本發明屬于甘草組織培養技術領域,尤其涉及一種含阿司匹林的甘草生根培養基。
背景技術:
甘草,(學名:Glycyrrhiza uralensis Fisch)別名:國老、甜草、烏拉爾甘草、甜根子。豆科、甘草屬多年生草本,根與根狀莖粗壯,是一種補益中草藥。對人體很好的一種藥,藥用部位是根及根莖,藥材性狀根呈圓柱形,長25~100厘米,直徑0.6~3.5厘米。外皮松緊不一,表面紅棕色或灰棕色。根莖呈圓柱形,表面有芽痕,斷面中部有髓。氣微,味甜而特殊。功能主治清熱解毒、祛痰止咳、脘腹等。喜陰暗潮濕,日照長氣溫低的干燥氣候。甘草多生長在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠邊緣和黃土丘陵地帶。根和根狀莖供藥用。傳統的甘草獲取方法是采挖葉生植物資源,造成水土流失和嚴重土壤沙漠化。另外,甘草種子主要來自野生甘草,其品種混雜,種子稀缺,發芽率極低,野生資源不適應規模化和標準化生產的需要。同時由于人們破壞性地對葉生甘草采挖,使野生植物幾乎滅絕,對甘草的保護性利用迫在眉睫,但由于甘草種植發芽率不高和人們對其此生代謝物的需求,從而使甘草的組織培養對研究和生產具有重要作用,目前的甘草培養基的生根效率不高,不能滿足需求。
稀土元素是17種特殊的元素的統稱,它的得名是因為瑞典科學家在提取稀土元素時應用了稀土化合物,所以得名稀土元素。然而稀土是歷史遺留下來的名稱,稀土是從18世紀末開始陸續發現,當時人們常把不溶于水的固體氧化物稱為土,例如,將氧化鋁稱為“陶土”,氧化鈣稱為”堿土“等。稀土一般是以氧化物狀態分離出來的,當時比較稀少,因而得名為稀土(Rare Earth,簡稱RE或R),然而經過大量的科學研究,在組織培養當中添加了稀土元素會大大地提高組織培養的質量。
鑭是一種金屬元素,原子序數57,原子量138.9055,元素名來源于希臘文,原意是“隱蔽”。銀灰色光澤,質地較軟,密度6.174g/cm3,熔點921℃,沸點3457℃;化學性質活潑,暴露于空氣中很快失去金屬光澤生成一層藍色的氧化膜,但是它并不能保護金屬,繼而進一步氧化生成白色的氧化物粉末。能和冷水緩慢作用,易溶于酸,可以多種非金屬反應。金屬鑭一般保存于礦物油或稀有氣體中。鑭在地殼中的含量為0.00183%,在稀土元素中含量僅次于鈰。
技術實現要素:
基于現有技術存在上述問題,本發明提供一種含阿司匹林的甘草生根培養基,其以1/2MS培養基為基礎培養基,并添加阿司匹林溶液、NAA(萘乙酸)、ZT(玉米素)、硝酸鑭、維生素、瓊脂粉和白砂糖,其在培養基當中添加了阿司匹林溶液,調整了激素的組成成分及比例以及添加了稀土元素,提高了甘草的出根率及生根質量,本發明具有出根率高、根生長質量好的優點。
一種含阿司匹林的甘草生根培養基,其以1/2MS培養基為基礎培養基,并添加阿司匹林溶液、NAA(萘乙酸)、ZT(玉米素)、硝酸鑭、維生素、瓊脂粉和白砂糖。
優選地,阿司匹林溶液的體積分數是為0.01%-0.05%、NAA(萘乙酸)的濃度為0.01-0.1mg/L、ZT(玉米素)的濃度為1-4 mg/L、硝酸鑭的濃度為1-5g/L,維生素的濃度為0.1-0.5mg/L,瓊脂粉的濃度為8-12g/L、白砂糖的濃度為5-10g/L。
優選地,阿司匹林溶液的體積分數是為0.03%、NAA(萘乙酸)的濃度為0.04-0.06mg/L、ZT(玉米素)的濃度為1.5-2.5 mg/L、硝酸鑭的濃度為2-4g/L,維生素的濃度為0.2-0.4mg/L,瓊脂粉的濃度為9-11g/L、白砂糖的濃度為6-8g/L。
優選地,所述的培養基的pH值為5.0-6.0。
優選地,所述的培養基的pH值為5.4。
優選地,所述的維生素是維生素B12。
一種含阿司匹林的甘草生根培養基的配制方法,其包括以下步驟:
步驟S10,使用電子秤按照1/2MS培養基標準配方配制1000倍1/2MS培養基母液;
步驟S20,取1/2MS培養基母液配制1/2MS培養基,并按配方添加硝酸鑭、阿司匹林溶液、瓊脂粉和白砂糖,使用鹽酸或者氫氧化鈉調節培養基pH值;
