專利名稱：一種甜瓜白粉病菌的保存方法
技術領域：
本發明涉及一種生物病原菌的保存方法技術領域，具體的說，本發明涉及一種甜瓜白粉病菌的保存方法技術領域。
背景技術：
甜瓜是葫蘆科ifucurbitaceae)甜瓜屬{Cucumis Linn) 一年生蔓性草本植物,在國內外廣泛栽培，是一種重要的經濟作物。據統計，我國甜瓜播種面積約為15. 3萬公頃， 年總產量在300萬噸以上，居世界首位(劉君璞等，2000)。目前，各種病蟲害對甜瓜的生產造成了不同程度的影響，甜瓜白粉病是甜瓜生產中重要的病害之一，我國露地和保護地甜瓜每年都因甜瓜白粉病造成大量減產，并嚴重的影響到了產品的品質。據資料報道，瓜類白粉病主要由瓜單囊殼{S. fuliginea)和二孢白粉菌(萬.cichoracearum)引起,我國以瓜單囊殼危害較為普遍(呂佩珂，1996)。甜瓜白粉病是一種廣泛發生的世界性病害，在我國各甜瓜產區普遍發生。白粉病菌主要侵染甜瓜植株的葉片，在甜瓜植株幼苗期和成株期都可發病。在適宜的條件下，甜瓜白粉病發展很快，幾天或一周時間蔓延到整個瓜田或溫室，造成葉片發黃、失去功能、漸漸枯死，嚴重影響了甜瓜果實的產量和品質。由于是專性寄生菌，甜瓜白粉病菌無性世代只能在活體上繁殖保存。傳統的保存方法是將白粉病菌接種到感病的甜瓜植株上，將接種后的植株放置在合適的條件下。傳統的保存方法時間短，現有技術報道的采用不同貯藏方法處理新鮮的白粉病菌，用摩擦接種法和噴霧法將該病原接種于葉片上，觀察不同接種方法對白粉病發病的影響，結果顯示用陰干低溫4°C方法貯藏白粉病菌可保持3周左右，現有技術報道中最多僅能保存一個月左右，而且容易造成病菌污染，因此掌握一種合適的甜瓜白粉病菌的保存方法十分重要。

發明內容
針對上述現有技術中甜瓜白粉病菌保存時間太短的技術現狀，本發明的目的旨在于提供一種保存甜瓜白粉病菌的方法，可以使甜瓜白粉病菌的保存時間更長、保存效率更聞。本發明的主要技術方案
采用感病的甜瓜或黃瓜品種的種子播種至5片真葉長出，在超凈工作臺上取幼苗莖尖，莖尖帶I片展開的真葉，莖尖用3%雙氧水消毒2分鐘，再用無菌水沖洗3次；用滅菌鑷子將莖尖扦插在盛有苯并咪唑-甘露醇瓊脂培養基的500毫升三角瓶內，用滅菌的洗耳球將純化培養的甜瓜白粉病菌吹到莖尖的葉片上；將三角瓶放入光照培養箱，白粉病菌菌落生成后調整培養條件，可有效保存約200天。本發明具體提供一種甜瓜白粉病菌的保存方法，具體保存方法步驟如下
(I)感病的甜瓜或黃瓜品種播種至5片真葉長出，在超凈工作臺上取幼苗莖尖，莖尖帶I片展開的真葉，莖尖用3%雙氧水消毒2分鐘，再用無菌水沖洗3次；用滅菌鑷子將莖尖扦插在盛有苯并咪唑-甘露醇瓊脂培養基的500毫升三角瓶內，用滅菌的洗耳球將純化培養的甜瓜白粉病菌吹到莖尖的葉片上；將三角瓶放入光照培養箱，白粉病菌菌落生成后調整培養條件，可有效保存約200天。(2)上述步驟中的苯并咪唑-甘露醇瓊脂培養基每升含有甘露醇10克，苯并咪唑150克，每毫克5000個單位的Nystatin 50毫克，溶劑為酒精、體積百分比濃度為O. 1%的Botran75ff 2. 5毫升，瓊脂8克。(3)上述步驟(I)中的扦插莖尖培養條件白粉病菌菌落生成前，光周期，12小時光照/12小時暗培養；光照強度，2000勒克斯；溫度，12小時光照時22°C /12小時暗培養時180C ;白粉病菌菌落生成后，光周期，12小時光照/12小時暗培養；光照強度，1500勒克斯；溫度，12小時光照時20°C /12小時暗培養時15°C。
通過實施本發明具體的發明內容，可以達到以下有益效果
本發明與傳統方法比較，無需每隔一個月播種感病品種得到幼苗，并將白粉病菌每隔一個月轉接在感病品種幼苗上。本發明具有不易污染、保存時間長、保存效率高等優點。為甜瓜抗白粉病新品種選育奠定基礎。
