用于雜草控制的方法和組合物的制作方法
【專利摘要】本發明提供用于增強雜草控制的新穎組合物。具體地說，本發明披露了調節雜草物種中的八氫番茄紅素脫氫酶的方法和組合物。還提供了增強雜草控制的組合物與方法的組合。
【專利說明】用于雜草控制的方法和組合物
[0001]本申請依據35USC§ 119(e)要求2011年9月13日提交的美國臨時申請序列號61/534，082的權益，該案以引用的方式整體并入本文中。文件中所含的名為“40_21 (58639)B seq listing, txt”的序列表為1，035，201個字節(在操作系統MS-Windows中測量)并且于2012年9月5日創建，與本案一起提交并以引用的方式并入本文中。
[0002]領域
[0003]所述方法和組合物大體上涉及雜草管理領域。更具體地說，涉及植物中的八氫番茄紅素脫氫酶(ros)基因以及含有供調節其表達的多核苷酸分子的組合物。還提供了可用于雜草控制的方法和組合物。
[0004]背景
[0005]雜草是在農藝環境中與耕種的植物競爭的植物，并且農場主每年在作物損失和控制雜草嘗試方面要花費上億美元。雜草還充當作物疾病和蟲害的宿主。在農業生產環境中由雜草引起的損失包括作物產量降低、作物質量下降、灌溉成本增加、收割成本增加、土地價值降低、損傷牲畜以及由雜草攜帶的昆蟲和病害所引起的作物損害。雜草造成這些影響的主要手段有:1)與作物競爭水、養分、陽光以及供生長和發育的其它必需要素；2)產生有毒或刺激性化學物質，這些化 學物質引起了人類或動物健康問題；3)產生極大量的種子或營養繁殖部分或兩者，從而污染了農業產品并且使這些物種在農業用地中長期存在；以及4)在農業和非農業用地上產生大量必須除掉的植被。耐除草劑的雜草是幾乎所有正在使用的除草劑所面臨的一個問題，需要有效地管理這些雜草。目前有超過365種雜草生物型被除草劑抗性行動委員會(Herbicide Resistance Action Committee,HRAC)、北美除草劑抗性行動委員會(North American Herbicide Resistance Action Committee,NAHRAC)和美國治草科學學會(Weed Science Society of America, WSSA)鑒別為對一種或多種除草劑具有除草劑抗性。
[0006]八氫番茄紅素脫氫酶(ros)是類胡蘿卜素生物合成路徑中的一種必不可少的酶。這種酶是包括咕嗪酮、吡啶甲酰胺、氟丁酰草胺(beflubutamid)、氟唳酮(fluridone)、氟咯草酮(fIurochloridone)及呋草酮(flurtamone)在內的除草劑的革巴。
[0007]發明概述
[0008]在一個方面中，本發明提供一種植物控制方法，該方法包括向植物外部施用一種包含多核苷酸和轉移劑的組合物，其中該多核苷酸與PDS基因序列或其片段，或與所述ros基因序列或其片段的RNA轉錄物基本上同一或基本上互補，其中所述ros基因序列選自SEQID NO:1-78和2138或其多核苷酸片段，由此相對于未用所述組合物處理的植物，該植物生長或發育或繁殖能力有所降低，或使該植物對PDS抑制劑除草劑更敏感。以此方式，可以使已經對施用含PDS的除草劑產生抗性的植物更易于受含ros抑制劑的除草劑的除草作用影響，由此加強該除草劑的作用。該多核苷酸片段為至少18個連續核苷酸、至少19個連續核苷酸、至少20個連續核苷酸或至少21個連續核苷酸長度并且與選自SEQ ID NO:1_78和2138的PDS基因序列至少85%同一，并且該轉移劑是一種有機硅酮組合物或化合物。該多核苷酸片段還可以是有義或反義ssDNA或ssRNA、dsRNA或dsDNA，或dsDNA/RNA雜交體。該組合物可以包括超過一個多核苷酸片段，并且該組合物可以包括PDS抑制劑除草劑和/或增強該組合物的植物控制活性的其它除草劑(共除草劑)。
[0009]在另一個方面中，提供了用于調節植物物種中PDS基因表達的多核苷酸分子和方法。該方法降低、阻遏或以其它方式延遲植物中PDS基因的表達，包括向該植物外部施加一種包含多核苷酸和轉移劑的組合物，其中該多核苷酸與PDS基因序列或其片段，或與該ros基因序列或其片段的RNA轉錄物基本上同一或基本上互補，其中該PDS基因序列選自SEQID NO:1-78和2138或其多核苷酸片段。該多核苷酸片段為至少18個連續核苷酸、至少19個連續核苷酸、至少20個連續核苷酸或至少21個連續核苷酸長度并且與選自SEQ ID NO:1-78和2138的PDS基因序列至少85%同一，并且該轉移劑是一種有機硅酮化合物。該多核苷酸片段還可以是有義或反義ssDNA 或ssRNA、dsRNA或dsDNA，或dsDNA/RNA雜交體。包含SEQ ID N079-2010的多核苷酸分子是該PDS基因的片段。
[0010]在又一方面中，該包含多核苷酸分子的組合物可以與其它除草用(共除草劑)化合物組合以提供對于耕種植物的田地中不想要的植物的額外控制。
[0011]在又一方面中，該多核苷酸分子組合物可以與任一種或多種其它的農用化學品組合，以形成多組分殺蟲劑，從而得到甚至更廣譜的農業保護，這些農用化學品諸如為殺昆蟲劑、殺真菌劑、殺線蟲劑、殺細菌劑、殺螨劑、生長調控劑、化學絕育劑、化學信息素、驅避劑、引誘劑、信息素、取食剌激劑、生物殺蟲劑、微生物殺蟲劑或其它生物活性化合物。
