專利名稱：一種培育轉基因大米的方法
技術領域：
本發明涉及植物基因工程領域中一種培育轉基因植物的方法及其應用，特別涉及一種培育轉基因大米的方法及其應用。
背景技術：
在生活中，轉基因大米是最重要的糧食作物之一，是人類食物和營養的基本來源。目前全世界大米播種面積約2.26億公頃，總產量約5.5億噸。

發明內容
本發明的目的是提供一種簡單、快速、實用的培育轉基因大米的方法，利用該方法培育轉基因大米不需經過組織培養和植株再生的過程。本發明所提供的培育轉基因大米的方法，是通過農桿菌的介導將外源基因導入大米生長點，通過非組培遺傳轉化方法得到轉基因大米。生長點可為根尖生長點、莖尖生長點，優選為莖尖生長點。所述遺傳轉化的外植體為大米種子23 — 27 〃 C萌發48 — 72小時得到的莖尖生長點。本發明的方法與其它培育轉基因大米方法的顯著區別在于采用大米生長點作為農桿菌介導的遺傳轉化的外植體，而不是未成熟胚或胚性愈傷組織或懸浮細胞，不需經過組織培養和植株再生的過程，從根本上克服了由于大米基因型對轉化后形成可育再生植株的限制。本發明通過對局部人工損傷的大米生長點采用真空滲入技術進行農桿菌介導的遺傳轉化，獲得了表達報告基因的轉基因大米，生長點轉化率達到60 — 70 %，成苗率平均90 %，T。代種子卡那霉素抗性陽性率為16 — 21 %，T，代幼苗報告基因表達陽性率占所測植株的81 %。尤為重要的是克服了大米遺傳轉化的瓶頸問題一基因型的限制。本發明所試材料的品種包括大米金花、大米京411、大米4071，均獲得上述效果。本發明的方法轉化效率高、操作簡便、重復性好、不依賴于受體的基因型。本發明的方法可以培育出各種高產、優質和/或抗逆性強的大米新種質:非組培遺傳轉化方法可應用到其它受基因型限制大難以獲得轉基因植株的單子葉農作物中，可以培育高產、抗逆、優質的新型農作物。
具體實施例方式實施例1、轉基因大米的培育1、大米外植體的處理(I )將金花、京411和京4071三種大米品種的大米種子用10 %的次氯酸消毒5分鐘，再用70 %的乙醇處理10分鐘，然后用無菌水沖洗3次。在一無菌大平皿中墊三層以無菌水浸濕的紗布，將經消毒處理的大米種子置于平皿中25 〃 C黑暗中萌發48小時，得到待轉化的大米萌發種子。(2 )在無菌條件下用解剖針將待轉化的大米萌發種子胚芽鞘劃開，盡量暴露其生長點，以便于外源基因的導入。2、轉化用農桿菌的培養(I )將過夜培養的農桿菌菌株LBA4404 / 3301，其中含CaMV 355啟動子驅動的⑶S基因，Iml接種于IOOml含鏈霉素100 mg / L，卡那霉素50 mg / L和利福平50 mg / L的YEB培養基中，280C，300 rpm振蕩培養至菌液濃度為0D6。。。.=0.7。 (2 )在轉化前向菌液中加入乙酞丁香酮至100卿，繼續在28oc，300 rPm振蕩培養2小時。將上述菌液分裝于50ml的無菌三角瓶中，每瓶20ml。3、轉化(I )將步驟I的(2 )中的大米生長點浸入步驟2的(2 )中的菌液中，侵染20分鐘后，置于負壓條件下，真空度0.04 Mpa，滲透10分鐘。(2 )真空滲透處理后，倒除菌液，用無菌吸水紙將大米外植體表面的菌液吸凈，轉入含梭節基青 霉素的MS培養基中，22 — 250C >16/8小時光周期下共培養3天。
權利要求
1.一種培育轉基因大米的方法，其特征在于:所述生長點為根尖生長點或莖尖生長點。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于:所述遺傳轉化的外植體為大米種子23一 27 〃 C萌發48 — 72小時得到的莖尖 生長點。
全文摘要
一種培育轉基因大米的方法,其特征在于所述生長點為根尖生長點或莖尖生長點，本發明提供一種簡單、快速、實用的培育轉基因大米的方法，利用該方法培育轉基因大米不需經過組織培養和植株再生的過程。
文檔編號A01H5/00GK103074369SQ20121058364
公開日2013年5月1日 申請日期2012年12月30日 優先權日2012年12月30日
發明者周剛剛 申請人:周剛剛