一種殺菌原液及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種殺菌原液，包括藥性成份與溶劑，藥性成份為甲基烯丙基三硫醚，溶劑為有機試劑和去離子水。本發明的有益效果為：本發明提供的藥劑對香蕉枯萎病菌具有高效的抑制作用，能高效致死香蕉枯萎病菌，破壞其孢子結構，而且能顯著抑制香蕉枯萎病菌的發病率，減輕發病程度；另外，甲基烯丙基三硫醚在工業上主要用作食品添加劑，所以捋該物質開發用于香蕉枯萎病的防控，對人畜無毒，對環境無害，具有高效、安全、環境友好的特性，符合目前“公共種植”和“綠色植保”的種植理念，符合人類發展的需求，而且使用方便，操作簡單，非常適合大面積推廣使用。
【專利說明】一種殺菌原液及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及防控香蕉枯萎病菌【技術領域】，具體而言，涉及一種殺菌原液及其應用。【背景技術】
[0002]香蕉是世界上重要的熱帶亞熱帶水果之一，也是一些發展國家的重要的糧食作物。但是全球香蕉正在經受著枯萎病的嚴重威脅，該病是尖孢鐮刀菌古巴轉化型引起。目前該病在全球香蕉園中普遍存在，上世紀由于該病的危害，中美洲數千個香蕉園被毀，直接損失約$400，000，000，如加上香蕉園被毀帶來的工人失業等，造成的經濟損失無法估量。
[0003]我國香蕉主要產區包括廣東、廣西、海南、云南及臺灣等地，在這些地區，香蕉枯萎病均有分布。由于香蕉枯萎病的威脅，很多香蕉園改種其他作物甚至直接丟棄荒蕪，對香蕉產業造成了不可估量的損失。
[0004]到目前為止，針對香蕉枯萎病還沒有找到有效的化學藥劑。該病目前主要通過抗病品種、輪作、有益生防菌、轉基因等方法進行防控，但是抗病品種選育速度此較慢，而且一些抗性較好的品種，由于品質、產量等各方面的原因，難以在市場上獲得認可；與非寄主作物進行輪作，可以有效防控香蕉枯萎病的發生，但該模式受地域及病菌寄主等因素的限制，而且需要輪作2-3年也能有較好的效果，防控周期長，因而也難以大面積推廣應用；生物菌防控香蕉枯萎病的相關研究有較多報道，但是多處于試驗階段，并沒有在生產中真正應用；通過轉基因技術培育抗病品種是今后未來的發展方向，近年來也有報道了幾丁質酶、3-1，3葡聚糖酶和葡萄糖氧化酶等基因等轉基因植株的研究成果，但也只停留在實驗室研究階段。

【發明內容】

[0005]為解決現有技術中香蕉枯萎病沒有有效防控藥劑的難題，本發明提供了一種殺菌原液及其應用。其目的為將該殺菌原液用于防控香蕉枯萎病菌，具備高效、安全、環保的特點。
[0006]為達到上述目的，本發明提供了一種殺菌原液，包括藥性成份與溶劑，藥性成份為甲基烯丙基三硫醚，溶劑為有機試劑和去離子水
[0007]本技術方案中，本發明提供的藥劑中主要的藥性成分為甲基烯丙基三硫醚(CAS:34135-85-8)。甲基烯丙基三硫醚天然存在于洋蔥、大蒜、細香蔥等植物中，化學合成物在工業上主要用于食品添加劑。對人畜無毒、對環境無害。本發明發現甲基烯丙基三硫醚能夠高效抑制香蕉枯萎病菌的生長，能破壞香蕉枯萎病菌的結構，也能顯著降低香蕉枯萎病菌的發病率，減輕發病程度。而且實施方便，操作簡單，是一種潛在的高效安全、綠色環保的香蕉枯萎病防控藥劑。
[0008]進一步的，甲基烯丙基三硫醚與有機試劑的體積此為1: 1，每升去離子水中甲基烯丙基三硫醚的體積為25~50 μ l。
[0009]對甲基烯丙基三硫醚與有機溶劑的體積此做進一步的限定。甲基烯丙基三硫醚不溶于水，需要有機溶劑溶解后，才能溶于水中形成穩定的溶液。本發明中，捋甲基烯丙基三硫醚與有機溶劑的體積比為1:1此例進行溶解，即10 μ I甲基烯丙基三硫醚與10μ I有機溶劑溶解后，再溶解于980 μ I水中，形成濃度為10 μ I/ml的母液。在進行實驗前捋母液稀釋成工作液即可。在實際應用中，也可以根據實際情況調整甲基烯丙基三硫醚與有機溶劑的此例，已保證其充分溶解的情況下，盡可能少的引入有機溶劑為原則。
