專利名稱：營養補充劑及其加工方法
技術領域：
本發明涉及含有生物活性小分子的封入膠囊的組合物，以及加工所述組合物保持生物活性，尤其是保持其活化(表達)或者滅活(沉默)Sirtuin 1基因的方法。
背景技術：
白藜蘆醇(Resveratrol)是一種有某些植物應答損傷或者真菌感染產生的天然存在的酚類殺真菌劑。它是在環境脅迫期間，諸如惡劣天氣或昆蟲，動物，或病原微生物(例如，真菌)攻擊期間，植物產生的一種化合物(稱作植物抗毒素)。白藜蘆醇是稱作葡萄抗毒素的聚合物家族的母體分子。其天然來源包含松樹，桉樹植物，蓼屬，百合科，蓼科，豆科，桑，花生，越桔，蔓越橘以及松樹籽。其最豐富的天然來源是歐洲葡萄，美洲葡萄以及圓葉葡萄(圓葉葡萄)，所有均是用于釀酒的葡萄品種。
白藜蘆醇(C14H12O3)又名3，4′，5-三羥基茋，以順式以及反式立體異構體的形式天然存在。在葡萄和酒中，白藜蘆醇主要以其反式立體異構體的形式存在。在葡萄酒制造過程中，在發生發酵的同時葡萄的種子以及果皮與壓榨的汁接觸。發酵過程中產生的乙醇從果皮以及種子天然提取以及濃縮出白藜蘆醇。葡萄酒的白藜蘆醇含量不僅取決于葡萄的類型，而且取決于葡萄皮/種子在發酵過程中存在的時間長短(即，果皮/種子與漿汁接觸的時間量)。在紅葡萄酒中白藜蘆醇的濃度明顯比白葡萄酒要高(大約10倍)，因為紅葡萄酒生產期間，果皮/種子與漿汁接觸更長的時間，增加了來自果皮/種子的白藜蘆醇的量。在一瓶典型的紅葡萄酒(750ml)中，白藜蘆醇的總濃度范圍可以從0.6至15mg/l。一旦形式，白藜蘆醇通過包裝以及加工保存在葡萄酒內，即，將其保藏在基本上不透光的氣密瓶中。而且，瓶子本身一般儲存在陰涼，黑暗的環境(例如，酒窖)。
研究顯示白藜蘆醇具有生物活性，提供了包括防癌，抗炎特性以及心血管療效的若干健康益處。白藜蘆醇作為中度抗氧化劑，淬滅與若干癌癥相關的自由基損傷來發揮功能。白藜蘆醇還抑制轉錄因子NF-κB，所述轉錄因子激活負責細胞存活，炎癥以及癌擴散的基因。當施加于癌細胞時，白藜蘆醇使癌細胞對腫瘤壞死因子-α致敏，其引發細胞凋亡(細胞死亡)。流行病學的體外以及動物研究還顯示高水平攝入白藜蘆醇與心血管疾病發病率的降低相關(產生抗血小板以及高脂血癥療效)。更多近代研究顯示白藜蘆醇通過減緩細胞衰退提高酵母，蠕蟲以及小鼠的壽命期限。已經顯示3至15毫克的白藜蘆醇(存在于3-5玻璃杯紅葡萄酒的量)就足以產生上述療效。
然而，為了提供上述益處，白藜蘆醇一旦產生就必須保持其生物學活性。保持白藜蘆醇的生物活性是很困難的。白藜蘆醇僅具有大約1天的半衰期；因此在暴露于周圍環境后，在2天內完全氧化。一旦氧化，其影響生物系統的能力減弱。
當用于營養增補劑中時，原料白藜蘆醇通常作為來自植物來源(例如虎杖)的醇抽提物產生，然后干燥成粉末，封入膠囊或成為藥丸形式，隨后在氣密包裝中密封。雖然白藜蘆醇作為原料通常顯示出有效的生物活性，當白藜蘆醇粉末在膠囊化作用的過程中進行混合以及摻和時，就會暴露于氧氣，在消費者使用前即使不喪失全部生物活性也會逐漸喪失一些生物學活性。結果，即使白藜蘆醇分子可通過高效液相色譜法(HPLC)證實在膠囊化作用之后依然存在，但是可能不會顯示基因控制的生物活性。結果，即使白藜蘆醇可能存在于補充劑中，但是可能已經喪失了大部分的生物活性。尤其是，雖然白藜蘆醇可以顯示出某些抗氧化劑，雌激素類，膽固醇-控制的效果，但是喪失了其基因組生物活性。酶生物活性(例如，活化人類酶或者使其失活的能力)僅在保存的白藜蘆醇分子中顯示(例如，作為分子存在于葡萄酒或研究級的白藜蘆醇中)。因此，需要提供包括維持其生物學活性并且尤其是其酶促生物學活性的穩定化的白藜蘆醇的營養補充劑。
