本發(fā)明涉及植物育種技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種抗根腫病大白菜的育種方法。

背景技術(shù)：

十字花科根腫病是由蕓薹根腫菌(Plasmodiophora brassica Woronin)侵染引起的一種世界性病害，蕓薹根腫菌的寄主范圍很廣，包括白菜、甘藍(lán)、蘿卜、花椰菜、油菜等100多種栽培的和野生的十字花科植物。大白菜是根腫病危害最嚴(yán)重的十字花科蔬菜之一，近年來，我國沿海地區(qū)、云貴川、東北部分地區(qū)以及西部地區(qū)等全國大部分地區(qū)都有根腫病發(fā)生，發(fā)生面積急劇增加并逐年加重，根腫病已經(jīng)成為大白菜主產(chǎn)區(qū)的主要病害。

由于根腫病菌休眠孢子抗逆性強(qiáng)，在土壤中可存活10年以上，化學(xué)防治極為困難。抗病品種的選育和應(yīng)用是解決根腫病危害的根本途徑。我國主栽優(yōu)良大白菜品種普遍不抗根腫病，在根腫病發(fā)病區(qū)優(yōu)良品種存在著不能繼續(xù)生產(chǎn)應(yīng)用的問題。對當(dāng)前生產(chǎn)上主栽優(yōu)良品種的抗根腫病性狀改良是生產(chǎn)上迫切的需求，但是抗根腫病性狀轉(zhuǎn)育和回交改良是一個(gè)漫長的過程，要經(jīng)過一次雜交轉(zhuǎn)育、5-6代回交選擇、2-3代的自交純化，現(xiàn)有技術(shù)每年最多可以實(shí)現(xiàn)2代轉(zhuǎn)育，目標(biāo)材料轉(zhuǎn)育完成需9-10個(gè)世代，需時(shí)為5年以上；并且現(xiàn)有技術(shù)通過根腫病菌接種鑒定的方法篩選抗病單株，存在著病菌污染擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)。因此如何實(shí)現(xiàn)優(yōu)良大白菜育種材料的抗根腫病性狀快速安全轉(zhuǎn)育，對改良優(yōu)良品種具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種快速安全抗根腫病大白菜的育種方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

一種抗根腫病大白菜的育種方法，包括以下步驟：

1)將根腫病抗性基因?yàn)閞r的擬轉(zhuǎn)育親本A與根腫病抗性基因?yàn)镽R的轉(zhuǎn)育源親本B雜交得到F1代種子，所述F1代種子的根腫病抗性基因?yàn)镽r；

2)將所述F1代種子的幼胚催芽和春化后進(jìn)行播種培養(yǎng)，獲得F1代植株；

3)將所述F1代植株與擬轉(zhuǎn)育親本A回交，得到BC1代種子；

4)對所述BC1代種子的幼胚進(jìn)行催芽和春化后播種培養(yǎng)，獲得BC1代植株；

5)利用抗根腫病分子標(biāo)記KBrH129J18R對所述BC1代植株進(jìn)行抗性鑒定，篩選得到根腫病抗性基因?yàn)镽r的BC1代抗病單株；

6)將所述BC1代抗病單株與擬轉(zhuǎn)育親本A回交，得到BC2代種子；

7)以所述BC2代種子的幼胚為處理對象，重復(fù)所述步驟4)中的催芽、春化和播種，所述步驟5)中的鑒定和篩選以及所述步驟6)中的回交4次得到BC6代種子；

8)播種所述BC6代種子獲得BC6代植株，將所述BC6代植株自交得到BC6代自交后代，利用抗根腫病分子標(biāo)記KBrH129J18R對所述BC6代自交后代進(jìn)行抗性鑒定，篩選獲得根腫病抗性純合的轉(zhuǎn)育單株。