[0012]附圖簡述
[0013]以下附圖形成了本說明書的一部分并且被包括用來進一步說明本發明的某些方面。通過參照一個或多個附圖并結合本文所呈現的具體實施方案的詳細說明，可以更好地理解本發明。由以下【專利附圖】

【附圖說明】，可以更完整地理解本發明:
[0014]圖1.用ssDNA觸發多核苷酸(trigger polynucleotide)和PDS抑制劑除草劑達草滅(norfIurazon)處理長芒覓(Amaranthus palmeri)。
[0015]圖2.用ros ssDNA寡核苷酸處理的蒲公英和刺萵苣。
[0016]發明詳述
[0017]本發明提供了調控、阻遏或延遲PDS (八氫番茄紅素脫氫酶)基因表達并且增強對似雜草植物物種和重要的是PDS抑制劑抗性雜草生物型的控制的方法和含多核苷酸的組合物。該方法的各個方面可以用于管理農藝和其它耕種環境中的各種似雜草植物。
[0018]提供以下定義和方法以更好地定義本發明并且指導本領域技術人員實踐本發明。除非另作注釋，否則各術語應根據相關領域技術人員的常規用法來理解。在一個術語以單數形式提供的情況下，本發明人也預期由該術語的復數形式所描述的本發明的各個方面。
[0019]“不可轉錄的”多核苷酸意思指，這些多核苷酸不包含完整的聚合酶II轉錄單元。如本文所使用，“溶液”是指均勻混合物和不均勻混合物，諸如懸浮液、膠體、膠束及乳液。
[0020]似雜草植物是與耕種的植物競爭的植物，特別重要的那些包括但不限于，作物生產中的重要入侵性和有害的雜草及除草劑抗性生物型，諸如莧屬物種(Amaranthu sspecies)-白覓(A.albus)、北美覓(A.blitoides)、綠穗覓(A.hybridus)、長芒覓(A.palmeri)、鮑威氏覓(A.powellii)、反枝覓(A.retroflexus)、刺覓(A.spinosus)、糙果覓(A.tuberculatus)及皺果覓(A.viridis);豚草屬物種(Ambrosia species)-三裂葉豚草(A.trifida)、美洲豚草(A.artemisifolia);黑麥草屬物種(Lolium species)-多花黑麥草(L.multiflorum)、硬直黑麥草(L.rigidium)、多年生黑麥草(L.perenne);馬唐屬物種(Digitaria species)-兩耳草(D.1nsularis);大戟屬物種(Euphorbia species)-白荀猩猩草(E.heterophylla);地膚屬物種(Kochia species)-掃帚草(K.scoparia);高梁屬(Sorghum species)-約翰遜草(S.halepense);白酒草屬(Conyza species)-香絲草(C.bonariensis)、小蓬草(C.canadensis)、蘇門白酒草(C.sumatrensis)；虎尾草屬物種(Chloris species)-截頭虎尾草(c.truncate);稗草屬物種(Echinocholaspecies)-光頭稗(E.colona)、大骨草(E.crus-galli);穆屬物種(Eleusine species)-牛筋草(E.1ndica);早熟禾屬物種(Poa species)-—年生早熟禾(P.annua);車前屬物種(Plantago species)-長葉車前草(P.1anceolata);燕麥屬物種(Avena species)-野燕麥(A.fatua);藜草屬物種(Chenopodium species)-灰蓼頭草(C.album);狗尾草屬物種(Setaria species)-灰藜(S.viridis)、苘麻(Abutilon theophrasti)、番薯屬物種(Ipomoea species)、田菁屬物種(Sesbania species)、決明屬物種(Cassia species)、黃花穩屬物種(Sida species)、臂形草屬物種(Brachiaria species)及煎屬物種(Solanumspecies)。
[0021] 耕種區中所見的其它似雜草植物物種包括大穗看麥娘(Alopecurus myosuroides)、不實燕麥(Avena sterilis)、長穎燕麥(Avena sterilis Iudoviciana)、車前臂形草(Brachiaria plantaginea)、雙雄雀麥(Bromus diandrus)、硬雀麥(Bromusrigidus)、洋狗尾草(Cynosurus echinatus)、升馬唐(Digitaria ciliaris)、止血馬唐(Digitaria ischaemum)、馬唐(Digitaria sanguinalis)、稻稗(Echinochloa oryzicola)、水稗(Echinochloa phyllopogon)、路易斯安納野黍(Eriochloa punctata)、大麥草(Hordeum glaucum)、± 嗇大麥(Hordeum Ieporinum)、田間甲鳥嘴草(Ischae mum rugosum)、千金子(Leptochloa chinensis)、歐黑麥草(Lolium persicum)、小藹草(Phalarisminor)、變形藹草(Phalaris paradoxa)、筒軸茅(Rottboellia ex alta)、大狗尾草(Setaria faberi)、巨狗尾草(Setaria viridis var robusta-alba sch reiber)、狗尾草變種(Setaria viridis var robusta-purpurea)、Snowdenia polyst achea、蘇丹高梁(Sorghum sudanese)、澤?