步驟S30,使用高溫高壓蒸汽滅菌鍋用121℃對培養基滅菌20分鐘,取出培養基并在超凈工作臺中靜置冷卻;
步驟S40,按照配方配制維生素溶液、ZT(玉米素)和NAA(萘乙酸),并進行過濾滅菌;
步驟S50,待培養基冷卻到60℃時向培養基中加入步驟S40配制好的試劑,搖晃均勻,靜置,冷卻凝固。
具體實施方式
下面結合具體實施例對本發明作進一步的描述。
實施例一:
按以下步驟配制實驗組1/2MS培養基:
步驟S10,使用電子秤按照1/2MS培養基標準配方配制1000倍1/2MS培養基母液;
步驟S20,取1/2MS培養基母液配制1/2MS培養基,并按配方添加硝酸鑭、阿司匹林溶液、瓊脂粉和白砂糖,使用鹽酸或者氫氧化鈉調節培養基pH值至5.0;
步驟S30,使用高溫高壓蒸汽滅菌鍋用121℃對培養基滅菌20分鐘,取出培養基并在超凈工作臺中靜置冷卻;
步驟S40,按照配方配制維生素B12溶液、ZT(玉米素)和NAA(萘乙酸),并進行過濾滅菌;
步驟S50,待培養基冷卻到60℃時向培養基中加入步驟S40配制好的試劑,搖晃均勻,靜置,冷卻凝固。
其中培養基的配方如下:以1/2MS培養基為基礎培養基,添加阿司匹林溶液的體積分數是為0.01%、NAA(萘乙酸)的濃度為0.01mg/L、ZT(玉米素)的濃度為1mg/L,維生素B12的濃度為0.1mg/L,瓊脂粉的濃度為8g/L、白砂糖的濃度為5g/L。
將健康的甘草愈傷組織接種到實驗組1/2MS培養基中出行常規組織培養,20天后計算甘草出根率,達到94.6%。
實施例二:
實施例二與實施例一的不同之處在于,調整了培養基配方濃度和pH值。
按以下步驟配制實驗組1/2MS培養基:
步驟S10,使用電子秤按照1/2MS培養基標準配方配制1000倍1/2MS培養基母液;
步驟S20,取1/2MS培養基母液配制1/2MS培養基,并按配方添加硝酸鑭、阿司匹林溶液、瓊脂粉和白砂糖,使用鹽酸或者氫氧化鈉調節培養基pH值至6.0;
步驟S30,使用高溫高壓蒸汽滅菌鍋用121℃對培養基滅菌20分鐘,取出培養基并在超凈工作臺中靜置冷卻;
步驟S40,按照配方配制維生素B12溶液、ZT(玉米素)和NAA(萘乙酸),并進行過濾滅菌;
步驟S50,待培養基冷卻到60℃時向培養基中加入步驟S40配制好的試劑,搖晃均勻,靜置,冷卻凝固。
其中培養基的配方如下:以1/2MS培養基為基礎培養基,添加阿司匹林溶液的體積分數是為0.01%、NAA(萘乙酸)的濃度為0.01mg/L、ZT(玉米素)的濃度為1mg/L,維生素B12的濃度為0.1mg/L,瓊脂粉的濃度為8g/L、白砂糖的濃度為5g/L。
將健康的甘草愈傷組織接種到實驗組1/2MS培養基中出行常規組織培養,20天后計算甘草出根率,達到96.3%。
實施例三:
實施例三與實施例一和實施例二的不同之處在于,調整了培養基配方濃度和pH值。
按以下步驟配制實驗組1/2MS培養基:
按以下步驟配制實驗組1/2MS培養基:
步驟S10,使用電子秤按照1/2MS培養基標準配方配制1000倍1/2MS培養基母液;
步驟S20,取1/2MS培養基母液配制1/2MS培養基,并按配方添加硝酸鑭、阿司匹林溶液、瓊脂粉和白砂糖,使用鹽酸或者氫氧化鈉調節培養基pH值至6.0;
步驟S30,使用高溫高壓蒸汽滅菌鍋用121℃對培養基滅菌20分鐘,取出培養基并在超凈工作臺中靜置冷卻;
步驟S40,按照配方配制維生素B12溶液、ZT(玉米素)和NAA(萘乙酸),并進行過濾滅菌;
步驟S50,待培養基冷卻到60℃時向培養基中加入步驟S40配制好的試劑,搖晃均勻,靜置,冷卻凝固。
其中培養基的配方如下:以1/2MS培養基為基礎培養基,添加阿司匹林溶液的體積分數是為0.03%、NAA(萘乙酸)的濃度為0.05mg/L、ZT(玉米素)的濃度為2.0 mg/L、硝酸鑭的濃度為3g/L,維生素B12的濃度為0.3mg/L,瓊脂粉的濃度為10g/L、白砂糖的濃度為7g/L。
將健康的甘草愈傷組織接種到實驗組1/2MS培養基中出行常規組織培養,20天后計算甘草出根率,達到98.3%。