專利名稱：一種茶壺棗組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物的組織培養(yǎng)方法，具體涉及一種通過(guò)茶壺棗無(wú)菌短枝扦插方法獲得茶壺棗組培苗的方法。
背景技術(shù)：
:率(ZiziphusjujubeMill)為鼠李科(Rhamnaceae)率屬(ZiziphusMill)植物，是原產(chǎn)于我國(guó)的特有經(jīng)濟(jì)樹(shù)種。棗樹(shù)適應(yīng)性強(qiáng)，抗旱，耐鹽堿、耐瘠薄，具有良好的水土保持作用。果實(shí)含有非常豐富的糖、Vc、cAMP以及蛋白質(zhì)、脂肪、Vp、B族維生素和Fe、P、Ca、Zn等人類必需的物質(zhì)，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和食療價(jià)值。棗樹(shù)種類繁多，高度雜合，遺傳背景復(fù)雜，具有花小、坐果率低、早期胚敗育等特點(diǎn)，造成去雄和人工授粉困難，不易得到雜種后代，種質(zhì)創(chuàng)新遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于其他果樹(shù)，利用組織培養(yǎng)可以進(jìn)行苗木的快繁、無(wú)病毒苗木的培育、種質(zhì)資源的離體保存，同時(shí)也為生物技術(shù)育種奠定基礎(chǔ)。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展，給果樹(shù)育種開(kāi)辟了全新的道路，進(jìn)行了體細(xì)胞變異的誘導(dǎo)和利用花粉和花藥培養(yǎng)、植物的遺傳轉(zhuǎn)化及與植物遺傳育種相關(guān)的其他分子生物學(xué)技術(shù)。在棗樹(shù)生產(chǎn)不斷發(fā)展的同時(shí)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者在花藥培養(yǎng)和原生質(zhì)體培養(yǎng)方面取得了一定的進(jìn)展，也開(kāi)展了棗不定芽再生體系的研究，在棗莖段、葉片、體細(xì)胞胚形成和胚挽救等方面取得了很大的進(jìn)展。利用花藥培養(yǎng)、原生質(zhì)體融合及不定芽再生體系進(jìn)行了種質(zhì)創(chuàng)新和新品種選育，這為今后原生質(zhì)體融合、基因工程等現(xiàn)代育種技術(shù)在棗品種改良中的應(yīng)用奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。茶壺棗原產(chǎn)于山東，通常在棗身肩部或近肩部長(zhǎng)出一對(duì)對(duì)角排列的肉質(zhì)突出物，因突出物酷似茶壺的壺嘴、壺把而得名，形狀奇特，艷麗美觀。果皮薄，紫紅色，富光澤鮮艷，果肉綠白色，質(zhì)地粗松略綿，汁液中多，味甜略酸，鮮食品質(zhì)較優(yōu)，是一種有極高的觀賞價(jià)值食用為一體的優(yōu)良經(jīng)濟(jì)植物。適合于園林、庭院、盆栽或點(diǎn)綴花壇、草坪的新型綠化樹(shù)種。利用組織培養(yǎng)的方法，不僅可以建立茶壺棗的脫毒系，同時(shí)還可以加速茶壺棗苗木的繁育速度。然而常規(guī)的組織培養(yǎng)方法所獲得的茶壺棗組培苗成活率低，難以大面積的推廣使用
發(fā)明內(nèi)容
:本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的所述不足，提供一種茶壺棗組織培養(yǎng)方法，通過(guò)對(duì)工藝流程和培養(yǎng)基的選擇和優(yōu)化，使得能夠更加有效、方便的在短時(shí)間內(nèi)獲得大量茶壺棗組培苗，所獲得的組培苗成活率高。本發(fā)明實(shí)施例提供的茶壺棗組織培養(yǎng)方法，包括如下步驟:剪取大田茶壺棗帶芽莖尖，自來(lái)水洗凈后，至于酒精中消毒，用升汞滅菌，無(wú)菌水沖洗干凈后，接種于啟動(dòng)培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)接至分生培養(yǎng)基，然后轉(zhuǎn)接至繼代培養(yǎng)基，最后在生根培養(yǎng)基中完成整個(gè)組培體系的建立。在人工控制的光照、溫度條件下無(wú)菌培養(yǎng)，移栽。其中，所述消毒酒精濃度為75%，消毒時(shí)間為30s，滅菌使用0.1%的氯化汞，滅菌時(shí)間為7min,無(wú)菌水沖洗6次。
其中，所述啟動(dòng)培養(yǎng)基配方為MS基本培養(yǎng)基+6-芐氨基腺嘌呤2.0mg/L+萘乙酸
0.lmg/L+聚乙烯吡咯烷酮lg/L+蔗糖30g/L+倍立凝6g/L，pH=6,培養(yǎng)時(shí)間為30d。其中，所述繼代培養(yǎng)基配方為MS基本培養(yǎng)基+6-芐氨基腺嘌呤2.0mg/L+吲哚丁酸0.5mg/L+聚乙烯吡咯烷酮lg/L+蔗糖30g/L+倍立凝6g/L，pH=6,培養(yǎng)時(shí)間為35d。其中，所述繼代培養(yǎng)基配方為MS基本培養(yǎng)基+6-芐氨基腺嘌呤2.0mg/L+吲哚丁酸0.5mg/L+聚乙烯吡咯烷酮lg/L+蔗糖30g/L+倍立凝6g/L，pH=6,培養(yǎng)時(shí)間為35d。其中，所述生根培養(yǎng)基配方為改良MS培養(yǎng)基+吲哚丁酸0.4mg/L+聚乙烯吡咯烷酮lg/L+蔗糖20g/L+倍立凝6g/L，pH=6,培養(yǎng)時(shí)間為35d。其中，所述大田茶壺棗帶芽莖段的采集地點(diǎn)為北京林業(yè)大學(xué)河北滄州棗樹(shù)育種實(shí)踐基地，時(shí)間為當(dāng)年4月中下旬到5月中旬。