優(yōu)選的，所述種子為授粉后20～25天的種子。

優(yōu)選的，所述步驟2)、步驟4)和步驟7)中幼胚催芽的溫度獨(dú)立地為24～26℃。

優(yōu)選的，所述幼胚催芽的時(shí)間獨(dú)立地為5～7天。

優(yōu)選的，所述幼胚催芽至胚根長為5～10mm、根毛長為1～3mm時(shí)進(jìn)行春化。

優(yōu)選的，所述春化的溫度為4～6℃，所述春化的時(shí)間為3～4周。

優(yōu)選的，所述幼胚催芽和春化后進(jìn)行播種培養(yǎng)的環(huán)境溫度為23～25℃，濕度為65～70％。

優(yōu)選的，所述幼胚催芽和春化后進(jìn)行播種培養(yǎng)的時(shí)間為40～50天，培養(yǎng)過程全天光照。

優(yōu)選的，所述抗性鑒定使用的植株DNA為播種后2～3周的植株DNA。

優(yōu)選的，所述擬轉(zhuǎn)育親本A在回交前與幼胚同時(shí)進(jìn)行催芽、春化和播種。

本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明提供的育種方法通過對未成熟種子的幼胚培養(yǎng)，從幼胚到下一代幼胚，需要90～100天，每年可轉(zhuǎn)育3代以上，目標(biāo)親本2年即可轉(zhuǎn)育成功，大大地縮短了育種周期；另外本發(fā)明采用分子標(biāo)記方法篩選抗病單株，可快速篩選抗病基因型，避免人工接種鑒定造成的病菌傳播。

附圖說明

圖1為剝?nèi)〉挠着撸?/p>

圖2為催芽后的幼胚；

圖3為春化中的幼胚；

圖4為人工氣候箱中培養(yǎng)的植株；

圖5為開花的植株；

圖6為授粉后的植株。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明提供了一種抗根腫病大白菜的育種方法，包括以下步驟：1)將根腫病抗性基因?yàn)閞r的擬轉(zhuǎn)育親本A與根腫病抗性基因?yàn)镽R的轉(zhuǎn)育源親本B雜交得到F1代種子，所述F1代種子的根腫病抗性基因?yàn)镽r；2)將F1代種子的幼胚催芽和春化后進(jìn)行播種培養(yǎng)，獲得F1代植株；3)將所述F1代植株與擬轉(zhuǎn)育親本A回交，得到BC1代種子；4)對所述BC1代種子的幼胚進(jìn)行催芽和春化后播種培養(yǎng)，獲得BC1代植株；5)利用抗根腫病分子標(biāo)記KBrH129J18R對所述BC1代植株進(jìn)行抗性鑒定，從中篩選出根腫病抗性基因?yàn)镽r的BC1代抗病單株；6)將所述BC1代抗病單株與擬轉(zhuǎn)育親本A回交，得到BC2代種子；7)以所述BC2代種子的幼胚為處理對象，重復(fù)所述步驟4)～步驟6)中的催芽、春化、播種、篩選和回交，得到BC3代種子，以此類推，重復(fù)4次得到BC6代種子；8)播種所述BC6代種子獲得BC6代植株，將所述BC6代植株自交得到BC6代自交后代，利用抗根腫病分子標(biāo)記KBrH129J18R對所述BC6代自交后代進(jìn)行抗性鑒定，篩選獲得根腫病抗性純合的轉(zhuǎn)育單株。

本發(fā)明中，所述轉(zhuǎn)育源親本B是抗根腫病DH(Double Haploid)系，是指通過單倍體培養(yǎng)獲得的染色體自然加倍雙單倍體，抗根腫病基因是純合的，為RR。在本發(fā)明中，所述擬轉(zhuǎn)育親本A是常規(guī)的不抗根腫病的大白菜植株，由于根腫病抗性基因?yàn)轱@性基因，不抗根腫病的擬轉(zhuǎn)育親本A的基因型必然是rr。

本發(fā)明首先將根腫病抗性基因?yàn)閞r的擬轉(zhuǎn)育親本A與根腫病抗性基因?yàn)镽R的轉(zhuǎn)育源親本B雜交得到F1代種子，根據(jù)擬轉(zhuǎn)育親本A與轉(zhuǎn)育源親本B的基因型，可以確定雜交得到的F1代種子的基因型為Rr。由于F1代種子的根腫病抗性基因?yàn)镽r，表現(xiàn)抗病，因此F1代不需要經(jīng)過抗病性鑒定，可以省去一次分子標(biāo)記鑒定或接種鑒定篩選的工作。

本發(fā)明在雜交授粉完成后，優(yōu)選的在20～25天摘取種莢，得到F1代種子，更優(yōu)選的在雜交授粉完成后21～24天摘取種莢；本發(fā)明在摘取種莢后，剝出F1代種子的幼胚，本發(fā)明采用F1代種子的幼胚，而不是成熟的胚，所述剝?nèi)『蟮挠着叩男螒B(tài)如附圖1所示，更容易發(fā)芽，可以大大的縮短世代培養(yǎng)的時(shí)間，加快育種進(jìn)程。

