一種含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料及其制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料及其制備方法，屬于一種生物飼料。其特征在于，一種肉羊精飼料經(jīng)釀酒酵母和植物乳桿菌發(fā)酵制備而成，該發(fā)酵精飼料含有大量益生菌，植物乳桿菌≥108cfu/g、釀酒酵母≥108cfu/g、粗蛋白≥12％、真蛋白≥8％。本發(fā)明的含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料，具有調(diào)節(jié)胃腸道菌群，促進(jìn)動(dòng)物消化功能，提高飼料利用率，增加蛋白質(zhì)合成，增強(qiáng)機(jī)體免疫，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，降低養(yǎng)殖成本，改善環(huán)境污染等作用。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物飼料【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]益生菌發(fā)酵飼料即微生物飼料，是指從微生態(tài)理論和綠色食品意識(shí)出發(fā)，在微生態(tài)理論指導(dǎo)下，采用已知有益的微生物與飼料混合發(fā)酵等特殊工藝制成的含活性益生菌的安全、無(wú)污染、無(wú)殘留的優(yōu)質(zhì)飼料，稱(chēng)為生物飼料。生物飼料是我國(guó)食品安全戰(zhàn)略中所涉及的重要內(nèi)容。在國(guó)家生物農(nóng)業(yè)發(fā)展綱要中，高效優(yōu)質(zhì)生物飼料是優(yōu)先發(fā)展主題。開(kāi)發(fā)利用生物飼料，可將飼料生產(chǎn)、農(nóng)副產(chǎn)品利用和環(huán)境保護(hù)三者有機(jī)地結(jié)合起來(lái)，不但可彌補(bǔ)我國(guó)蛋白飼料的不足，緩解飼料資源短缺問(wèn)題，又有效地降低了對(duì)環(huán)境的污染。益生菌發(fā)酵飼料能夠減少飼料中有害微生物的數(shù)量，維持動(dòng)物胃腸道菌群平衡，增強(qiáng)動(dòng)物免疫力，提高動(dòng)物生產(chǎn)性能以及改善環(huán)境。
[0003]益生菌種類(lèi)繁多，美國(guó)食品藥物管理局(FDA)和美國(guó)飼料公定協(xié)會(huì)(AAFCO)公布了 40余種。我國(guó)農(nóng)業(yè)部2003年12月發(fā)布的第318號(hào)公告“飼料添加劑品種目錄”中有15種。目前市場(chǎng)上用于飼料發(fā)酵的益生菌種類(lèi)主要是乳酸菌、芽孢桿菌、酵母和霉菌。乳酸菌是應(yīng)用最早、最廣泛的益生菌，是一類(lèi)能在可利用的碳水化合物發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌的總稱(chēng)。通常為厭氧或者兼性厭氧菌，耐酸，在PH值為4.5以下時(shí)仍可生長(zhǎng)，研究發(fā)現(xiàn)代謝產(chǎn)物和活菌液對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌都有很強(qiáng)的抑菌效果，隨著PH值的降低抑菌作用逐漸變強(qiáng)，活菌體內(nèi)和代謝產(chǎn)物中含有較高的超氧化物歧化酶(SOD)，能增強(qiáng)動(dòng)物的體液免疫和細(xì)胞免疫。酵母則是一類(lèi)非絲狀真核微生物，一般泛指能發(fā)酵糖類(lèi)的各種單細(xì)胞真菌，酵母菌體中含有非常豐富的蛋白質(zhì)、B族維生素、脂肪、糖、酶等多種營(yíng)養(yǎng)成分。大量的應(yīng)用研究試驗(yàn)證明，酵母在提高動(dòng)物免疫力、提高動(dòng)物生產(chǎn)性能和減少應(yīng)激等方面均起作用。啤酒酵母除用于釀造啤酒及其他的飲料酒外，還可發(fā)酵面包。菌體維生素、蛋白質(zhì)含量高，可作食用、藥用和飼料酵母。
[0004]新生反芻動(dòng)物使用益生菌發(fā)酵飼料可以促進(jìn)其瘤胃發(fā)育，提前斷奶，開(kāi)食料中使用的益生菌主要是乳酸桿菌，乳酸桿菌可改變幼齡反芻動(dòng)物的瘤胃功能。益生菌發(fā)酵飼料還可以增強(qiáng)幼齡反芻動(dòng)物的抗病能力，促進(jìn)增重，提高生產(chǎn)性能。羔羊開(kāi)食料中添加酵母培養(yǎng)物，可提高生產(chǎn)性能和采食量。那日蘇等用酵母培養(yǎng)物對(duì)放牧補(bǔ)飼綿羊做對(duì)比試驗(yàn)，結(jié)果使日增重提高11.1%。