發明目的以及概述因此，根據上述以及其他原因，很明顯本發明的一個目的是提供含有生物學活性白藜蘆醇的封入膠囊的組合物以及將組合物封入膠囊使白藜蘆醇被消費者攝入時保持生物學活性的方法。
本發明的另一個目的是提供將能夠激活酶活性使得酶活性得以保存的小分子植物多酚封入膠囊的方法。
本發明的另一目的是提供具有基因組效果，包括活化和/或滅活人酶的封入膠囊的組合物。
本發明的另一目的是提供含有封入膠囊的白藜蘆醇成分的營養補充劑，其中白藜蘆醇的效力通過防止其在膠囊化處理過程中暴露于氧氣得以保持。
本發明的更進一步的目的是阻止營養補充劑成分在營養補充劑的加工和包裝過程中由金屬誘導氧化。
通常，本發明的實施方案提供了含有如下成分的封入膠囊的組合物(1)植物或者合成來源的生物學活性形式的小分子以及(2)任選的至少一種如下成分(a)乳化劑，(b)抗氧化劑以及(c)螯合劑。實施方案更進一步提供了組合物封入膠囊的方法，包括如下步驟(1)獲得植物來源或者合成加工形成的含有生物學活性小分子的材料以及(2)將材料在基本上無氧的環境下封入膠囊。
本發明的上述以及進一步的目的，特征和優點在考慮了下列的具體實施方案的詳細說明后會變得更加顯而易見。
發明詳述本發明的一個實施方案涉及含有來自植物或者合成加工形成的小分子的組合物，以及將組合物封入膠囊使其在較長的時間內保持其生物學活性。植物或者合成來源的生物活性小分子可以包括小分子植物多酚諸如白藜蘆醇，櫟精，漆樹黃酮(Fisetin)，紫鉚因(Butein)，piceatonol，異甘草素(isoliquiritigenin)，特征在于尺寸小以及分子量小，并且能夠通過細胞壁，進入細胞核并能夠改變某些基因控制的機制。優選的小分子植物多酚是白藜蘆醇(分子量228.25)，白藜蘆醇已經顯示出可以比其他的多酚更好的激活Sirtuin-1控制的酶活性。然而，可以采用其他的小分子。白藜蘆醇可以合成加工形成或者獲自自然來源，諸如植物材料，包括葡萄和蓼屬植物。白藜蘆醇優選包括分子的反式立體異構體，也稱作反式-3，4′，5-三羥基茋，具有下式的化學結構 為了較長時間保持生物活性，植物或者合成來源的小分子優選在由于諸如氧化的降解過程將自然生物活性滅活的時間段后依然保持生物活性。例如，白藜蘆醇具有大約1天的半衰期；因此在暴露于周圍條件的2天內以及營養增補劑的處理期間通常將喪失大部分的生物活性。
本發明的另一個實施方案涉及將植物或者合成來源的小分子封入膠囊的方法，包括如下步驟(1)獲得包括植物或者合成來源小分子的材料；(2)在基本上無氧的環境中將材料封入膠囊；以及(3)向材料中任選添加(a)螯合劑，(b)抗氧化劑，和/或(c)乳化劑。