[0010]進一步的，甲基烯丙基三硫醚抑菌的有效濃度為每升去離子水中甲基烯丙基三硫醚的體積為25~50μ 1，本技術方案中，先捋甲基烯丙基三硫醚與有機溶劑按照體積比I: I混合，充分溶解后加入滅菌后的去離子水稀釋至25 μ 1/L~50 μ 1/L的范圍。在離體情況下，25μ 1/L~50μ 1/L的甲基烯丙基三硫醚對香蕉枯萎病菌的生長具有顯著的抑制作用，處理24小時后，40μ 1/L的甲基烯丙基三硫醚對香蕉枯萎病菌生長的抑制率高達100%，并且能顯著破壞香蕉枯萎病菌結構。在離體條件下，對香蕉枯萎病的防控效果高達72.1%，在溫室條件下，對香蕉枯萎病的防控效果高達68.6%。由上述描述可知，該藥劑具有高效防控香蕉枯萎病的巨大潛力，而且施用方法簡單，非常適合大面積推廣應用。
[0011]優選的，有機溶劑為二甲基亞砜。甲基烯丙基三硫醚不溶于水，需要有機溶劑溶解后，才能溶于水中形成穩定的溶液。本技術方案中，選用二甲基亞砜為甲基烯丙基三硫醚的溶劑。本發明中將甲基烯丙基三硫醚溶解在二甲基亞砜溶液中，然后在與水互溶，形成藥劑溶液。而且二甲基亞砜作為甲基烯丙基三硫醚的載體，可以迅速滲入土壤及香蕉植株內部，提高起到對香蕉枯萎病菌的致死作用。在實際應用中，可以選用其它的可以與水互溶的有機溶劑作為甲基烯丙基三硫醚的溶劑。
[0012]本發明所述殺菌原液的應用，捋該原液作為防治香蕉枯萎病菌殺菌原液的應用。
[0013]本發明的有益 效果為:本發明以甲基烯丙基三硫醚為藥性成份，得到殺菌原液，該殺菌原液對香蕉枯萎病菌生長的抑制能力高達100%，也可以顯著降低香蕉枯萎病菌的發病率減，輕發病程度。另外，甲基烯丙基三硫醚天然存在與洋蔥、大蒜、細香蔥等植物中，化學合成物主要用于食品添加劑。因此，將該物質開發用于香蕉枯萎病的防控，對人畜無毒，對環境無害，具有高效、安全、環境友好的特性，符合當前“公共種植”和“綠色植?！钡闹脖＠砟睿先祟惏l展的需求。該方法使用方便，操作簡單，非常適合大面積推廣使用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1為本發明實施例1中在不同時間內，施加不同濃度的藥劑與香蕉枯萎病菌斑大小的柱形圖；
[0015]圖2為本發明實施例1中在不同時間內，施加不同濃度的藥劑與香蕉枯萎病菌的抑制率的柱形圖；
[0016]圖3為本發明實施例2中在不同時間內，不同濃度的甲基烯丙基三硫醚溶液中香蕉枯萎病菌菌絲形態的掃描電鏡圖一；
[0017]圖4為本發明實施例2中在不同時間內，不同濃度的甲基烯丙基三硫醚溶液中香蕉枯萎病菌菌絲形態的掃描電鏡圖二 ；
[0018]圖5為本發明實施例2中香蕉枯萎病菌菌絲形態對照掃描電鏡圖；
[0019]圖6為本發明實施例2中香蕉枯萎病菌菌絲形態對照的投射電鏡圖；
[0020]圖7為本發明實施例2中甲基烯丙基三硫醚溶液中香蕉枯萎病菌菌絲形態的投射電鏡圖一；
[0021]圖8為本發明實施例2中甲基烯丙基三硫醚溶液中香蕉枯萎病菌菌絲形態的投射電鏡圖二 ；
[0022]圖9為本發明實施例3中離體條件下，對照香蕉苗生長情況圖；
[0023]圖10為本發明實施例3中離體條件下，甲基丙烯基三硫醚處理的香蕉苗生長情況圖；
[0024]圖11為本發明實施例4中溫室條件下，含有對照溶液中香蕉苗生長情況圖；
[0025]圖12為本發明實施例4中溫室條件下，甲基丙烯基三硫醚處理的香蕉苗生長情況圖?！揪唧w實施方式】
[0026]下面通過具體的實施例并結合附圖對本發明做進一步的詳細描述。
[0027]實施例一:本發明開發出的一種殺菌原液，包括藥性成份與溶劑，藥性成份為甲基烯丙基三硫醚，溶劑為有機試劑和去離子水。所用的溶劑只要能將甲基烯丙基三硫醚溶解于去離子水即可。
[0028]實驗1，驗證本發明提供的殺菌原液對香蕉枯萎病菌生長的抑制作用