寫(Alisma plantago-aquatica)、凹頭覓(Amaranthuslividus)、青覓(Amaranthus quitensis)、耳基水覓(Ammania aur iculata)、紅花水覓(Ammania coccinea)、臭春黃菊(Anthemis cotula)、阿披拉草(Apera spica-venti)、圓葉虎耳(Bacopa rotundifolia)、三葉鬼針草(Bidens pi losa)、Bidens subalternans、非洲芥末(Brassica tournefortii)、旱雀麥(Bromus tectorum)、小果亞麻莽(Camelinamicrocarpa)、茼蒿(Chrysanthemum coronari um)、田野寬絲子(Cuscuta campestris)、異型莎草(Cyperus difformis)、Damas onium minus、播娘嵩(Descurainia sophia)、細葉二行芥(Diplotaxis tenuifolia)、車前葉藍薊(Echium plantagineum)、三蕊溝繁縷(Elatine triandra var pedicell ata)、白荀猩猩草、卷莖蓼(Fallopia convolvulus)、水風草(Fimbristylis miliac ea)、融辧花(Galeopsis tetrahit)、鋸鋸藤(Galiumspurium)、向日葵(Helianthus annuus)、假蒼耳(Iva xanthifolia)、單剛毛狗尾草(Ixophorus unisetus)、變色牽牛(Ipomoea indica)、圓葉牽牛(Ipomoea purpurea)、毛莖墓(Ipomoea sepiari a)、雍菜(Ipomoea aquatic)、三裂葉墓(Ipomoea triloba)、毒萬苣(Lactuca serr iola)、黃花域葉草(Limnocharis flava)、直立石龍尾(Limnophilaerecta)、無柄花石龍尾(Limnophila sessilif lora)、美洲母草(Lindernia dubia)、美洲母草主變種(Lindernia dubia var maior)、狹葉母草(Lindernia micrantha)、陌上草(Lind ernia procumbens)、冰葉曰中花(Mesembryanthemum crystal Iinum) Λ雨久花(Μ onochoria korsakowii)、甲鳥舌草(Monochoria vaginalis)、球果芥(Nesliapanicul ata)、虞美人(Papaver rhoeas)、銀膠菊(Parthenium hysterophorus)、Pentziasuffruticosa、小子藹草(Phalaris minor)、野蘿卜(Raphanus raphanistrum)、秋冬蘿卜(Raphanus sativus)、皺果莽(Rapistrum rugosum)、印度節節菜原變種(Rotalaindica var uliginosa)、冠果草(Sagittaria guyanensis)、蒙特登慈姑(Sagittariamontevidensis)、矮慈姑(Sagittaria pygmaea)、俄國大薊(Salsola iberica)、螢藺歐萬斯變種(Scirpus juncoides var ohwianus)、北水毛花(Scirpus mucronatus)、金色狗尾 草(Setaria Iutescens)、剌金午時花(Sida spinosa)、野芥(Sinapis arvensis)、戟葉柿娘蒿(Sisymbrium orientale)、大蒜芥(Sisymbrium thellungii)、東方龍葵(Solanum ptycanthum)、花葉潰苦菜(Sonchus asper)、苦苣菜(Sonchus oleraceus)、甜高梁(Sorghum bicolor)、繁縷(Stellaria media)、薪蓂(Thlaspi arvense)、蒼耳(Xanthium strumarium)、南非金蓋草(Arctotheca calendula)、蘇門白酒草、革命菜(Crassocephalum crepidiodes)、萼距花(cuphea carthagenenis)、Epilobiumadenocaulon、費城飛蓮(Erigeron philadelphicus)、紫萍(Landoltia