專利名稱：具有改良生長(zhǎng)特性的植物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般地涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，并涉及改良植物生長(zhǎng)特性的方法。更具體地，本發(fā)明涉及通過增加植物中Na+-K+協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(HKT)或其同源物的活性來改良植物生長(zhǎng)特性尤其是產(chǎn)率的方法。本發(fā)明還涉及具有增加HKT活性的植物，這些植物相對(duì)于相應(yīng)的野生型植物，具有改良的生長(zhǎng)特性。本發(fā)明還提供在發(fā)明方法中有用的構(gòu)建體。
背景技術(shù)：
鑒于不斷增長(zhǎng)的世界人口和農(nóng)業(yè)可耕種土地面積的縮小，提高農(nóng)業(yè)效率和增加園藝植物的多樣性一直是農(nóng)業(yè)研究的主要目標(biāo)。農(nóng)作物和園藝改良的常規(guī)方法是利用選育技術(shù)來鑒定具有期望特性的植物。然而，這樣的選育技術(shù)有幾個(gè)缺點(diǎn)，即這些技術(shù)通常是勞動(dòng)密集型的，并且產(chǎn)生通常含有異源遺傳組分的植物，這些遺傳組分并非總是產(chǎn)生從親本植物傳遞的期望性狀。分子生物學(xué)的進(jìn)展已經(jīng)允許人類改造動(dòng)物和植物的種質(zhì)(germplasm)。植物基因工程需要分離和操作遺傳物質(zhì)(通常為DNA或RNA的形式)及隨后將該遺傳物質(zhì)引入植物。這種技術(shù)導(dǎo)致開發(fā)具有多種改良的經(jīng)濟(jì)、農(nóng)業(yè)或園藝性狀的植物。具有特別經(jīng)濟(jì)利益的性狀是生長(zhǎng)特性如高產(chǎn)。產(chǎn)率通常被定義為來自農(nóng)作物經(jīng)濟(jì)價(jià)值的可測(cè)量產(chǎn)出。其可以根據(jù)數(shù)量和/或質(zhì)量來定義。產(chǎn)率直接依賴于幾種因素，例如器官的數(shù)量和大小，植物構(gòu)造(例如分枝數(shù))，種子產(chǎn)量及更多的因素。根的發(fā)育，營養(yǎng)吸收和脅迫耐受性也是決定產(chǎn)率的重要因素?？梢酝ㄟ^優(yōu)化上述因素之一來增加農(nóng)作物的產(chǎn)率。
植物的一個(gè)主要的非生物脅迫因素是鹽分。鹽脅迫，特別是Na+脅迫對(duì)若干細(xì)胞過程具有負(fù)面作用。除包括膜功能不良的高滲損傷之外，高鈉濃度還可能干擾Na+敏感性酶并可能導(dǎo)致失常的離子轉(zhuǎn)運(yùn)(有關(guān)細(xì)胞和分子應(yīng)答的綜述，參見Hasegawa等，2000.Annu.Rev.Plant Physiol.PlantMol.Biol.51，463-499)。另一方面，鉀是一種重要的營養(yǎng)素，對(duì)于蛋白質(zhì)上負(fù)電荷的中和、K+依賴性酶的激活、細(xì)胞膨壓及滲透平衡的維持等都是必要的。Na+和K+轉(zhuǎn)運(yùn)彼此相互關(guān)聯(lián)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示兩種離子都使用同樣的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，而且植物可以通過吸收鈉來代償鉀的不足(Pitman，1967.Nature 216，1343-1344；Pitman等，1968.Aust.J.Biol.Sci 21，871-881)。非電壓門控單價(jià)陽離子通道(Voltage-insensitive monovalent-cation channel)(VIC)在植物的Na+和K+吸收方面起著重要作用(White，1999.Trends PlantSci.4，245-246)。