本發明屬魚類生物工程與細胞工程遺傳育種技術領域，具體涉及選育純系黃顙魚全雌魚及超雄魚大規模生產全雄魚的方法。
背景技術：
黃顙魚從純屬野生轉為全人工繁養，至今已有20年歷史。期間，凡長速快、個體大的成魚多數被人們吃掉了，唯有魚篩底下長速慢、個體小的級外魚（“毛毛魚”）留下來繼續養殖一年而供給黃顙魚孵化場作繁殖用的母魚，用以生產黃顙魚普通苗或全雄苗，加上近親繁殖，年復一年，種質一代不如一代；另外，普通黃顙魚雌雄各半，雄魚個體與生長速度是雌魚的2—3倍。雖然近五年來國內開始興起全雄魚養殖，但生產全雄苗所用的超雄魚YY♂供應緊張，價格昂貴，甚至不予外供，社會上種質混雜，不少人以假亂真，而檢測技術僅掌握在少數人之手，普通苗場及廣大養戶很難對親本YY♂及全雄苗XY♂進行檢測鑒定。如此種種，均成為黃顙魚養殖業健康發展的瓶頸。因此，有必要對黃顙魚種質進行提純復壯生產純系黃顙魚全雌魚、超雄魚供應各孵化場作繁殖純系全雄苗親本；大規模生產純系全雄苗供應廣大養戶大面積養殖商品魚。
技術實現要素：
本發明主要提供選育純系黃顙魚全雌魚及超雄魚大規模生產全雄魚的方法。包括以下步驟：
（1）建立純系黃顙魚種質庫：在長江水系篩選個體大、性狀優良的野生黃顙魚成熟親魚，通過人工雌核發育，生產純系全雌子代XX♀，開口四天后，提取部分子代苗獨立投喂17α—甲基睪酮藥餌或藥蟲，將其轉性為生理雄魚XX♂，與全雌魚XX♀分別獨立培育至性成熟，XX♀與XX♂交配，規模擴繁純系全雌魚種群；
（2）應用GMT技術和測交技術研制黃顙魚超雄魚YY♂和超雄生理雌魚YY♀：純系全雌魚XX♀與野生原系雄魚XY雜交，獲得雜交子代XY♂和XX♀，其中XY♂和XX♀各占50%，雜交苗開口五天后，取500尾獨立培育至性成熟，另外取500尾用EE2雌二醇藥餌或藥蟲轉性為生理雌魚XY♀，獨立培養至性成熟；雜交子代XY分別與10—20尾生理雌魚交配，開口五天后，各組均抽出500尾獨立培育成熟，另抽500尾用EE2雌二醇轉性為生理雌魚，分別獨立培育至性成熟；若母本為生理雌魚，其后代超雄魚占25%，普通雄魚占50%，雌魚占25%；若母本為正常雌魚，則子代雌雄各半；測交選出超雄魚YY♂和超雄生理雌魚YY♀。
（3）建立純系超雄魚種質庫：生理雌魚YY♀與超雄魚YY♂雜交，子代為100%的超雄魚，開口五天后，抽取部分投喂EE2雌二醇藥餌或藥蟲45天，將其轉性為生理雌魚YY♀，并與未轉性的超雄魚YY♂分池培育至性成熟，二者雜交，批量繁殖超雄魚種群，儲備于超雄魚種質庫；
（4）建立純系全雄魚生產體系：黃顙魚超雄魚YY♂與全雌魚雜交，大規模全人工繁殖純系全雄魚XY♂，供各地養殖戶養殖商品魚。
進一步，所述EE2雌二醇藥餌的配制方法為：將EE2雌二醇激素溶于95%酒精中，配成原液，再用酒精稀釋拌入鰻料或長吻鮠料中，晾干后即可獲得EE2雌二醇藥餌，其含EE2雌二醇激素量為40—60mg/kg。
進一步，所述藥蟲為采用含EE2雌二醇激素量為130—180μg/L的藥液浸泡1小時后濾去藥液的活豐年蟲。
本發明與現有技術相比的有益效果：
本發明針對近年來黃顙魚種質逐代退化的現狀，選用長江水系野生原系黃顙魚中性狀特優的成熟親魚，進行雌核發育，獲得純度較高的純系黃顙魚全雌魚XX♀，使黃顙魚種質得以提純復壯，并應用激素性逆轉技術獲得生理雄魚XX♂，與全雌魚XX♀雜交擴群，規模生產純系全雌魚取代社會上的“毛毛魚”作為生產全雄苗的母本；同時，以純系黃顙魚全雌魚作為選育基礎，通過GMT技術，以及激素性逆轉與測交方法，選育出純度較高的優質超雄魚YY♂,與純系全雌魚XX♀交配而生產出的純系全雄苗XY♂種質純正、長速快、個體大而均勻、抗病力強，具有極強的生長優勢及抗逆性能，提高了商品魚養殖的經濟效益。本發明為可持續發展的黃顙魚養殖業提供了切實可行的技術路線與優質的健康養殖新品系。
附圖說明
圖1為本發明的技術路線圖。
具體實施方式
參照圖1，下面介紹申請人七年來關于本發明在研究與生產實踐中的具體操作方法。但所舉操作方法不作為對本發明的限制，本領域的技術人員可以因地、因人、因時制宜，對本發明作相應改動。
具體操作方法，有如下步驟：
1.建立純系全雌黃顙魚種質庫
針對多年來各地生產黃顙魚普通苗及全雄苗存在的問題，將黃顙魚種質提純復壯，按傳統方法即通過選擇育種與雜交育種來構建純系，需要經過8—10代同胞兄弟妹交配選育，而人工誘導雌核發育，只需經過一次抑制第一次卵裂，就可以使基因座位全部純合，由于黃顙魚性別決定機制為雌性配子同型，所以生產的子代為純系全雌苗。具體操作步驟如下：