其中，所述人工控制的光照、溫度條件為光照強(qiáng)度20001x±1001x，光照時(shí)間14h/d，溫度 25±1°C。優(yōu)選的，本發(fā)明中的茶壺棗選自山東茶壺棗。所述MS基本培養(yǎng)基為本領(lǐng)域常見(jiàn)的MS培養(yǎng)基，其實(shí)例包括但不限于(Murashigeand Skoog, 1962)所列舉的配方:
權(quán)利要求
1.一種茶壺棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于，包括如下步驟:剪取大田茶壺棗帶芽莖尖，自來(lái)水洗凈后，置于酒精中消毒，用升汞滅菌，無(wú)菌水沖洗干凈后，接種于啟動(dòng)培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)接至分生培養(yǎng)基，然后轉(zhuǎn)接至繼代培養(yǎng)基，最后在生根培養(yǎng)基中完成整個(gè)組培體系的建立，在人工控制的光照、溫度條件下無(wú)菌培養(yǎng)，移栽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述茶壺棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述消毒酒精濃度為70-80%，消毒時(shí)間為25-35s，滅菌使用0.05-0.15%的氯化汞，滅菌時(shí)間為5_9min，無(wú)菌水沖洗4次以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述茶壺棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述啟動(dòng)培養(yǎng)基配方為MS基本培養(yǎng)基+6-芐氨基腺嘌呤1.0-3.0mg/L+萘乙酸0.05-0.15mg/L+聚乙烯吡咯烷酮 0.8-1.2g/L+ 蔗糖 20-40g/L+ 倍立凝 4_8g/L，pH=5.5-6.5，培養(yǎng)時(shí)間為 25-35 天。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的茶壺棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述分生培養(yǎng)基配方為MS基本培養(yǎng)基+6-芐氨基腺嘌呤3.0-5.0mg/L+萘乙酸0.05-0.15mg/L+聚乙烯吡咯烷酮0.8-1.2g/L+ 蔗糖 20-40g/L+ 倍立凝 4_8g/L，pH=5.5-6.5，培養(yǎng)時(shí)間為 30_40d。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的茶壺棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述繼代培養(yǎng)基配方為MS基本培養(yǎng)基+6-芐氨基腺嘌呤1.5-2.5mg/L+吲哚丁酸0.4-0.6mg/L+聚乙烯吡咯烷酮0.8-1.2g/L+ 蔗糖 20-40g/L+ 倍立凝 4_8g/L，pH=5.5-6.5，培養(yǎng)時(shí)間為 30_40d。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的茶壺棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)基配方為改良MS培養(yǎng)基+吲哚丁酸0.3-0.5mg/L+聚乙烯吡咯烷酮0.8-1.2g/L+蔗糖15_25g/L+4-8g/L, pH=5.5-6.5，培養(yǎng)時(shí)間為 30_40d。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的茶壺棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述大田茶壺棗帶芽莖段的采集時(shí)間為當(dāng)年4月中下旬到5月中旬。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的茶壺棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述人工控制的光照、溫度條件為光照強(qiáng)度2 0001X ± 1001X，光照時(shí)間14 ± 2h/d，溫度25 ± 2 °C。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的茶壺棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述改良MS培養(yǎng)基的配方如下表所示:
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種茶壺棗組織培養(yǎng)方法，包括如下步驟剪取大田茶壺棗帶芽莖尖，自來(lái)水洗凈后，置于酒精中消毒，用升汞滅菌，無(wú)菌水沖洗干凈后，接種于啟動(dòng)培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)接至分生培養(yǎng)基，然后轉(zhuǎn)接至繼代培養(yǎng)基，最后在生根培養(yǎng)基中完成整個(gè)組培體系的建立，在人工控制的光照、溫度條件下無(wú)菌培養(yǎng)，移栽。按本發(fā)明實(shí)施例進(jìn)行的茶壺棗的離體快速繁殖，從接種至生根僅需要70天，即可下地移栽至育苗床，誘導(dǎo)成活率高達(dá)97％，增值倍數(shù)為10倍，移栽生根率也高達(dá)95％。
文檔編號(hào)A01H4/00GK103190347SQ20131014957
公開(kāi)日2013年7月10日 申請(qǐng)日期2013年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月26日
發(fā)明者李穎岳, 金琪, 龐曉明, 王巖, 續(xù)九如 申請(qǐng)人:北京林業(yè)大學(xué)