punctata)、北美獨行菜(Lepidium virginicum)、雨久花(Monochoria korsak owii)、少花龍葵(Solanumamericanum)、龍葵(Solanum nigrum)、歐洲福克斯泰爾羊茅(Vulpia bromoides)、黃鶴菜(Youngia japonica)、下輪葉黑藻(Hydrilla vert ici I lata)、垂花飛廉(Carduusnutans)、意大利薊(Carduus pycnocephalus)、黃星薊(Centaurea solstitialis)、絲路薊(cirsium arvense)、節節草(Commelina diffusa)、田方定花(Convolvulus arvensis)、野古月蘿卜(Daucus carota)、止血馬唐、孔雀稗(Echinochloa crus-pavonis)、水風草、融辧花、鋸鋸藤、直立石龍尾、淡甘菊(Matricaria perforate)、虞美人、烏頭葉毛茛(Ranunculusacris)、翅果假吐金菊(Soliva sessilis)、尖辧花(Sphenoclea zeylanica)、繁縷、三叉針茅(N assella trichotoma)、智利針草(Stipa neesiana)、匍匍翦股穎(Agrostisstolonifera)、扁蓄蓼(Polygonum aviculare)、日本看麥娘(Alopecurus j aponicus)、茼草(Beckmannia syzigachne)、旱雀麥、孟仁草(Chloris inflate) Λ Echinochloa erecta、馬齒覓(Portulaca oleracea)及歐洲千里光(Senecio vulgaris)。據信，所有植物在其基因組中都含有八氫番茄紅素脫氫酶基因，其序列可以被分離出來，并且根據本發明的方法制造出可用于調控、抑制或延遲這些植物中靶PDS基因的表達以及經過處理的植物的生長或發育的多核苷酸。
[0022]一些耕種的植物當出現在不想要的環境中時也可以是似雜草植物。舉例來說，在大豆田中生長的玉米植物。具有一種或多種除草劑耐藥性的轉基因作物將需要專門的管理方法來控制雜草和自生作物。
[0023]“觸發因子”或“觸發多核苷酸”是與靶基因多核苷酸同源或互補的多核苷酸分子。這些觸發多核苷酸分子當與轉移劑一起局部施用到植物表面時，將調節靶基因的表達，由此相對于未用含觸發因子分子的組合物處理的植物，用所述組合物處理的植物的生長或發育或繁殖能力受到調控、抑制或延遲，或所述植物因含所述多核苷酸的組合物而對PDS抑制劑除草劑或有絲分裂抑制劑除草劑更敏感。
[0024] 預期該組合物將含有多種多核苷酸和除草劑，包括但不限于，PDS基因觸發多核苷酸和PDS抑制劑除草劑以及任一種或多種其它除草劑靶基因觸發多核苷酸和相關除草劑，及任一種或多種其它必需基因觸發多核苷酸。必需基因是植物中提供有機體或細胞生長或存活必需的或植物正常生長和發育所涉及的關鍵酶或其它蛋白質的基因，例如生物合成酶、代謝酶、受體、信號轉導蛋白、結構基因產物、轉錄因子或轉運蛋白；或調控性RNA，諸如微 RNA 的基因(Meinke 等，Trends Plant Sc1.2008 年 9 月；13(9):483-91)。抑制必需基因使除草劑影響不同于抑制的必需基因的基因產物的功能的作用增強。本發明的組合物可以包括各種調節除PDS基因外的必需基因的表達的觸發多核苷酸。
[0025]針對植物耐藥性的轉基因已經得到證實并且可以應用本發明方法的除草劑包括但不限于:類生長素除草劑、草甘膦(glyphosate)、草銨膦(glufosinate)、磺酰脲類、咪唑啉酮類、溴苯腈(bromoxynil)、茅草枯(delapon)、麥草畏(dicamba)、環己二酮(eye1hezanedione)、原卟啉原氧化酶抑制劑類(protoporphyrionogen oxidaseinhibitors)、4_羥苯基-丙酮酸雙加氧酶抑制劑類除草劑。舉例來說，編碼除草劑耐藥性中所涉及的蛋白質的轉基因及其多核苷酸分子是本領域已知的，并且包括但不限于，5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)，例如，更完整地描述于美國專利號7,807, 791 (SEQ ID NO:5)、6，248，876 Bl、5, 627，061、5，804，425、5，633，435、5，145，783、4，971，908,5, 1062，910,5, 188，642,4, 940，835,5, 866，775,6, 225，114BU6, 130，366、5，1060，667,4, 535，060,4, 769，061,5, 633，448,5, 510，471 ;美國專利號 Re.36，449 ;美國專利號RE37，287E及5，491，288中；對磺酰脲和/或咪唑啉酮的耐藥性，例如，更完整地描述于美國專利號 5，605，011,5, 013，659,5, 141，870,5, 767，361,5, 7106，180,5, 304，732、4，761，373,5, 3106，107,5, 928，937 