHA, Iml O. 1%的肝素鈉，以7. 5% NaHCO3 (無菌)或IN HCl調pH至7. 2 7. 4 ;2)用注射器吸取少量滅菌肝素鈉溶液，于用碘酒消毒后的實驗魚尾部靜脈取血；3)按每IOml培養液中加入約O. 2ml抗凝血的標準將抗凝血加入培養基中，于24°C 5% 二氧化碳濃度的培養箱中培養68h 72h，培養期間，定期輕搖勻，以使細胞充分接觸培養基；4)終止培養前24h，在培養液中用Iml注射器滴加10 μ g/ml的秋水仙堿，使其終濃度為O. 05 μ g/ml O. 07 μ g/ml ；以上步驟I 4均需無菌操作；5)將培養物全部轉入潔凈的10 ml離心管中，以IOOOrpm離心5min，棄上清液；
6)向離心管中加入低滲液9ml,混勻,低滲25min 30min ;7)加入Iml固定液,輕輕混勻后IOOOrpm離心5min,棄上清液；8)加入4ml固定液,輕輕混勻，靜置20min后IOOOrpm離心5min，棄上清液；9)重復步驟8)—次；10)視最后細胞數量多少加入適量固定液制成細胞懸液(一般為Iml 2ml)后，吸取細胞懸液自20cm 30cm高處滴片，輕吹散,空氣中自然干燥；ll)Giemsa染液染色20min 40min，細水流沖洗載玻片背面去除染液，氣干后鏡檢、拍照。檢測結果顯示，被檢測的魴舶F2個體均為二倍體(參見圖6)。從上述獲得的二倍體魴舶F2的2月齡開始，每月定時取材，每次取4 6條二倍體魴舶F2，利用石蠟切片技術對其性腺發育情況進行檢測，石蠟切片方法如上所述，圖7和圖8分別為雌性和雄性二倍體魴舶F2在15月齡時的性腺石蠟切片圖。從圖7中可以看出，雌性二倍體魴舶F2的15月卵巢中存在大量處于II和III時相的卵母細胞，卵巢發育正常；雄性二倍體魴舶F2在15月精細小管中發育正常，管內可以觀察到大量精子細胞。另外，在I年齡時，部分雄性二倍體魴舶F2的個體便可以擠出白色精液，相比于二倍體魴舶雜交F1,其達到性成熟的年齡變短了，這與我們在異源四倍體鯽鯉中觀察到的結果一致，表明雜交可能會導致雜交后代性成熟年齡提早。另外，抽取二倍體魴舶雜交Fp F2及其親本團頭魴和翹嘴紅舶血液，血液抗凝劑(Ara)防止血液凝固，利用UNIQ-10柱式基因組DNA抽提試劑盒(sangon)提取其基因組DNA，采用聚合酶鏈式反應(PCR)擴增其rDNA內部轉錄間隔區(ITS)序列進行測序，并與其親本進行比較，結果如圖9所示。由圖9可見，二倍體魴舶雜交F1及F2均共同遺傳了團頭魴和翹嘴舶特異的ITSl序列，這為本發明方法獲得的魴舶品系的遺傳穩定性提供了直接的證據。—種本發明的翹嘴鳊的培育方法，包括以下步驟將本實施例上述方法中獲得的兩性可育的二倍體魴舶雜交F1和二倍體魴舶F2，與團頭魴進行回交育種，回交育種包括人工催產和人工干法授精步驟，回交育種后獲得雜交魚翹嘴鳊。上述回交育種中的人工催產包括以下兩種方式
方式一在繁殖季節，選擇腹部膨脹、輕壓能擠出墨綠色卵粒的雌性團頭魴作為母本親魚，選擇輕壓腹部能擠出白色精液的雄性二倍體魴舶雜交F1和F2作為父本親魚，將母、父本親魚置于20°C 26°C的水溫環境中，先對前述母本親魚注射黃體素釋放激素類似物、絨毛膜促性腺激素及地歐酮的混合催產劑進行催產，雌性團頭魴母本親魚的黃體素釋放激素類似物的注射劑量為8 μ g/kg 10 μ g/kg,絨毛膜促性腺激素的注射劑量為500IU/kg 1000IU/kg，地歐酮的注射劑量為lmg/kg ;母本親魚注射完畢4h 5h后，再對前述父本親魚注射黃體素釋放激素類似物和絨毛膜促性腺激素進行催產，父本親魚的黃體素釋放激素類似物的注射劑量和絨毛膜促性腺激素的注射劑量均為母本親魚注射劑量的一半；注射完畢后按I : 3 5的數量比將母、父本親魚投放到產卵池中，先向產卵池中沖水，然后讓前述母、父本親魚在靜水中催產，直至其開始順利產卵和產精。