1.一種通過體胚發生大量繁殖忽地笑的方法,其特征在于:
A外殖體消毒:選取在-4℃,保存30天以上的忽地笑小鱗莖,剝去外層鱗片,切除根部,經消毒試劑消毒后,無菌水沖洗4-5遍,最后用無菌濾紙吸干表面水分;
B叢生芽誘導:將消毒好的忽地笑切去上部1/2,將帶有鱗莖盤的鱗莖均勻分為4-8塊,接種到以下培養基中:MS基本培養基,適當濃度的植物生長激素6-卞基腺嘌呤(6-BA)3.0~5.0mg/L,吲哚乙酸(IBA)0.1~0.5mg/L蔗糖(食用糖)20~40g/L,適當pH值;培養溫度28±1℃,光照強度1000~3000lx,光照時間10~16h,進行光照培養;
C愈傷組織誘導:將不定芽萌發后培養20天左右的小鱗莖切開,去除原有鱗片和褐化部分,接種到以下培養基中:MS基本培養基,蔗糖(食用糖)20~40g/L,適當濃度植物生長激素毒莠定(Picolarm)1.0~3.0mg/L,6-卞基腺嘌呤(6-BA)0.1~0.5mg/L,適當pH值;培養溫度28±1℃;
D愈傷組織增殖:將誘導出20天左右的愈傷組織切下,接種到以下培養基上:MS基本培養基,適當植物生長激素毒莠定(Picolarm)1.0~2.0mg/L,6-卞基腺嘌呤(6-BA)1.0~2.0mg/L,培養溫度28±1℃,光照時間10~16h,進行光照培養30~40天;
E愈傷組織的分化:將進行增殖培養后的愈傷組織切成2cm左右的小塊,接種到以下培養基上:MS基本培養基,適當植物生長激素6-卞基腺嘌呤(6-BA)4.0~6.0mg/L,萘乙酸(NAA)0.1~0.5mg/L,培養溫度25±1℃,光照時間10~16h,進行光照培養30~40天;
F生根培養:選取生長健壯的試管苗,連同小鱗莖接種到如下培養基中:1/2MS或MS基本培養基,蔗糖60~90g/L,適當濃度的植物生長激素萘乙酸(NAA)400~500mg/L,適當PH值,進行光照培養50~60天。
H煉苗移栽:將組培瓶蓋打開,并添加少量的蒸餾水,進行有菌條件馴化;用鑷子將組培苗從瓶中取出,移栽到已經滅菌的栽培基質中,進行遮陰馴化3周,期間不定期的噴施1/2MS營養液。