及 5，378，824 ;及國際公布 W096/33270 中；植物中對于羥苯基丙酮酸雙加氧酶抑制性除草劑的耐藥性描述于美國專利號6，245，968B1、6，268，549 及 6，069，115 ;美國專利公布 20110191897 及 US7, 1062，379SEQ ID NO:3 ；US7, 935，869 ；US7, 304，209，SEQ ID NO:1、3、5及15中；芳氧基鏈烷酸酯雙加氧酶多核苷酸，其賦予對2，4-D和其它苯氧基生長素除草劑，以及對芳氧基苯氧基丙酸酯除草劑的耐藥性，如例如W02005/107437 ；US7, 838，733SEQ ID NO:5中所描述的；及耐麥草畏的多核苷酸，如例如Herman等(2005) J.Biol.Chem.280 =24759-24767中所描述的。耐除草劑性狀的其它實例包括由編碼外源膦絲菌素乙酰轉移酶的多核苷酸所賦予的那些，如美國專利號 5，969，213,5, 489，520,5, 550，1068,5, 874，265,5, 919，675,5, 561，236,5, 648，477、5，646，024,6, 177，616及5，879，903中所描述。含有外源膦絲菌素乙酰轉移酶的植物可以對抑制谷氨酰胺合成酶的草銨膦除草劑展現出改善的耐藥性。此外，耐除草劑多核苷酸包括由賦予改變的原卟啉原氧化酶(protox)活性的多核苷酸所賦予的那些,如美國專利號6，288，306B1、6，282，837B1&5，767，373 ;以及 W001/12825 中所描述。含有這些多核苷酸的植物對于祀向protox酶的多種除草劑(又稱為protox抑制劑)中的任一種可以展現出改善的耐藥性。編碼草甘膦氧化還原酶和草甘膦-N-乙酰轉移酶的多核苷酸(G0X描述于美國專利5，463，175中并且GAT描述于美國專利公布20030083480中；麥草畏單加氧酶，美國專利公布20030135879，全部以引用的方式并入本文中)；編碼溴苯腈腈水解酶的多核苷酸分子(Bxn描述于美國專利號4，810，648，以引用的方式并入本文中；針對溴苯腈耐藥性)；編碼八氫番茄紅素脫氫酶的多核苷酸分子(crtl)(描述于Misawa等(1993)PlantJ.4:833-840 和 Misawa 等(1994)Plant J.6:481-489 中；針對達草滅(norfIurazon)耐藥性);編碼乙酰乳酸合成酶的多核苷酸分子(AHAS，也稱為ALS)(描述于Sathasiivan等(1990) Nucl.Acids Res.18 =1068-2193中;針對磺酰脲除草劑耐藥性)^bar基因(描述于DeBlock等(1987) EMBO J.6 =2513-2519中；針對草銨膦和雙丙氨磷(bialaphos)耐藥性)。耐除草劑基因的轉基因編碼區和調控元件是可包括在本發明組合物中的多核苷酸觸發因子和除草劑的靶。
[0026]PDS抑制劑除草劑包括但不限于，達草滅、吡氟草胺(diflufenican)、氟吡酰草胺(picolinafen)、氟丁酰草胺、氟啶酮、氟咯草酮及呋草酮。[0027]許多具有類似或不同作用模式的其它可用除草劑(本文中稱為共除草劑)可以添加到本發明的組合物中，例如，包括但不限于以下的除草劑家族成員:酰胺除草劑類、芳香酸除草劑類、含砷除草劑類、苯并噻唑除草劑類、苯甲酰基環己二酮除草劑類、烷基磺酸苯并呋喃基酯除草劑類、氨基甲酸酯除草劑類、環己烯肟除草劑類、環丙基異噁唑除草劑類、二甲酰亞胺除草劑類、二硝基苯胺除草劑類、二硝基苯酚除草劑類、二苯基醚除草劑類、二硫代氨基甲酸酯除草劑類、鹵代脂肪族除草劑類、咪唑啉酮除草劑類、無機除草劑類、腈除草劑類、有機磷除草劑類、噁二唑酮除草劑類、噁唑除草劑類、苯氧基除草劑類、苯二胺除草劑類、吡唑除草劑類、噠嗪除草劑類、噠嗪酮除草劑類、吡啶除草劑類、嘧啶二胺除草劑類、嘧啶氧基苯甲胺除草劑類、季銨除草劑類、硫代氨基甲酸酯除草劑類、硫代碳酸酯除草劑類、硫脲除草劑類、三嗪除草劑類、三嗪酮除草劑類、三唑除草劑類、三唑酮除草劑類、三唑并嘧啶除草劑類、尿嘧啶除草劑類及脲除草劑類。具體地說，可以使本發明的包含多核苷酸的組合物中添加的除草劑的使用量降低。另外添加的除草劑的使用量可以降低10% -25%,26% -50%,51% -75%或更多，并且這些可增強多核苷酸與除草劑的組合物的活性的除草劑涵蓋在本文中作為本發明的一個方面。這些家族的代表性共除草劑包括但不限于，乙草胺(acetochlor)、氟鎖草醚(acifluorfen)、氟羧草醚鈉(acifluorfen-sodium)、苯草醚(aclonifen)、丙烯醒(acrolein)、草不綠(alachlor)、禾草滅(alloxydim)、烯丙醇、莠滅凈(ametryn)、氨唑草酮(amicarbazone)、氨基嘧磺隆(amidosulfuron)、氯氨吡唳酸(aminopyralid)、氨基三唑(amitrole)、磺胺酸銨(ammonium sulfamate)、莎稗憐(anilofos)、黃草靈(asulam)、阿特拉通(atraton)、阿特拉津(atrazine)、四唑嘧磺隆(a