[0005]目前關(guān)于肉羊發(fā)酵精飼料的研究與應(yīng)用報(bào)道較少，本發(fā)明從肉羊的生理特點(diǎn)出發(fā)，在瘤胃微生態(tài)學(xué)和系統(tǒng)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)觀點(diǎn)指導(dǎo)下，以肉羊精飼料為發(fā)酵原料，經(jīng)過(guò)酵母菌、植物乳桿菌混合固態(tài)發(fā)酵，采用響應(yīng)面優(yōu)化等技術(shù)，開(kāi)發(fā)出I種發(fā)酵精飼料，其活菌數(shù)多、營(yíng)養(yǎng)豐富、適口性好、利用率高。既可緩解飼料短缺的問(wèn)題，又可減少環(huán)境污染。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0006]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，提供一種含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料及其制備方法，采用釀酒酵母和植物乳桿菌厭氧與好氧組合發(fā)酵工藝發(fā)酵，雜菌率低，運(yùn)用響應(yīng)面法使試驗(yàn)次數(shù)少，周期短、精度高等特點(diǎn)優(yōu)化生產(chǎn)工藝參數(shù)，是針對(duì)肉羊瘤胃內(nèi)的微生態(tài)環(huán)境和瘤胃微生物對(duì)機(jī)體的生理功能開(kāi)發(fā)的，產(chǎn)品更具有針對(duì)性、實(shí)用性和高效性。
[0007]其具體技術(shù)方案為:
[0008]一種含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料，各組成成分及其所占質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為:豆柏
2.0%、菜柏 8.0%、棉柏 11.0%, DDGS8.7%、玉米蛋白 21.15%、鹽 0.7%、石粉 1.85%、統(tǒng)糠6.0 %、預(yù)混料0.2%、膨潤(rùn)土 5.0%、磷酸氫鈣0.4 %、玉米35.0 %。所述精飼料的營(yíng)養(yǎng)水平為粗蛋白18.0 %、真蛋白14.31 %、水分12.1 %、粗脂肪3.23 %、粗纖維5.8 %、粗灰分6.29%、鈣 0.88%、磷 0.60%。
[0009]進(jìn)一步優(yōu)選，所述發(fā)酵菌種植物乳桿菌和釀酒酵母購(gòu)自中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心，所述的菌種植物乳桿菌和釀酒酵母為植物乳桿菌CGMCC1.103 (Lactobacillusplantarum CGMCC1.103)和釀酒酵母 CGMCC2.119 (Saccharomyces cerevisiaeCGMCC2.119)。
[0010]進(jìn)一步優(yōu)選，所述精飼料由植物乳桿菌CGMCC1.103和釀酒酵母CGMCC2.119按3:7比例混合發(fā)酵精飼料制備而成。
[0011]進(jìn)一步優(yōu)選，所述精飼料發(fā)酵后營(yíng)養(yǎng)水平為:植物乳桿菌> 108cfu/g、釀酒酵母≥108cfu/g,粗蛋白≥12%、真蛋白≥8%。
[0012]一種本發(fā)明所述的含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料的制備方法，將植物乳桿菌CGMCC1.103和釀酒酵母CGMCC2.119以3:7比例混合，按10% (v/w)的比例接種于肉羊精飼料固態(tài)培養(yǎng)基中，料水比1:0.8(?八)，32°〇條件下發(fā)酵4911，料層厚度90cm，翻料次數(shù)I次。
[0013]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為:
