果蔬農(nóng)殘生物酶清洗劑的制作方法
【專利摘要】果蔬農(nóng)殘生物酶清洗劑為白色粉劑，主要成分為黑曲霉J6酶液、酶保護劑和吸附劑，經(jīng)黑曲霉J6酶液的提取、基本酶液的配制和吸附固定三步完成，清洗劑可以有效快速地清除果蔬表面的有機磷農(nóng)藥殘留，對氧化樂果、甲拌磷、辛硫磷和甲基對硫磷殘留的去除率最高達到94.8%、92.1%、96.7%和98.5%。
CGMCC No.4220
2010.10.12
【專利說明】果蔬農(nóng)殘生物酶清洗劑

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于有機磷農(nóng)藥降解酶【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種果蔬農(nóng)殘生物酶清洗劑。

【背景技術(shù)】
[0002] 民以食為天，食以安為先，食品安全是關(guān)系人類身體健康和社會穩(wěn)定的頭等大事。 在我國，水果蔬菜產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留尤其是有機磷農(nóng)藥殘留問題令人堪憂，它直接影響到我 國的民眾生活和經(jīng)濟貿(mào)易等諸多方面，成為影響我國食品安全及農(nóng)產(chǎn)品國際競爭力的一個 重要因素，在國家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局曾對全國23個主要城市的蔬菜產(chǎn)品進行的農(nóng)藥殘留監(jiān) 督檢查中，抽樣合格率最高僅為72. 4%，最低則為47. 5%，2003年以來，我國出口日本、韓國 等國家和地區(qū)的農(nóng)副產(chǎn)品因有機磷農(nóng)藥超標而屢次被亮紅牌，造成了嚴重的負面影響，民 眾在買食水果蔬菜時更是憂慮重重。目前我國每年農(nóng)藥施用總量達50萬噸，殺蟲劑占70%， 殺蟲劑中有機磷類占70%，其中高毒品種又占70%，有機磷農(nóng)藥在水果蔬菜的生長過程中較 為普遍的使用造成其在水果蔬菜中的殘留已是不爭的事實，為解決成品水果蔬菜中有機磷 農(nóng)藥的殘留問題人們想出了不少物理的、化學的方法：民間在食用水果蔬菜前對農(nóng)藥殘留 的清除方法主要是清洗、削皮、烹飪和儲存保管法等，清洗常用的方法有清水浸泡洗滌法、 堿水浸泡清洗法、清洗去皮法等，是多年來人們依據(jù)民間常見的小竅門兒歸納的"一放、二 肖IJ、三洗、四燙、五炒"水果蔬菜安全食用方法，這些方法不足的地方是去皮對一些葉菜、花 菜類蔬菜和不易削皮的水果如草莓、櫻桃等不適用，加熱烹飪法可以消除些農(nóng)藥殘留，但不 適合生食的水果蔬菜，儲存保管法因其保存條件和保鮮要求的差異有一定的局限性；使用 活氧機(又名臭氧機）降解農(nóng)藥殘留是近年來見到的一種機械化學方法，原理是利用臭氧在 水中極強的氧化分解能力起到降解農(nóng)藥殘留的作用，但其存在的臭氧污染問題不容忽視， 利用化學原理的還有使用硅油、丙二醇等化學清洗劑處理水果蔬菜農(nóng)藥殘留，也因其去除 率較低而不宜推廣。利用生物方法降解水果蔬菜農(nóng)藥殘留污染物是近期研究者關(guān)注的一 個新的方向，生物方法安全、有效，與物理化學方法相比具有無毒、無殘留、無二次污染等優(yōu) 點，現(xiàn)有的報道有用天然蛋白酶制劑的，但是農(nóng)殘去除率不理想，而且與硅油、丙二醇等一 樣，未形成用于去除水果蔬菜降解農(nóng)藥殘留的產(chǎn)品。能安全、有效的去除水果蔬菜的農(nóng)藥殘 留，并且使用方便，是人們對去除水果蔬菜農(nóng)藥殘留用品的迫切期待，但到目前為止，還未 見有此類生物產(chǎn)品研制的報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是利用黑曲霉J6酶液良好的降解有機磷農(nóng)藥的功能，配制一種果 蔬農(nóng)殘生物酶清洗劑。
