蝴蝶蘭試管開花的誘導(dǎo)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種蝴蝶蘭試管開花的誘導(dǎo)方法。該方法包括以下步驟：取經(jīng)壯苗生根后的健壯無菌蝴蝶蘭瓶苗為外植體進(jìn)行花芽誘導(dǎo)?；ㄑ空T導(dǎo)約3-4個月，可見花梗抽出。再經(jīng)開花誘導(dǎo)培養(yǎng)，花芽可正常發(fā)育并有花苞出現(xiàn)，花苞發(fā)育正常并得以正常開放，無畸形花出現(xiàn)。本發(fā)明的誘導(dǎo)蝴蝶蘭開花的方法，可以準(zhǔn)確有效地誘導(dǎo)蝴蝶蘭花芽的形成，花芽誘導(dǎo)率可達(dá)80.0-93.3%。并有60.0-73.3%的花芽可正常發(fā)育并成功誘導(dǎo)開花?；ㄆ鞴偻暾幕ǘ涓哌_(dá)100.0%?；ㄆ诔志?，可長達(dá)30-40天。通常試管定植生根后瓶苗經(jīng)移栽種植開花需約24個月，本發(fā)明的瓶苗試管內(nèi)誘導(dǎo)開花僅需6-8個月。
【專利說明】蝴蝶蘭試管開花的誘導(dǎo)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種蝴蝶蘭試管開花的誘導(dǎo)方法，屬于花卉生物【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]蝴蝶蘭(Phalaenopsis hybrida),蘭科蝴蝶蘭屬(Phalaenopsis)植物，是蘭科植物中栽培最廣泛、最受歡迎的種類之一?；ㄐ蝿e致、色彩艷麗多樣，花期持久，觀賞價值及經(jīng)濟(jì)價值極高，素有“洋蘭皇后”之美稱。溫室栽培條件下，從種子萌發(fā)至開花至少需要3年時間。其中，種植開花所需時間較長是制約雜交育種及商業(yè)化生產(chǎn)的重要因素之一。而利用植物生物技術(shù)誘導(dǎo)蝴蝶蘭試管開花可大大縮短生長周期，且具有方法簡單、易于調(diào)控、重復(fù)性強(qiáng)及不受季節(jié)或地域限制等優(yōu)點(diǎn)。為研究植物開花機(jī)理提供理想的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)并利于植物試管雜交開展。此項(xiàng)技術(shù)應(yīng)用于開發(fā)迷你型試管花卉產(chǎn)品，市場前景廣闊。因此，蝴蝶蘭試管開花研究無論在理論上還是應(yīng)用上都具有重要意義。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)中，已對蝴蝶蘭試管開花進(jìn)行了初步的研究。Duan與Yazawa (1995)進(jìn)行蝴蝶蘭試管開花研究顯示，蝴蝶蘭花芽誘導(dǎo)率可達(dá)70%，經(jīng)9個月后培養(yǎng)有10%的花芽成花，但均為畸形花(Duan J X, Yazawa S，F(xiàn)loral induction and development in Phalaenopsisin vitro[J].Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 1995，43:71-74)。王再花等(2007)研究則表明，蝴蝶蘭實(shí)生苗經(jīng)預(yù)處理后，于添加6-BA、TDZ的VW培養(yǎng)基，輔以低溫處理，花芽誘導(dǎo)率可提高至51.7%。但發(fā)芽發(fā)育至一定程度即停止發(fā)育(王再花，朱根發(fā)，呂復(fù)兵等.蝴蝶蘭快速繁殖及花芽誘導(dǎo)[J].亞熱帶植物科學(xué)，2007，36 (3):65-66)。Chiu與Chang (2011)研究顯示，蝴蝶蘭花芽誘導(dǎo)率可高達(dá)100%。其中，部分花芽可見花苞出現(xiàn)；但部分花芽發(fā)育至一定程度即停止發(fā)育。且花苞最終也無法正常開放(Chiu Y T, ChangC.1nduction of in vitro flowering in the Phalaeopsis orchid[J].J.Taiwan Soc.Hort.Sc1.，2011，57(1):43-51).由現(xiàn)有研究可見，國內(nèi)外尚無法實(shí)`現(xiàn)蝴蝶蘭正常試管成花。存在著花芽難以進(jìn)一步發(fā)育成花的難題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目在于提供一種簡單的、開花誘導(dǎo)率較高的蝴蝶蘭試管開花的方法。