具體實施例方式下面，舉實施例說明本發明，但是，本發明并不限于下述的實施例。本發明中選用的所有原輔材料和用具、設備都為本領域熟知選用的，但不限制本發明的實施，其他本領域熟知的一些試劑和設備都可適用于本發明以下實施方式的實施。實施例一甜瓜白粉病菌的保存方法 甜瓜白粉病菌的保存方法具體步驟如下
(I)感病的甜瓜或黃瓜品種播種至5片真葉長出，在超凈工作臺上取幼苗莖尖，莖尖帶I片展開的真葉，莖尖用3%雙氧水消毒2分鐘，再用無菌水沖洗3次；用滅菌鑷子將莖尖扦插在盛有苯并咪唑-甘露醇瓊脂培養基的500毫升三角瓶內，用滅菌的洗耳球將純化培養的甜瓜白粉病菌吹到莖尖的葉片上；將三角瓶放入光照培養箱，白粉病菌菌落生成后調整培養條件，可有效保存約200天。(2)上述步驟中的苯并咪唑-甘露醇瓊脂培養基每升含有甘露醇10克，苯并咪唑150克，每毫克5000個單位的Nystatin 50毫克，溶劑為酒精、體積百分比濃度為O. 1%的Botran75ff 2. 5毫升，瓊脂8克。(3)上述步驟(I)中的扦插莖尖培養條件白粉病菌菌落生成前，光周期，12小時光照/12小時暗培養；光照強度，2000勒克斯；溫度，12小時光照時22°C /12小時暗培養時180C ;白粉病菌菌落生成后，光周期，12小時光照/12小時暗培養；光照強度，1500勒克斯；溫度，12小時光照時20°C /12小時暗培養時15°C。上述提供的技術方案與現有技術提供的方法比較，無需每隔一個月播種感病品種得到幼苗，并將白粉病菌每隔一個月轉接在感病品種幼苗上，本發明提供的技術方案具有不易污染、保存時間長、保存效率聞等優點。
權利要求
1.一種甜瓜白粉病菌的保存方法，其特征在于，具體保存方法步驟如下 (1)感病的甜瓜或黃瓜品種播種至5片真葉長出，在超凈工作臺上取幼苗莖尖，莖尖帶I片展開的真葉，莖尖用3%雙氧水消毒2分鐘，再用無菌水沖洗3次；用滅菌鑷子將莖尖扦插在盛有苯并咪唑_甘露醇瓊脂培養基的500毫升三角瓶內，用滅菌的洗耳球將純化培養的甜瓜白粉病菌吹到莖尖的葉片上；將三角瓶放入光照培養箱，白粉病菌菌落生成后調整培養條件，可有效保存約200天； (2)上述步驟中的苯并咪唑-甘露醇瓊脂培養基每升含有甘露醇10克，苯并咪唑150克，每毫克5，000個單位的Nystatin 50毫克，溶劑為酒精、體積百分比濃度為0. 1%的Botran75ff 2. 5毫升，瓊脂8克； (3)上述步驟(I)中的扦插莖尖培養條件白粉病菌菌落生成前，光周期，12小時光照/12小時暗培養；光照強度，2000勒克斯；溫度，12小時光照時22°C /12小時暗培養時18°C ；白粉病菌菌落生成后，光周期，12小時光照/12小時暗培養；光照強度，1500勒克斯；溫度，12小時光照時20°C /12小時暗培養時15°C。
全文摘要
本發明公開一種甜瓜白粉病菌的保存方法。首先將感病的甜瓜或黃瓜品種的種子播種，待植株5片真葉長出后備用。在超凈工作臺上，剪取帶1片展開真葉的幼苗莖尖，莖尖滅菌后用無菌水沖洗3次。用滅菌鑷子將莖尖扦插在盛有苯并咪唑-甘露醇瓊脂培養基的500毫升三角瓶內，用滅菌的洗耳球將純化培養的甜瓜白粉病菌吹到莖尖的葉片上。將三角瓶放入光照培養箱，白粉病菌菌落生成后調整培養條件，可有效保存約200天。本發明提供的甜瓜白粉病菌的保存方法，保存周期長可達200天以上，大大提高保存效率，獲得良好的應用效果。
文檔編號A01H4/00GK102972302SQ20121057804
公開日2013年3月20日 申請日期2012年12月27日 優先權日2012年12月27日
發明者張永兵, 張學軍, 伊鴻平, 季娟, 李寐華, 郭麗霞, 吳明珠 申請人:新疆農業科學院哈密瓜研究中心