本發(fā)明在得到F1代種子的幼胚后，對所述幼胚進(jìn)行催芽。在本發(fā)明中，所述幼胚催芽的環(huán)境溫度優(yōu)選的為24～26℃，更優(yōu)選的為25℃；所述幼胚催芽的時(shí)間優(yōu)選的為5～7天，更優(yōu)選的為6天。在本發(fā)明中，所述的催芽優(yōu)選的在鋪有濕潤濾紙的培養(yǎng)皿中進(jìn)行，催芽過程的幼胚如圖2所示，可以看到2片子葉。

所述催芽后，本發(fā)明將萌發(fā)的幼胚進(jìn)行春化。本發(fā)明優(yōu)選在幼胚催芽至胚根長為5～10mm、根毛長為1～3mm進(jìn)行春化，更優(yōu)選的至胚根長6～8mm、根毛長2mm。在本發(fā)明中，所述的春化優(yōu)選的在低溫箱中進(jìn)行，所述春化的溫度優(yōu)選的為4～6℃，更優(yōu)選的為5℃，所述春化的時(shí)間優(yōu)選的為3～4周，更優(yōu)選的為3.5周，春化中的幼胚的形態(tài)如圖3所示，可以看出春化中的幼胚2片子葉已經(jīng)展開。在本發(fā)明中，如果F1代種子是轉(zhuǎn)育冬性強(qiáng)的材料(即耐抽薹育種材料)春化時(shí)間優(yōu)選的延長至35～40天。

本發(fā)明在F1代種子的幼胚春化后，將得到的F1代種子的幼胚播種培養(yǎng)，得到F1代植株。在本發(fā)明中，所述播種培養(yǎng)的環(huán)境溫度優(yōu)選的為23～25℃，更優(yōu)選的為24℃；所述播種培養(yǎng)的濕度優(yōu)選的為65～70％，更優(yōu)選的為66～68％；所述播種培養(yǎng)的時(shí)間優(yōu)選的為40～50天，更優(yōu)選的為42～48天。本發(fā)明中的F1代植株在培養(yǎng)過程全天光照；本發(fā)明在實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)中播種用的容器優(yōu)選的為72孔穴盤中，實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)中培養(yǎng)優(yōu)選的在人工氣候箱中進(jìn)行。

本發(fā)明在得到F1代植株后，將所述F1代植株與擬轉(zhuǎn)育親本A進(jìn)行回交，得到BC1代種子。本發(fā)明為了保證F1代植株與擬轉(zhuǎn)育親本A在相同的生長期回交，在對F1代種子的幼胚進(jìn)行催化、春化和播種培養(yǎng)的同時(shí)，對回交親本，即擬轉(zhuǎn)育親本A在相同的條件下進(jìn)行催芽、春化和播種。本發(fā)明中所述回交的具體操作優(yōu)選的包括：取F1代植株單株開花前1～3天的花蕾，用擬轉(zhuǎn)育親本A當(dāng)天開花的鮮花粉授粉；優(yōu)選的將所述花蕾剝開，露出柱頭，所述剝開花蕾使用的工具優(yōu)選的為尖頭鑷子。

本發(fā)明在獲得BC1代種子后，對獲得的BC1代種子的幼胚進(jìn)行催芽和春化后播種培養(yǎng)，獲得BC1代植株。本發(fā)明獨(dú)立地選擇上述技術(shù)方案所述對F1代種子的幼胚催芽、春化和播種培養(yǎng)的條件，在此不再贅述。

本發(fā)明在獲得BC1代植株后，利用抗根腫病分子標(biāo)記KBrH129J18R對所述BC1代植株進(jìn)行抗性鑒定，篩選得到根腫病抗性基因?yàn)镽r的BC1代抗病單株。本發(fā)明優(yōu)選的在所述的BC1代植株培養(yǎng)2～3周后，提取BC1代單株的全基因組DNA，所述全基因組DNA的提取方法采用本領(lǐng)域常規(guī)的植物組織DNA的提取方法即可，對此本發(fā)明沒有特殊限定。本發(fā)明在獲得BC1代單株的全基因組DNA后，利用抗根腫病分子標(biāo)記KBrH129J18R對所述BC1代植株的全基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增；本發(fā)明中所述的抗根腫病分子標(biāo)記KBrH129J18R的具體序列參見參考文獻(xiàn)《大白菜抗根腫病基因位點(diǎn)CRa和CRb的分子標(biāo)記鑒定》華北農(nóng)學(xué)報(bào)，2015，30(2)：87-92。本發(fā)明所述的KBrH129J18R為共顯性分子標(biāo)記，擴(kuò)增產(chǎn)物目標(biāo)片段為254bp的抗病帶和194bp的感病帶，根據(jù)各單株電泳條帶，篩選具有245bp條帶的單株。由于F1代和各回交世代均為抗病性雜合世代，因此具有抗、感兩個(gè)條帶的單株即為抗病單株。

