專利名稱：基于精密肝切片技術的魚類新鮮肝組織的固定方法
技術領域：
本發明涉及一種魚類新鮮肝組織的固定方法，特別涉及一種基于精密肝切片技術的魚類新鮮肝組織的固定方法。
背景技術：
精密肝切片(precision_cutliverslices:PCLS)技術介于器官與細胞水平之間，其獲得不需要用膠原酶，切片技術相對簡單，能夠保存正常組織結構、細胞聯系及細胞極性，精密肝切片培養系統在預測藥物的體內代謝和毒性方面要優越于體外肝細胞培養法。該技術已成為研究藥物代謝、轉化及毒性的一種良好的體外實驗模型，目前，精密肝切片技術已廣泛應用于科學研究當中，但在水產研究方面應用研究較少。由于魚類肝組織比較軟，直接將其固定到振蕩切片機上面進行操作很困難，影響了精密肝切片技術的發展，因此需要一種既保證肝組織的完整性，又能保證該技術順利進行的好方法。

發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種基于精密肝切片技術的魚類新鮮肝組織的固定方法，其可以對魚類新鮮肝組織進行固定，方便進行精密肝切片操作。為解決上述技術問題，本發明提供一種基于精密肝切片技術的魚類新鮮肝組織的固定方法，其包括:配置濃度為10-50g/L的瓊脂糖溶液；將所述瓊脂糖溶液放置于規則形狀的容器中；待所述瓊脂糖溶液的溫度為降至10-60度時，將采集的魚類新鮮肝組織放置于所述瓊脂糖溶液中；待所述瓊脂糖溶液完全凝固。在一個進一步的實施例中，待所述瓊脂糖溶液完全凝固后，將其放置于振蕩切片機中進行切片。在一個進一步的實施例中，配置瓊脂糖溶液的最佳濃度為30g/L，如果濃度過高如低熔點瓊脂糖的濃度為5%，會造成低熔點瓊脂糖還沒等降低溫度到30度就已經發生凝固現象，同時在高溫度下進行切片工作，會造成新鮮肝組織的死亡，影響了實驗的進行；如果濃度過低如低熔點瓊脂糖的濃度為1%，雖然溫度30度會控制好，但是由于濃度低，造成固定新鮮組織的外表不夠堅硬結實，在切片過程中會發生撕裂現象，使切片工作失敗。在一個進一步的實施例中，將采集的魚類新鮮肝組織放置于所述瓊脂糖溶液中的所述瓊脂糖溶液的最佳溫度為30度。如果溫度過高達到60度，會造成新鮮肝組織的死亡；相反，如果溫度過低達到10度，沒有接近魚類在體時的溫度，也會使肝組織的活性受到一定影響，影響了實驗數據的準確性。在一個進一步的實施例中，所述規則形狀的容器為細胞培養板或者正方形容器。在一個進一步的實施例中，配置濃度為30g/L的瓊脂糖溶液的具體步驟為:稱取3g的瓊脂糖，將其放入裝有IOOml蒸餾水的燒杯中；對所述燒杯進行加熱，使所述瓊脂糖完全溶解。
在一個進一步的實施例中，所述魚類新鮮肝臟組織為建鯉新鮮肝臟組織。與現有技術相比，本發明利用低熔點瓊脂糖溶液的凝固特性，對魚類新鮮肝組織進行固定，此方法不僅保證了魚類新鮮肝組織的活性，而且可以保證精密肝切片操作順利進行。
具體實施例方式為使本發明的上述目的、特征和優點能夠更加明顯易懂，下面結合具體實施方式
對本發明作進一步詳細的說明。此處所稱的“一個實施例”或“實施例”是指可包含于本發明至少一個實現方式中的特定特征或特性。在本說明書中不同地方出現的“在一個實施例中”并非均指同一個實施例，也不是單獨的或選擇性的與其他實施例互相排斥的實施例。實施例一稱取Ig低熔點瓊脂糖，將其加入到含有IOOml蒸餾水的小燒杯中，放置到電熱爐或微波爐中加熱煮沸使其溶解(此瓊脂糖溶液的濃度為10g/L)，然后將其分裝到規則形狀的容器中，比如，分裝到六孔細胞培養板中或自制的正方形小容器內，待溫度分別降低到大約60度、30度、10度時，將新鮮采集的建鯉肝組織加入其中，等待其冷卻凝固后，進行修塊，放置在震蕩切片機中進行切片研究。研究發現在60度時對肝組織損傷較大；30度時由于低熔點瓊脂糖的濃度較低，切塊時容易造成外表撕裂，不能順利進行切片；10度時，還沒等將新鮮肝組織放入，低熔點瓊脂糖已經發生了凝固現象，影響后續試驗的順利進行。實施例二稱取3g低熔點瓊脂糖，將其加入到含有IOOml蒸餾水的小燒杯中，放置到電熱爐或微波爐中加熱煮沸使其溶解(此瓊脂糖溶液的濃度為30g/L)，將其分裝到六孔細胞培養板中或自制的正方形小容器，待溫度分別降低到大約60度、30度、10度時，將新鮮采集的建鯉肝組織加入其中，等待其冷卻凝固后，放置到震蕩切片機中進行切片研究。