[0004] 本發(fā)明的果蔬農(nóng)殘生物酶清洗劑(簡稱清洗劑)為白色粉劑，主要成分為黑曲霉J6 酶液、酶保護劑和吸附劑，經(jīng)黑曲霉J6酶液的提取一基本酶液的配制一吸附固定三步配制 而成，酶保護劑的成分為甘氨酸、山梨酸鉀和甘油，吸附劑的組分為碳酸鈣和白炭黑，清洗 劑配制的第一步是黑曲霉J6酶液的提取：將斜面菌種黑曲霉J6經(jīng)PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)至孢子 成熟，所用PDA培養(yǎng)基為去皮馬鈴薯200g+蔗糖20g+瓊脂15?20g，定容至1000ml，pH自 然，用滅菌的種子培養(yǎng)基沖取成熟孢子，配制成密度為2?4X IO8個/ml的孢子懸液接種 于種子培養(yǎng)基中，種子培養(yǎng)基的組分為NaClL 0g+KH2P04 0· 5g+K2HP04l. 5g+(NH4) 2S041. Og+M gS047H200. Ig+葡萄糖2. 0g，定容至1000ml，pH7. 0,待孢子萌發(fā)后，接種于盛有液體發(fā)酵培 養(yǎng)基的錐形瓶中，液體發(fā)酵培養(yǎng)基的組分為NaCl 0. 1%+KH2P040. 05%+K2HP040. 15%+MgS047H2 00. 01%+葡萄糖0. 2%+酵母粉0. 1%，ρΗ7. 0, 30°C搖床培養(yǎng)3?5d，收集所產(chǎn)菌絲體研磨，研 磨后于4°C條件下放置12?24 h，離心機離心20 min，取上清液得黑曲霉J6酶液；第二步 是基本酶液的配制：將黑曲霉J6酶液與酶保護劑按比例加入攪拌器中，攪拌5分鐘，使其混 合均勻得基本酶液，所用酶保護劑為甘氨酸、山梨酸鉀和甘油，成分含量按體積百分比計： 黑曲霉J6酶液93. 5?98. 8%、甘氨酸0. 1?0. 5%、山梨酸鉀0. 1?1%、甘油1?5% ;第三 步是吸附固定：將吸附劑與基本酶液按1:1?2的質(zhì)量與體積比（g/ml)混合攪拌拌勻，經(jīng) 吸附固定即成成品清洗劑，成品為白色粉劑，吸附劑的組分碳酸鈣和白炭黑均為粉狀，二者 質(zhì)量比為1:2?3。
[0005] 本發(fā)明所用菌株J6,分類名稱：黑曲霉保藏于中國微生物 菌種保藏管理委員會普通微生物中心，北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院，保藏號為CGMCC NO. 4220,保藏日期為2010年10月12日；果蔬農(nóng)殘生物酶清洗劑經(jīng)清洗效果實驗，對果蔬 有機憐農(nóng)藥殘留的去除率最1?達到98%以上。
[0006] 本發(fā)明由以下技術(shù)方案實現(xiàn)： 1、黑曲霉J6酶液的提取 將斜面菌種黑曲霉J6接種于PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)，PDA培養(yǎng)基為去皮馬鈴薯200g+蔗糖 20g+瓊脂15?20g，定容至1000ml，pH自然，待孢子成熟后，用滅菌的種子培養(yǎng)基沖取成 熟孢子，配制成密度為2?4X IO8個/ml的孢子懸液，接于種子培養(yǎng)基中，種子培養(yǎng)基的組 分為 NaClL 0g+KH2P040. 5g+K2HP04l. 5g+(NH4)2S04l. 0g+MgS047H200. Ig+ 葡萄糖 2. 0g，定容至 1000 ml，pH7.0,待孢子萌發(fā)后，按2%接種于盛有液體發(fā)酵培養(yǎng)基的錐形瓶中，液體發(fā)酵培 養(yǎng)基的組分為 NaClO. 1%+KH2P040 . 05%+K2HP040. 15%+MgS047H200. 01%+ 葡萄糖 0. 2%+ 酵母粉 0. 1%，ρΗ7. 0, 30°C、160 r/min搖床培養(yǎng)3?5d，用滅菌紗布過濾收集菌絲體，用蒸餾水洗滌 2次，冰浴冷卻，然后加入Tris-HCL緩沖液，緩沖液濃度0. 05mol/L，pH7. 0,置于研缽中加 入適量的石英砂充分研磨，研磨后于4°C條件下放置12?24 h，離心機12000 r/min離心 20min，取上清液得黑曲霉J6酶液。
[0007] 2、基本酶液的配制 將黑曲霉J6酶液與酶保護劑按比例加入攪拌器中混合攪拌均勻得基本酶液，所用 酶保護劑為甘氨酸、山梨酸鉀和甘油，成分含量按體積百分比計：黑曲霉J6酶液93. 5? 98. 8%、甘氨酸0· 1?0· 5%、山梨酸鉀0· 1?1%、甘油1?5%，酶保護劑可有效地保護清洗劑 免受外界環(huán)境溫度、PH值、水分和儲運條件對酶活的影響。