如上所述，包括小分子的材料可以是天然來源的或者合成加工形成的。而且該材料應該是生物學活化的。生物活性是指包括小分子通過細胞壁，進入細胞核并且有利地改變基因控制的酶，尤其是Sirtuin 1酶的能力。生物學活性材料優選是天然來源，即獲自至少一個天然來源，諸如植物(或者其部分，諸如植物的莖或者果實(包括果漿以及果皮))。一個優選的來源是葡萄，諸如歐洲葡萄(Vitis vinifera)，美洲葡萄(Vitis labrusca)以及圓葉葡萄(Vitis rotundifolia)的種子和/或果皮。另一個優選的來源是蓼屬植物(虎杖)以及尤其是1-虎杖(虎杖的一個種)。天然獲得方法包括本領域通常已知的方法，包括提取工藝，其中溶劑用于從天然來源提取小分子。溶劑包括水溶劑，有機溶劑及其混合物。溶劑可以包括但是不局限于醇諸如乙醇。作為具體的實例，提取的小分子材料可以包括植物(或者其部分)的水或者有機溶劑提取物，果汁(例如，葡萄汁)，和從植物或者果汁產生的發酵醪液(例如酒)或者上述的任意混合物。提取的材料可以更進一步包括在提取加工期間天然去除的惰性植物材料。可以對提取的材料進行處理(物理和/或化學方法)去除溶劑并提高小分子的濃度。例如，可以從提取物除去溶劑(例如，經干燥)，獲得干燥粉末。
然后在基本上無氧的環境中將所獲得的包括小分子的材料封入膠囊。本發明所用的短語“基本上無氧的”是指所述環境具有小于大約100ppm的氧氣。理論上，在提取或者形成小分子之后立即進行膠囊化處理并蔽光，熱和氧氣。或者，包括小分子的材料可以儲存在基本上無氧的環境直到封入膠囊。
膠囊化處理包括如下步驟(1)提供包含頭部和主體部分的膠囊；(2)用包括生物活性小分子的材料至少部分填充主體部分；(3)將頭部分軸向放置在主體部分上，使這兩個部分至少部分交疊；以及(4)沿著交疊部分形成液密的(不透氣和液體)密封。
包含膠囊各部分的材料沒有特別的限制。優選膠囊部分包含具有低透氧率的材料。例如，優選膠囊部分具有100μm小于大約165cm3/m2/天的透氧率(由ASTM D3985測量的)，更優選100μm小于大約4cm3/m2/天，最優選100μm小于大約1cm3/m2/天。示范的包含膠囊各部分的材料包含但是不局限于可吸收的材料諸如凝膠，羥丙基甲基纖維素或者淀粉。作為具體的實例，該材料可以包括具有100μm大約3.5cm3/m2/天的透氧率的明膠。所產生的膠囊可以包含硬明膠膠囊或者軟明膠膠囊，透氧率最多大約0.04cm3/膠囊/天(27℃和50％濕度下進行ASTM D3985測量)。
另外，非常優選不透光的膠囊。這可以通過向膠囊材料配方中添加諸如二氧化鈦的顏料實現。鈦二氧化物是惰性的并且具有高分子量，可以防止其在攝取時被吸收到血液循環中。不透光的膠囊可以阻止包含白藜蘆醇的組合物通過光衰退過程諸如光氧化降解。市場上可買到的具有低透氧性的不透光膠囊獲自Capsugel(Greenwood，SC-www.capsugel.com)，商品名Licaps。
用于將包含生物學活性小分子材料的組合物封入膠囊的系統必須在膠囊部分周圍形成液密的(不透氣體和液體)密封。尤其優選的封裝系統和方法公開在WO 01/08631A1中，在此處全文引入作為參考。在該系統和相關方法中，膠囊頭部和膠囊主體部分被置于填充腔中。膠囊主體部分填充有所需的劑量材料，然后通過伸縮將膠囊各部分連接，使得頭部與主體部分部分交疊。將包含溶劑的密封液施加到交疊部分之間的缺口中，干燥膠囊除去溶劑并形狀液密的密封。