[0014]本發(fā)明的肉羊精飼料經(jīng)過(guò)植物乳桿菌和釀酒酵母混合發(fā)酵，運(yùn)用響應(yīng)面法等優(yōu)化生產(chǎn)工藝參數(shù)后，制備的肉羊發(fā)酵精飼料含有大量益生菌，雜菌率低且對(duì)其適口性有明顯改善，能促進(jìn)動(dòng)物消化利用，提高飼料利用率，增強(qiáng)機(jī)體免疫，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，降低養(yǎng)殖成本，改善環(huán)境污染。
【具體實(shí)施方式】
[0015]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說(shuō)明。
[0016]本發(fā)明所述的含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料的制備方法，具體步驟如下:
[0017](1)種子液制備
[0018]A、植物乳桿菌
[0019]將植物乳桿菌依次經(jīng)過(guò)斜面培養(yǎng)、一級(jí)種子液培養(yǎng)和二級(jí)種子液培養(yǎng)，制得植物乳桿菌的種子液，活菌數(shù)達(dá)108cfu/g ；
[0020]植物乳桿菌的斜面培養(yǎng)、一級(jí)種子液培養(yǎng)和二級(jí)種子液培養(yǎng)的溫度均為37°C，時(shí)間均為24h ；
[0021]植物乳桿菌斜面培養(yǎng)基為MRS培養(yǎng)基(成分為:蛋白陳10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g,檸檬酸氫二鉀2.0g,葡萄糖20.0g,吐溫801.0mL,三水合乙酸鈉5.0g,磷酸氫二鉀
2.0g，硫酸鎂0.58g，硫酸錳0.25g，蒸餾水IOOOmL, pH6.2?6.6瓊脂粉20g)或廣東環(huán)凱公司購(gòu)買(mǎi)的MRS瓊脂培養(yǎng)基。一級(jí)種子液和二級(jí)種子液成分與斜面培養(yǎng)基相同，不加瓊脂。
[0022]B、釀酒酵母
[0023]將酵母菌依次經(jīng)過(guò)斜面培養(yǎng)、一級(jí)種子液培養(yǎng)和二級(jí)種子液培養(yǎng)，制得酵母菌的種子液，活菌數(shù)達(dá)108cfu/g ；
[0024]酵母菌的斜面培養(yǎng)為30°C恒溫培養(yǎng)48h，一級(jí)種子液培養(yǎng)和二級(jí)種子液培養(yǎng)的溫度均為32°C，120r/min搖床培養(yǎng)36h ；
[0025]酵母菌斜面活化培養(yǎng)基:酵母膏10.0g,葡萄糖20.0g,加入蒸懼水至IOOOmL,蛋白陳20.0g,瓊脂粉20.0g, pH自然；或廣東環(huán)凱公司的麥芽瓊脂培養(yǎng)基。一級(jí)種子液和二級(jí)種子液成分與斜面培養(yǎng)基相同，不加瓊脂。
[0026](2)肉羊精飼料制備
[0027]肉羊精飼料由內(nèi)蒙古優(yōu)牧特農(nóng)牧科技股份有限公司提供，配方組成為豆柏2.0%,菜柏8.0 %、棉柏11.0%、00658.7%、玉米蛋白21.15 %、鹽0.7 %、石粉1.85 %、統(tǒng)糠
6.0%、預(yù)混料0.2%、膨潤(rùn)土 5.0%、磷酸氫鈣0.4%、玉米35.0% (按質(zhì)量百分比計(jì)算)。
[0028](3)固態(tài)發(fā)酵
[0029]將植物乳桿菌和釀酒酵母以3:7比例混合，按10% (v/w)比例接種于上述肉羊精飼料培養(yǎng)基中，料水比1:0.8 (w/v)，32°C條件下發(fā)酵49h，料層厚度90cm，翻料次數(shù)I次，制得一種含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料。
[0030]上述植物乳桿菌和釀酒酵母購(gòu)自中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心。
[0031]實(shí)施例1、一種含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料的制備
[0032]1、斜面培養(yǎng)
[0033]在斜面培養(yǎng)基中植物乳桿菌在37°C條件下培養(yǎng)24h ;釀酒酵母在斜面培養(yǎng)基中30°C 培養(yǎng) 48h。
[0034]2、一級(jí)種子液培養(yǎng)
