一種冬蟲夏草優(yōu)質(zhì)菌種的選育方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種冬蟲夏草優(yōu)質(zhì)菌種的選育方法，主要解決現(xiàn)在規(guī)模化生產(chǎn)冬蟲夏草菌絲進(jìn)行冬蟲夏草深層發(fā)酵生產(chǎn)過(guò)程中，普遍存在缺乏優(yōu)質(zhì)菌種的問(wèn)題。本發(fā)明的菌種選育方法包括以下步驟：從冬蟲夏草產(chǎn)區(qū)采收新鮮冬蟲夏草，在經(jīng)過(guò)優(yōu)選配置的固體培養(yǎng)基中進(jìn)行組織分離，模擬天然環(huán)境采用12小時(shí)光照與12小時(shí)黑暗間隔培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為10-20℃。采用不同的固體培養(yǎng)基轉(zhuǎn)接2次，進(jìn)行富營(yíng)養(yǎng)刺激，實(shí)時(shí)記錄冬蟲夏草菌絲形態(tài)和生長(zhǎng)特點(diǎn)，從中選擇優(yōu)良的冬蟲夏草菌株進(jìn)行工業(yè)生產(chǎn)。本發(fā)明具有的積極效果：性能好，活力強(qiáng)，發(fā)酵物產(chǎn)量高、質(zhì)量好，能很好滿足工業(yè)生產(chǎn)要求。
【專利說(shuō)明】一種冬蟲夏草優(yōu)質(zhì)菌種的選育方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于食用真菌、藥用真菌生物技術(shù)與發(fā)酵生產(chǎn)領(lǐng)域，尤其涉及一種冬蟲夏草優(yōu)質(zhì)菌種的選育方法。應(yīng)用于冬蟲夏草工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)中。
【背景技術(shù)】
[0002]食藥用菌產(chǎn)業(yè)是新型的朝陽(yáng)產(chǎn)業(yè)，在我國(guó)國(guó)民經(jīng)濟(jì)中占據(jù)重要地位，而食藥用菌的發(fā)酵是其中最重要的組成部分之一。冬蟲夏草是中國(guó)傳統(tǒng)中藥中最著名的一種，它的發(fā)酵已經(jīng)形成了很大的產(chǎn)業(yè)。
[0003]良好的菌種是微生物發(fā)酵工業(yè)的基礎(chǔ)。在應(yīng)用食藥用菌生產(chǎn)食品、保健品時(shí)，首要任務(wù)是要挑選出符合需要的優(yōu)質(zhì)菌種，從自然界中新分離的野生菌株，應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)時(shí)中往往性能不佳，活力也是比較低，致使發(fā)酵物的產(chǎn)量和質(zhì)量偏低，不能滿足工業(yè)生產(chǎn)要求，因此需要在人工條件下進(jìn)行菌種選育。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種冬蟲夏草優(yōu)質(zhì)菌種的選育方法，性能好，活力強(qiáng)，發(fā)酵物產(chǎn)量高、質(zhì)量好，能很好滿足工業(yè)生產(chǎn)要求。
[0005]本發(fā)明的提供的冬蟲夏草優(yōu)質(zhì)菌種的選育方法包括以下步驟:
(1)新鮮冬蟲夏草采收:每年在青藏高原主產(chǎn)區(qū)采收新鮮的冬蟲夏草，以保證獲得生長(zhǎng)旺盛的菌種，拉丁學(xué)名是 Cordyceps sinensis,也寫作 Ophiocordyceps sinensis ；
