本發明涉及組織培養，具體涉及一種桃枝條免基質生根方法。

背景技術：

1、桃子素有“壽桃”和“仙桃”的美稱，因其肉質鮮美，又被稱為“天下第一果”。桃肉含蛋白質、脂肪、碳水化合物、粗纖維、鈣、磷、鐵、胡蘿卜素、維生素b1、以及有機酸（主要是蘋果酸和檸檬酸）、糖分（主要是葡萄糖、果糖、蔗糖、木糖）和揮發油。每100克鮮桃中所含水分占比88%，蛋白質約有0.7克，碳水化合物11克，熱量只有180.0千焦。桃子適宜低血鉀和缺鐵性貧血患者食用。

2、桃在我國栽培歷史長，分布區域廣，在栽培上有早結果、早豐產、早收益等優點，而且易管理，易獲高產。桃樹傳統育苗方法是嫁接育苗，但其育苗周期長、投資大、效益低。為縮短育苗時間、降低育苗費用和建園成本，在生產上已開始通過扦插育苗獲得自根苗，與嫁接苗相比，扦插育苗獲得的自根苗具有性狀穩定、成苗快、苗木整齊、早豐產等優點。目前，桃樹扦插育苗常用的有硬枝扦插和嫩枝扦插2種方式：生長期利用帶葉的新梢進行扦插稱嫩枝插，休眠期利用木質化的一年生無葉枝扦插稱作硬枝插。硬枝扦插育苗中插穗采集方便，甚至可露地直插建園，有良好的應用前景。但是，扦插育苗需要選擇合適的基質，如河沙、蛭石、草炭等，并且要對基質進行處理，如消毒、配比等，以確保基質的透氣性、保水性和養分供應等特性，操作較為繁瑣。同時，優質的扦插基質如進口草炭等價格較貴，且基質的使用量較大，增加了育苗成本。

3、生根劑是屬于植物生長調節劑促進劑類的生長素類化合物，在果樹植物應用的作用是在植物體內維持植物的頂端優勢，誘導同化產物向果實運輸，促進植物生根等。目前廣泛的應用激素的方法是，激素與水或有機溶劑混合，通過涂抹或噴在目標部位。這種方法的缺陷是隨著時間推移，激素等生根促進物質在目標部位的濃度會逐漸降低，這在田間有雨水的情況下表現的尤為明顯，從而降低了激素等生根促進物質在壓條中的作用，結果會降低生根率，影響生根效果。

技術實現思路

1、本發明的目的在于提出一種桃枝條免基質生根方法，和常規扦插相比，直接在培養條件下，噴施水汽，不用基質，省工省力省錢，節省空間，便于控制，便于管理，且生根效果好，易于實現快速生根，快速獲得桃枝條生根苗，具有廣闊的應用前景。

2、本發明的技術方案是這樣實現的：

3、本發明提供一種桃枝條免基質生根方法，將桃枝條下部插入生根組合物水凝膠中，取出，凝膠附著在桃枝條下部，懸掛，在培養條件下，在桃枝條下部噴施水汽，培養直至桃枝條下部生根，繼續培養，獲得桃枝條生根苗。

4、作為本發明的進一步改進，所述培養條件為溫度為15-20℃，濕度為50-60rh%，光照8-10h/日；所述噴施水汽的噴氣量為1-2l/h，噴施1-2h，休息1-2h，所述培養的時間為7-10d，所述繼續培養的時間為3-5d。

5、作為本發明的進一步改進，所述生根組合物水凝膠的制備方法如下：

6、s1.?中間體的制備：將靛紅酸酐和3-二甲氨基丙胺攪拌反應，加水分液，有機相減壓除去溶劑，獲得中間體，結構如下：；

7、s2.?生根劑a的制備：將吲哚丁酸加入有機溶劑中，加入nhs和edc，攪拌活化，加入中間體，攪拌反應，加水分液，有機相減壓除去溶劑，丙酮重結晶，制得生根劑a，結構如下：；

8、s3.?生根劑b的制備：將萘乙酸加入有機溶劑中，加入nhs和edc，攪拌活化，加入中間體，攪拌反應，加水分液，有機相減壓除去溶劑，丙酮/乙酸乙酯混合溶液重結晶，制得生根劑b，結構如下：；

