一種云芝葡聚糖與鹽酸嗎啉胍的抗病毒組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種含有云芝葡聚糖與鹽酸嗎啉胍的抗病毒組合物，所述抗病毒組合物可用于防治由植物病毒引起的植物病毒病，且能夠促進(jìn)作物生長、提高植物抗病性。經(jīng)實驗證明，該制劑對黃瓜花葉病毒病和煙草花葉病毒病具有良好的預(yù)防和治療作用，且對人畜、環(huán)境高度安全，符合當(dāng)前農(nóng)藥發(fā)展的方向，具有良好的開發(fā)應(yīng)用潛力。
【專利說明】-種云芝葡聚糖與鹽酸嗎嘟艦的抗病毒組合物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及農(nóng)藥領(lǐng)域，特別是農(nóng)用抗病毒劑領(lǐng)域；具體而言，涉及一種農(nóng)用抗病毒 組合物及其制備方法和應(yīng)用，特別是涉及一種含有云芝葡聚糖與鹽酸嗎晰脈的抗病毒組合 物。 技術(shù)背景
[0002] 植物病毒病是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中一類種類繁多、發(fā)生普遍、危害嚴(yán)重的病害。其中，黃瓜 花葉病毒病（化州mber mosaic virus，CMV)能侵染千余種單、雙子葉植物，可經(jīng)閩蟲和種子 傳播，是寄主范圍最多、分布最廣、最具經(jīng)濟(jì)重要性的植物病毒之一。作物感染CMV后發(fā)病 流行速度極快，生長發(fā)育停滯，嚴(yán)重影響農(nóng)作物的產(chǎn)量和質(zhì)量，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。
[0003] 目前，對病毒病害的控制主要通過種植無毒種子、脫毒苗木和繁殖材料，清除感病 植株及其傳毒介體，加強(qiáng)栽培管理等措施，而至今生產(chǎn)上尚無有效的防治藥劑。近20年來， 隨著天然產(chǎn)物化學(xué)、藥理學(xué)研究的不斷深入，對多糖的研究引起國內(nèi)外學(xué)者的極大興趣。
[0004] 真菌多糖是指各種真菌的子實體和菌絲體所產(chǎn)生的一類代謝產(chǎn)物，一般由10個 W上的單糖通過糖巧鍵連接而成，具有抗細(xì)菌、抗病毒的功能。
[0005] 云芝葡聚糖作為真菌多糖的一種，具有抑制腫瘤，抗?jié)儯拐婢⒚咕筒《镜?多種藥理作用。
[0006] 鹽酸嗎晰脈化學(xué)名稱為；N - N - (2-脈基一己亞氨基）一嗎晰鹽酸鹽。分子式： CeHnNsO ?肥1 ;分子量；207. 66 ;該化合物主要用于流感病毒及瘡疹病毒感染。對多種病毒 (包括流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、冠狀病毒、腺病毒等）有抑制作用。在植物上也具有 抗病毒的作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于，克服云芝葡聚糖和鹽酸嗎晰脈單獨(dú)使用效果較差，容易產(chǎn)生 抗性的缺點(diǎn)。兩者按一定比例復(fù)配使用具有協(xié)同增效作用，不容易產(chǎn)生抗性，進(jìn)而提供了一 種高效，低毒，低殘留，環(huán)境友好，高性價比的抗病毒組合物。
[0008] 本發(fā)明是該樣實現(xiàn)的：
[0009] -種含云芝葡聚糖和鹽酸嗎晰脈的抗病毒劑，其特征在于，該抗病毒劑由W下原 料按重量百分比制成：云芝葡聚糖；1%?7%，鹽酸嗎晰脈0. 5?5%，表面活性劑；2%? 6%，抗凍劑；1%?5%，防腐劑；0. 1%?0.5%，穩(wěn)定劑；1%?3%，余量為水，原料的重量 百分比之和為100%。
[0010] 優(yōu)選地，云芝葡聚糖和鹽酸嗎晰脈的重量比為1 : 1-4 : 1;更優(yōu)選二者的重量比 為 3 ;1 或 4:1。
