本發明屬于麝養殖
技術領域：
，尤其涉及一種老年林麝延長泌香方法。
背景技術：
：麝香(moschus)主要由我國一級重點保護瀕危野生藥用動物林麝(moschusberezovskii)雄性個體分泌，是傳統中藥的重要組成部分。據《中國藥典》2015年版記載，麝香具有開竅醒神，活血通經，消腫止痛的功效。現代研究表明，麝香有抗炎、抗腫瘤的作用、并對中樞神經系統、心腦血管系統等均有顯著的影響。也因其香氣濃郁，為世界公認的“四大動物香料”(麝香、靈貓香、河貍香、龍涎香)之冠，被用作高級化妝品的定香劑。由于其價格昂貴，人為獵麝取香致使野生資源枯竭，麝香產量急劇下降，造成傳統中醫藥許多名貴驗方因無麝香原料而名存實亡。麝香年產量少，自然情況下，一年只分泌一次麝香，這與其生理結構和泌香機制關系密切。早在20世紀80年代，科研工作者就已對麝類泌香機制的研究展開了卓有成效的研究，但由于技術條件的限制，主要集中在麝香囊的解剖結構和組織結構方面。這些研究結果使人們對林麝香腺的宏觀解剖結構與超微結構有了較為全面的了解，在組織和細胞形態結構層面為開展林麝泌香機制和提高麝香產量研究提供了可以借鑒的理論依據。麝的泌香反應機制與性腺軸激素密切相關。畢書增等在總結前人經驗的基礎上，發現下丘腦-垂體-性腺軸激素是調節林麝麝香分泌活動關鍵因素。與此類似，汪建隆等研究表明性激素(促卵泡素fsh與促黃體生成素lh)可以影響麝香分泌；洪沂生等在對外源激素誘導林麝泌香方面做了大量的研究，結果表明外源雄性激素的誘導可提高林麝的泌香量，并可使切除睪丸和附睪的雄麝、失去自然泌香能力的雄麝和非泌香期的雄麝重新分泌麝香。也有研究表明麝的泌香受促黃體生成素釋放激素(lrh)的調節；尹淑媛、戴衛國進一步證明了外源雄性激素可誘導雄麝的泌香活動；此外，相關研究還顯示，不同年齡階段、不同泌香周期公麝的雄激素含量均有明顯的變化規律。以上研究結果表明性腺軸激素能夠誘導林麝產生泌香活動，是調節林麝麝香分泌活動的關鍵因素。由于麝特殊的生理結構，只有公麝才產香，母麝不產香，而麝的壽命只有12～15年，產香的高峰期也就5～7年。程建國等研究表明，2.5歲-7.5歲的公麝為有效取香率峰值段，8.5歲以上的雄麝隨著年齡的增大，雄麝受到體質、疾病等多種因素的影響，尤其雄激素分泌減少、香腺細胞萎縮的影響，導致雄麝泌香功能逐漸下降，有效取香率呈逐年下降趨勢，有的僅泌少量的香或不泌香。根據四川養麝研究所多年生產數據記載，若在公麝泌香過程中，出現生病或過強的應激反應，會在出現反應當年或后續幾年停止泌香。由于林麝是瀕危保護動物，又是特種養殖經濟動物，在人工圈養中，也只能長期飼喂，不能增加收益，這無形的增加了飼養成本。綜上所述，現有技術存在的問題是：8.5歲以上的雄麝隨著年齡的增大，雄麝受到體質、疾病等多種因素的影響，尤其雄激素分泌減少、香腺細胞萎縮的影響，導致雄麝泌香功能逐漸下降，有效取香率呈逐年下降趨勢，有的僅泌少量的香或不泌香.技術實現要素：針對現有技術存在的問題，本發明提供了一種老年林麝延長泌香方法。