本發(fā)明在獲得基因型為Rr的BC1代抗病單株后，對獲得的BC1代抗病單株和擬轉(zhuǎn)育親本A同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)，并進(jìn)行回交授粉，此處所述的培養(yǎng)方法、回交授粉的操作獨(dú)立地選擇與上述技術(shù)方案F1代的培養(yǎng)方法及回交授粉操作相同的范圍，回交授粉后獲得BC2代種子。

本發(fā)明在獲得BC2代種子后，以BC2代種子的幼胚為處理對象，重復(fù)所述步驟4)～步驟6)中的催芽、春化、播種、篩選和回交，得到BC3代種子，以此類推，重復(fù)4次得到BC6代種子；所述的BC6代種子，從理論來說已經(jīng)有99.72％接近擬轉(zhuǎn)育親本A。

本發(fā)明獲得BC6代種子后，播種所述BC6代種子獲得BC6代植株，將所述BC6代植株自交得到BC6代自交后代，利用抗根腫病分子標(biāo)記KBrH129J18R對所述BC6代自交后代進(jìn)行抗性鑒定，篩選獲得根腫病抗性純合的，即根腫病抗性基因?yàn)镽R的大白菜植株。

本發(fā)明的方法從上一代的幼胚到下一代幼胚，需要90～100天，每年可轉(zhuǎn)育3代以上，根腫病抗性基因?yàn)镽R的植株2年即可培育成功。

下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明提供的抗根腫病大白菜的育種方法進(jìn)行詳細(xì)的說明，但是不能把它們理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。

實(shí)施例1

2014年4月中旬，轉(zhuǎn)育目標(biāo)親本Y1(根腫病抗性基因型rr)和轉(zhuǎn)育源CRA-2(DH系，根腫病抗性基因型RR)雜交得到F1代種子。

5月上旬摘取F1的種莢，剝?nèi)∮着哂阡佊袧駶櫈V紙的培養(yǎng)皿中(見圖1)，24℃培養(yǎng)箱中催芽，發(fā)芽后的幼胚(見圖2)于4℃冷藏培養(yǎng)箱中(SANYO MEDICALCOOL)弱光培養(yǎng)春化(見圖3)，6月播種，于人工氣候箱中培養(yǎng)(見圖4)，培養(yǎng)溫度24℃，濕度69％，24小時(shí)光照，7月回交授粉獲得BC1代種子，8月BC1代種子剝胚、25℃催芽6天。

BC1代催芽后的幼胚經(jīng)過5℃春化3周，9月播種，10月進(jìn)行KBrH129J18R分子標(biāo)記鑒定，從中篩選出根腫病抗性基因?yàn)镽r的BC1代抗病單株，11月BC1代抗病單株與目標(biāo)親本Y1回交，獲得BC2代種子，12月對BC2代種子剝胚、26℃催芽7天。

BC2代催芽后的幼胚經(jīng)過4℃春化4周，2015年1月播種(見圖5)，2月進(jìn)行KBrH129J18R分子標(biāo)記篩選，從中篩選出根腫病抗性基因?yàn)镽r的BC2代抗病單株，3月BC2代抗病單株與目標(biāo)親本Y1回交(見圖6)，獲得BC3代種子，4月對BC3代種子剝胚、25℃催芽6天。

BC3代催芽后的幼胚5月4℃春化4周，6月播種，7月進(jìn)行KBrH129J18R分子標(biāo)記篩選，從中篩選出根腫病抗性基因?yàn)镽r的BC3代抗病單株，8月BC3代抗病單株與目標(biāo)親本Y1回交，獲得BC4代種子，9月對BC4代種子剝胚、26℃催芽7天。

BC4代幼胚經(jīng)過4℃春化3周，9月底播種，10月中下旬進(jìn)行KBrH129J18R分子標(biāo)記篩選，從中篩選出根腫病抗性基因?yàn)镽r的BC4代抗病單株，11月中旬BC4代抗病單株與目標(biāo)親本Y1回交，獲得BC5代種子，12月中旬對BC5代種子剝胚、25℃催芽6天。

