專利名稱：箬葉多糖的提取方法
技術領域：
本發明涉及天然產物化學，特別是涉及從箬葉中提取箬葉多糖或箬葉硒多糖的方法。
背景技術：
箬葉是禾本科植物箬竹(Indocalamus tesselatus)的葉。箬葉具有清熱止血、解毒消腫、利尿抗癌等功效?！侗静菥V目》記載箬葉“甘，寒，無毒”，“治男女吐血、嘔血、咯血、下血.又通小便，利肺氣，喉痹，消癰腫”。日本民間亦用竹(Sasa albomarginata)葉作漢方藥，藥理實驗表明，竹葉多糖提取液具有良好的抗腫瘤、抗炎癥、抗潰瘍等作用[Kuboyama N，Fuji A，TamuraT.Antitumor activities of bamboo leaf extracts(BLE)and its lignin(BLL).FoliaPharmacol Japan，1981，77(3)579-596；Shibata M，Yamatake Y，Sakamoto M，et al.Pharmacological studies on bamboo grass(1)acute toxicities，anti-inflammatory and antiulcerogenic activities of water-soluble fraction(Folin)extracted from Sasa albomarginat Makino et Shibata.Folia Pharmacol Japan，1975，71(3)481-490]。
近年來，我國學者對鄂西恩施地區野生葉箬葉進行了一定的研究。主要在箬葉多糖的組成、結構和性質方面[陳春英，丁玉強.堿液提取箬葉多糖的純化及其結構性質的研究.生物化學與生物物理進展，1999，26(1)51-55；陳春英，丁玉強.箬葉多糖的分離純化及其理化性質的研究.中國生物化學與分子生物學報，1998，14(4)422-426；丁玉強，陳春英.箬葉水溶性多糖的色譜研究.色譜，1996，14(6)470-472]，從鄂西恩施地區野生箬葉中提取了多種多糖成分。在藥理研究方面，證明箬葉多糖及其衍生物具有抗艾滋病毒的作用[蔣巖，陳春英.硫酸酯化箬葉多糖抗HIV-1機制的初步研究.中華實驗和臨床病毒學雜志，2000，14(1)56-59；陳春英，蔣巖.箬葉多糖及其衍生物對小鼠艾滋病作用的研究.中國藥理學通報，1999，15(4)336-340；陳春英，蔣巖.硫酸酯化箬葉多糖的結構修飾及其抗艾滋病病毒活性.藥學學報，1998，33(4)264-268]；箬葉多糖對四氯化碳致小鼠肝損傷也有抑制作用[陳春英，丁玉強，等.箬葉多糖對小鼠實驗性四氯化碳致肝損傷的作用.中國藥理學與毒理學雜志，1996，10(3)；237-238]。另外對箬葉多糖及其衍生物的熱化學也進行了研究[顏承農，陳春英.硒和箬葉多糖對細菌生長代謝作用熱化學特征研究.化學學報，1998，56(9)833-839；顏承農，陳春英.硒的熱化學研究.武漢大學學報自科版，1997，43(4)471-474；顏承農，劉義等.箬葉多糖和硫多糖對細菌生長代謝作用的熱化學探討.荊州師范學院學報，1997，20(5)58-61]。由于箬葉多糖及其衍生物具有抗腫瘤、抗炎癥、抗潰瘍、抗病毒尤其具有抗艾滋病毒的作用，因此對箬葉多糖的制備和應用具有重要意義。
硒是人和動物體內必需的微量元素，體內不能自行合成，必須由外界供給才能滿足正常代謝需要，我國絕大部分地區缺硒。箬葉多糖具有上述多種生理活性，將硒和箬葉多糖有機的結合在一起的箬葉硒多糖，不僅具有箬葉多糖的生理活性，而且具有硒的生理活性。實驗證明，在含硒地區生長的箬葉中提取的箬葉多糖含有硒元素。因此對箬葉硒多糖的制備和應用更具有重要意義。