本發明是這樣實現的，一種老年林麝延長泌香方法，所述老年林麝延長泌香方法包括以下步驟：步驟一，藥劑準備：載藥棒—促性腺素釋放素類似物復合，將藥物包埋到30萬單位的膠原蛋白中后進行原位冷凍干燥，構建膠原蛋白-丙酸睪丸酮，膠原蛋白-促性腺素釋放素緩釋劑；步驟二，高劑量通過微創植入埋植在雄麝頸部皮下。進一步，所述老年林麝延長泌香方法采用外源生物緩釋技術，對連續多年不產香的林麝分高劑量和中劑量進行皮下埋置。進一步，所述老年林麝延長泌香方法采用復合配制激素藥物及受體調節劑為泌香劑，以具備三螺旋結構能強勁鎖住藥物分子的大分子膠原蛋白和羥基骨水泥生物材料作包裹劑制作皮下埋置。本發明的優點及積極效果為：延長動物的使用年限，提高麝香產量，增加經濟效益，嘗試性的采用了外源生物緩釋技術，對連續多年不產香的林麝分高劑量和中劑量進行皮下埋置，前期工作結果表明體內埋置激素后，不泌香的雄麝出現了典型的泌香反應，提供了事實依據。通過現代生物緩釋制藥技術手段，采用復合配制激素藥物及受體調節劑為泌香劑，以具備三螺旋結構能強勁鎖住藥物分子的大分子膠原蛋白和羥基骨水泥生物材料作包裹劑制作皮下埋置，通過增加下丘腦相關激素受體的劑量，誘發垂體分泌正反饋激素，促進性激素分泌，使連續三年不泌香的青中年麝和已經停止泌香的老公麝泌香；為林麝泌香機制研究提供理論基礎，也對增加中醫藥動物藥麝香產量有重要作用。通過制備不同激素及生物包埋緩釋棒劑植入公麝皮下或微囊劑肌肉注射，通過血液運載，勻速激活受體，誘導下丘腦-垂體-性腺軸靶相激素釋放或增加，激發停止泌香老公麝和已有一次泌香中青年公麝重啟泌香，延長公麝泌香年限，以達到麝香增產的目的。國內未見該方面研究技術的報道。由于林麝的產香年限有限，8.5歲以后，產香量逐年減少甚至大部分出現停滯泌香反應。而且在公麝泌香過程中，出現生病或過強的應激反應，會在出現反應當年或后續幾年停止泌香。采用源頭激素通過正反饋刺激性腺軸釋放性腺激素，以此使不泌香的公麝泌香，能夠在養殖群體數量有限的情況下提高麝香產量，將大大提高林麝的經濟效益。應用現代生物緩釋制藥技術手段，采用復合配制激素藥物及受體調節劑為泌香劑，以具備三螺旋結構能強勁鎖住藥物分子的大分子膠原蛋白和羥基骨水泥生物材料作包裹劑制作皮下埋置，通過增加下丘腦相關激素受體的劑量，誘發垂體分泌正反饋激素，促進性激素分泌麝香，對麝香泌香機制提供了理論支持。使不泌香的公麝泌香，有助于改善圈養情況下瀕危保護動物林麝的生存質量，為增加中醫藥動物藥麝香的產量提供技術支持，也有利于促進人工養麝產業化發展。附圖說明圖1是本發明實施例提供的老年林麝延長泌香方法流程圖。圖2是本發明實施例提供的不同施藥方式對性激素水平的影響示意圖。圖3是本發明實施例提供的膠原蛋白-促性腺素釋放激素對性激素水平的影響示意圖。圖4是本發明實施例提供的膠原蛋白-雄激素對性激素水平的影響示意圖。圖5是本發明實施例提供的肌注雄激素對性激素水平的影響示意圖。圖6是本發明實施例提供的不同劑量膠原蛋白-促性腺素釋放激素對動物性激素水平的影響示意圖。圖7是本發明實施例提供的不同劑量膠原蛋白-雄激素對動物性激素水平的影響示意圖。具體實施方式為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。下面結合附圖對本發明的應用原理作詳細的描述。