BC5代幼胚經(jīng)過4℃春化3周，2016年1月中旬播種，2月中旬進(jìn)行KBrH129J18R分子標(biāo)記篩選，從中篩選出根腫病抗性基因?yàn)镽r的BC5代抗病單株，3月上旬BC5代抗病單株與目標(biāo)親本Y1回交，獲得BC6代種子，4月初對BC6代種子進(jìn)行剝胚，25℃催芽6天。

BC6代幼胚經(jīng)4℃春化3.5周，5月上旬播種，6月初進(jìn)行KBrH129J18R分子標(biāo)記篩選抗病株，6月下旬篩選到的抗病株自交授粉，得到BC6代自交后代，7月底至8月初收獲自交后代種子，利用抗根腫病分子標(biāo)記KBrH129J18R對所述BC6代自交后代進(jìn)行抗性鑒定經(jīng)抗根腫病分子標(biāo)記鑒定，篩選出純合抗病基因型(RR)單株，經(jīng)秋季田間性狀鑒定，獲得CRY1，根腫病抗性基因?yàn)镽R的大白菜植株。

上述方案的全程培養(yǎng)時(shí)間是為95天。

實(shí)施例2

2014年4月中旬，轉(zhuǎn)育目標(biāo)親本Y1(根腫病抗性基因型rr)和轉(zhuǎn)育源CRA-2(DH系，根腫病抗性基因型RR)雜交得到F1代種子。

5月上旬摘取F1的種莢，剝?nèi)∮着哂阡佊袧駶櫈V紙的培養(yǎng)皿中24℃培養(yǎng)箱中催芽，發(fā)芽后的幼胚于4-5℃冷藏培養(yǎng)箱中(SANYO MEDICALCOOL)弱光培養(yǎng)春化，6月播種，于人工氣候箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24℃，濕度66％，24小時(shí)光照，7月回交授粉獲得BC1代種子，8月BC1代種子剝胚、25℃催芽6天。

BC1代催芽后的幼胚經(jīng)過5℃春化3周，9月播種，10月進(jìn)行KBrH129J18R分子標(biāo)記鑒定，從中篩選出根腫病抗性基因?yàn)镽r的BC1代抗病單株，11月BC1代抗病單株與目標(biāo)親本Y1回交，獲得BC2代種子，12月對BC2代種子剝胚、25℃催芽7天。

BC2代催芽后的幼胚經(jīng)過4℃春化4周，2015年1月播種，2月進(jìn)行KBrH129J18R分子標(biāo)記篩選，從中篩選出根腫病抗性基因?yàn)镽r的BC2代抗病單株，3月BC2代抗病單株與目標(biāo)親本Y1回交，獲得BC3代種子，4月對BC3代種子剝胚、25℃催芽7天。

BC3代催芽后的幼胚5月4℃春化4周，6月播種，7月進(jìn)行KBrH129J18R分子標(biāo)記篩選，從中篩選出根腫病抗性基因?yàn)镽r的BC3代抗病單株，8月BC3代抗病單株與目標(biāo)親本Y1回交，獲得BC4代種子，9月對BC4代種子剝胚、26℃催芽7天。

BC4代幼胚經(jīng)過4℃春化3周，9月底播種，10月中下旬進(jìn)行KBrH129J18R分子標(biāo)記篩選，從中篩選出根腫病抗性基因?yàn)镽r的BC4代抗病單株，11月中旬BC4代抗病單株與目標(biāo)親本Y1回交，獲得BC5代種子，12月中旬對BC5代種子剝胚、25℃催芽6天。

BC5代幼胚經(jīng)過4℃春化3周，2016年1月中旬播種，2月中旬進(jìn)行KBrH129J18R分子標(biāo)記篩選，從中篩選出根腫病抗性基因?yàn)镽r的BC5代抗病單株，3月上旬BC5代抗病單株與目標(biāo)親本Y1回交，獲得BC6代種子，4月初對BC6代種子進(jìn)行剝胚，25℃催芽6天。