對本發明很重要的是膠囊化處理要在基本上無氧的環境下進行。另外，優選膠囊化處理發生在黑暗(基本上無光)的環境。如上述說明，諸如白藜蘆醇的小分子在曝光和/或暴露于氧氣后(例如，由于氧化過程)喪失其生物活性。因此，包含小分子的組合物應該在基本上無氧的環境、包含不透氣以及黑暗的混合和填充腔的系統中混合和/或封入膠囊。這可以通過使用除去氧氣的封閉體系實現。可以使用真空裝置，用吹惰性氣體替換系統內的氧氣或者其組合除去氧氣。例如，該系統可以使用控制的氮氣層清除氧氣。另外，在膠囊化處理期間通過吹氮氣使系統基本上保持無氧。吹氮處理也可用于從每一單獨的膠囊除去氧氣。具體地說，密封之前，向各膠囊施加正壓力用氮氣替換膠囊內存在的所有氧氣。密封后，氮氣泡保留在膠囊中。市場上可買到的能夠在基本上無氧和無光的環境下填充膠囊的膠囊化系統獲自Capsugel(Greenwood，SC-www.capsugel.com)，商品名CPS 1000 Capsule FillingMachine。
以上所述方法產生適用于作為口服可吸收劑量的生物學活性小分子(例如，白藜蘆醇)的封入膠囊的組合物。包含生物學活性小分子的組合物可以包含按重量計高達100％的小分子材料。另外，組合物可以包含用于穩定小分子的生物活性，改善攝取后的生物利用率和/或改善他們的吸收以及通過生物障礙的添加劑。例如，組合物可以包含一或多種(1)螯合劑，(1)抗氧化劑和(3)乳化劑。
可以添加螯合劑通過阻止金屬誘導的氧化更進一步維護小分子材料的生物活性。在金屬諸如鐵的存在下，氧氣可以通過苯酚還原成過氧化氫。過氧化氫隨后可以氧化小分子諸如白藜蘆醇和櫟精。諸如鐵的金屬具有特殊的氧轉移性質，當與過氧化氫相結合時生成更具反應性和破壞性形式的鐵，也就是Fe3+。在Fenton反應中，II價鐵(Fe2+)鹽與過氧化氫反應形成III價鐵(Fe3+)鹽和高度反應性的羥基。
因此，具信，阻斷Fenton反應可以阻斷獲自植物或者合成來源的小分子(例如，白藜蘆醇和櫟精)的氧化。這可以通過使用螯合劑實現。例如，金屬螯合劑諸如NDGA(去甲二氫愈創木酸；1，4-二[3，4-二羥基苯基]2，3-二甲基丁烷)通過過氧化氫起到對抗白藜蘆醇氧化的功能。NDGA部分上通過將更具反應性形式的鐵(Fe3+)轉換到其較低反應性形式(Fe2+)發揮功能。參見Pinto等的“Oxidation of Resveratrol Catalyzed bySoybean Lipoxygenase”，J.Agric.Food Chem.，51(6)(2003)，1653-1657；在此處全文引入作為參考。
植酸(也稱作六磷酸肌醇酯)是一般用作食品防腐劑的鐵結合分子，因為其能夠阻斷鐵-驅動的氧化，類似于NDGA的作用。同樣，植酸起金屬螯合劑的作用即使不能阻止也能使Fenton反應的發生最小化。參見Graf等人的“Phytic AcidA Natural Antioxidant”J Biol.Chem，Aug 1987，26211647-11650；在此處全文引入作為參考。植酸是來自包含玉米，小麥，大米，大豆，芝麻和燕麥的植物原料的整粒和種子的天然來源的材料。螯合劑的量沒有特別限制只要能夠足以結合組合物中的金屬。例如，螯合劑可以按重量計大約0-25％，更優選按重量計大約5-15％，最優選按重量計大約7-10％的量存在。