方式二 在繁殖季節，選擇腹部膨脹、輕壓能擠出墨綠色卵粒的雌性二倍體魴舶雜交F1作為母本親魚，選擇輕壓腹部能擠出白色精液的雄性團頭魴作為父本親魚，將母、父本親魚置于20°C 26°C的水溫環境中，先對前述母本親魚注射黃體素釋放激素類似物、絨毛膜促性腺激素及地歐酮的混合催產劑進行催產，雌性二倍體魴舶雜交F1的黃體素釋放激素類似物的注射劑量為8 μ g/kg 10 μ g/kg,絨毛膜促性腺激素的注射劑量為400IU/kg 800IU/kg，地歐酮的注射劑量為lmg/kg ;母本親魚注射完畢4h 5h后，再對前述父本親魚注射黃體素釋放激素類似物和絨毛膜促性腺激素進行催產，父本親魚的黃體素釋放激素類似物的注射劑量和絨毛膜促性腺激素的注射劑量均為母本親魚注射劑量的一半；注射完畢后按I : 2 3的數量比將母、父本親魚投放到產卵池中，先向產卵池中沖水，然后讓前述母、父本親魚在靜水中催產，直至其開始順利產卵和產精。不論采用上述的哪種人工催產方式，當人工催產8h 12h后，選取產卵順利的母本親魚與產精順利的父本親魚進行人工干法授精，將受精卵均勻鋪于玻璃培養皿中，24°C左右的流水孵化。待魚苗全部孵出后，繼續在玻璃培養皿中培育2天，再將魚苗放入網箱中繼續飼養，其中清水的高度從30cm高逐漸提升,在一周內升高到O. 8m I. 2m,當魚苗長到3cm 4cm長時，轉入池塘中飼養；1 2天后潑灑豆漿，2 3次/天，力求細、勻。魚苗長成后經檢測獲得二倍體雜交魚翹嘴鳊。其中，采用上述方式一人工催產后獲得的翹嘴鳊的外形照片和染色體圖分別如圖10、圖11所示，采用上述方式二人工催產后獲得的翹嘴鳊的外形照片和染色體圖分別如圖12、圖13所示。在采用上述方式一回交制備的翹嘴鳊達到4月齡時，以及采用上述方式二回交制備的翹嘴鳊達到14月齡時，隨機選取20尾，測量其體重，計算其平均重量；同時對它們的外部形態特征進行檢測，包括背鰭條、腹鰭條、臀鰭條、側線鱗、側線上鱗和側線下鱗；檢測結果如下表I所示。表I :翹嘴鳊的外部形態特征檢測結果對照
權利要求
1.一種團頭魴與翹嘴紅舶間雜交品系的建立方法，包括以下步驟以團頭魴為母本， 翹嘴紅舶為父本，經遠緣雜交后獲得魴舶雜交F1，對所述的魴舶雜交F1進行飼養，通過對魴舶雜交F1的倍性、育性進行檢測，篩選獲得兩性可育的二倍體魴舶雜交F1 ;然后以兩性可育的二倍體魴舶雜交F1為對象進行培育，當其達到性成熟年齡時，使兩性可育的二倍體魴舶雜交F1進行自交繁殖，再經孵化、養殖，獲得二倍體魴舶F2 ;對二倍體魴舶F2的倍性、育性進行檢測，篩選獲得兩性可育且遺傳穩定的二倍體魴舶F2,完成了團頭魴與翹嘴紅舶間雜交品系的建立。
2.根據權利要求I所述的團頭魴與翹嘴紅舶間雜交品系的建立方法，其特征在于所述自交繁殖包括人工催產和人工干法授精步驟。
3.根據權利要求2所述的團頭魴與翹嘴紅舶間雜交品系的建立方法，其特征在于，所述人工催產的具體操作包括以下步驟在繁殖季節，將達到性成熟年齡的兩性可育的二倍體魴舶雜交F1置于20°C 26°C的水溫環境中，先對該二倍體魴舶雜交F1的母本親魚注射黃體素釋放激素類似物、絨毛膜促性腺激素及地歐酮的混合催產劑進行催產，再對該二倍體魴舶雜交F1的父本親魚注射黃體素釋放激素類似物和絨毛膜促性腺激素進行催產；注射完畢后按I : 2 3的數量比將該二倍體魴舶雜交F1的母、父本親魚投放到產卵池中，先向產卵池中沖水，然后讓二倍體魴舶雜交F1的母、父本親魚在靜水中催產，直至其開始順利產卵和產精。
4.根據權利要求3所述的團頭魴與翹嘴紅舶間雜交品系的建立方法，其特征在于，所述母本親魚的黃體素釋放激素類似物的注射劑量為8 μ g/kg 10 μ g/kg，絨毛膜促性腺激素的注射劑量為400IU/kg 800IU/kg，地歐酮的注射劑量為lmg/kg ;所述父本親魚的黃體素釋放激素類似物的注射劑量和絨毛膜促性腺激素的注射劑量均為母本親魚注射劑量的一半。