此外，已經(jīng)在擬南芥(Arabidopsis)中描述了幾種K+吸收蛋白質(zhì)(Maser等，2001.Plant Physiol.1261646-1667)AKT/KAT型通道蛋白、HAK/AT/KUP樣轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和HKT型轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。植物HKT蛋白是植物陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白超家族的一部分，該超家族也包括酵母Trk蛋白和原核生物KdpA、KrkH和KtrB蛋白(Schachtman&Liu，1999.Trends Plant Sci.4，281-286)。
已在擬南芥中證明跨膜蛋白AtHKT1也參與根及鹽耐受情況下的Na+吸收(Uozumi等，2000.Plant Physiol.122，1249-1259；Rus等，2001.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 98，14150-14155)；該蛋白在稻中的對(duì)應(yīng)物(OsHKT1)在鉀消耗的條件下執(zhí)行相似的功能(Garciadeblás等，2003.Plant J.34，788-801)。還報(bào)道AtHKT1對(duì)于從芽到根的Na+再循環(huán)很重要，由此促成了植物的鹽耐受(Berthomieu等，2003.EMBO J.22，2004-2014)。在稻中，已經(jīng)鑒定和表征了9類HKT轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Garciadeblás等，2003.Plant J.34，788-801，Horie等，2001.Plant J.27，129-138)。此外，稻HKT1不僅介導(dǎo)Na+和K+轉(zhuǎn)運(yùn)，而且還介導(dǎo)其他堿性陽離子的轉(zhuǎn)運(yùn)(Golldack等，2002.PlantJ.31，529-542)。在稻中對(duì)高和低HKT1蛋白水平的影響進(jìn)行了研究(Golldack等，2002)就吸收或外排鈉的能力而言，鹽耐受品系Pokkali和鹽敏感品系IR29彼此差異顯著。高濃度的堿性離子在兩種品系中均抑制OsHKT1表達(dá)，但是與鹽耐受品系Pokkali相比，這種抑制作用在IR29品系的根和葉脈管組織中不太突出。
有關(guān)HKT1基因在植物中異源表達(dá)的數(shù)據(jù)不多。Schroeder和Schachtman(WO96/05722)公開了一種小麥HKT1蛋白，并提出通過操縱這種HKT1蛋白的表達(dá)來利用其調(diào)節(jié)環(huán)境中的鹽吸收，產(chǎn)生可用于脫鹽的植物(通過增強(qiáng)HKT1表達(dá)增加鈉吸收)，或產(chǎn)生對(duì)毒性堿金屬具有抗性的植物(通過抑制HKT1表達(dá)降低或抑制吸收)。然而，如Laurie等所示(PlantJ.32，139-149，2002)，過表達(dá)HKT1植物的表型與對(duì)照植物沒有多大不同在NaCl脅迫條件下，HKT1過表達(dá)品系的鮮重下降至與對(duì)照植物相似的程度，而且，與對(duì)照相比，過表達(dá)品系根中的Na+含量也沒有顯著增加。Laurie等還證明實(shí)現(xiàn)HKT1表達(dá)下調(diào)的條件相當(dāng)復(fù)雜。迄今為止，與HKT1有關(guān)的現(xiàn)有技術(shù)主要集中在陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)和離子穩(wěn)態(tài)方面，而且多數(shù)研究是在酵母或爪蟾(Xenopus)卵母細(xì)胞中進(jìn)行的，這些結(jié)果也許不能完全反映植物中的HKT1功能。