[0035]將斜面培養(yǎng)后的兩個(gè)菌種分別接入250mL三角瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，每瓶裝有50mL —級(jí)種子液培養(yǎng)基，各取斜面活化菌種I環(huán)接入各自培養(yǎng)基中；植物乳桿菌于37°C靜置培養(yǎng)24h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到其一級(jí)種子液；酵母菌于32°C、120r/min搖床培養(yǎng)36h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到酵母菌的一級(jí)種子液。
[0036]3、二級(jí)種子液培養(yǎng)
[0037]植物乳桿菌二級(jí)種子液:將一級(jí)種子液以10%接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，37°C下培養(yǎng)24h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到植物乳桿菌的二級(jí)種子液；
[0038]釀酒酵母二級(jí)種子液:將一級(jí)種子液以10%接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，120r/min，32°C下培養(yǎng)36h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到釀酒酵母的二級(jí)種子液。
[0039]4、固態(tài)發(fā)酵
[0040]固態(tài)培養(yǎng)基組成為豆柏2.0%、菜柏8.0%、棉柏11.0%、DDGS8.7%、玉米蛋白21.15%、鹽0.7%、石粉1.85%,統(tǒng)糠6.0%,預(yù)混料0.2%,膨潤(rùn)土 5.0%,磷酸氫鈣0.4%,玉米35.0% (按質(zhì)量百分比計(jì)算)。
[0041]將植物乳桿菌和釀酒酵母以3:7比例混合，按10% (v/w)比例接種于上述固態(tài)培養(yǎng)基中，料水比1: 1(?八)，351:條件下發(fā)酵4811，設(shè)定2501^錐形瓶中固態(tài)培養(yǎng)基相應(yīng)的料層厚度分別為3cm、5Cm、7Cm、9Cm，每組設(shè)置3個(gè)平行樣，測(cè)定產(chǎn)物真蛋白含量，最后得到料層厚度為5cm時(shí)的真蛋白含量最高。
[0042]實(shí)施例2、一種含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料的制備
[0043]1、斜面培養(yǎng)
[0044]在斜面培養(yǎng)基中植物乳桿菌在37°C條件下培養(yǎng)24h ;釀酒酵母在斜面培養(yǎng)基中30°C 培養(yǎng) 48h。
[0045]2、一級(jí)種子液培養(yǎng)
[0046]將斜面培養(yǎng)后的兩個(gè)菌種分別接入250mL三角瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，每瓶裝有50mL —級(jí)種子液培養(yǎng)基，各取斜面活化菌種I環(huán)接入各自培養(yǎng)基中；植物乳桿菌于37°C靜置培養(yǎng)24h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到其一級(jí)種子液；酵母菌于32°C、120r/min搖床培養(yǎng)36h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到酵母菌的一級(jí)種子液。
[0047]3、二級(jí)種子液培養(yǎng)
[0048]植物乳桿菌二級(jí)種子液:將一級(jí)種子液以10%接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，37°C下培養(yǎng)24h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到植物乳桿菌的二級(jí)種子液；
[0049]釀酒酵母二級(jí)種子液:將一級(jí)種子液以10%接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，120r/min，32°C下培養(yǎng)36h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到釀酒酵母的二級(jí)種子液。
[0050]4、固態(tài)發(fā)酵