9、s4.?緩釋生根劑的制備：將生根劑a和生根劑b混合均勻，加入有機溶劑中，得到有機相；將明膠溶于水中，加入有機相，均質，調節均質液ph值為第一ph值，攪拌反應，降溫，調節溶液ph值為第二ph值，加入谷氨酰胺轉氨酶，攪拌反應，抽濾，洗滌，干燥，制得微膠囊，加入水中，加入海藻酸鈉和乳化劑，攪拌，乳化，滴加氯化鈣溶液，常溫固化，抽濾，洗滌，干燥，制得緩釋生根劑；

10、s5.?改性生根劑的制備：將緩釋生根劑加入水中，加入單寧酸和催化劑，加熱攪拌反應，抽濾，洗滌，干燥，制得改性生根劑；

11、s6.?生根組合物水凝膠的制備：將絲素蛋白肽溶于水中，得到絲素蛋白肽溶液，將殼聚糖溶于酸液中，得到殼聚糖溶液，將絲素蛋白肽溶液和殼聚糖溶液混合均勻，加入改性生根劑，加入nhs和edc，攪拌反應，形成凝膠態，制得生根組合物水凝膠。

12、作為本發明的進一步改進，步驟s1中所述靛紅酸酐和3-二甲氨基丙胺的摩爾比為1:1.1-1.2，所述反應的時間為1-2h。

13、作為本發明的進一步改進，步驟s2中所述吲哚丁酸、中間體、nhs、edc的摩爾比為1.1-1.2：1:1.3-1.5:1.2-1.3，所述攪拌活化的時間為20-40min，所述攪拌反應的時間為7-10h。

14、作為本發明的進一步改進，步驟s3中所述萘乙酸、中間體、nhs、edc的摩爾比為1.1-1.2：1:1.3-1.5:1.2-1.3，所述攪拌活化的時間為20-40min，所述攪拌反應的時間為6-8h。

15、作為本發明的進一步改進，步驟s4中所述生根劑a、生根劑b、明膠、谷氨酰胺轉氨酶、海藻酸鈉和乳化劑的質量比為3-5:2-4:5-6:2-3:10-12:0.5-1，所述第一ph值為4-4.5，所述第二ph值為6.3-6.7，所述降溫至3-8℃，所述乳化劑選自吐溫-20、吐溫-40、吐溫-60、吐溫-80、吐溫-85中的至少一種。

16、作為本發明的進一步改進，步驟s5中所述緩釋生根劑、單寧酸和催化劑的質量比為10:5-7:1-2，所述催化劑為ph=8-9的tris-hcl溶液，所述加熱攪拌反應的溫度為45-55℃，時間為3-5h。

17、作為本發明的進一步改進，步驟s6中所述絲素蛋白肽、殼聚糖、改性生根劑、nhs和edc的質量比為6-8:10-12:5-7:3-5:3-5，所述攪拌反應的時間為5-7h，所述酸液為1-3wt%的乙酸或乳酸溶液。

18、本發明進一步保護一種生根組合物水凝膠，制備方法如下：

19、s1.?中間體的制備：將1摩爾當量靛紅酸酐和1.1-1.2摩爾當量3-二甲氨基丙胺攪拌反應1-2h，加水分液，有機相減壓除去溶劑，獲得中間體，結構如下：；

20、s2.?生根劑a的制備：將1.1-1.2摩爾當量吲哚丁酸加入有機溶劑中，加入1.3-1.5摩爾當量nhs和1.2-1.3摩爾當量edc，攪拌活化20-40min，加入1摩爾當量中間體，攪拌反應7-10h，加水分液，有機相減壓除去溶劑，丙酮重結晶，制得生根劑a，結構如下：；

21、s3.?生根劑b的制備：將1.1-1.2摩爾當量萘乙酸加入有機溶劑中，加入1.3-1.5摩爾當量nhs和1.2-1.3摩爾當量edc，攪拌活化20-40min，加入1摩爾當量中間體，攪拌反應6-8h，加水分液，有機相減壓除去溶劑，丙酮/乙酸乙酯混合溶液重結晶，制得生根劑b，結構如下：；