5.一種翹嘴鳊的培育方法，包括以下步驟利用權利要求I 4中任一項所述建立方法中獲得的兩性可育的二倍體魴舶雜交F1和二倍體魴舶F2，與團頭魴進行回交育種，獲得雜交魚翹嘴鳊。
6.根據權利要求5所述的翹嘴鳊的培育方法，其特征在于，所述回交育種包括人工催產和人工干法授精步驟。
7.根據權利要求6所述的翹嘴鳊的培育方法，其特征在于，所述人工催產的具體操作包括以下步驟在繁殖季節，選擇腹部膨脹、輕壓能擠出墨綠色卵粒的雌性團頭魴作為母本親魚，選擇輕壓腹部能擠出白色精液的雄性二倍體魴舶雜交F1和雄性二倍體魴舶F2作為父本親魚，將前述回交用的母本親魚和父本親魚置于20°C 26°C的水溫環境中，先對母本親魚注射黃體素釋放激素類似物、絨毛膜促性腺激素及地歐酮的混合催產劑進行催產， 再對父本親魚注射黃體素釋放激素類似物和絨毛膜促性腺激素進行催產；注射完畢后按 I 3 5的數量比將母、父本親魚投放到產卵池中，先向產卵池中沖水，然后讓前述母、父本親魚在靜水中催產，直至其開始順利產卵和產精。
8.根據權利要求7所述的翹嘴鳊的培育方法，其特征在于，所述雌性團頭魴的黃體素釋放激素類似物的注射劑量為8 μ g/kg 10 μ g/kg，絨毛膜促性腺激素的注射劑量為 500IU/kg 1000IU/kg，地歐酮的注射劑量為lmg/kg ;所述父本親魚的黃體素釋放激素類似物的注射劑量和絨毛膜促性腺激素的注射劑量均為前述雌性團頭魴注射劑量的一半。
9.根據權利要求6所述的翹嘴鳊的培育方法，其特征在于，所述人工催產的具體操作包括以下步驟在繁殖季節，選擇腹部膨脹、輕壓能擠出墨綠色卵粒的雌性二倍體魴舶雜交 F1作為母本親魚，選擇輕壓腹部能擠出白色精液的雄性團頭魴，將前述回交用的母本親魚和父本親魚置于20°C 26°C的水溫環境中，先對母本親魚注射黃體素釋放激素類似物、絨毛膜促性腺激素及地歐酮的混合催產劑進行催產，再對父本親魚注射黃體素釋放激素類似物和絨毛膜促性腺激素進行催產；注射完畢后按I : 2 3的數量比將母、父本親魚投放到產卵池中，先向產卵池中沖水，然后讓前述母、父本親魚在靜水中催產，直至其開始順利產卵和產精。
10.根據權利要求9所述的翹嘴鳊的培育方法，其特征在于，所述雌性二倍體魴舶雜交 F1的黃體素釋放激素類似物的注射劑量為8 μ g/kg 10 μ g/kg,絨毛膜促性腺激素的注射劑量為400IU/kg 800IU/kg，地歐酮的注射劑量為lmg/kg ;所述父本親魚的黃體素釋放激素類似物的注射劑量和絨毛膜促性腺激素的注射劑量均為前述雌性二倍體魴舶雜交F1注射劑量的一半。
全文摘要
本發明公開了一種團頭魴與翹嘴紅鲌間雜交品系的建立方法，以團頭魴為母本，翹嘴紅鲌為父本，經遠緣雜交后獲得魴鲌雜交F1，對F1進行飼養及檢測，獲得兩性可育的F1；然后以該F1為對象進行培育，使兩性可育的F1進行自交，再經孵化、養殖，獲得二倍體魴鲌F2；對F2的倍性、育性進行檢測，獲得兩性可育的F2，至此獲得了遺傳穩定、兩性可育的異源魴鲌品系。本發明還公開了一種翹嘴鳊的培育方法，利用前述建立方法中獲得的兩性可育的二倍體魴鲌雜交F1和二倍體魴鲌F2，與團頭魴進行回交育種，獲得雜交魚翹嘴鳊。通過該培育方法可以制備得到生長速度快、抗逆性強、肉質好、體形優美等特征的新型雜交魚翹嘴鳊。
文檔編號A01K61/00GK102972319SQ20121053454
公開日2013年3月20日 申請日期2012年12月12日 優先權日2012年12月12日
發明者劉少軍, 肖軍, 劉筠, 陶敏, 張純, 康雪偉, 羅凱坤 申請人:湖南師范大學