zimsulfuron)、BCPC、氟丁酰草胺、草除靈(benazolin)、氟草胺(benfIuralin)、呋草黃(benfuresate)、節嘧橫隆(bensulfuron)、甲基節嘧橫隆(bensulfuron-methyl)、地散憐(bensulide)、噻草平(bentazone)、雙苯嘧草酮、苯并雙環酮(benzo bicyclon)、吡草酮(benzofenap)、治草醚、雙丙氨憐(biIanafos)、雙草醚(bispyr ibac)、雙草醚鈉(bispyribac-sodium)、硼砂(borax)、除草定(bromacil)、溴丁酰草胺(bromobutide)、溴苯腈、去草胺(butachlor)、布芬草、抑草磷(butamifos)、地樂胺(butralin)、丁苯草酮(butroxydim)、丁草敵(butylate)、二甲腫酸(cacodylic acid)、氯酸鈣、唑草胺(cafenstrole)、長殺草(carbetamide)、唑草酮(carfentr azone)、唑酮草酯、CDEA> CEPC> 整形醇(chlorfIurenol)、整形素(chlorflure nol-methyl)、殺草敏(chloridazon)、氯嘧橫隆(chlorimuron)、乙基氯嘧橫隆(chlorimuron-ethyl)、氯醋酸(chloroacetic acid)、綠麥隆(chlorotoluron)、氯苯胺靈(chlorpropham)、綠黃隆(chlorsulfuron)、敵草索(chlorthal)、氯酞酸二甲酯(chlorthal-dimethyl)、吲哚酮草酯、環庚草醚(cinmethylin)、西速隆(cinosulfuron)、落草胺(cisanilide)、烯草酮(clethodim)、塊草酸(clodinafop)、塊草酯(clodinafop-propargyl)、異草酮(clomazone)、稗草胺(clomeprop)、二氯吡卩定酸(clopyralid)、氯酯磺草胺(cloransulam)、氯甲酯橫草胺(cloransulam-methyl)、CMA、4_CPB、CPMF、4_CPP、CPPCΛ 甲酷、節草隆(cumyluron)、氨腈(cyanamide)、氰乙酰肼(cyanazine)、草滅特(cycloate)、環丙啼磺隆(cyclosulfamuron)、噻草酮(cycloxydim)、氰氟草酸(cyhalofop)、氰氟草酯(cyhalofop-butyl)、2，4_D、3，4-DA、殺草隆(daimuro)、茅草枯(dalapon)、棉隆(dazomet)、2，4_DB、3，4_DB、2，4-DEB、舌甘菜安(desmedipham)、麥草畏、敵草臆(dichlobenil)、鄰二氯苯(ortho-dichlorobenzen)、對二氯苯(para-dichlorobenzene)、滴丙酸(dichlorprop)、滴丙酸-P (dichlorprop-P)、禾草靈(diclofop)、甲基禾草靈(diclofop-methyl)、雙氯磺草胺(diclosulam)、燕麥枯(difenzoquat)、野燕枯甲基硫酸酯(difenzoquat metilsulfate)、吡氟草胺、二氟吡隆(diflufenzopyr)、惡唑隆(dimefuron)、哌草丹(dimepiperate)、二甲草胺(dimethachlor)、異戊乙凈(dimethametryn)、二甲吩草胺(dimethenamid)、二甲吩草胺-P(dimethenamid-P)、噻節因(dimethipin)、二甲基砷酸(dimethylarsinic acid)、敵樂安(dinitramine)、特樂酌.(dinoterb)、草乃敵(diphenamid)、殺草快(diquat)、二溴敵草快(diquat dibromide)、氟硫草定(dithiopyr)、敵草隆(diuron)、DN0C、3，4-DP、DSMA、EBEP、草多索(endothal)、EPTC、禾草畏(esprocarb)、丁氟消草(ethalfluralin)、胺苯橫隆(ethametsulfuron)、甲基胺苯橫隆(ethametsulfuron-methyl)、乙呋草黃(ethofumesate)、氯氟草醚(ethoxyfen)、乙氧啼磺隆(ethoxysulfuron)、乙氧苯草胺(etobenzanid)、精惡唑禾草靈(fenoxaprop-P)、乙基精惡唑禾草靈(fenoxaprop-P-ethyl)、四唑草胺(fentra zamide)、硫酸亞鐵、麥草伏甲酯(flamprop-M)、卩定啼磺隆(f Iazasulfuron)、雙氟磺草胺(f 1rasulam)、吡氟禾草靈(f Iuazifop)、丁基吡氟禾草靈(f luazifop-buty I)、精吡氟禾草靈(fluazifop-P)、丁基精吡氟禾草靈(fluazifop-P-butyl)、氟酮磺隆(f Iucarbazone)、氟酮橫隆鈉(flucarbazone-sodium)、氟吡橫隆(f Iucetosulfuro