另外，可以向組合物中添加抗氧化劑不僅給組合物提供附加的生物活性而且可以防止由氧化所引起的組合物的降解。在生物系統中，氧化的正常過程(加電離輻射的較少作用)生成高度反應性的自由基。這些自由基可以很容易與其他分子反應并損害其他分子。有時，身體會利用其對抗感染。有時，損害可以延伸至身體自身的細胞。因此，抗氧化劑的存在可以阻止自由基損害小分子。例如，組合物可以包含諸如類黃酮的酚類抗氧化劑。例如，組合物可以包含諸如櫟精的黃酮醇化合物。除了具有抗氧化劑特性之外，櫟精是顯示類似于白藜蘆醇的酶生物活性(包括sirtuin酶激活)的小分子植物多酚。櫟精也起到一旦攝取即可抑制白藜蘆醇硫酸鹽化的作用。組合物中抗氧化劑的量沒有特別限制。例如，抗氧化劑可以按重量計大約0-50％，更優選按重量計大約15-35％，最優選按重量計大約20-30％的量存在。
可以向組合物中添加乳化劑提高組合物的生物利用率(即，一旦攝取提高身體吸收和利用小分子的能力)。例如，乳化劑可以包含磷脂，諸如卵磷脂(磷脂酰膽堿)。組合物中乳化劑的存在量優選按重量計0-50％，更優選按重量計15-45％％，最優選按重量計25％-40％。
當存在一或多種添加劑時，包含小分子的材料的量優選按重量計大約1-70％，更優選按重量計5-30％，最優選按重量計10-20％。例如，在標準膳食膠囊中，用于口服消耗的白藜蘆醇的有效量優選在大約3到70mg。添加劑可以與包含小分子的材料在密封膠囊以前的任何時間組合。例如，可以提取包含小分子白藜蘆醇材料的材料，干燥，與添加劑混合然后封入膠囊。或者，可以在將含有小分子的材料置于膠囊內前后將添加劑置于膠囊內。
一旦包含小分子的組合物被封入膠囊，所產生的膠囊可以被包裝防止膠囊一旦破裂降解小分子。例如，膠囊可以逐一包在包含氣密隔室的泡罩包裝中。另外，如果膠囊松散地儲藏在氣密的真空-密封容器(例如瓶子)中，可以通過添加能夠保持瓶子內自由氧的量少于大約100ppm或更低的氧氣吸收包，在容器內保持基本上無氧的環境。優選，密封以前對所使用的任何包裝吹氮氣。
本發明包含通過阻止成分的降解，保持存在于含有小分子植物多酚諸如白藜蘆醇的組合物中的組分生物活性的實用、低成本的方法。具體地說，本發明的組合物和方法被認為能夠通過阻止由氧化金屬(即，營養補充劑中天然發現的金屬，或者作為藥草提取物的一部分以痕量提供的金屬，或者制劑，混合用和膠囊化用機器表面的金屬)所引起的氧化保持組合物的生物活性，所述金屬氧化可以觸發或者促進組合物的氧化(腐敗)并破壞成分的生物活性。這通過添加螯合劑穩定所述的組分抗金屬誘導的氧化，以及如上所述，在基本上無氧的環境中對營養補充劑進行加工和膠囊化進一步得以實現。
存在于本發明封入膠囊的組合物中的小分子在小分子的正常生命周期之后還可保持顯著長時間段的生物活性。例如，在周圍環境下，白藜蘆醇的半衰期大約是1天。然而，在制造和運輸營養增補劑的過程中，在膠囊化后通常要幾個星期才能使組合物到達消費者的手中。本發明的實施方案形成了包含在達到消費者手中后依然保持生物學活性的小分子的營養增補劑。尤其是，形成了包含具有酶生物活性的白藜蘆醇的營養增補劑。優選，小分子在封入膠囊后保持生物學活化至少大約4個月，更優選在封入膠囊后保持生物學活性至少大約8個月，最有選至少大約1年或者無止境。
來源于植物來源或者合成形成的生物學活性小分子以及包含生物學活性小分子的組合物提供了多種健康益處。例如，生物學活性小分子具有酶活性，激活人“長壽基因”。研究已經鑒定了一類由幾乎所有的活生物共有的調節基因。這些基因起反饋系統的作用提高脅迫時代，諸如干旱或者饑荒時代的存活率。一旦激活，這些長壽基因誘導細胞水平的防御改變，諸如減慢代謝以及提高細胞呼吸，有助于身體適應有害的環境。一種限制提供給生物體卡路里的特定的脅迫通過激活稱作sirtuins(一族脫乙酰化酶)酶(或者蛋白質)延長很多物種的壽命。