本結果發現瓊脂糖溶液的濃度為30g/L在溫度為30度時切出的精密肝組織切片形狀良好、厚度均勻，適合后續科學研究實驗。實施例三稱取5g低熔點瓊脂糖，將其加入到含有IOOml蒸餾水的小燒杯中，放置到電熱爐或微波爐中加熱煮沸使其溶解(此瓊脂糖溶液的濃度為50g/L)，將其分裝到六孔細胞培養板中或自制的正方形小容器，待溫度分別降低到60度、30度、10度時，將新鮮采集的建鯉肝組織加入其中，等待其冷卻凝固后，放置到震蕩切片機中進行切片研究。研究結果發現，60度時由于溫度過高會造成肝組織損傷，因此不適合固定肝組織，而在10度、30度時，由于低熔點瓊脂糖濃度過高，還沒等肝組織放入就出現了凝固現象，因此，瓊脂糖溶液的濃度為50g/L不適合固定肝組織。根據上述三個實施例可以得出，配置的瓊脂糖溶液濃度可以為10_50g/L ;待所述瓊脂糖溶液的溫度為降至10-60度時，將采集的魚類新鮮肝組織放置于所述瓊脂糖溶液中；本發明不僅適用于建鯉新鮮肝組織，也同樣適用于，其他魚類新鮮肝組織。綜上所述，本發明 中的基于精密肝切片技術的魚類新鮮肝組織的固定方法，其包括；配置濃度為10-50g/L的瓊脂糖溶液；將所述瓊脂糖溶液放置于容器中；待所述瓊脂糖溶液的溫度為降至10-60度時，將采集的魚類新鮮肝組織放置于所述瓊脂糖溶液中；待所述瓊脂糖溶液完全凝固后，這樣就實現了對魚類新鮮肝組織的固定，隨后，可以將其放置于振蕩切片機中進行切片。與現有技術相比，本發明利用低熔點瓊脂糖溶液的凝固特性，將魚類新鮮肝組織放置于一定溫度的瓊脂糖溶液中，待所述瓊脂糖溶液完全凝固后，所述魚類新鮮肝組織也被固定于其中，此方法不僅保證了魚類新鮮肝組織的活性，而且可以保證精密肝切片操作順利進行。本發明不僅適用于一些較軟的魚類肝組織，為以后應用新鮮動物組織進行科學實驗提供了一種有效的方法。以上所述僅為本發明的較佳實施方式，本發明的保護范圍并不以上述實施方式為限，但凡本領域普通技術人員根據本發明揭示內容或發明精神所作的等效修改或變化，皆應納入權利要求書中記 載的保護范圍內。
權利要求
1.一種基于精密肝切片技術的魚類新鮮肝組織的固定方法，其特征在于，其包括: 配置濃度為10-50g/L的瓊脂糖溶液； 將所述瓊脂糖溶液放置于容器中； 待所述瓊脂糖溶液的溫度為降至10-60度時，將采集的魚類新鮮肝組織放置于所述瓊脂糖溶液中；和 待所述瓊脂糖溶液完全凝固。
2.根據權利要求1所述的基于精密肝切片技術的魚類新鮮肝組織的固定方法，其特征在于，待所述瓊脂糖溶液完全凝固后，將其放置于振蕩切片機中進行切片。
3.根據權利要求1所述的基于精密肝切片技術的魚類新鮮肝組織的固定方法，其特征在于，配置瓊脂糖溶液的最佳濃度為30g/L。
4.根據權利要求1所述的基于精密肝切片技術的魚類新鮮肝組織的固定方法，其特征在于，將采集的魚類新鮮肝組織放置于所述瓊脂糖溶液中的所述瓊脂糖溶液的最佳溫度為30度。
5.根據權利要求3或者4 所述的基于精密肝切片技術的魚類新鮮肝組織的固定方法，其特征在于，所述容器為細胞培養板或者正方形容器。
6.根據權利要求3所述的基于精密肝切片技術的魚類新鮮肝組織的固定方法，其特征在于，配置濃度為30g/L的瓊脂糖溶液的具體步驟為: 稱取3g的瓊脂糖，將其放入裝有IOOml蒸餾水的燒杯中； 對所述燒杯進行加熱，使所述瓊脂糖完全溶解。
7.根據權利要求5所述的 基于精密肝切片技術的魚類新鮮肝組織的固定方法，其特征在于，所述魚類新鮮肝臟組織為建鯉新鮮肝臟組織。
全文摘要
本發明公開了一種基于精密肝切片技術的魚類新鮮肝組織的固定方法，其包括配置濃度為10-50g/L的瓊脂糖溶液；將所述瓊脂糖溶液放置于容器中；待所述瓊脂糖溶液的溫度為降至10-60度時，將采集的魚類新鮮肝組織放置于所述瓊脂糖溶液中；待所述瓊脂糖溶液完全凝固，這樣就實現了對魚類新鮮肝組織的固定。本發明操作簡單，使用方便，可以在科學研究領域廣泛使用。
文檔編號A01K61/00GK103070118SQ20131002830
公開日2013年5月1日 申請日期2013年1月25日 優先權日2013年1月25日
發明者杜金梁, 殷國俊, 曹麗萍, 賈睿 申請人:中國水產科學研究院淡水漁業研究中心