[0051]固態(tài)培養(yǎng)基組成為豆柏2.0%、菜柏8.0%、棉柏11.0%、DDGS8.7%、玉米蛋白21.15%、鹽0.7%、石粉1.85%,統(tǒng)糠`6.0%,預(yù)混料0.2%,膨潤(rùn)土 5.0%,磷酸氫鈣0.4%,玉米35.0% (按質(zhì)量百分比計(jì)算)。
[0052]將植物乳桿菌和釀酒酵母以3: 7比例混合，料水比1:1 (w/v)，35°C條件下發(fā)酵48h，料層厚度為5cm，設(shè)定接種比例分別為0%、5%、10%、15%，每組設(shè)置3個(gè)平行樣，測(cè)定產(chǎn)物真蛋白含量，最后得到接種比例為10%~15%對(duì)產(chǎn)物真蛋白含量無(wú)顯著差異，為節(jié)約成本，選擇接種比例為10%。
[0053]實(shí)施例3、一種含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料的制備
[0054]1、斜面培養(yǎng)
[0055]在斜面培養(yǎng)基中植物乳桿菌在37°C條件下培養(yǎng)24h ;釀酒酵母在斜面培養(yǎng)基中30°C 培養(yǎng) 48h。
[0056]2、一級(jí)種子液培養(yǎng)
[0057]將斜面培養(yǎng)后的兩個(gè)菌種分別接入250mL三角瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，每瓶裝有50mL —級(jí)種子液培養(yǎng)基，各取斜面活化菌種I環(huán)接入各自培養(yǎng)基中；植物乳桿菌于37°C靜置培養(yǎng)24h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到其一級(jí)種子液；酵母菌于32°C、120r/min搖床培養(yǎng)36h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到酵母菌的一級(jí)種子液。
[0058]3、二級(jí)種子液培養(yǎng)
[0059]植物乳桿菌二級(jí)種子液:將一級(jí)種子液以10%接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，37°C下培養(yǎng)24h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到植物乳桿菌的二級(jí)種子液；
[0060]釀酒酵母二級(jí)種子液:將一級(jí)種子液以10%接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，120r/min，32°C下培養(yǎng)36h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到釀酒酵母的二級(jí)種子液。[0061]4、固態(tài)發(fā)酵
[0062]固態(tài)培養(yǎng)基組成為豆柏2.0%、菜柏8.0%、棉柏11.0%、DDGS8.7%、玉米蛋白21.15%、鹽0.7%、石粉1.85%,統(tǒng)糠6.0%,預(yù)混料0.2%,膨潤(rùn)土 5.0%,磷酸氫鈣0.4%,玉米35.0% (按質(zhì)量百分比計(jì)算)。
[0063]將植物乳桿菌和釀酒酵母以3:7比例混合，按10% (v/w)接種比例接種于上述固態(tài)培養(yǎng)基中，35°C條件下發(fā)酵48h，料層厚度為5cm，設(shè)定料水比分別為1:0.6、1: 0.8、I: Ul:1.2,1: 1.4，每組設(shè)置3個(gè)平行樣，測(cè)定產(chǎn)物真蛋白含量，最后得到料水比為1:
0.8和1:1時(shí)，發(fā)酵產(chǎn)物中真蛋白含量較高，因此，料水比選為1:0.8即水分占45%。
[0064]實(shí)施例4、一種含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料的制備
[0065]1、斜面培養(yǎng)
[0066]在斜面培養(yǎng)基中植物乳桿菌在37°C條件下培養(yǎng)24h ;釀酒酵母在斜面培養(yǎng)基中30°C 培養(yǎng) 48h。
[0067]2、一級(jí)種子液培養(yǎng)
[0068]將斜面培養(yǎng)后的兩個(gè)菌種分別接入250mL三角瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，每瓶裝有50mL —級(jí)種子液培養(yǎng)基，各取斜面活化菌種I環(huán)接入各自培養(yǎng)基中；植物乳桿菌于37°C靜置培養(yǎng)24h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到其一級(jí)種子液；酵母菌于32°C、120r/min搖床培養(yǎng)36h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到酵母菌的一級(jí)種子液。