(2)初始菌種分離:采收的 新鮮冬蟲夏草用濃度70%的酒精浸泡2-5min，用酒精棉球擦拭表面消毒，取直徑0.5-lcm的冬蟲夏草的蟲子致密組織接入固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)；模擬天然環(huán)境采用12小時(shí)光照與12小時(shí)黑暗間隔培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為10-20°C，期間測(cè)量菌絲生長(zhǎng)速度，用顯微鏡觀察菌絲特點(diǎn)；
初始分離固體培養(yǎng)基的優(yōu)選成分重量配比為:2-4%的粗糧復(fù)合物、0.30-0.60%的胰蛋白胨、0.30-0.60%的酵母浸出粉、0.02-0.04%的硫酸鎂，0.02-0.04%的磷酸二氫鉀、0.05-0.10%的維生素BU0.05-0.10%的維生素Β2、1.00-2.00%的瓊脂粉，其余為水分；粗糧復(fù)合物為玉米、小米、蕎麥、燕麥、黃豆粗制粉同等比例混合而成；
(3)第一次菌種轉(zhuǎn)接:初始分離菌種培養(yǎng)30天后，進(jìn)行第一次菌種轉(zhuǎn)接，模擬天然環(huán)境采用12小時(shí)光照與12小時(shí)黑暗間隔培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為10-20°C，期間測(cè)量菌絲生長(zhǎng)速度，用顯微鏡觀察菌絲特點(diǎn)；
第一次菌種轉(zhuǎn)接后固體培養(yǎng)基成分重量配比為:2-4%的粗糧復(fù)合物、0.30-0.60%的胰蛋白胨、0.30-0.60%的酵母浸出粉、0.02-0.04%的硫酸鎂，0.02-0.04%的磷酸二氫鉀、
0.05-0.10% 的維生素 BU0.05-0.10% 的維生素 B2、1.00-2.00% 的瓊脂粉、0.50-1.50% 的粗蛋白粉，其余為水分；
(4)第二次菌種轉(zhuǎn)接:第一次菌種轉(zhuǎn)接培養(yǎng)30天后，進(jìn)行第二次菌種轉(zhuǎn)接，模擬天然環(huán)境采用12小時(shí)光照與12小時(shí)黑暗間隔培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為10-20°C，期間測(cè)量菌絲生長(zhǎng)速度，用顯微鏡觀察菌絲特點(diǎn)；第二次轉(zhuǎn)接后培養(yǎng)30天，即可獲得具有很高活性的優(yōu)質(zhì)冬蟲夏草菌種，可用于發(fā)酵生產(chǎn)。
[0006]第二次轉(zhuǎn)接后的固體培養(yǎng)基成分重量配比為:2_4%的粗糧復(fù)合物、0.30-0.60%的胰蛋白胨、0.30-0.60%的酵母浸出粉、0.02-0.04%的硫酸鎂，0.02-0.04%的磷酸二氫鉀、0.10-0.20%的復(fù)合維生素、1.00-2.00%的瓊脂粉、0.50-1.50%的粗蛋白粉，其余為水分；
本發(fā)明具有的積極效果:性能好，活力強(qiáng)，發(fā)酵物產(chǎn)量高、質(zhì)量好，能很好滿足工業(yè)生產(chǎn)要求。
【具體實(shí)施方式】
[0007]下面結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明所涉及的方法做進(jìn)一步說(shuō)明:
(I)每年在青藏高原主產(chǎn)區(qū)采收新鮮的冬蟲夏草，特別挑選蟲子粗壯、蟲草芽較小的早期草為最佳，以保證獲得生長(zhǎng)旺盛的菌種。拉丁學(xué)名是Cordyc印s sinensis，也寫作Ophiocordyceps sinensis。