研究已經顯示sirtuins(沉默信息調節酶(Silent InformationRegulator enzymes)由于能夠控制生物體諸如酵母，蛔蟲和果蠅的老化速率作為長壽基因。具體地說，已經顯示與人體的Sirtuin 1同源的酵母細胞中的SIR2(沉默信息調節基因2)在生物脅迫條件下被激活。酵母中，老化與SIR2活性直接相關。SIR2的過表達提高DNA的穩定性，提高rDNA重組的沉默和抑制，加速細胞修復以及提高母-子細胞復制壽命。
有7種人sirtuins，已經被命名為Sirtuin 1至Sirtuin 7。Sirtuin 1(SIRT1)位于核中，是與SIR2具有最大同源性的人Sirtuin。人sirtuins可以作為保護細胞以及提高細胞存活率的保護酶。例如SIRT1已經顯示可以抑制正常參與抑制腫瘤生長以及策動細胞死亡(細胞凋亡)的p53酶系統。抑制腫瘤抑制基因的活性可能不能簡單地認為是有益的，直到認識到SIRT1抑制阻止早老化的周期和正常的細胞凋亡。通過抑制p53活性，當細胞DNA受到損傷或者脅迫時，SIRT1阻止早老化周期以及正常誘導的細胞凋亡，由此給細胞充足的時間修復所有的損傷以及阻止不必要的細胞死亡。
體外以及體內研究已經確定諸如白藜蘆醇的小分子能夠激活SIR2。在酵母中，白藜蘆醇降低rDNA重組以及延長壽命，類似于卡路里限制過程中發生的現象。而且諸如白藜蘆醇小分子已經顯示可以激活人細胞中的SIRT1，提高輻射脅迫的細胞的存活率。因此，保持小分子的生物活性可以使存在于包含利用以上所述方法形成的和封入膠囊的組合物的營養補充劑中的劑量激活長壽基因，也就是sirtuin酶SIR2以及SIRT1。人體內，SIRT1酶的活化提高人細胞的存活率抑制細胞凋亡。
包含小分子的膠囊化的組合物適用于制造營養增補劑以及處方藥物。
實施例經乙醇從歐洲葡萄以及虎杖獲得白藜蘆醇形式的小分子。除去乙醇，所得的提取物包含大約25％的歐洲葡萄果皮白藜蘆醇以及25％虎杖白藜蘆醇，其余包含無白藜蘆醇的惰性植物材料。提取物中白藜蘆醇的生物活性利用SIRT1熒光活性分析/Drug Discovery Kit AK-555(獲自BiomolResearch Laboratories，Inc.Plymouth Meeting，PA；www.biomol.com)進行證實。提取物保持在氮氣環境中并被加到包含大約按重量計25％櫟精；按重量計33％卵磷脂以及9％植酸(米糠提取物的形式)的混合物中。組合物的剩余部分包含大約按重量計33％的白藜蘆醇提取物。將所獲得的果漿置入膠囊填充機器中。將獨立的劑量封入用二氧化鈦著色的明膠膠囊中(Licaps膠囊，獲自Capsugel；Greenwood，SC；www.capsugel.com)。利用不斷吹氮氣的膠囊填充機器(Capsugel CFS 1000膠囊填充密封機，獲自Capsugel；Greenwood，SC；www.capsugel.com)在基本上無氧環境中將所述劑量封入膠囊。每一獲得的膠囊包含至少15mg白藜蘆醇，100mg卵磷脂，75毫克櫟精以及25mg植酸。這些膠囊樣品在周圍環境中儲藏大約8個月。