[0005]通過取經(jīng)壯苗生根的健壯蝴蝶蘭瓶苗為植體，經(jīng)去根后于成分獨(dú)特的培養(yǎng)基進(jìn)行花芽誘導(dǎo)，再經(jīng)開花誘導(dǎo)培養(yǎng)，成功誘導(dǎo)蝴蝶蘭開花，提高蝴蝶蘭試管成花率。該法簡單，開花誘導(dǎo)率較高，從而實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的。
[0006]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0007]本發(fā)明提供的一種蝴蝶蘭試管開花的誘導(dǎo)方法，包括以下步驟:
[0008](I)花芽誘導(dǎo)階段:取經(jīng)壯苗生根后的健壯無菌蝴蝶蘭瓶苗為外植體，去根后于花芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行花芽誘導(dǎo)?；ㄑ空T導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS培養(yǎng)基(1/5-1/10Ν、2-5Ρ) +6-BA(6-芐基腺嘌呤)5-10mg/L，另在培養(yǎng)基中添加蔗糖20_30g/L、蛋白胨3_5g/L、椰子汁100-150ml/L、活性炭 0.5-1.0g/L 以及瓊脂 6_8g/L、ρΗ5.5-5.8。培養(yǎng)溫度為 18±2°C。光照時間為12_16h,光照強(qiáng)度為30-50 μ mol IiT2S'誘導(dǎo)3-4個月。
[0009](2)開花培養(yǎng)階段:花芽誘導(dǎo)完成后即進(jìn)入誘導(dǎo)開花階段。開花誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:以1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，另在培養(yǎng)基中添加蔗糖20-30g/L、蛋白胨3_5g/L、椰子汁100-150ml/L、活性炭 0.5-1.0g/L 以及瓊脂 6_8g/L、ρΗ5.5-5.8。培養(yǎng)溫度為 25±2°C。光照時間為12_16h,光照強(qiáng)度為30-50 μ mol nT2s'培養(yǎng)3-4個月。
[0010]步驟(1)所述的1/5-1/10N為N減少為原來MS培養(yǎng)基中N的1/5-1/10，2-5P為P增加為原來MS培養(yǎng)基中P的2-5倍。 [0011]步驟(2)所述的1/2MS培養(yǎng)基，指的是原來MS培養(yǎng)基中的大量元素減半，其余含量不變。
[0012]本發(fā)明的誘導(dǎo)蝴蝶蘭開花的方法，可以有效誘導(dǎo)蝴蝶蘭花芽形成，花芽發(fā)育正常且健壯，花苞發(fā)育正常并能正常成花，無畸形花出現(xiàn)。通過降低培養(yǎng)基中的N含量及提高培養(yǎng)基中的P含量，并結(jié)合6-BA、去除根及低溫協(xié)同作用，誘導(dǎo)蝴蝶蘭花芽形成，并得以正常發(fā)育并出現(xiàn)花苞，最終能正常開花。本發(fā)明的方法簡單易行。培養(yǎng)的植株健壯、花芽誘導(dǎo)率高，為80.0-93.3%。其中，60.0-73.3%的花芽可正常發(fā)育并可正常開花。且花器官完整率可達(dá)100.0%?；ㄐ痛笄医选；ㄆ诔志茫砷L達(dá)30-40天。通常試管定植生根后瓶苗經(jīng)移栽種植開花需約24個月，本發(fā)明的瓶苗試管內(nèi)誘導(dǎo)開花僅需6-8個月。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1為本發(fā)明實(shí)施例1誘導(dǎo)出的花。
【具體實(shí)施方式】
[0014]以下的實(shí)施例是對本發(fā)明的進(jìn)一步說明，不是對本發(fā)明的限制。
[0015]實(shí)施例1:
[0016]以經(jīng)壯苗生根的蝴蝶蘭健壯瓶苗為誘導(dǎo)材料進(jìn)行誘導(dǎo)，分兩個階段進(jìn)行，一是花芽誘導(dǎo)階段，二是開花培養(yǎng)階段。