（1）魚卵采集：在長江水系挑選個體粗大、性狀優良的野生原系黃顙魚雌、雄魚親本回來進行強化培育，野生原系雌魚注射催產激素后，達到效應時間時人工擠出卵子；
（2）精子滅活：選取成熟的異源精子（如：南方大口鯰、長吻鮠等精子），置于精子保存液稀釋，用波長2537埃的紫外線燈照射25分鐘，使精子的遺傳物質失活即可保存備用；
（3）人工授精：滅活精子與卵子混合均勻，加入4‰鹽水激活精子，刺激魚卵“受精”發育；
（4）冷休克處理：受精后1—2分鐘內，將受精卵放進4℃水中冷休克處理15—20分鐘，阻斷卵子減數分裂第二極體排出而恢復雌核二倍體；
（5）人工孵化：冷休克處理完畢后將魚卵取出放入25—30℃水中按正常方法人工孵化出純系全雌子代XX♀；
（6）生理雄魚制種：在全雌苗開口五天后，取出部分苗獨立培育，投喂40天17α—甲基睪酮藥餌或藥蟲將其轉性為生理雄魚XX♂，與未轉性的全雌苗分別獨立培育至性成熟；
（7）雜交擴群：純系全雌魚XX♀與生理雄魚XX♂雜交擴群，規模生產純系全雌苗，專塘培育成熟后，置于純系全雌魚種質庫保種。
2選育優質黃顙魚超雄魚YY♂和生理雌魚YY♀
本發明在選育出純系全雌魚的基礎上，用GMT技術和性逆轉與測交方法研制出優質黃顙魚超雄魚和生理雌魚，具體方法如下：
（1）優質雄魚的選育：用純系黃顙魚全雌魚XX♀與野生原系黃顙魚雄魚雜交，獲得優質子代XY♂及XX♀；
（2）優質生理雌魚XY♀的制備：上述優質雜交子代保留500尾用豐年蟲投喂五天后，提取250尾獨立培育，改投EE2雌二醇藥餌：將豐年蟲放入劑量為150μg/L的EE2藥液中浸1小時后，濾取活蟲投喂，日喂三次，連喂45天，將其轉性為生理雌魚XY♀，然后用普通黃顙魚飼料培育至性成熟；其余250尾未轉性的雜交苗繼續獨立培育至性成熟（當雌雄可辨別清楚時，將其中的雌魚淘汰掉，僅保留雄魚XY♂）
（3）全雄黃顙魚YY♂與生理雌魚YY♀的制種
取兩尾發育良好的優質雄魚的精囊剪碎，用精子保存液稀釋，置于5—7℃冰箱保存；
取10—20尾發育良好的純系“生理雌魚”，注射催產激素，將卵子擠出，分開暫放，一尾一尾獨立與上述（XY♂）精子人工授精，受精卵獨立孵化，獨立培育，開口五天后，每尾雌魚產出的魚苗各保留500尾，其中50%即250尾按上述方法人工雌性化后獨立培育，余下50%按常規培苗方法獨立培育。
將以上各組魚苗用小網箱獨立培育至可分清雌雄后，檢查不轉性的各組魚中的雌雄比例。若雌雄各50%左右，則該母本為XX♀，其母本及子代（含已雌性化的子代）全部淘汰；若雌雄比例為1:3，則該母本為XY♀，子代中存在25%超雄魚YY，應將這尾雌魚產出的子代（含已轉性和未轉性兩部分）獨立培育成熟。
（4）測交選出純系黃顙魚超雄魚YY♂和生理雌魚YY♀
候選雄魚YY♂，與普通雌魚XX♀1:1配對繁殖，親本及子代均獨立培育至子代可分清雌雄，若子代為全雄魚，則該尾雄魚為超雄魚YY♂，否則淘汰；
候選生理雌魚YY♀與普通雄魚XY♂人工繁殖出子代獨立培育，若子代全部為雄魚，則該尾雌魚為超雄生理雌魚YY♀，否則淘汰。
3.建立純系超雄黃顙魚YY♂和YY♀種質庫
將選出的超雄魚YY♂和超雄生理雌魚YY♀人工繁殖，所產子代全部為超雄魚，按上述方法將部分YY♂人工雌性化變為超雄生理雌魚YY♀，培育成熟后就可以批量擴群，儲存于超雄黃顙魚種質庫。
4.大規模生產純系全雄黃顙魚魚苗
當種質庫儲備有足夠的黃顙魚超雄魚YY♂和全雌XX♀成熟親魚后，就可以在繁殖季節大規模全人工繁殖純系全雄黃顙魚魚苗供應各地養戶。一尾超雄魚YY♂可與100—350萬粒純系全雌魚魚卵交配授精，若親魚培育良好，受精率與孵化率均在95%以上。
上述方法中，EE2雌二醇藥餌的配制方法為：將EE2雌二醇激素溶于95%酒精中，配成原液，再用酒精稀釋拌入鰻料或長吻鮠料中，晾干后即可獲得EE2雌二醇藥餌，其含EE2雌二醇激素量為40—60mg/kg。
上述方法中，所述藥蟲為采用含EE2雌二醇激素量為130—180μg/L g/L的藥液浸泡1小時后濾去藥液的活豐年蟲。
經過試驗發現，以豐年蟲為激素載體比投喂藥餌效果更佳。
以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，并不用以限制本發明，只要以基本相同手段實現本發明目的的技術方案都屬于本發明的保護范圍之內。