一種鐵皮石斛種胚的保存方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種鐵皮石斛種胚的保存方法，其特征在于包括以下步驟：1）將鐵皮石斛果莢表面清理后置于超凈工作臺中紫外照射6～10min，然后將石斛果莢消毒5～8min；2）將鐵皮石斛種胚在無菌狀態(tài)下播種于無菌西林瓶中，將西林瓶瓶口封緊后對其用0.01～0.05%苯扎溴銨溶液浸泡消毒10～15min；3）用真空包裝機(jī)對消毒后的西林瓶進(jìn)行抽真空包裝保存，抽真空時間為3～6s，保存條件為0～4℃保存。本發(fā)明解決了鐵皮石斛果莢保質(zhì)期短，原先組培受季節(jié)限制，其他季節(jié)只能通過繼代增值進(jìn)行生產(chǎn)的缺陷，本發(fā)明的保存方法工藝簡單實用、操作方便，鐵皮石斛種胚經(jīng)長期保存后質(zhì)量穩(wěn)定可靠，種胚萌發(fā)率高，可適合鐵皮石斛種子大規(guī)模的長期保存。
【專利說明】一種鐵皮石斛種胚的保存方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種鐵皮石斛種胚的保存方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鐵皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)是傳統(tǒng)珍稀名貴中藥材,具有滋陰清熱、生津益胃、消除腫瘤、提高人體免疫力等功效，具有很高的藥用價值，其在《道藏》中被列為“中華九大仙草之首”。但其自然生長條件下生長緩慢，繁殖率極低，加之近年來的掠奪性采挖，野生資源已瀕臨滅絕。鐵皮石斛已于1987年正式列為國家二級保護(hù)植物。由于鐵皮石斛的市場需求量巨大，而目前野生資源遠(yuǎn)遠(yuǎn)難以滿足市場的需要。二十世紀(jì)八十年代人們開始進(jìn)行鐵皮石斛的仿野生種植，但由于種苗繁育以及種植技術(shù)低下鐵皮石斛繁育種植發(fā)展緩慢，直到近十年隨著現(xiàn)代生物組培技術(shù)的發(fā)展以及科學(xué)的種植研究，全國建立起近百個現(xiàn)代植物組培工廠，鐵皮石斛的種苗繁育與人工仿野生種植取得了飛速的發(fā)展。
[0003]鐵皮石斛屬于蘭科植物，自然坐果率極低，鐵皮石斛果莢十分寶貴。鐵皮石斛一般五月下旬開始開花，十月份果莢成熟。成熟的果莢自然狀態(tài)下會自行開裂。而開裂后的果莢在組培行業(yè)中很難去毒，部分人通過將果莢存放于冰箱中進(jìn)行冷藏保存，但只能延長一個月左右的保質(zhì)期。因為鐵皮石斛果子的季節(jié)性導(dǎo)致現(xiàn)有組培工廠每年只有在10~12月的季節(jié)里才能依靠鐵皮石斛果莢進(jìn)行直接種子繁育，而除此季節(jié)外只能通過繼代增值進(jìn)行生產(chǎn)，這大大增加了組培成本，此外經(jīng)過不斷繼代導(dǎo)致種質(zhì)的退化難以保證產(chǎn)品的質(zhì)量。因此石斛蒴果的有無已經(jīng)成為制約石斛組培行業(yè)發(fā)展瓶頸。因此需要研發(fā)出一種鐵皮石斛種胚的保存方法，可以將鐵皮石斛種子進(jìn)行大規(guī)模的長期保存，來滿足鐵皮石斛組培行業(yè)發(fā)展需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種鐵皮石斛種胚的保存方法，工藝簡單實用，技術(shù)穩(wěn)定可靠，適合鐵皮石斛種子大規(guī)模的長期保存。
[0005]本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為:一種鐵皮石斛種胚的保存方法，其特征在于包括以下步驟:
[0006]I)將鐵皮石斛果莢表面清理后置于超凈工作臺中紫外照射6~lOmin，然后將鐵皮石斛果莢用酒精消毒5~8min ；
[0007]2)將消毒后的鐵皮石斛果莢剪開取鐵皮石斛種胚，將鐵皮石斛種胚在無菌狀態(tài)下播種于無菌西林瓶中，將西林瓶瓶口封緊后對其用質(zhì)量濃度0.01~0.05%苯扎溴銨溶液浸泡消毒10~15min ；
[0008]3)用真空包裝機(jī)對消毒后的西林瓶進(jìn)行抽真空包裝保存，使其內(nèi)氣壓在100~150pa內(nèi)，保存條件為O~4°C保存。
[0009]作為優(yōu)選，所述步驟I)中酒精的質(zhì)量濃度為70~75%。[0010]最后，所述步驟2)中鐵皮石斛果莢是采用無菌手術(shù)剪刀進(jìn)行剪開，并用鑷子將鐵皮石斛種胚播種于無菌西林瓶中，每個西林瓶中播種鐵皮石斛果莢3~5個。
[0011]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于:解決了鐵皮石斛果莢保質(zhì)期短，原先組培受季節(jié)限制，其他季節(jié)只能通過繼代增值進(jìn)行生產(chǎn)的缺陷，本發(fā)明的保存方法工藝簡單實用、操作方便，鐵皮石斛種胚經(jīng)長期保存后質(zhì)量穩(wěn)定可靠，種胚萌發(fā)率高，可適合鐵皮石斛種子大規(guī)模的長期保存。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0012]圖1是保存示意圖之一；