BC6代幼胚經(jīng)4℃春化3.5周，5月上旬播種，6月初進(jìn)行KBrH129J18R分子標(biāo)記篩選抗病株，6月下旬篩選到的抗病株自交授粉，得到BC6代自交后代，7月底至8月初收獲自交后代種子，利用抗根腫病分子標(biāo)記KBrH129J18R對所述BC6代自交后代進(jìn)行抗性鑒定經(jīng)抗根腫病分子標(biāo)記鑒定，篩選出純合抗病基因型(RR)單株，經(jīng)秋季田間性狀鑒定，獲得CRY1，根腫病抗性基因?yàn)镽R的大白菜植株。

上述方案的全程培養(yǎng)時(shí)間是為90天。

實(shí)施例3

2014年4月中旬，轉(zhuǎn)育目標(biāo)親本Y1(根腫病抗性基因型rr)和轉(zhuǎn)育源CRA-2(DH系，根腫病抗性基因型RR)雜交得到F1代種子。

5月上旬摘取F1的種莢，剝?nèi)∮着哂阡佊袧駶櫈V紙的培養(yǎng)皿中24℃培養(yǎng)箱中催芽，發(fā)芽后的幼胚于5℃冷藏培養(yǎng)箱中(SANYO MEDICALCOOL)弱光培養(yǎng)春化，6月播種，于人工氣候箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24℃，濕度68％，24小時(shí)光照，7月回交授粉獲得BC1代種子，8月BC1代種子剝胚、25℃催芽6天。

BC1代催芽后的幼胚經(jīng)過5℃春化3周，9月播種，10月進(jìn)行KBrH129J18R分子標(biāo)記鑒定，從中篩選出根腫病抗性基因?yàn)镽r的BC1代抗病單株，11月BC1代抗病單株與目標(biāo)親本Y1回交，獲得BC2代種子，12月對BC2代種子剝胚、26℃催芽6天。

BC2代催芽后的幼胚經(jīng)過4℃春化3.5周，2015年1月播種，2月進(jìn)行KBrH129J18R分子標(biāo)記篩選，從中篩選出根腫病抗性基因?yàn)镽r的BC2代抗病單株，3月BC2代抗病單株與目標(biāo)親本Y1回交，獲得BC3代種子，4月對BC3代種子剝胚、25℃催芽5天。

BC3代催芽后的幼胚5月4℃春化4周，6月播種，7月進(jìn)行KBrH129J18R分子標(biāo)記篩選，從中篩選出根腫病抗性基因?yàn)镽r的BC3代抗病單株，8月BC3代抗病單株與目標(biāo)親本Y1回交，獲得BC4代種子，9月對BC4代種子剝胚、26℃催芽6天。

BC4代幼胚經(jīng)過4℃春化3周，9月底播種，10月中下旬進(jìn)行KBrH129J18R分子標(biāo)記篩選，從中篩選出根腫病抗性基因?yàn)镽r的BC4代抗病單株，11月中旬BC4代抗病單株與目標(biāo)親本Y1回交，獲得BC5代種子，12月中旬對BC5代種子剝胚、25℃催芽6天。

BC5代幼胚經(jīng)過4℃春化3周，2016年1月中旬播種，2月中旬進(jìn)行KBrH129J18R分子標(biāo)記篩選，從中篩選出根腫病抗性基因?yàn)镽r的BC5代抗病單株，3月上旬BC5代抗病單株與目標(biāo)親本Y1回交，獲得BC6代種子，4月初對BC6代種子進(jìn)行剝胚，25℃催芽6天。

BC6代幼胚經(jīng)4℃春化3.5周，5月上旬播種，6月初進(jìn)行KBrH129J18R分子標(biāo)記篩選抗病株，6月下旬篩選到的抗病株自交授粉，得到BC6代自交后代，7月底至8月初收獲自交后代種子，利用抗根腫病分子標(biāo)記KBrH129J18R對所述BC6代自交后代進(jìn)行抗性鑒定經(jīng)抗根腫病分子標(biāo)記鑒定，篩選出純合抗病基因型(RR)單株，經(jīng)秋季田間性狀鑒定，獲得CRY1，根腫病抗性基因?yàn)镽R的大白菜植株。

上述方案的全程培養(yǎng)時(shí)間是為97天。

由以上實(shí)施例可知，本發(fā)明通過對未成熟的幼胚培養(yǎng)，從幼胚到下一代幼胚，需要90～100天，每年可轉(zhuǎn)育3代以上，根腫病抗性植株2年即可轉(zhuǎn)育成功，大大地縮短了育種周期；另外本發(fā)明采用分子標(biāo)記方法篩選抗病單株，可快速篩選抗病基因型，避免人工接種鑒定造成的病菌傳播。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。