在擬南芥(Arabidopsis thaliana)中AtHKT1由單個(gè)基因編碼。據(jù)認(rèn)為此基因存在于所有植物基因組中，有時(shí)可能作為小的基因家族存在，例如在稻中即如此。AtHKT1基因于根中表達(dá)，其他組織中的表達(dá)程度較小(Uozumi等，2000)。已經(jīng)利用序列分析和疏水性分析構(gòu)建了一種HKT型蛋白的三維模型(Durell等，Biophys.J.77，775-788，1999；Durell和Guy，Biophys.J.77，789-807，1999)表明該蛋白是疏水性的，并包含一種核心結(jié)構(gòu)，該核心結(jié)構(gòu)為側(cè)接形成孔的4個(gè)環(huán)的8個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域(換言之四個(gè)單位的跨膜結(jié)構(gòu)域-孔形成結(jié)構(gòu)域-跨膜結(jié)構(gòu)域)，預(yù)測(cè)每個(gè)孔形成結(jié)構(gòu)域部分地定位于膜內(nèi)(見圖1)并含有保守的甘氨酸或絲氨酸殘基。野生型AtHKT1的異源表達(dá)揭示該蛋白選擇性地介導(dǎo)Na+轉(zhuǎn)運(yùn)，而K+轉(zhuǎn)運(yùn)程度較小(Uozumi等，2000)。來自不同植物物種的其他HKT蛋白顯示出Na+/K+同向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性。認(rèn)為離子選擇性是由第一孔形成結(jié)構(gòu)域(或P環(huán))決定的。將AtHKT1基因中的Ser-68突變?yōu)镚ly能夠恢復(fù)K+的滲透性。在其他HKT蛋白中也發(fā)現(xiàn)了對(duì)應(yīng)于AtHKT1中突變Gly-68的甘氨酸殘基；已證明此Gly是發(fā)揮離子選擇性濾孔作用的保守“GYG”基序中的第一個(gè)Gly(M_ser等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 99，6428-6433，2002)。除了Na+和K+，證明HKT型蛋白還轉(zhuǎn)運(yùn)其他陽離子如Rb+、Li+和Cs+(Golldack等，2002)。除了擬南芥，已從多種其他植物物種中分離到HKT蛋白，包括稻、小麥、赤桉(Eucalyptus camaldulensis)、大麥(Hordeum vulgare)和冰葉日中花(Mesembryanthemum crystallinum)。
現(xiàn)已驚奇地發(fā)現(xiàn)，與相應(yīng)野生型植物相比，增加植物中HKT蛋白或其同源物的活性使植物具有改良的生長(zhǎng)特性，特別是無脅迫條件下的生長(zhǎng)特性。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，提供了改良植物生長(zhǎng)特性的方法，其包括增加植物中HKT蛋白或其同源物的活性。任選的后續(xù)步驟可以選擇具有改良生長(zhǎng)特性的植物有利地，執(zhí)行本發(fā)明的方法使植物具有多種改良的生長(zhǎng)特性，尤其是增加的產(chǎn)率，特別是種子產(chǎn)率。
本文所定義術(shù)語“增加的產(chǎn)率”意指相對(duì)于相應(yīng)的野生型植物，在以下任一或多個(gè)方面的增加(i)植物的一個(gè)或多個(gè)部分，特別是地上(可收獲)部分增加的生物量(重量)、增加的根生物量或者任何其他可收獲部分增加的生物量；(ii)增加的種子產(chǎn)率，包括種子生物量(種子重量)的增加，并且可以是每株植物種子重量或以單個(gè)種子為基礎(chǔ)的增加；(iii)增加的每個(gè)圓錐花序的花(小穗florets)的數(shù)量；(iv)增加的(飽滿)種子數(shù)量；(v)增加的種子大小，其也可能影響種子的組成；(vi)增加的種子體積，其也可能影響種子的組成(包括油、蛋白質(zhì)和糖類總含量以及組成)；(vii)增加的單個(gè)種子的面積；(viii)增加的單個(gè)種子的長(zhǎng)度和/或?qū)挾龋?ix)增加的收獲指數(shù)，其表示為可收獲部分如種子的產(chǎn)率與總生物量的比值；和(x)增加的千粒重(TKW)，其是從所計(jì)的飽滿種子數(shù)和它們的總重量推斷出的。增加的TKW可能源自增加的種子大小和/或種子重量。增加的TKW可能源自增加的胚大小和/或胚乳大小。