η)、氯乙氟靈(fIuchloralin)、氟噻草胺(fIufenacet)、氟_嗪草酮(fIufenpyr)、氟_嗪草酯(flufenpyr-ethyl)、唑啼磺草胺(fIumetsulam)、氟烯草酸(fIumiclorac)、氟烯草酸戊酯、丙炔氟草胺、伏草隆(fluometuron)、乙羧氟草醚、乙羧氟草醚乙酯、氟丙酸(f Iupropanate)、吡羧啼磺隆(flupyrsulfuron)、氟卩定啼磺隆鈉(flupyrsulfuron-methyl-sodium)、抑草丁(flurenol)、氟卩定酮、氟咯草酮、氟草煙(fIuoroxypyr)、呋草酮、氟螨嗪(fIuthiacet)、氟噻甲草酯、氟磺胺草醚(fomesafen)、甲酰胺磺隆(foramsulfuron)、調節膦(fosamine)、草銨膦(glufosinate)、草銨膦銨鹽(glufosinate-ammonium)、草甘膦、氯吡啼磺隆(halosulfuron)、甲基氯吡啼磺隆(halosulfuron-methyl)、氟批甲禾靈(haloxyfop)、氟批甲禾靈-P (haloxyfop-P)、HC-252、環嗪酮(hexazinone)、咪草酸(imazamethabenz)、咪草酸甲酯(imazamethabenz-methyl)、甲氧咪草煙(imazamox)、甲咪唑煙酸(imazapic)、滅草煙(imazapyr)、咪唑喹啉酸(imazaquin)、咪草煙(imazethapyr)、唑礎啼橫隆(imazosulfuron)、節草酮(indanofan)、碘甲焼、碘甲磺隆、碘甲磺隆鈉鹽(iodos
【權利要求】
1.一種植物控制方法，包括:用包含多核苷酸和轉移劑的組合物處理植物，其中所述多核苷酸與八氫番茄紅素脫氫酶(ros)基因序列或其片段，或與所述PDS基因序列或其片段的RNA轉錄物基本上同一或基本上互補，其中所述PDS基因序列選自SEQ ID N0:l_78和2138或其多核苷酸片段，由此相對于未用所述組合物處理的植物，所述植物生長或發育或繁殖能力得到調控、抑制或延遲，或所述植物因所述含多核苷酸的組合物而對PDS抑制劑除草劑更敏感。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述轉移劑包含有機硅酮表面活性劑組合物或其中所含的化合物。
3.如權利要求1所述的方法，其中所述多核苷酸片段為18個連續核苷酸、19個連續核苷酸、20個連續核苷酸或至少21個連續核苷酸長度并且與選自SEQ ID NO: 1_78和2138的PDS基因序列至少85%同一。
4.如權利要求3所述的方法，其中所述多核苷酸片段選自有義或反義ssDNA或ssRNA、dsRNA 或 dsDNA，或 dsDNA/RNA 雜交體。
5.如權利要求1所述的方法，其中所述植物選自:苘麻、綠耳莧、匍匐莧、長芒莧、西部莧、綠穗莧、凹頭莧、刺莧、皺果莧、美洲豚草、三裂葉豚草、節節草、小蓬草、馬唐、白苞猩猩草、掃帚草、多花黑麥草、西洋蒲公英及毒萵苣。
6.如權利要求1所述的方法，其中所述組合物另外包含所述PDA抑制劑并且向植物外部施用所述組合物。
7.如權利要求6所述的方法，其中所述組合物另外包含一種或多種與所述PDS抑制劑除草劑類似或不同的共除草劑。
8.如權利要求3所述的方法，其中所述組合物包含所述多核苷酸片段中兩個或更多個的任何組合并且向植物外部施用所述組合物。
9.一種包含多核苷酸和轉移劑的組合物，其中所述多核苷酸與PDS基因序列，或與所述PDS基因序列的RNA轉錄物基本上同一或基本上互補，其中所述PDS基因序列選自SEQID NO:1-78和2138或其多核苷酸片段，并且由此相對于未用所述組合物處理的植物，用所述組合物處理的植物的生長或發育或繁殖能力得到調控、抑制或延遲，或所述植物因所述含多核苷酸的組合物而對PDS抑制劑除草劑或有絲分裂抑制劑除草劑更敏感。
10.如權利要求9所述的組合物，其中所述轉移劑是有機硅酮組合物。
11.如權利要求9所述的組合物，其中所述多核苷酸片段為18個連續核苷酸、19個連續核苷酸、20個連續核苷酸或至少21個連續核苷酸長度并且與選自SEQ ID NO:1_78和2138的PDS基因序列至少85%同一。
12.如權利要求9所述的組合物，其中所述多核苷酸選自SEQID N0:79-2010。
13.如權利要求9所述的組合物，其中所述多核苷酸選自SEQID NO:2011-2136。
14.如權利要求9所述的組合物，另外包含PDS抑制劑除草劑。
15.如權利要求14所述的組合物，其中所述PDS抑制劑分子選自:噠嗪酮、吡啶甲酰胺、氟丁酰草胺、氟啶酮、氟咯草酮及呋草酮。
16.如權利要求14所述的組合物，另外包含共除草劑。
17.一種減少植物中PDS基因的表達的方法，包括:向植物外部施用包含多核苷酸和轉移劑的組合物，其中所述多核苷酸與PDS基因序列或其片段，或與所述PDS基因序列或其片段的RNA轉錄物基本上同一或基本上互補，其中所述PDS基因序列選自SEQ ID N0:l_78和2138或其多核苷酸片段，由此所述PDS基因的所述表達相對于未施用所述組合物的植物有所減少。
18.如權利要求17所述的方法，其中所述轉移劑包含有機硅酮化合物。
19.如權利要求17所述的方法，其中所述多核苷酸片段為19個連續核苷酸、20個連續核苷酸或至少21個連續核苷酸長度并且與選自SEQ ID NO:1_78和2138的PDS基因序列至少85%同一。