[0069]3、二級(jí)種子液培養(yǎng)
[0070]植物乳桿菌二級(jí)種子液:將一級(jí)種子液以10%接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，37°C下培養(yǎng)24h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到植物乳桿菌的二級(jí)種子液；
[0071]釀酒酵母二級(jí)種子液:將一級(jí)種子液以10%接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，120r/min，32°C下培養(yǎng)36h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到釀酒酵母的二級(jí)種子液。
[0072]4、固態(tài)發(fā)酵
[0073]固態(tài)培養(yǎng)基組成為豆柏2.0%、菜柏8.0%、棉柏11.0%、DDGS8.7%、玉米蛋白21.15%、鹽0.7%、石粉1.85%,統(tǒng)糠6.0%,預(yù)混料0.2%,膨潤(rùn)土 5.0%,磷酸氫鈣0.4%,玉米35.0% (按質(zhì)量百分比計(jì)算)。
[0074]將植物乳桿菌和釀酒酵母以3:7比例混合，按10% (v/w)接種比例接種于上述固態(tài)培養(yǎng)基中，料水比為1:0.8 (w/v)，發(fā)酵48h，料層厚度為5cm，發(fā)酵溫度分別設(shè)定為28°C、30°C、32°C、34°C、36°C、38°C，每組設(shè)置3個(gè)平行樣，測(cè)定產(chǎn)物真蛋白含量，得到發(fā)酵溫度在32°C時(shí)，真蛋白含量最聞，發(fā)酵效果最佳。
[0075]實(shí)施例5、一種含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料的制備
[0076]1、斜面培養(yǎng)
[0077]在斜面培養(yǎng)基中植物乳桿菌在37°C條件下培養(yǎng)24h ;釀酒酵母在斜面培養(yǎng)基中30°C 培養(yǎng) 48h。
[0078]2、一級(jí)種子液培養(yǎng)
[0079]將斜面培養(yǎng)后的兩個(gè)菌種分別接入250mL三角瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，每瓶裝有50mL —級(jí)種子液培養(yǎng)基，各取斜面活化菌種I環(huán)接入各自培養(yǎng)基中；植物乳桿菌于37°C靜置培養(yǎng)24h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到其一級(jí)種子液；酵母菌于32°C、120r/min搖床培養(yǎng)36h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到酵母菌的一級(jí)種子液。[0080]3、二級(jí)種子液培養(yǎng)
[0081]植物乳桿菌二級(jí)種子液:將一級(jí)種子液以10%接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，37°C下培養(yǎng)24h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到植物乳桿菌的二級(jí)種子液；
[0082]釀酒酵母二級(jí)種子液；將一級(jí)種子液以10%接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，120r/min，32°C下培養(yǎng)36h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到釀酒酵母的二級(jí)種子液。
[0083]4、固態(tài)發(fā)酵
[0084]固態(tài)培養(yǎng)基組成為豆柏2.0%、菜柏8.0%、棉柏11.0%、DDGS8.7%、玉米蛋白21.15%、鹽0.7%、石粉1.85%,統(tǒng)糠6.0%,預(yù)混料0.2%,膨潤(rùn)土 5.0%,磷酸氫鈣0.4%,玉米35.0% (按質(zhì)量百分比計(jì)算)。