[0011] 所述的表面活性劑為焼基酷聚氧己帰離類、苯己基酷聚氧己帰離類、壬基酷聚氧 己帰離類中的其中一種；
[0012] 所述的抗凍劑為己二醇或丙二醇；
[0013] 所述的穩(wěn)定劑為液體頓鋒或液體巧鋒；
[0014] 所述的防腐劑為苯甲酸、苯甲酸軸、山梨酸、山梨酸鐘、丙酸巧其中一種。
[0015] 進(jìn)一步地，本發(fā)明還涉及上述抗病毒劑的制備方法，其特征在于，所述制備方法包 括W下按配方稱取云芝葡聚糖和鹽酸嗎晰脈溶解于適量水中，加入配方量的表面活性劑、 抗凍劑、防腐劑和穩(wěn)定劑，并加水補(bǔ)足到100%，攬拌均勻，即得云芝葡聚糖與鹽酸嗎晰脈的 抗病毒劑。
[0016] 優(yōu)選地，所述云芝葡聚糖通過如下方法制得：
[0017] 步驟一，將云芝子實體進(jìn)行干燥處理，置于高速組織搗碎機(jī)中充分搗碎，制成云芝 粉，過40目篩；
[0018] 步驟二，將采過篩后的云芝粉用酶-超聲波聯(lián)用法提取云芝葡聚糖，提取方法是： 稱取一定量的云芝粉于20倍體積的水中，加入濃度為1.5%的纖維素酶溶液，在溫度為 55C，pH為6. 5的條件下，酶解20min，隨后超聲提取20min ;
[0019] 步驟H，將提取液過濾并減壓濃縮，除去蛋白，并用活性炭進(jìn)行脫色處理，然后將 濾液離也得上清液，上清液中加入濃度為95%的己醇進(jìn)行沉淀，沉淀物用無水己醇進(jìn)行濾 洗，真空干燥得到云芝葡聚糖。
[0020] 進(jìn)一步地，本發(fā)明還涉及所述含云芝葡聚糖與鹽酸嗎晰脈的抗病毒劑用于防治植 物病毒病的用途。
[0021] 所述植物病毒為；黃瓜花葉病毒（化州mber Mosaic Virus)，煙草花葉病毒 (Tobacco mosaic virus)。
[0022] 除非另有說明，本說明書中的"％ "均為重量百分比。
[0023] 本發(fā)明制備的含云芝葡聚糖與鹽酸嗎晰脈的抗病毒劑，可用于防治由植物病毒引 起的植物病毒病，且能夠促進(jìn)作物生長、提高植物抗病性。經(jīng)實驗證明，該制劑對黃瓜花葉 病毒病（化州mber mosaic virus, CMV)和煙草花葉病毒病具有良好的預(yù)防和治療作用，且 對人畜、環(huán)境高度安全，符合當(dāng)前農(nóng)藥發(fā)展的方向，具有良好的開發(fā)應(yīng)用潛力。

【具體實施方式】
[0024] 經(jīng) 申請人:的研究表明，云芝葡聚糖作為生物效應(yīng)調(diào)節(jié)劑，不僅可W通過誘導(dǎo)植物 增強(qiáng)自身防御反應(yīng)，對病毒產(chǎn)生抗性；而且能和病毒表面蛋白外殼直接結(jié)合，從而直接抑制 病毒的生長繁殖；還具有無毒、易被降解、對環(huán)境無污染的優(yōu)良特性，該使其有可能作為一 種新型綠色農(nóng)藥，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)揮重要作用。鹽酸嗎晰脈作為醫(yī)藥用的抗病毒劑，在農(nóng)業(yè) 上使用安全，效果優(yōu)良。二者復(fù)配使用具有協(xié)同增效作用，效果好，無抗性。
[0025] W下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，需要說明的是，該些實施例僅供 本領(lǐng)域的技術(shù)人員充分理解本發(fā)明，本發(fā)明不限于該些實施例。
[0026] 在W下的實施例中，云芝葡聚糖母粉由西北農(nóng)林科技大學(xué)植保學(xué)院提供，含量 40 %，也可W按W下步驟制備：
[0027] 步驟一，將云芝子實體進(jìn)行干燥處理，置于高速組織搗碎機(jī)中充分搗碎，制成云芝 粉，過40目篩；