[0008](2)制備初始分離的固體培養(yǎng)基:稱取3g粗糧復(fù)合物、0.5g胰蛋白胨、0.5g酵母浸出粉、0.04g硫酸鎂，0.04g磷酸二氫鉀、0.08g維生素B1、0.08g維生素B2、2g瓊脂粉，用水定容到100ml。高溫高壓滅菌后冷卻，作為初始分離的固體培養(yǎng)基。
[0009]粗糧復(fù)合物為玉米、小米、蕎麥、燕麥、黃豆粗制粉同等比例混合而成。
[0010](3)初始菌種分離:將采收的新鮮冬蟲夏草用濃度70%的酒精浸泡2_5min，用酒精棉球擦拭表面消毒，消毒后的冬蟲夏草取直徑0.5-lcm蟲子致密組織，接入固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，放入光照培養(yǎng)箱中，模擬天然環(huán)境采用12小時(shí)光照與12小時(shí)黑暗間隔培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為10-20°C，期間測(cè)量菌絲生長(zhǎng)`速度，用顯微鏡觀察菌絲特點(diǎn)；` 30天后菌落直徑達(dá)到l-2cm，菌落白灰色，深入培養(yǎng)基，顯微鏡觀察確認(rèn)，菌絲未呈現(xiàn)衰老跡象。
[0011](4)制備轉(zhuǎn)接后固體培養(yǎng)基:稱取3g粗糧復(fù)合物、0.5g胰蛋白胨、0.5g酵母浸出粉、0.(Mg硫酸鎂，0.(Mg磷酸二氫鉀、0.08g維生素B1、0.08g維生素B2、2g瓊脂粉、Ig的粗蛋白粉(粗蛋白粉由玉米麩皮、粗蛋白胨、粗豆粉同等比例混合而成)，用水定容到100ml。高溫高壓滅菌后冷卻，作為轉(zhuǎn)接后的固體培養(yǎng)基。
[0012](5)此時(shí)進(jìn)行第一次菌種轉(zhuǎn)接，以更好地滿足菌種營(yíng)養(yǎng)要求，刺激菌絲生長(zhǎng)，激發(fā)冬蟲夏草菌絲活性。光照培養(yǎng)箱中模擬天然環(huán)境，12小時(shí)光照與黑暗間隔培養(yǎng)，溫度為10-20°C, 30天后菌落直徑達(dá)到2-4cm，可見第一次轉(zhuǎn)接和富營(yíng)養(yǎng)刺激后菌絲生長(zhǎng)速度，比初始分離菌種有所加快，菌落白灰色，深入培養(yǎng)基，顯微鏡觀察確認(rèn)，菌絲未呈現(xiàn)衰老跡象。
[0013](6)制備第二次轉(zhuǎn)接后的固體培養(yǎng)基:稱取3g粗糧復(fù)合物、0.5g胰蛋白胨、0.5g酵母浸出粉、0.04g硫酸鎂，0.04g磷酸二氫鉀、0.16g復(fù)合維生素、2g瓊脂粉、1.5g的粗蛋白粉，用水定容到100ml。高溫高壓滅菌后冷卻，作為第二次轉(zhuǎn)接后的固體培養(yǎng)基。上述的復(fù)合維生素粉劑由重量比例為1.0-2.0維生素B1、1.0-2.0維生素B2、0.05-0.15核黃素混勻--? 。
[0014]
(7)第一次菌種轉(zhuǎn)接培養(yǎng)30天后，進(jìn)行第二次菌種轉(zhuǎn)接，以通過(guò)進(jìn)一步富營(yíng)養(yǎng)，充分激發(fā)冬蟲夏草菌種活性；光照培養(yǎng)箱中，12小時(shí)光照與黑暗間隔培養(yǎng)，溫度為10-20°C，30天后菌落直徑達(dá)到3-6cm，可見第二次轉(zhuǎn)接和進(jìn)一步的富營(yíng)養(yǎng)刺激后，菌種生長(zhǎng)速度比初始分離菌種進(jìn)一步加快，菌落白灰色，深入培養(yǎng)基，顯微鏡觀察確認(rèn)，菌絲未呈現(xiàn)衰老跡象，經(jīng)過(guò)兩次轉(zhuǎn)接、富營(yíng)養(yǎng)刺激和光照黑暗交替刺激，冬蟲夏草菌種的活性明顯增強(qiáng)，即獲得具有很高活性的優(yōu)質(zhì)冬蟲夏草菌種。本發(fā) 明可以用在 冬蟲夏草深層發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)中。