[0008] 3、吸附固定 吸附劑的組分碳酸鈣和白炭黑均為粉狀，將其混合攪拌均勻備用，二者質(zhì)量比為 1:2 ?3 ; 將吸附劑與基本酶液按1:1?2的質(zhì)量與體積比（g/ml)混合攪拌拌勻，吸附固定20? 25分鐘，即成成品果蔬農(nóng)殘生物酶清洗劑。
[0009] 清洗劑使用方法：取適量果蔬農(nóng)殘生物酶清洗劑加入容器中，再加入可沒過果蔬 的水攪拌均勻，將要清洗的果蔬放入，浸泡5?10分鐘撈出，用清水沖洗干凈即可食用或烹 調(diào)。
[0010] 清洗效果實驗 取蘋果、梨、白菜和黃瓜四種果蔬，分別噴灑不同的有機磷農(nóng)藥，各設(shè)3個重復，所用氧 化樂果濃度為4000mg/L，甲拌磷濃度為200mg/L、辛硫磷濃度為500mg/L、甲基對硫磷濃度 為200mg/L，噴灑后于室溫下放置24h，晾干水分，分別取樣，檢測四種果蔬不同的有機磷農(nóng) 藥含量，再將四種果蔬按上述清洗劑使用方法進行洗滌，檢測洗滌后有機磷農(nóng)藥的殘留量， 計算其有機磷農(nóng)藥去除率（％)，結(jié)果見表1。
[0011] 表1.清洗劑對果蔬有機磷農(nóng)藥殘留的去除率（％)

【權(quán)利要求】
1. 果蔬農(nóng)殘生物酶清洗劑，其特征在于清洗劑為白色粉劑，主要成分為黑曲霉J6酶 液、酶保護劑和吸附劑，經(jīng)黑曲霉J6酶液的提取一基本酶液的配制一吸附固定三步配制而 成，酶保護劑的組分為甘氨酸、山梨酸鉀和甘油，吸附劑的組分為碳酸鈣和白炭黑。
2. 如權(quán)利要求1所述果蔬農(nóng)殘生物酶清洗劑，其特征在于所述三步的第一步是黑曲霉 J6酶液的提取：將斜面菌種黑曲霉J6接種于PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)，所用PDA培養(yǎng)基為去皮馬鈴 薯200g+蔗糖20g+瓊脂15?20g，定容至1000ml，pH自然，待孢子成熟后，用滅菌的種子 培養(yǎng)基沖取成熟孢子，配制成密度為2?4X IO8個/ml的孢子懸液，接種于種子培養(yǎng)基中， 種子培養(yǎng)基的組分為 NaClL 0g+KH2P040. 5g+K2HP04l. 5g+(NH4)2S041. 0g+MgS04*7H200. I. Og+ 葡萄糖2. 0g，定容至1000ml，pH7. 0,待孢子萌發(fā)后，接種于盛有液體發(fā)酵培養(yǎng)基的錐形瓶 中，液體發(fā)酵培養(yǎng)基的組分為 NaClO. 1%+KH2P040 . 05%+K2HP04 0. 15%+MgS04*7H200. 01%+ 葡萄 糖0. 2%+酵母粉0. l%，pH7. 0, 30°C搖床培養(yǎng)3?5d，收集所產(chǎn)菌絲體研磨，研磨后于4°C條 件下放置12?24 h，離心機離心20min，取上清液得黑曲霉J6酶液。
3. 如權(quán)利要求1所述果蔬農(nóng)殘生物酶清洗劑，其特征在于所述三步的第二步是基本酶 液的配制：將黑曲霉J6酶液與酶保護劑按比例加入攪拌器中混合攪拌均勻得基本酶液，所 用酶保護劑為甘氨酸、山梨酸鉀和甘油，成分含量按體積百分比計：黑曲霉J6酶液93. 5? 98. 8%、甘氨酸0? 1?0? 5%、山梨酸鉀0? 1?1%、甘油1?5%。
4. 如權(quán)利要求1所述果蔬農(nóng)殘生物酶清洗劑，其特征在于所述三步的第三步是吸附固 定：將吸附劑與基本酶液按1:1?2的質(zhì)量與體積比（g/ml)混合攪拌拌勻，經(jīng)吸附固定即 成成品清洗劑。
5. 如權(quán)利要求1所述果蔬農(nóng)殘生物酶清洗劑，其特征在于所述吸附劑的組分碳酸鈣和 白炭黑均為粉狀，二者質(zhì)量比為1:2?3。
【文檔編號】A01N25/32GK104322490SQ201310657828
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2013年12月9日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月9日
【發(fā)明者】陳國參, 王繼雯, 劉瑩瑩, 李冠杰, 寧萌, 楊文玲, 甄靜, 岳丹丹, 幕琦, 丁芳 申請人:河南省科學院生物研究所有限責任公司