[0017](I)花芽誘導(dǎo)階段:取經(jīng)壯苗生根后的健壯瓶苗為外植體，去除根后進(jìn)行花芽誘導(dǎo)。共接種15株?；ㄑ空T導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS培養(yǎng)基+6-BA5mg/L，另在培養(yǎng)基中添加蔗糖20g/L、蛋白胨3g/L、椰子汁150ml/L、活性炭0.5g/L以及瓊脂6g/L、pH5.8。并調(diào)整MS培養(yǎng)基的N、P量，N減少為原來的1/5，P增加為原來的2倍。培養(yǎng)溫度為18°C。光照時間為12h，光照強(qiáng)度為30 μ mol nT2s'誘導(dǎo)3個半月。
[0018](2)開花培養(yǎng)階段:花芽誘導(dǎo)完成后即可進(jìn)入開花誘導(dǎo)階段。開花誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:以1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，另在培養(yǎng)基中添加蔗糖20g/L、蛋白胨3g/L、椰子汁150ml/L、活性炭0.5g/L以及瓊脂6g/L、pH5.8。培養(yǎng)溫度為25°C。光照時間為12h，光照強(qiáng)度為30 μ mol HT2S'培養(yǎng)3個半月后，13株植株可見花芽抽出，部分植株可見2個花芽?；ㄑ空T導(dǎo)率為86.7%。其中，絕大部分花芽可正常發(fā)育并可見花苞形成。極少部分花芽發(fā)育至一定程度即萎縮或停止生長；亦有部分花芽可形成花苞，但花苞發(fā)育至一定大小即變黃凋謝。有9株植株花芽可見花苞形成且能正常成花，開花率達(dá)60.0%。所有花器官均正常發(fā)育，花器官完整率達(dá)100.0%?；ㄆ诔志?，可長達(dá)30d。
[0019]花芽誘導(dǎo)率(％)=形成花芽的植株數(shù)/總植株數(shù)X 100% ;開花率(％)=開花植株數(shù)/總植株數(shù)X 100% ;花器官完整率(％)=正常開花植株數(shù)/總開花植株數(shù)X 100%。
[0020]實(shí)施例2
[0021]取經(jīng)壯苗生根的蝴蝶蘭健壯瓶苗為誘導(dǎo)材料進(jìn)行以下步驟誘導(dǎo)。
[0022](I)花芽誘導(dǎo)階段:取經(jīng)壯苗生根后的健壯瓶苗為外植體，去除根后進(jìn)行花芽誘導(dǎo)。共接種15株?；ㄑ空T導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS培養(yǎng)基+6-BA7mg/L，另在培養(yǎng)基中添加蔗糖30g/L、蛋白胨4g/L、椰子汁120ml/L、活性炭0.7g/L以及瓊脂7g/L、pH5.7。并調(diào)整MS培養(yǎng)基的N、P量，N減少為原來的1/8，P增加為原來的3倍。培養(yǎng)溫度為20°C。光照時間16h，光照強(qiáng)度40 μ mol IiT2S'誘導(dǎo)4個月。
[0023](2)開花培養(yǎng)階段:花芽誘導(dǎo)完成后即可進(jìn)入開花誘導(dǎo)階段。開花誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:以1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，另在培養(yǎng)基中添加蔗糖30g/L、蛋白胨4g/L、椰子汁120ml/L、活性炭0.7g/L以及瓊脂7g/L、pH5.7。培養(yǎng)溫度為27°C。光照時間14h，光照強(qiáng)度40 μ molHT2s'培養(yǎng)3個月后，12株植株可形成花芽，部分植株可同時形成2個花芽。花芽誘導(dǎo)率為80.0%。其中，絕大部分花芽可正常發(fā)育并可形成花苞。極少部分花芽發(fā)育至一定程度即停止生長或萎縮；亦有部分花芽可見花苞形成，但花苞發(fā)育至一定大小時變黃凋謝。10株植株中的花芽可見花苞形成并能正常成花，開花率達(dá)66.7%。所有花均發(fā)育正常，無畸形花出現(xiàn)，花器官完整率達(dá)100.0%?；ㄆ诔志?，可長達(dá)40d。
[0024]花芽誘導(dǎo)率(％)=形成花芽的植株數(shù)/總植株數(shù)X 100% ;開花率(％)=開花植株數(shù)/總植株數(shù)X 100% ;花器官完整率(％)=正常開花植株數(shù)/總開花植株數(shù)X 100%。
[0025]實(shí)施例3
[0026]取經(jīng)壯苗生根的蝴蝶蘭健壯瓶苗為誘導(dǎo)材料進(jìn)行以下步驟誘導(dǎo)。