以玉米為例，產(chǎn)率的增加可以表現(xiàn)為以下的一項(xiàng)或多項(xiàng)每公頃或每英畝植物數(shù)量的增加，每株植物穗數(shù)的增加，行數(shù)、行粒數(shù)、粒重量、千粒重、穗長(zhǎng)度/直徑的增加等等的增加。以稻為例，產(chǎn)率的增加可以表現(xiàn)為以下一項(xiàng)或多項(xiàng)的增加每公頃或每英畝植物的數(shù)量，每株植物的圓錐花序數(shù)，每個(gè)圓錐花序的小穗數(shù)，每個(gè)圓錐花序的花數(shù)，種子飽滿率的增加，千粒重的增加等等。產(chǎn)率的增加也可能產(chǎn)生改變的構(gòu)造，或者可以作為改變的構(gòu)造的結(jié)果發(fā)生。
根據(jù)優(yōu)選的方面，執(zhí)行本發(fā)明的方法產(chǎn)生具有增加的產(chǎn)率特別是增加的生物量和/或增加的種子產(chǎn)率的植物。因此，本發(fā)明提供了改良植物生長(zhǎng)特性特別是增加種子產(chǎn)率的方法，該方法包括增加植物中HKT蛋白或其同源物的活性。
由于本發(fā)明的改良植物具有增加的產(chǎn)率，相對(duì)于相應(yīng)野生型植物在它們生命周期相應(yīng)階段的生長(zhǎng)速率而言，這些植物可能呈現(xiàn)增加的生長(zhǎng)速率(在至少它們部分的生命周期中)。增加的生長(zhǎng)速率可能是對(duì)植物的一個(gè)或多個(gè)部分或一種或多種細(xì)胞類型(包括種子)特異性的，或者可能基本上遍及整個(gè)植物。具有增加生長(zhǎng)速率的植物可能具有較短的生命周期。植物的生命周期意味著從成熟干種子成長(zhǎng)至該植物產(chǎn)生與類似于起始的材料的成熟干種子的階段所需的時(shí)間。生命周期可能受到諸如早期活力、生長(zhǎng)速率、開花時(shí)間和種子成熟的速度等因素的影響。生長(zhǎng)速率的增加可能出現(xiàn)在植物生命周期的一個(gè)或多個(gè)階段，或者出現(xiàn)在基本上整個(gè)植物生命周期的過程中。在植物生命周期的早期階段，生長(zhǎng)速率的增長(zhǎng)可能表現(xiàn)為增強(qiáng)的活力。生長(zhǎng)速率的增加可以改變植物的收獲周期，使植物能夠比其他可能的情況更晚播種和/或更快收獲。如果生長(zhǎng)速率充分增加，可能允許播種同種植物物種更多的種子(例如完全在一個(gè)常規(guī)的生長(zhǎng)期內(nèi)，播種和收獲稻類植物、接著播種和收獲更多的稻類植物)。同樣的，如果生長(zhǎng)速率充分地增長(zhǎng)，可能允許播種不同植物物種更多的種子(例如播種和收獲稻類植物，隨后，如播種和任選的收獲大豆、馬鈴薯或任何其他適合的植物)。在一些植物的情況下也可能從同一根莖收獲增加的次數(shù)。改變植物的收獲周期可能會(huì)導(dǎo)致每英畝年生物量產(chǎn)量的增加(這是由于(比方說在一年中)任何特定植物可以生長(zhǎng)和收獲次數(shù)的增加)。與野生型對(duì)應(yīng)物相比，生長(zhǎng)速率的增加還可能使能夠在更廣闊的地域栽培轉(zhuǎn)基因植物，因?yàn)榉N植農(nóng)作物的地域限制通常由種植時(shí)(早季)或收獲時(shí)(晚季)不利的環(huán)境條件所決定。如果縮短收獲周期，可以避免這類不利條件。可以通過來自生長(zhǎng)曲線的多種參數(shù)確定生長(zhǎng)速率，這類參數(shù)可以是T-Mid(植物達(dá)到其最大大小的50％所需時(shí)間)和T-90(植物達(dá)到其最大大小90％所需時(shí)間)等等。
執(zhí)行本發(fā)明的方法賦予植物增加的生長(zhǎng)速率。因此，本發(fā)明提供了增加植物生長(zhǎng)速率的方法，該方法包括增加植物中HKT蛋白或其同源物的活性。