20.如權利要求17所述的方法，其中所述多核苷酸分子選自有義或反義ssDNA或ssRNA、dsRNA 或 dsDNA，或 dsDNA/RNA 雜交體。
21.—種微生物表達盒，包含長度為18個連續核苷酸、19個連續核苷酸、20個連續核苷酸或至少21個連續核苷酸并且與選自SEQ ID NO:1_78和2138的PDS基因序列至少85%同一的多核苷酸片段。
22.—種制備多核苷酸的方法，包括a)將如權利要求21所述的微生物表達盒轉化到微生物中山)使所述微生物 生長；c)從所述微生物收獲多核苷酸，其中所述多核苷酸為至少18個連續核苷酸、至少19個連續核苷酸、至少20個連續核苷酸或至少21個連續核苷酸長度并且與選自SEQ ID NO:1-78和2138的PDS基因序列至少85%同一。
23.一種鑒別當外部處理植物時可用于調節PDS基因表達的多核苷酸的方法，包括:a)提供多種多核苷酸，所述多核苷酸包含與長度為18個連續核苷酸、19個連續核苷酸、20個連續核苷酸或至少21個連續核苷酸并且與選自SEQ ID NO:1_78和2138的PDS基因序列至少85%同一的多核苷酸片段基本上同一或基本上互補的區域；b)用所述多核苷酸中的一種或多種和轉移劑外部處理所述植物；c)針對PDS基因表達的調節對所述植物或提取物進行分析，并且由此相對于未用所述組合物處理的植物，用所述組合物處理的植物的生長或發育或繁殖能力得到調控、抑制或延遲，或所述植物因所述含多核苷酸的組合物而對ros抑制劑除草劑或有絲分裂抑制劑除草劑更敏感。
24.如權利要求23所述的方法，其中所述植物選自:苘麻、綠耳莧、匍匐莧、長芒莧、西部莧、綠穗莧、凹頭莧、刺莧、皺果莧、美洲豚草、三裂葉豚草、節節草、小蓬草、馬唐、白苞猩猩草、掃帚草、多花黑麥草、西洋蒲公英及毒萵苣。
25.如權利要求23所述的方法，其中所述PDS基因表達相對于未用所述多核苷酸片段和轉移劑處理的植物有所減少。
26.如權利要求23所述的方法，其中所述轉移劑是有機硅酮化合物。
27.—種包含多核苷酸與PDS抑制劑和共除草劑的混合物的農用化學組合物，其中所述多核苷酸與一部分PDS基因序列，或與所述PDS基因序列的一部分RNA轉錄物基本上同一或基本上互補，其中所述PDS基因序列選自SEQ ID NO:1-78和2138或其多核苷酸片段，并且由此相對于未用所述組合物處理的植物，用所述組合物處理的植物的生長或發育或繁殖能力得到調控、抑制或延遲，或所述植物因所述含多核苷酸的組合物而對PDS抑制劑除草劑或有絲分裂抑制劑除草劑更敏感。
28.如權利要求27所述的農用化學組合物，其中所述共除草劑選自:酰胺除草劑類、含砷除草劑類、苯并噻唑除草劑類、苯甲酰基環己二酮除草劑類、烷基磺酸苯并呋喃基酯除草劑類、環己烯肟除草劑類、環丙基異噁唑除草劑類、二甲酰亞胺除草劑類、二硝基苯胺除草劑類、二硝基苯酚除草劑類、二苯基醚除草劑類、二硫代氨基甲酸酯除草劑類、甘氨酸除草劑類、鹵代脂肪烴除草劑類、咪唑啉酮除草劑類、無機除草劑類、腈除草劑類、有機磷除草劑類、噁二唑酮除草劑類、噁唑除草劑類、苯氧基除草劑類、苯二胺除草劑類、吡唑除草劑類、噠嗪除草劑類、噠嗪酮除草劑類、吡啶除草劑類、嘧啶二胺除草劑類、嘧啶氧基苯甲胺除草劑類、季銨除草劑類、硫代氨基甲酸酯除草劑類、硫代碳酸酯除草劑類、硫脲除草劑類、三嗪除草劑類、三嗪酮除草劑類、三唑除草劑類、三唑酮除草劑類、三唑并嘧啶除草劑類、尿嘧啶除草劑類及脲除草劑類。
29.—種包含多核苷酸與DHPS抑制劑除草劑和殺蟲劑的混合物的農用化學組合物，其中所述多核苷酸與一部分PDS基因序列，或與所述PDS基因序列的一部分RNA轉錄物基本上同一或基本上互補，其中所述PDS基因序列選自SEQ ID NO:1-78和2138或其多核苷酸片段，由此具有需要雜草和蟲害控制的作物的田地用所述組合物進行處理，并且由此相對于未用所述組合物處理的植物，用所述組合物處理的植物的生長或發育或繁殖能力得到調控、抑制或延遲，或所述植物因所述含多核苷酸的組合物而對PDS抑制劑除草劑或有絲分裂抑制劑除草劑更敏感。
30.如權利要求29所述的農用化學組合物，其中所述殺蟲劑選自:殺昆蟲劑、殺真菌劑、殺線蟲劑、殺細菌劑、殺螨劑、生長調控劑、化學絕育劑、化學信息素、驅避劑、引誘劑、信息素、取食刺激劑及生物殺蟲劑。
31.一種除草劑組合物，包含PDS抑制劑除草劑以及多核苷酸和轉移劑，其中所述多核苷酸選自SEQ ID NO:2139-2176或者其補體或多核苷酸片段，并且由此相對于未用所述組合物處理的植物，用所 述組合物處理的植物的生長或發育或繁殖能力得到調控、抑制或延遲，或所述植物因所述含多核苷酸的組合物而對PDS抑制劑除草劑或有絲分裂抑制劑除草劑更敏感。
【文檔編號】A01H1/00GK103957696SQ201280053984
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2012年9月12日 優先權日:2011年9月13日
【發明者】D·阿德, J·J·芬內斯, 李兆隆, 劉虹, J·D·馬蘇西, R·H·沙, N·陶, 王大伏 申請人:孟山都技術公司