如圖1所示，本發明實施例提供的老年林麝延長泌香方法包括以下步驟：s101：藥劑準備：載藥棒—促性腺素釋放素類似物復合，將藥物包埋到30萬單位的膠原蛋白中后進行原位冷凍干燥，構建膠原蛋白-丙酸睪丸酮，膠原蛋白-促性腺素釋放素緩釋劑；s102：高劑量通過微創植入埋植在雄麝頸部皮下。下面結合實驗對本發的應用效果作詳細的描述。1實驗材料與方法選取成年雄麝6頭，按用藥方式與種類分組。用藥后，每天采血量4毫升，離心獲血清0.6毫升，儲存于-80℃，液氮罐送樣。將采集的血清進行甾體類性激素檢測。1.1埋植法藥劑準備：載藥棒—膠原蛋白與雄激素、促性腺素釋放素類似物復合，將藥物包埋到30萬單位的膠原蛋白中后進行原位冷凍干燥，構建膠原蛋白-丙酸睪丸酮，膠原蛋白-促性腺素釋放素緩釋劑。埋植：通過微創植入雄麝頸部皮下。1.2注射法藥劑準備：載藥緩釋微球—油包液型，將酶解為1萬單位的小分子膠原蛋白和藥物結合形成載藥緩釋微球，與注射用液混勻成懸浮液，備用。固定麝：采用保定床(由固定板和支架兩部分組成)固定麝，或三人配合將麝直接固定在抓麝人的雙腿上。快捷、安全、短時間內抓到麝，抓麝時伺機迅速抓住麝的后肢向上提起使其前肢著地。換手后握住麝的兩后肢一手再抓住兩前肢。在操作椅上坐下，將麝背頸部或后腿暴露在外，一人扶住其頭部以免掙扎時頭部晃動其獠牙傷人。用一塊布將麝的眼睛遮住，但注意不要將鼻部蒙住，以免影響麝呼吸。同時還應注意不要壓迫到麝心臟。注射：為避免微球形成絮狀凝集物而影響使用，立即將針頭插入緩慢將藥瓶內的藥液吸入注射器；發現藥物有沉淀，應將注射器輕輕倒2次，使其形成均勻的混懸液后才可進行注射。另外，提前做好準備并使麝肌肉松弛也至關重要。采用事先將注射微球吸于注射管中，準備好消毒棉球，保定好麝后，快速進針，將微球注入麝頸部皮下。1.3用藥劑量與用藥方式表1用藥劑量與用藥方式用藥標識藥量與用藥方式t，3雄激素即丙酸睪丸酮100毫克//125毫克//150毫克，分三次注射做對照。t，中雄激素即丙酸睪丸酮載藥500-600毫克，中劑量長效劑包埋。l，中促性腺素釋放素類似物載藥600微克，中劑量長效劑包埋。t，高雄激素即丙酸睪丸酮載藥800毫克，高劑量長效劑包埋。t，低雄激素即丙酸睪丸酮載藥400毫克，低劑量長效劑包埋。l，高促性腺素釋放素類似物載藥800微克，高劑量長效劑包埋。l，低促性腺素釋放素類似物載藥400微克，低劑量長效劑包埋。表2實驗方法與過程動物類型耳號藥品類型藥量采樣時間實驗方法林麝10003t600mg2016.6.22頸部埋置，縫合2針林麝05259l600ug2016.6.22頸部埋置，縫合3針林麝08255丙睪酮375mg2016.6.22左腿肌肉注射1:1.25:1.5比格犬735bt800mg2016.6.22背部埋置，縫合3針比格犬201t400mg2016.6.22背部埋置，縫合3針比格犬250l800ug2016.6.22背部埋置，縫合3針比格犬238l400ug2016.6.22背部埋置，縫合3針注：每天采血量4毫升，離心獲血清0.6毫升，儲存于-80℃，液氮罐送樣。2實驗結果與分析2.1施藥方式、施藥類型和施藥劑量對性激素水平的影響2.1.1施藥方式對性激素水平的影響如圖2所示，施藥方式：肌注丙酸睪丸酮(ck)，埋置膠原蛋白-雄激素(p-t)，埋置膠原蛋白-促性腺素釋放素(p-l)。