[0029]1、藥性成分的選擇:實驗用的甲基烯丙基三硫醚(CAS:34135-85-8)購自sigma公司。
[0030]2、準備病菌:選擇香蕉枯萎病菌4號生理小種，其保存于廣東省農業科學院果樹研究所。
[0031]3、制備殺菌原液:(I)取10μ I的甲基烯丙基三硫醚于1.5ml離心管中，并加入10μ I 二甲基亞楓，使甲基烯丙基三硫醚充分溶解在二甲基亞楓中，充分溶解后形成混合溶液；(2)在上述混合溶液中，加入滅菌后的去離子水補充體積至ΙΟΟΟμ 1，進行稀釋，制成10 μ Ι/ml的藥劑母液。
[0032]4、采用二倍稀釋法將藥劑母液進行稀釋配制成工作液:準備5個離心管，在第一個離心管中加入800 μ I的藥劑母液(10 μ 1/ml);從第一個離心管中取出400 μ I加入第二個離心管中，再向第二個離心管加入400 μ I的滅菌后的去離子水，充分搖勻后，配制成濃度為5 μ 1/ml的工作液；從第二個離心管中取出400 μ I的液體，加入至第三個離心管中，再向第三個離心管中加入400 μ I的滅菌后的去離子水，充分搖勻后，配制成濃度為2.5 μ I/ml的工作液；從第三個離心管中取出400 μ I的工作液，加入至第四個離心管中，再加入400 μ I的滅菌后的去離子水，充分搖勻后，配制成濃度為1.25 μ 1/ml的工作液；從第四個離心管中取出400 μ I的工作液，加入至第五個離心管中，再加入400 μ I的滅菌后的去離子水，充分搖勻后，配制成濃度為0.625 μ Ι/ml的工作液。
[0033]5、具體實驗包括以下步驟:
[0034](I)取5ml馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基加入至直徑為6cmm的培養皿(體積25ml),待其凝固后，在培養皿中央接種Iv直徑為0.5cm的香焦枯委病囷4號生理小種囷餅；
[0035](2)在培養皿蓋上放置一個2cmX 2cm的滅菌濾紙，吸取100 μ I的上述配制的各種濃度(10 μ 1/ml, 5 μ 1/ml, 2.5 μ 1/ml, 1.25 μ l/ml,0.625 μ 1/ml)的甲基烯丙基三硫醚工作液，滴加于滅菌濾紙上；[0036](3)同時做空白對照，在空白對照的培養皿蓋上放置濾紙，滴加100 μ I含有10%的二甲基亞楓的水溶液為對照實驗組；
[0037](4)捋所有的培養皿蓋蓋上，用封口膜密封后，倒置放于28°C的培養箱中黑暗培養;
[0038](5)此時培養皿中空間體積為20ml (培養皿總體積25ml減去培養基的體積5ml)，因此各個處理的培養皿空間中甲基烯丙基三硫醚的有效濃度分別為50μ 1/L、25y 1/L、12.5 μ 1/L,6.25 μ 1/L,3.125 μ 1/L ；
[0039](6)將上述培養基分別培養24小時、48小時、72小時和96小時，培養后分別測量菌斑直徑，并利用公式(I)計算抑制率，用以評估甲基烯丙基三硫醚對香蕉枯萎病4號生理
小種的抑制作用。
[0040]
【權利要求】
1.一種殺菌原液，包括藥性成份與溶劑，其特征在于，藥性成份為甲基烯丙基三硫醚，溶劑為有機試劑和去離子水。
2.根據權利要求1所述的殺菌原液，其特征在于，甲基烯丙基三硫醚與有機試劑的體積此為1:1，每升去尚子水中甲基稀丙基二硫釀的體積為25~50 μ I。
3.根據權利要求1所述的殺菌原液，其特征在于，有機試劑為二甲基亞砜。
4.權利要求1所述殺菌原液的應用，其特征在于，將該原液作為防治香蕉枯萎病菌殺菌原 液的應用。
【文檔編號】A01P3/00GK103783042SQ201410070544
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2014年2月28日 優先權日:2014年2月28日
【發明者】黃永紅, 易干軍, 胡春華, 董濤, 魏岳榮, 左存武 申請人:廣東省農業科學院果樹研究所