無論植物處于無脅迫條件下，或植物相對(duì)于對(duì)照植物暴露于多種脅迫下，都發(fā)生產(chǎn)率和/或生長(zhǎng)速率的增加。因而應(yīng)當(dāng)理解，在本發(fā)明中生產(chǎn)率和/或生長(zhǎng)速率的增加不依賴生長(zhǎng)條件，不管是脅迫條件或無脅迫條件。通常植物通過更加緩慢的生長(zhǎng)來應(yīng)答接觸的脅迫。在重度脅迫條件下，植物甚至可以完全停止生長(zhǎng)。另一方面，輕度脅迫在本文中定義為當(dāng)植物接觸時(shí)不導(dǎo)致植物完全停止生長(zhǎng)喪失重新開始生長(zhǎng)能力的任何脅迫。由于耕作方法(灌溉、施肥、殺蟲劑處理)的發(fā)展，栽培的農(nóng)作物植物常常不會(huì)遇到重度脅迫。因此，由輕度脅迫誘導(dǎo)的受損的生長(zhǎng)成為農(nóng)業(yè)中不期望的要素。輕度脅迫是植物可能接觸的典型脅迫。這些脅迫可以是植物接觸的日常生物的和/或非生物的(環(huán)境的)脅迫。典型的非生物的或環(huán)境的脅迫包括由反常的熱或冷/冰凍溫度產(chǎn)生的溫度脅迫；鹽脅迫；水脅迫(干旱或過量的水)。非生物脅迫也可以由化學(xué)物質(zhì)引起。生物的脅迫一般是由病原體如細(xì)菌、病毒、真菌和昆蟲引起的那些脅迫。本文所用術(shù)語“無脅迫條件”是指不超出植物每天遭遇的氣候或其他非生物脅迫條件的那些環(huán)境條件。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道對(duì)于給定的地理位置的正常土壤條件和氣候條件。
可以在任何植物中有利地修飾上述生長(zhǎng)特性。
本文所用術(shù)語“植物”包括整個(gè)植物、植物的祖先和后代以及植物的部分，包括種子、芽、莖、葉、根(包括塊莖)、花以及組織和器官。術(shù)語“植物”還包括植物細(xì)胞、懸浮培養(yǎng)物、愈傷組織、胚、分生區(qū)、配子體、孢子體、花粉和小孢子。術(shù)語“植物”還包括人工干預(yù)修飾的植物、植物部分或植物細(xì)胞，如突變或轉(zhuǎn)化的植物或植物部分，這些突變或轉(zhuǎn)化的植物或植物部分包括目的基因/核酸或目的基因/核酸的特定修飾。
尤其可用于本發(fā)明方法中的植物包括藻類、蕨類植物以及屬于植物界(Viridiplantae)超家族的所有植物，尤其是單子葉植物和雙子葉植物，包括選自如下物種的飼料或飼料豆科植物、觀賞植物、糧食作物、喬木或灌木秋葵屬物種(Abelmoschus spp.)、槭樹屬物種(Acer spp.)、獼猴桃屬物種(Actinidia spp.)、冰草屬物種(Agropyron spp.)、蔥芹屬物種(Alliumspp.)、莧屬物種(Amaranthus spp.)、鳳梨(Ananas comosus)、番荔枝屬物種(Annona spp.)、芹菜(Apium graveolens)、擬南芥、落花生屬物種(Arachis spp.)、木波羅屬物種(Artocarpus spp.)、石刁柏(Asparagusofficinalis)、燕麥(Avena sativa)、陽桃(Averrhoa carambola)、冬瓜(Benincasa hispida)、巴西栗(Bertholletia excelsea)、甜菜(Betavulgaris)、蕓苔屬物種(Brassica spp.)、Cadaba farinosa、大葉茶(Camelliasinensis)、美人蕉(Canna indica)、辣椒屬物種(Capsicum spp.)、番木瓜(Carica papaya)、大果假虎刺(Carissa macrocarpa)、紅花(Carthamustinctorius)、山核桃屬物種(Carya spp.)、栗屬物種(Castanea spp.)、苦苣(Cichorium endivia)、樟屬物種(Cinnamomum spp.)、西瓜(Citrulluslanatus)、柑橘屬物種(Citrus spp.)、椰子屬物種(Cocos spp.)、咖啡屬物種(Coffea spp.)、Cola spp.、芋(Colocasia esculenta)、榛屬物種(Corylus spp.)、山楂屬物種(Crataegus spp.)、香瓜屬物種(Cucumisspp.)、南瓜屬物種(Cucurbita spp.)