22、s4.?緩釋生根劑的制備：將3-5重量份生根劑a和2-4重量份生根劑b混合均勻，加入有機溶劑中，得到有機相；將5-6重量份明膠溶于水中，加入有機相，均質，調節均質液ph值為4-4.5，攪拌反應20-40min，降溫至3-8℃，調節溶液ph值為6.3-6.7，加入2-3重量份谷氨酰胺轉氨酶，攪拌反應2-4h，抽濾，洗滌，干燥，制得微膠囊，加入水中，加入10-12重量份海藻酸鈉和0.5-1重量份乳化劑，攪拌，乳化，滴加3-5重量份2-5wt%的氯化鈣溶液，常溫固化20-40min，抽濾，洗滌，干燥，制得緩釋生根劑；

23、s5.?改性生根劑的制備：將10重量份緩釋生根劑加入水中，加入5-7重量份單寧酸和1-2重量份催化劑，加熱至45-55℃，攪拌反應3-5h，抽濾，洗滌，干燥，制得改性生根劑；

24、所述催化劑為ph=8-9的tris-hcl溶液；

25、s6.?生根組合物水凝膠的制備：將6-8重量份絲素蛋白肽溶于水中，得到絲素蛋白肽溶液，將10-12重量份殼聚糖溶于1-3wt%的乙酸或乳酸溶液中，得到殼聚糖溶液，將絲素蛋白肽溶液和殼聚糖溶液混合均勻，加入5-7重量份改性生根劑，加入3-5重量份nhs和3-5重量份edc，攪拌反應5-7h，形成凝膠態，制得生根組合物水凝膠。

26、本發明具有如下有益效果：

27、本發明在中間體基礎上，通過羧基和氨基的耦合，制備了生根劑a和生根劑b，制備方法簡單，條件溫和，易于實現工業化應用，該生根劑可經由植物的根、莖、葉、果吸收，然后運輸到起作用的部位，具有加速細胞分裂、誘導愈傷組織生長、促進生根發芽和果實膨大的作用，特別是對于桃枝條的促進生根作用明顯，具有促進植物生根、增產提質的效果，生根劑a和生根劑b具有協同增效的作用。

28、但是，采用普通涂抹或噴灑的方法將生根劑附著于目標部位，隨著時間推移，或者在雨水沖刷作用下，生根劑在目標部位的濃度會明顯降低，從而大大降低了促進生根的效率。本發明通過將生根劑a和生根劑b經過復凝乳法包埋后，表面進一步經過海藻酸鈉交聯包埋，獲得的緩釋生根劑能緩慢釋放生根劑組分，從而延長了藥效，能夠起到長效促進的效果。但是，僅僅對生根劑進行包埋仍存在經過雨水沖刷后大量緩釋生根劑會脫落，從而也會降低促進生根的效率。

29、于是，本發明將制得的緩釋生根劑進一步表面經過單寧酸包覆改性，表面帶有的單寧酸具有較好的粘附性，從而能夠使得改性生根劑能夠很好的粘附于桃枝條表面，從而發揮出長效促進細胞分離，促進生根的效果。

30、水凝膠能夠將水分子束縛在空間網絡中而保留水分，具有類細胞外基質的結構，純絲素蛋白肽水凝膠的熱穩定性較差且降解速率過快，限制了其應用，本發明將絲素蛋白肽和殼聚糖共混，融合兩種材料的優點，能夠與絲素蛋白肽之間形成氫鍵或靜電作用，從而改善絲素蛋白肽的性能，通過edc和nhs交聯，避免了引入醛類交聯劑等對植物生長的不利影響，制得的水凝膠熱穩定性更好，且具有合適的降解速率。本發明進一步將改性生根劑分散于絲素蛋白肽-殼聚糖水凝膠中，水凝膠能夠更好的粘附于桃枝條上，從而進一步提高了生根劑在桃枝條表面的粘附性，發揮出長效促進細胞分離，促進生根的效果，同時，還能為生根生長提供有機質、氮源等營養物質以及提供水分，從而能夠促進快速生根。

31、本發明和常規扦插相比，直接在培養條件下，噴施水汽，不用基質，省工省力省錢，節省空間，便于控制，便于管理，且生根效果好，易于實現快速生根，快速獲得桃枝條生根苗，具有廣闊的應用前景。