[0085]將植物乳桿菌和釀酒酵母以3:7比例混合，按10% (v/w)接種比例接種于上述固態(tài)培養(yǎng)基中，料水比為1:0.8 (w/v)，發(fā)酵溫度為32°C，料層厚度為5cm，發(fā)酵時(shí)間分別設(shè)定為26h、36h、48h、60h、72h，每組設(shè)置3個(gè)平行樣，測(cè)定產(chǎn)物真蛋白含量，得到發(fā)酵時(shí)間為48h?60h時(shí)真蛋白含量最高,發(fā)酵效果最佳。
[0086]實(shí)施例6、一種含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料的制備
[0087]1、斜面培養(yǎng)
[0088]在斜面培養(yǎng)基中植物乳桿菌在37°C條件下培養(yǎng)24h ;釀酒酵母在斜面培養(yǎng)基中30°C 培養(yǎng) 48h。
[0089]2、一級(jí)種子液培養(yǎng)
[0090]將斜面培養(yǎng)后的兩個(gè)菌種分別接入250mL三角瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，每瓶裝有50mL —級(jí)種子液培養(yǎng)基，各取斜面活化菌種I環(huán)接入各自培養(yǎng)基中；植物乳桿菌于37°C靜置培養(yǎng)24h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到其一級(jí)種子液；酵母菌于32°C、120r/min搖床培養(yǎng)36h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到酵母菌的一級(jí)種子液。
[0091]3、二級(jí)種子液培養(yǎng)
[0092]植物乳桿菌二級(jí)種子液:將一級(jí)種子液以10%接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，37°C下培養(yǎng)24h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到植物乳桿菌的二級(jí)種子液；
[0093]釀酒酵母二級(jí)種子液:將一級(jí)種子液以10%接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，120r/min，32°C下培養(yǎng)36h，活菌數(shù)達(dá)108cfu/mL，得到釀酒酵母的二級(jí)種子液。
[0094]4、生產(chǎn)工藝參數(shù)優(yōu)化
[0095](I)發(fā)酵條件重要因素篩選(PB設(shè)計(jì)法)
[0096]將發(fā)酵時(shí)間、發(fā)酵溫度、加水量、接種量、料層厚度和翻料次數(shù)6個(gè)實(shí)驗(yàn)因素進(jìn)行Plackett-Burman設(shè)計(jì),將結(jié)果運(yùn)用Minitabl6進(jìn)行分析,得到對(duì)響應(yīng)值即真蛋白含量影響較大的3個(gè)因素分別為發(fā)酵時(shí)間、翻料次數(shù)和料層厚度。
[0097](2)應(yīng)用響應(yīng)面分析法確定重要因素的最佳水平
[0098]將料層厚度、發(fā)酵時(shí)間和翻料次數(shù)3個(gè)因素分別作為A、B、C，發(fā)酵產(chǎn)物中真蛋白含量Y為影響因子，根據(jù)Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)原理，設(shè)計(jì)三因素三水平共17個(gè)實(shí)驗(yàn)點(diǎn)的響應(yīng)面分析實(shí)驗(yàn)，通過(guò)各個(gè)因子交互作用的響應(yīng)面的3D和等值線分析圖分析得到料層厚度為90cm、發(fā)酵時(shí)間為49h、翻料次數(shù)為I次時(shí)理論上能夠得到最佳的真蛋白含量為
8.936%。
[0099]5、固態(tài)發(fā)酵[0100]固態(tài)培養(yǎng)基組成為豆柏2.0%、菜柏8.0%、棉柏11.0%, DDGS8.7%、玉米蛋白21.15%、鹽0.7%、石粉1.85%,統(tǒng)糠6.0%,預(yù)混料0.2%,膨潤(rùn)土 5.0%,磷酸氫鈣0.4%,玉米35.0% (按質(zhì)量百分比計(jì)算)。