實驗顯示手術埋置對麝影響較大，因此施藥方式需要改進為非手術。對麝性雄激素(t)、孕激素(p)、雌激素(e2)水平的影響：三種施藥方式在麝血清t/p變化趨勢相近，麝血清t在第2天達峰，麝血清p在第6天達峰；施藥方式ck和p-l麝血清e2在第5天達峰，施藥方式p-t則麝血清e2在第5天開始升，第7天未降。施藥方式p-l與ck在麝血清e2/t/p變化趨勢更接近，麝血清e2在第4天持續上升，第6天下降；麝血清t在第2天達峰，第3天持續緩慢下降；麝血清p在第4天升高后持續到第7天。施藥方式p-t與ck在麝血清t在第2天達峰；ck麝血清e2在第5天達峰，p-t麝血清e2在第5天升持續未降；p-t麝血清p第6天達峰，ck持續未降。據報道，泌香前期睪酮、雌二醇和孕酮含量均處于較低水平，泌香盛期均升到各自最高峰。泌香末期又均迅速降低到與其泌香前期接近的水平。也有報道，泌香盛期睪酮的含量達到最高峰，顯著高于其他各期，泌香后期睪酮含量急劇下降，泌香期后繼續下降。雌二醇也呈現出與睪酮相似的變化規律，泌香盛期雌二醇的含量也達到最高峰。對本實驗進行結果分析表明，林麝的泌香量與整個泌香期睪酮、雌二醇的含量之間呈顯著正相關。實驗顯示采用雄激素350-400mg/只、促性腺素釋放激素400ug/只，已足以使動物體內睪酮和雌二醇激素水平出現峰值，因此可排除使用高劑量。但對雄麝泌香效果有待進一步實驗證實。2.1.2施藥類型對性激素水平的影響如圖3-圖5所示，施藥類型：膠原蛋白-促性腺素釋放激素，膠原蛋白-雄激素，雄激素。由上圖實驗結果可知膠原蛋白-雄激素與膠原蛋白-促性腺素釋放激素相比，膠原蛋白-促性腺素釋放激素使動物體內性激素水平出現峰值與對照(肌注雄激素)更接近。促性腺素釋放激素為性腺軸最上層激素，眾多報道證實，其對動物繁殖上的副作用小于甾體類的雄激素，但最后還應以泌香量才能得出評價結論。2.1.3施藥劑量對性激素水平的影響如圖6所示，低劑量和中劑量的膠原蛋白-促性腺素釋放激素對動物血清e2/p/t變化規律相似；動物血清e2和t在第3、第5、第7天出現峰，e2峰谷起伏大，t第2天出峰，第4天谷小；動物血清p在第4升持續高緩慢降。如圖7所示，高劑量的膠原蛋白-促性腺素釋放激素對動物血清t在第1、第3、第5、第7天出現峰；e2在第5、第7天出峰；動物血清p在第3天略高，一直低。低劑量膠原蛋白-雄激素和肌注雄激素(見圖5)對動物血清e2/p變化規律相似；動物血清e2在第5出現峰，第3、第6天為谷；動物血清p在第2天后緩慢持續升高；動物血清t第2天出峰，以后降低。高/中劑量膠原蛋白-雄激素對動物血清e2變化規律相似，在第5天出峰值；高劑量膠原蛋白-雄激素動物血清p和t一直低值延伸；中劑量膠原蛋白-雄激素與低劑量膠原蛋白-雄激素和肌注雄激素(見圖5)動物血清e2/t/p變化規律相似；動物血清e2在第5出現峰，第4、第6天為谷；動物血清p在第4天后緩慢升高；動物血清t第2天出峰，以后降低。2.2施藥方式與劑量對停止泌香公麝的影響自然情況下，林麝每年5-7月份泌香一次，泌香時間5-7天。