【權(quán)利要求】
1.一種冬蟲夏草優(yōu)質(zhì)菌種的選育方法，其特征在于包括以下步驟: (1)新鮮冬蟲夏草采收:每年在青藏高原主產(chǎn)區(qū)采收新鮮的冬蟲夏草，以保證獲得生長(zhǎng)旺盛的菌種； (2)初始菌種分離:采收的新鮮冬蟲夏草用濃度70%的酒精浸泡2-5min，用酒精棉球擦拭表面消毒，取直徑0.5-1cm的冬蟲夏草的蟲子致密組織接入固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)；模擬天然環(huán)境采用12小時(shí)光照與12小時(shí)黑暗間隔培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為10-20°C，期間測(cè)量菌絲生長(zhǎng)速度，用顯微鏡觀察菌絲特點(diǎn)； 初始分離固體培養(yǎng)基的優(yōu)選成分重量配比為:2-4%的粗糧復(fù)合物、0.30-0.60%的胰蛋白胨、0.30-0.60%的酵母浸出粉、0.02-0.04%的硫酸鎂，0.02-0.04%的磷酸二氫鉀、.0.05-0.10%的維生素BU0.05-0.10%的維生素Β2、1.00-2.00%的瓊脂粉，其余為水分； 粗糧復(fù)合物為玉米、小米、蕎麥、燕麥、黃豆粗制粉同等比例混合而成； (3)第一次菌種轉(zhuǎn)接:初始分離菌種培養(yǎng)30天后，進(jìn)行第一次菌種轉(zhuǎn)接，模擬天然環(huán)境采用12小時(shí)光照與12小時(shí)黑暗間隔培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為10-20°C，期間測(cè)量菌絲生長(zhǎng)速度，用顯微鏡觀察菌絲特點(diǎn)； 第一次菌種轉(zhuǎn)接后固體培養(yǎng)基成分重量配比為:2_4%的粗糧復(fù)合物、0.30-0.60%的胰蛋白胨、0.30-0.60%的酵母浸出粉、0.02-0.04%的硫酸鎂，0.02-0.04%的磷酸二氫鉀、.0.05-0.10% 的維生素 BU0.05-0.10% 的維生素 B2、1.00-2.00% 的瓊脂粉、0.50-1.50% 的粗蛋白粉，其余為水分； (4)第二次菌種轉(zhuǎn)接:第一次菌種轉(zhuǎn)接培養(yǎng)30天后，進(jìn)行第二次菌種轉(zhuǎn)接，模擬天然環(huán)境采用12小時(shí)光照與12小時(shí)黑暗間隔培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為10-20°C，期間測(cè)量菌絲生長(zhǎng)速度，用顯微鏡觀察菌絲特點(diǎn)；第二次轉(zhuǎn)接后培養(yǎng)30天，即可獲得具有很高活性的優(yōu)質(zhì)冬蟲夏草菌種，可用于發(fā)酵生產(chǎn)； 第二次轉(zhuǎn)接后的固體培養(yǎng)基成分重量配比為:2_4%的粗糧復(fù)合物、0.30-0.60%的胰蛋白胨、0.30-0.60%的酵母浸出粉、0.02-0.04%的硫酸鎂，0.02-0.04%的磷酸二氫鉀、.0.10-0.20%的復(fù)合維生素、1.00-2.00%的瓊脂粉、0.50-1.50%的粗蛋白粉，其余為水分。
【文檔編號(hào)】A01G1/04GK103444435SQ201310398240
【公開日】2013年12月18日 申請(qǐng)日期:2013年9月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月5日
【發(fā)明者】李文新, 陳春森, 廖金永 申請(qǐng)人:東方中科生命科學(xué)有限責(zé)任公司