`[0027](I)花芽誘導(dǎo)階段:取經(jīng)壯苗生根后的健壯瓶苗為外植體，去根后進(jìn)行花芽誘導(dǎo)。共接種15株。花芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS培養(yǎng)基十6-BA10mg/L,另在培養(yǎng)基中添加蔗糖25g/L、蛋白胨5g/L、椰子汁100ml/L、活性炭1.0g/L以及瓊脂8g/L、ρΗ5.6。并調(diào)整MS培養(yǎng)基的N、P量，N減少為原來的1/10，P增加為原來的5倍。培養(yǎng)溫度為16°C。光照時間16h，光照強(qiáng)度50 μ mol IiT2S'誘導(dǎo)3個月。
[0028](2)開花培養(yǎng)階段:開花誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:以1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，另在培養(yǎng)基中添加蔗糖25g/L、蛋白胨5g/L、椰子汁100ml/L、活性炭1.0g/L以及瓊脂8g/L、pH5.6。培養(yǎng)溫度為26°C。光照時間為16h,光照強(qiáng)度為50 μ mol m 2S 1O培養(yǎng)4個月后，14株植株可形成花芽，部分植株可同時形成2個花芽?；ㄑ空T導(dǎo)率為93.3%。其中，絕大部分花芽可正常發(fā)育并可形成花苞。極少部分花芽發(fā)育至一定程度即停止生長；亦有部分花芽可見花苞形成，但花苞發(fā)育至一定大小時即變黃凋謝。有11株植株中的花芽可形成花苞并能正常成花，開花率達(dá)73.3%。花全部發(fā)育正常，并無畸形花出現(xiàn)，花器官完整率達(dá)100.0%?；ㄆ诔志茫砷L達(dá)35d。
[0029]花芽誘導(dǎo)率(％)=形成花芽的植株數(shù)/總植株數(shù)X 100% ;開花率(％)=開花植株數(shù)/總植株數(shù)X 100% ;花器官完整率(％)=正常開花植株數(shù)/總開花植株數(shù)X 100%。
【權(quán)利要求】
1.蝴蝶蘭試管開花的誘導(dǎo)方法，其特征在于包括以下步驟: (1)花芽誘導(dǎo)階段:取經(jīng)壯苗生根后的健壯蝴蝶蘭無菌瓶苗為外植體，去根后于花芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行花芽誘導(dǎo)；花芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS培養(yǎng)基(1/5-1/10Ν、2-5Ρ) +6-BA5-10mg/L,另在培養(yǎng)基中添加蔗糖20_30g/L、蛋白胨3-5g/L、椰子汁100-150ml/L、活性炭0.5-1.0g/L以及瓊脂6-8g/L、ρΗ5.5-5.8 ;培養(yǎng)溫度18±2°C ;光照時間為12-16h，光照強(qiáng)度30-50 μ mo 1 m-2s_l ;誘導(dǎo)3-4個月； (2)誘導(dǎo)開花階段:花芽誘導(dǎo)完成后即進(jìn)入誘導(dǎo)開花階段；誘導(dǎo)開花培養(yǎng)基為:以I/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，另在培養(yǎng)基中添加蔗糖20-30g/L、蛋白胨3-5g/L、椰子汁100-150ml/L、活性炭 0.5-1.0g/L 以及瓊脂 6_8g/L、pH5.5-5.8 ;培養(yǎng)溫度為 25±2°C ;光照時間為12-16h，光照強(qiáng)度30-50ymol m-2s_l ;培養(yǎng)3-4個月。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的蝴蝶蘭試管開花的誘導(dǎo)方法，其特征在于步驟(1)所述的1/5-1/10N為N減少為原來MS培養(yǎng)基中N的1/5-1/10，2-5P為P增加為原來MS培養(yǎng)基中P的2-5倍；步驟(2)所述的1/2MS培養(yǎng)基，指的是大量元素減半，其余含量不變。
【文檔編號】A01H4/00GK103477978SQ201310384939
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年8月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月29日
【發(fā)明者】曾碧玉 申請人:福建省亞熱帶植物研究所