通過確定每一樣品是否可以激活sirtuin酶尤其是樣品是否激活SIRT1催化活性檢驗樣品的生物活性。封入膠囊之后4個月和8個月檢驗樣品。利用SIRT1熒光活性分析/Drug Discovery Kit AK-555(獲自BiomolResearch Laboratories，Inc；Plymouth Meeting，PA；xyww.biomol.com)進行檢驗。檢驗后，確定樣品內包含的白藜蘆醇具有生物活性，激活SIRT1活性，與不存在白藜蘆醇相比生成直至大約8倍的酶活性激活。同地，檢驗櫟精的生物活性，并確定封入膠囊的櫟精保持的生物活性(即，與不存在櫟精相比激活SIRT1活性的能力)。
本發明包括制造并保持最大生物活性(包含激活sirtuin酶的能力)以及植物多酚的結構形式及其他營養補充劑成分抗降解(例如，經由氧化)的多種方法，包含但不限于原料的制造以及將其置入膠囊中。上述方法可以低成本生成包含濃縮白藜蘆醇的膠囊化組合物，所述濃縮白藜蘆醇具有類似于研究級白藜蘆醇或者密封酒瓶中存在的白藜蘆醇的特性。本發明可用于制造可以作為營養增補劑攝取的膠囊制劑。
雖然已經詳細地并且參考具體的實施方案對本發明進行了描述，對本領域技術人員顯而易見的是可以對其進行多種改變和修改，只要不背離本發明的精神和范圍。例如，膠囊可以是任一的形狀和大小，并且被制成易碎的從而可以從膠囊取出組合物。而且膠囊材料可以包含具有低透氧率的任一材料。包含小分子的組合物可以進一步以干燥粉末，液體懸浮液，凝膠或者漿液的形式存在。另外，該制劑可以包含其他適用于營養補充劑中的添加劑，填料等，只要該添加劑不降解包含小分子的材料的生物活性或者生物利用率，此外，具有酶活性的其他小分子多酚(包含激活sirtuins的催化活性)可以利用上述方法封入膠囊，包含但不限于櫟精，漆樹黃酮，紫鉚因，piceatonol以及異甘草素。因此，本發明旨在包括在權利要求書及其等價部分范圍內的本發明的修改以及變化。
權利要求
1.將組合物封入膠囊的方法，包括如下步驟(a)獲得包含生物學活性小分子的材料；以及(b)在基本上無氧的環境中將生物學活性小分子封入膠囊。
2.權利要求1的方法，其中的生物學活性小分子包括白藜蘆醇。
3.權利要求2的方法，進一步包括(c)將白藜蘆醇與螯合劑，抗氧化劑和乳化劑至少之一組合。
4.權利要求2的方法，其中步驟(a)包括(a.1)利用溶劑提取白藜蘆醇，其中所述溶劑包含水溶劑，有機溶劑及其混合物。
5.權利要求2的方法，其中步驟(b)包括(b.1)將包含頭部和主體部分的膠囊容納在氣密填充腔內；(b.2)用包含生物活性白藜蘆醇的組合物至少部分填充主體部分；(b.3)將頭部軸向放置在主體部分上，使這兩個部分至少部分交疊；以及(b.4)沿著交疊部分形成液密的密封。
6.權利要求5的方法，其中膠囊部分包含100μm具有小于大約165cm3/m2/天的透氧率(通過ASTM D3985測量的)的材料。
7.權利要求5的方法，其中膠囊部分包含100μm具有小于大約4cm3/m2/天的透氧率(通過ASTM D3985測量的)的材料。
8.權利要求5的方法，其中膠囊部分包含100μm具有小于大約1cm3/m2/天的透氧率(通過ASTM D3985測量的)的材料。
9.權利要求5的方法，其中膠囊部分包含明膠，羥丙基甲基纖維素和淀粉至少之一。
10.權利要求5的方法，其中步驟(b)更進一步包括(b.5)在所述填充腔內形成氮氣層從而形成基本上無氧的環境。