[0028] 步驟二，將采過篩后的云芝粉用酶-超聲波聯(lián)用法提取云芝葡聚糖，提取方法是：
[0029] 稱取一定量的云芝粉于20倍體積的水中，加入濃度為1. 5%的纖維素酶溶液，在 溫度為55°C，抑為6. 5的條件下，酶解20min，隨后超聲提取20min ;
[0030] 步驟H，將提取液過濾并減壓濃縮，除去蛋白（Sevag法），并用活性炭進(jìn)行脫色處 理，然后將濾液離也得上清液，上清液中加入濃度為95%的己醇進(jìn)行沉淀，沉淀物用無水己 醇進(jìn)行濾洗，真空干燥得到云芝葡聚糖。
[0031] 鹽酸嗎晰脈（西安近代農(nóng)用化學(xué)藥品有限公司生產(chǎn)）。
[0032] 制備實施例1 ; (1000公斤）
[0033] 云芝葡聚糖10公斤，鹽酸嗎晰脈50公斤，辛基酷聚氧己帰離30公斤，己二醇15 公斤，苯甲酸3公斤，頓鋒12公斤，水880公斤。
[0034] 稱取10公斤云芝葡聚糖和50公斤鹽酸嗎晰脈溶解于400公斤水中，再加入表面 活性劑辛基酷聚氧己帰離30公斤，抗凍劑己二醇15公斤，防腐劑苯甲酸3公斤，穩(wěn)定劑頓 鋒12公斤，補(bǔ)足剩余的水480公斤，加完上述物料后攬拌1小時，即得到所需產(chǎn)品。
[0035] 制備實施例2 ; (1000公斤）
[0036] 云芝葡聚糖50公斤，鹽酸嗎晰脈20公斤，壬基酷聚氧己帰離40公斤，丙二醇30 公斤，苯甲酸軸2公斤，液體巧鋒15公斤，水843公斤。
[0037] 稱取50公斤云芝葡聚糖和20公斤鹽酸嗎晰脈溶解于400公斤水中，再加入表面 活性劑壬基酷聚氧己帰離40公斤，抗凍劑丙二醇30公斤，防腐劑苯甲酸軸2公斤，穩(wěn)定劑 液體巧鋒15公斤，補(bǔ)足剩余的水443公斤，加完上述物料后攬拌1小時，即得到所需產(chǎn)品。 [00測藥效試驗
[003引室內(nèi)生物學(xué)試驗：
[0040] 本發(fā)明組合物W云芝葡聚糖與鹽酸嗎晰脈不同比列組合為有效成分，經(jīng)室內(nèi)生物 測定試驗發(fā)現(xiàn)，兩者復(fù)配之后對抗性植物病毒病有明顯的協(xié)同增效作用，防效均比相應(yīng)的 單劑藥劑效果好。具體用W下生物測定實例加W說明。
[0041] 實例一云芝葡聚糖與鹽酸嗎晰脈不同比列組合對黃瓜花葉病毒（CMV)的作用機(jī) 理及防治效果
[004引 1、試驗藥劑：
[0043] 云芝葡聚糖與鹽酸嗎晰脈分別W 1 : 1、3 : 1、4 : 1的重量比的抗病毒組合物， 同時設(shè)單劑處理；
[0044] 供試作物：
[0045] 覓色黎煙lenopodium amaranticolor)，由西北農(nóng)林科技大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院病理 實驗室提供；
[0046] 黃瓜花葉病毒（化州mber Mosaic Virus)簡稱CMV,由西北農(nóng)林科技大學(xué)植物保護(hù) 學(xué)院病理實驗室提供。
[0047] 2、試驗方法；參照《農(nóng)藥生物測定試驗準(zhǔn)則NY/T1156. 2-2006》，本試驗分別采用 半葉枯斑法和盆栽試驗。
[0048] 4、數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析：用SAS6. 12統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。根據(jù)試驗數(shù)據(jù)計算出對病毒病 的防效（％ )，求出毒力回歸方程式、相關(guān)系數(shù)（r)、EC50和共毒系數(shù)。
[0049] 5、評價方法：參照《農(nóng)藥生物測定試驗準(zhǔn)則NY/T 1156. 2-2006》，根據(jù) Sun&Johnson(1960)的共毒系數(shù)法（CTC)來評價藥劑混用的增效作用，即CTC《80為枯抗 作用，80<CTC<120為相加作用，CTC > 120為增效作用。