現有從箬葉中提取的箬葉多糖通常有下面一些方法(1)將箬葉加入水或醇水混合液提取、澄清、或濃縮、或干燥、或加入輔料等工藝制成口服液、片劑、顆粒劑或膠囊劑(CN 1324652)。但這種方法提取不完全，提取效率低，為粗提物，且通常提取溫度較高、提取時間長，容易導致具有活性的多糖成分因長時間受熱破壞損失；(2)將箬葉依次通過0.9％NaCl水溶液，85％乙醇，95℃熱水，1％草酸銨水溶液，5％NaOH水溶液(含0.05％NaBH4，N2保護)及20％NaOH水溶液(含0.05％NaBH4，N2保護)逐級提取，得到6種多糖粗提取液，其中由5％和20％NaOH處理的提取液經醋酸中和沉淀得兩種多糖和兩種上清液多糖，經冷凍干燥得粗多糖。8種粗多糖經過H2O2法脫色，然后用稀HCl中和至pH＝7.用Savag法除蛋白質5次以后，濃縮至小體積，用乙醇沉淀多糖，將多糖溶于適量蒸餾水，置于透析袋中，用自來水透析3d，蒸餾水透析1d，濃縮，冷凍干燥得多糖各組分(陳春英，丁玉強.箬葉多糖的分離純化及其理化性質的研究。中國生物化學與分子生物學報，1998，14(4)422-426)。這種方法適合實驗室研究，不適合工業化生產。
發明內容
鑒于現有技術中存在的上述問題，本發明的目的是提供種在較低溫度下，提取率較高，適合工業化生產的提取較純箬葉多糖或箬葉硒多糖的方法。
本發明的技術方案是取箬葉(或含硒箬葉)，破碎，脫脂或不脫脂處理后，加多倍量的水，調PH值2-11，加入纖維素酶(或含纖維素酶的混合酶)，在0℃-80℃下酶促反應5h，調PH值至中性，煮沸10分鐘，濾出提取液。再在濾渣中加多倍量的水，調PH值2-11，加入纖維素酶(或含纖維素酶的混合酶)，在0℃-80℃下酶促反應5h，調PH值至中性，煮沸10分鐘，濾出提取液，如此提取濾渣共2次。合并三次提取液，濃縮至加水總量的1/5-1/6體積，離心分離除去沉淀，得到澄清液。澄清液加入相當于總體積分數為70％的酒精，沉淀24h以上，離心分出多糖沉淀，丙酮脫水，真空干燥即得箬葉多糖(或箬葉硒多糖)。
在本發明中采用加入蛋白酶酶促反應除蛋白，具體方法是蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)可以在提取時與纖維素酶(或含纖維素酶的混合酶)一同加入、或在提取液中加入、或在三次提取液合并后的濃縮液中加入，無論在哪一工序加入蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)，均需在PH值為2-11，溫度為0℃-80℃下酶促反應。
權利要求
1.一種從箬葉中提取箬葉多糖或箬葉硒多糖的方法，其技術特征在于箬葉(或含硒箬葉)在PH值為2-11水中，溫度為0℃-80℃下用纖維素酶(或含纖維素酶的混合酶)酶促反應提取，每次提取后調PH值至中性，煮沸。
2.如權利要求1所述的制備方法，采用加入蛋白酶酶促反應除蛋白，具體方法是蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)可以在提取時與纖維素酶(或含纖維素酶的混合酶)一同加入、或在提取液中加入、或在合并提取液的濃縮液中加入，無論在哪一工序加入蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)，均需在PH值為2-11，溫度為0℃-80℃下酶促反應。
全文摘要
本發明涉及天然產物化學，特別是涉及從箬葉中提取箬葉多糖或箬葉硒多糖的方法。箬葉(或含硒箬葉)在pH值為2－11水中，溫度為0℃－80℃下用纖維素酶(或含纖維素酶的混合酶)酶促反應提取數次，合并提取液濃縮、去沉淀，澄清液加入酒精沉淀24h以上，分出多糖沉淀、脫水、真空干燥即得箬葉多糖(或箬葉硒多糖)。在本發明中采用蛋白酶法除蛋白，蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)可以在提取時與纖維素酶一同加入、或在提取液中加入、或在三次提取液的濃縮液中加入，無論在哪一工序加入蛋白酶，均需在pH值為2－11，溫度為0℃－80℃下酶促反應。本發明提供了一種在較低溫度下，提取率較高，適合工業化生產的提取箬葉多糖或箬葉硒多糖的方法。
文檔編號C12P19/00GK1468868SQ0314288
公開日2004年1月21日 申請日期2003年6月16日 優先權日2003年6月16日
發明者余愛農 申請人:湖北民族學院