[0101]將植物乳桿菌和釀酒酵母以3:7比例混合，其生產(chǎn)工藝參數(shù)為:接種量10% (v/w)，料水比1:0.8 (w/v)，發(fā)酵溫度為320C，發(fā)酵時(shí)間49h，料層厚度90cm,翻料次數(shù)I次。
[0102]實(shí)施例7、一種含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料的檢測(cè)
[0103]1、發(fā)酵產(chǎn)物營(yíng)養(yǎng)成分分析
[0104](1)活菌數(shù)的測(cè)定
[0105]植物乳桿菌:傾倒法，通過(guò)稀釋梯度從-1到-8次依次稀釋?zhuān)?8次方的菌液ImL注入已滅菌的培養(yǎng)皿上，再用40°C MRS固體培養(yǎng)基傾倒入培養(yǎng)皿中待凝固后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h觀察菌落。
[0106]釀酒酵母:涂布法，通過(guò)稀釋梯度從-1到-8次依次稀釋?zhuān)?8次方的菌液ImL涂布于已制備好的麥芽汁固體培養(yǎng)基上恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h觀察菌落。
[0107](2)粗蛋白含量測(cè)定
[0108]采用GB/T6432-1994飼料中粗蛋白測(cè)定方法。
[0109](3)真蛋白含量測(cè)定
[0110]采用三氯乙酸法，將真蛋白質(zhì)與NPN沉淀分離，再用凱氏定氮法測(cè)定發(fā)酵前后精飼料中真蛋白的含量。
[0111](4)粗纖維含量測(cè)定
[0112]采用GB/T6434-1994飼料中粗纖維測(cè)定方法。
[0113](5)粗灰分含量測(cè)定
[0114]采用GB/T6434-1994飼料中粗灰分測(cè)定方法。
[0115]結(jié)果如下表1:
[0116]表1 一種含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料營(yíng)養(yǎng)成分分析結(jié)果
[0117]
【權(quán)利要求】
1.一種含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料，其特征在于，各組成成分及其所占質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為:豆柏2.0 %、菜柏8.0 %、棉柏11.0%、00658.7%、玉米蛋白21.15 %、鹽0.7 %、石粉1.85%,統(tǒng)糠6.0%、預(yù)混料0.2%、膨潤(rùn)土 5.0%、磷酸氫鈣0.4%、玉米35.0%，所述精飼料的營(yíng)養(yǎng)水平為粗蛋白18.0 %、真蛋白14.31 %、水分12.1 %、粗脂肪3.23%、粗纖維5.8%、粗灰分 6.29%、鈣 0.88%、磷 0.60%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料，其特征在于，所述精飼料由植物乳桿菌CGMCC1.103和釀酒酵母CGMCC2.119混合發(fā)酵精飼料制備而成。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料，其特征在于，所述植物乳桿菌CGMCC1.103和釀酒酵母CGMCC2.119的比例為3:7。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料，其特征在于，所述精飼料發(fā)酵后營(yíng)養(yǎng)水平為:植物乳桿菌> 108cfu/g、釀酒酵母> 108cfu/g、粗蛋白> 12%、真蛋白^ 8%。
5.一種權(quán)利要求1所述的含益生菌的肉羊發(fā)酵精飼料的制備方法，其特征在于，將植物乳桿菌CGMCC1.103和釀酒酵母CGMCC2.119以3:7比例混合，按10% v/w的比例接種于肉羊精飼料固態(tài)培養(yǎng)基中，料水比1:0.8w/v，32°C條件下發(fā)酵49h，料層厚度90cm，翻料次數(shù)I次。
【文檔編號(hào)】A23K1/14GK103609881SQ201310573406
【公開(kāi)日】2014年3月5日 申請(qǐng)日期:2013年11月14日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月14日
【發(fā)明者】張金川, 烏蘭, 郭德, 安曉萍, 劉娜, 羅旭光 申請(qǐng)人:內(nèi)蒙古優(yōu)牧特農(nóng)牧科技股份有限公司