[0050] 6、結(jié)果與分析
[0051] 云芝葡聚糖與鹽酸嗎晰脈二者不同比例的混配組合對黃瓜花葉病毒的毒力測定 結(jié)果見表1。
[0052] 表1云芝葡聚糖與鹽酸嗎晰脈二者不同比例的混配組合對黃瓜花葉病毒的毒力 測定結(jié)果
[0053]

【權(quán)利要求】
1. 一種含云芝葡聚糖和鹽酸嗎啉胍的抗病毒劑，其特征在于，該抗病毒劑由以下原料 按重量百分比制成：云芝葡聚糖：1%?7%，鹽酸嗎啉胍0.5?5%，表面活性劑：2%? 6%，抗凍劑：1%?5%，防腐劑：0. 1 %?0. 5%，穩(wěn)定劑：1%?3%，余量為水，原料的重量 百分比之和為100%。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗病毒劑，其特征在于，云芝葡聚糖和鹽酸嗎啉胍的重量比 為 1 : 1-4 : 1。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗病毒劑，其特征在于，云芝葡聚糖和鹽酸嗎啉胍的重量比 為 3 :1 或 4:1。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗病毒劑，其特征在于，所述的表面活性劑為烷基酚聚氧乙 烯醚類、苯乙基酚聚氧乙烯醚類、壬基酚聚氧乙烯醚類中的其中一種；所述的抗凍劑為乙二 醇或丙二醇；所述的穩(wěn)定劑為液體鋇鋅或液體鈣鋅；所述的防腐劑為苯甲酸、苯甲酸鈉、山 梨酸、山梨酸鉀、丙酸鈣其中一種。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4任一所述的抗病毒劑的制備方法，其特征在于， 進(jìn)一步地，本發(fā)明還涉及上述抗病毒劑的制備方法，其特征在于，所述制備方法為按配 方稱取云芝葡聚糖和鹽酸嗎啉胍溶解于適量水中，加入配方量的表面活性劑、抗凍劑、防腐 劑和穩(wěn)定劑，并加水補(bǔ)足到100%，攪拌均勻，即得云芝葡聚糖與鹽酸嗎啉胍的抗病毒劑。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述云芝葡聚糖通過如下方法制得： 步驟一，將云芝子實體進(jìn)行干燥處理，置于高速組織搗碎機(jī)中充分搗碎，制成云芝粉， 過40目篩； 步驟二，將采過篩后的云芝粉用酶-超聲波聯(lián)用法提取云芝葡聚糖，提取方法是：稱取 一定量的云芝粉于20倍體積的水中，加入濃度為1. 5%的纖維素酶溶液，在溫度為55°C，pH 為6. 5的條件下，酶解20min，隨后超聲提取20min ; 步驟三，將提取液過濾并減壓濃縮，除去蛋白，并用活性炭進(jìn)行脫色處理，然后將濾液 離心得上清液，上清液中加入濃度為95%的乙醇進(jìn)行沉淀，沉淀物用無水乙醇進(jìn)行濾洗，真 空干燥得到云芝葡聚糖。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1至4任一所述的抗病毒劑用于防治植物病毒病的用途。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其特征在于，所述植物病毒為：黃瓜花葉病毒（Cucumber Mosaic Virus)，煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus)。
【文檔編號】A01P1/00GK104397005SQ201410654140
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年11月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月17日
【發(fā)明者】唐滿倉, 馬玉明, 葉龍江, 唐少燃 申請人:陜西恒田化工有限公司