11.權利要求4的方法，其中步驟(b)更進一步包括(b.6)在密封步驟之前在膠囊內形成氮氣泡。
12.權利要求2的方法，其中步驟(a)更進一步包括(a.1)從選自歐洲葡萄和蓼屬的天然來源獲得所述白藜蘆醇。
13.包含生物學活性小分子，螯合劑，抗氧化劑和乳化劑的封入膠囊的組合物，其中小分子在基本上無氧的環境中封入膠囊。
14.權利要求13的封入膠囊的組合物，其中所述生物學活性小分子包含白藜蘆醇。
15.權利要求14的封入膠囊的組合物，其中所述螯合劑以按重量計大約5-15％的量存在，所述抗氧化劑以按重量計大約15-35％的量存在，所述乳化劑以按重量計大約15-45％的量存在，以及所述白藜蘆醇以按重量計大約5-30％的量存在。
16.權利要求14的封入膠囊的組合物，其中所述螯合劑以按重量計大約7-10％的量存在，所述抗氧化劑以按重量計大約20-30％的量存在，所述乳化劑以按重量計大約25-40％的量存在，以及所述白藜蘆醇以按重量計大約10-20％的量存在。
17.權利要求14的封入膠囊的組合物，其中所述螯合劑包含能夠阻斷白藜蘆醇金屬誘導的氧化的化合物。
18.權利要求17的封入膠囊的組合物，其中所述螯合劑包含植酸和NDGA至少之一。
19.權利要求14的封入膠囊的組合物，其中所述抗氧化劑包含酚類抗氧化劑。
20.權利要求19的封入膠囊的組合物，其中所述酚類抗氧化劑包含櫟精。
21.權利要求14的封入膠囊的組合物，其中所述乳化劑包含卵磷脂(磷脂酰膽堿)。
22.權利要求14的封入膠囊的組合物，其中所述白藜蘆醇獲自天然來源。
23.權利要求14的封入膠囊的組合物，其中所述生物活性包含激活Sirtuin 1酶。
24.經如下方法產生的營養補充劑(a)獲得生物學活性白藜蘆醇材料；(b)將包含頭部和主體部分的膠囊容納在基本上無氧環境的填充腔內；(c)用生物活性的白藜蘆醇材料至少部分填充主體部分；(d)將頭部軸向放置在主體部分上，使這兩個部分至少部分交疊；以及(e)沿著交疊部分形成液密的密封。
25.營養補充劑，包括含有生物學活性形式的白藜蘆醇的封入膠囊的組合物，其中所述白藜蘆醇在封入膠囊之后保持至少4個月的生物活性。
26.權利要求25的營養補充劑，其中所述生物活性包含激活Sirtuin 1酶活性。
27.封入膠囊的組合物，包含生物學活性小分子以及下列成分至少之一螯合劑，抗氧化劑和乳化劑，其中所述小分子能夠通過細胞壁，進入細胞核并改變位于核內基因控制的酶。
28.權利要求27的封入膠囊的組合物，其中所述基因-控制的酶是Sirtuin 1酶。
全文摘要
本發明提供了包含生物學活性形式的植物或者合成的小分子，諸如白藜蘆醇和櫟精的組合物。小分子可以獲自天然來源諸如葡萄或者虎杖(植物學名稱蓼屬)可以加工組合物使得小分子基因控制的生物活性得以保持。具體地說，用于封入膠囊的原料必須在封入膠囊前后顯示生物活性并在無氧(氮氣)，暗光環境中加工。組合物可以更進一步包含作為抗氧化劑穩定劑的金屬螯合劑，抗氧化劑和乳化劑至少之一。該組合物可用于形成營養補充劑或藥物。
文檔編號A23L1/30GK1956733SQ200580010754
公開日2007年5月2日 申請日期2005年3月28日 優先權日2004年4月7日
發明者比爾·薩爾迪, 斯坦·索洛蒙森 申請人:白藜蘆醇合伙人有限責任公司