[0013]圖2是保存示意圖之二 ；
【具體實施方式】
[0014]以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0015]實施例1:
[0016]種質(zhì)材料為浙江樂清大荊鐵皮石斛植株生長的果莢，將石斛果莢表面清理后置于超凈工作臺中紫外照射6min，然后將石斛果莢用70~75%酒精消毒5min。然后用無菌手術(shù)剪刀和鑷子將鐵皮石斛種胚在無菌狀態(tài)下播種于無菌西林瓶中，每個西林瓶中播種鐵皮石斛果莢3個。將西林瓶瓶口封緊后對其用0.01%苯扎溴銨溶液浸泡消毒lOmin。用真空包裝機(jī)對消毒后的西林瓶進(jìn)行抽真空包裝保存，抽真空時間為3s，使其內(nèi)氣壓在100~150pa內(nèi)，保存條件為0°C保存。保存一年后，在無菌狀態(tài)下將種胚轉(zhuǎn)移到常規(guī)種子萌發(fā)培養(yǎng)基中檢查萌發(fā)情況。培養(yǎng)基組成為:1/2MS培養(yǎng)基，添加0.5%瓊脂粉，3.0%蔗糖，0.05%活性碳，PH5.8。培養(yǎng)I個月后種子萌發(fā)，萌發(fā)率為95.8%。
[0017]實施例2:
[0018]種質(zhì)材料為廣西容縣鐵皮石斛植株生成的果莢，將石斛果莢表面清理后置于超凈工作臺中紫外照射8min，然后將石斛果莢用70~75%酒精消毒6.5min。然后用無菌手術(shù)剪刀和鑷子將鐵皮石斛種胚在無菌狀態(tài)下播種于無菌西林瓶中，每個西林瓶中播種鐵皮石斛果莢4個。將西林瓶瓶口封緊后對其用0.02%苯扎溴銨溶液浸泡消毒12min。用真空包裝機(jī)對消毒后的西林瓶進(jìn)行抽真空包裝保存，抽真空時間為4.5s，使其內(nèi)氣壓在100~150pa內(nèi)，保存條件為2°C保存。保存兩年后，在無菌狀態(tài)下將種胚轉(zhuǎn)移到常規(guī)種子萌發(fā)培養(yǎng)基中檢查萌發(fā)情況。培養(yǎng)基組成為:1/2MS培養(yǎng)基，添加0.5%瓊脂粉，3.0%蔗糖，0.05%活性碳，PH5.8。培養(yǎng)I個月后種子萌發(fā)，萌發(fā)率為95.1%。
[0019]實施例3:
[0020]種質(zhì)材料為廣東韶關(guān)鐵皮石斛植株生成的果莢，將石斛果莢表面清理后置于超凈工作臺中紫外照射lOmin，然后將石斛果莢用70~75%酒精消毒8min。然后用無菌手術(shù)剪刀和鑷子將鐵皮石斛種胚在無菌狀態(tài)下播種于無菌西林瓶中，每個西林瓶中播種鐵皮石斛果莢5個。將西林瓶瓶口封緊后對其用0.05%苯扎溴銨溶液浸泡消毒15min。用真空包裝機(jī)對消毒后的西林瓶進(jìn)行抽真空包裝保存，抽真空時間為6s，使其內(nèi)氣壓在100~150pa內(nèi)，保存條件為2°C保存。保存三年后，在無菌狀態(tài)下將種胚轉(zhuǎn)移到常規(guī)種子萌發(fā)培養(yǎng)基中檢查萌發(fā)情況。培養(yǎng)基組成為:1/2MS培養(yǎng)基，添加0.5%瓊脂粉，3.0%蔗糖，0.05%活性碳，PH5.8。培養(yǎng)I個月后種子萌發(fā)，萌發(fā)率為96.2%。
【權(quán)利要求】
1.一種鐵皮石斛種胚的保存方法，其特征在于:包括以下步驟: 1)將鐵皮石斛果莢表面清理后置于超凈工作臺中紫外照射6~lOmin，然后將鐵皮石斛果莢用酒精消毒5~8min ； 2)將消毒后的鐵皮石斛果莢剪開取鐵皮石斛種胚，將鐵皮石斛種胚在無菌狀態(tài)下播種于無菌西林瓶中，將西林瓶瓶口封緊后對其用質(zhì)量濃度0.01~0.05%苯扎溴銨溶液浸泡消毒 10 ~15min ； 3)用真空包裝機(jī)對消毒后的西林瓶進(jìn)行抽真空包裝保存，使其內(nèi)氣壓在100~150pa內(nèi)，保存條件為O~4°C保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的保存方法，其特征在于:所述步驟I)中酒精的質(zhì)量濃度為70 ~75%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的保存方法，其特征在于:所述步驟2)中鐵皮石斛果莢是采用無菌手術(shù)剪刀進(jìn)行剪開，并用鑷子將鐵皮石斛種胚播種于無菌西林瓶中，每個西林瓶中播種鐵皮石斛果莢3~5 個。
【文檔編號】A01N3/00GK104026120SQ201310070585
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2013年3月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月6日
【發(fā)明者】何心展, 李振達(dá), 黃飛 申請人:寧波洛祥生物技術(shù)有限公司, 寧波洛祥藥業(yè)有限公司