泌香時停食，有香味溢出，香囊膨大、睪丸紅腫下垂，觸摸均溫度升高(發燙)。生產中，通常以林麝停食為泌香反應的標志，停食的天數也就是泌香的天數。開始采食標志著泌香反應結束。開始采食到完全恢復采食的時間有個體差異，短的一天，長的達15天。對林麝進行藥物埋置并觀察起對藥物的反應，結果見表3。表3雄性林麝對藥物的反應結果注：05259香味濃烈時間大約3天，10003號香味時間5天，08255有香味時間5天。3只林麝在施藥后，分別在不同時間均出現典型的泌香反應。結合上述圖2的激素檢測結果：三種施藥方式在麝血清t/p變化趨勢相近，麝血清t在第2天達峰，麝血清p在第6天達峰；施藥方式ck和p-l麝血清e2在第5天達峰，施藥方式p-t則麝血清e2在第5天開始升，第7天未降。根據以上激素檢測結果再結合麝出現泌香反應的時間可以推測血清e2含量與麝泌香反應具有顯著相關性，當血清e2升高到峰值時麝停食出現泌香反應。10003號雄麝，泌香結束開始采食的第3天，因背部埋植傷口、腿部感染化膿，食量很少，用抗生素治療，排出大量膿液及塊狀藥物載體，清洗傷口。處理傷口次日采食量增加到一半以上。2016年10月18日，對6.22日埋植激素的3只林麝進行取香，結果如下：10003——10月18日取香黃豆大小一粒，稀，棕色，香味淡；05259——9月22號，下頜斷裂脫落，頭部化膿并發肺部感染引起死亡，取香3.94克，褐色，泥漿狀；08255——10月18日取香9.88克，淺棕色。實驗顯示手術埋置對麝影響較大，創口難以愈合，取香量少，分析其原因可能是采用塊狀手術埋置在皮下的方法，由于塊狀分子量大，在皮下降解慢，可能會導致藥物以外的損傷，使愈合時間延長，從而影響促泌香效果。本發明提供的生物緩釋促性腺素釋放素仿生誘導雄麝泌香的方法采用仿生控釋劑一次植入或注入，都可模擬多次注射生理誘導雄麝泌香，同時兼顧了技術推廣簡潔便利；雄麝仿生控釋劑植入后應激反應小，隨傷口恢復快，短時間可見正常覓食，從而保證了麝生長及生命安全；埋植用藥棒載體為膠原蛋白，其作為生物材料不僅安全、生物相容性好，而且為皮膚主要組分，對止血、組織修復有促進作用；但埋置方法是微創手術，現場操作易因消毒不嚴造成感染。促性腺素釋放素類似物為性腺軸最上級促性腺激素分泌因子，可生理性控制性腺軸上激素的分泌，其本身為多肽類物質，免疫原性低(不易產生耐藥性)，在體內降解為氨基酸營養物質，沒有毒副作用與殘留。不僅對雄麝泌香增量有益，而且對麝群繁衍，野生動物保護起到很好的示范作用。注射用微球，采用16號獸用針頭及普通注射器在頸部皮下注射即可完成，操作簡便，對動物刺激小。便于在生產場推廣應用。兩次實驗6只公麝，共計取濕香24.49克(促泌香13.82克+二次泌香10.67克)，效果顯著。本發明采用埋置生物緩釋劑，通過不同施藥品種、方式、劑量對動物血清三種甾體類性激素變化規律的探究，為進一步深入研究麝的泌香機制和提高麝產香量提供了事實依據。以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，并不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。當前第1頁12