、菜薊屬物種(Cynara spp.)、胡蘿卜(Daucus carota)、山馬蟥屬物種(Desmodium spp.)、龍眼(Dimocarpuslongan)、薯蕷屬物種(Dioscorea spp.)、柿樹屬物種(Diospyros spp.)、稗屬物種(Echinochloa spp.)、穇子(Eleusine coracana)、枇杷(Eriobotryajaponica)、紅仔果(Eugenia uniflora)、蕎麥屬物種(Fagopyrum spp.)、山毛櫸屬物種(Fagus spp.)、無花果(Ficus carica)、金桔屬物種(Fortunellaspp.)、草莓屬物種(Fragaria spp.)、銀杏(Ginkgo biloba)、大豆屬物種(Glycine spp.)、陸地棉(Gossypium hirsutum)、向日葵屬物種(Helianthus spp.)、木槿屬物種(Hibiscus spp.)、大麥屬物種(Hordeumspp.)、甘薯(Ipomoea batatas)、核桃屬物種(Juglans spp.)、萵苣(Lactucasativa)、山黧豆屬物種(Lathyrus spp.)、浮萍屬物種(Lemna spp.)、兵豆(Lens culinaris)、亞麻(Linum usitatissimum)、荔枝(Litchichinensis)、百脈根屬物種(Lotus spp.)、棱角絲瓜(Luffa acutangula)、羽扇豆屬物種(Lupinus spp.)、硬皮豆屬物種(Macrotyloma spp.)、西印度櫻桃(Malpighia emarginata)、蘋果屬物種(Malus spp.)、曼密蘋果(Mammea americana)、芒果(Mangifera indica)、木薯屬物種(Manihotspp.)、人心果(Manilkara zapota)、紫苜蓿(Medicago sativa)、草木樨屬物種(Melilotus spp.)、薄荷屬物種(Mentha spp.)、苦瓜屬物種(Momordicaspp.)、黑桑(Morus nigra)、芭蕉屬物種(Musa spp.)、煙草屬物種(Nicotianum spp.)、木犀欖屬物種(Olea spp.)、仙人掌屬物種(Opuntiaspp.)、Ornithopus spp.、稻屬物種(Oryza spp.)、稷(Panicum miliaceum)、雞蛋果(Passiflora edulis)、歐防風(fēng)(Pastinaca sativa)、鱷梨屬物種(Perseaspp.)、香芹(Petroselinum crispum)、菜豆屬物種(Phaseolus spp.)、刺葵屬物種(Phoenix spp.)、酸漿屬物種(Physalis spp.)、松屬物種(Pinusspp.)、阿月渾子(Pistacia vera)、豌豆屬物種(Pisum spp.)、早熟禾屬物種(Poa spp.)、楊屬物種(Populus spp.)、牧豆樹屬物種(Prosopisspp.)、李屬物種(Prunus spp.)、番石榴屬物種(Psidium spp.)、石榴(Punica granatum)、西洋梨(Pyrus communis)、櫟屬物種(Quercusspp.)、蘿卜(Raphanus sativus)、波葉大黃(Rheum rhabarbarum)、茶藨子屬物種(Ribes spp.)、懸鉤子屬物種(Rubus spp.)、甘蔗屬物種(Saccharum spp.)、接骨木屬物種(Sambucus spp.)、黑麥(Secalecereale)、Sesamum spp.、茄屬物種(Solanum spp.)、兩色蜀黍(Sorghumbicolor)、菠菜屬物種(Spinacia spp.)、蒲桃屬物種(Syzygium spp.)、酸豆(Tamarindus indica)、可可樹(Theobroma cacao)、車軸草屬物種(Trifolium spp.)、Triticosecale rimpaui、小麥屬物種(Triticum spp.)、越桔屬物種(Vaccinium spp.)、野豌豆屬物種(Vicia spp.)、豇豆屬物種(Vigna spp.)、葡萄屬物種(Vitis spp.)、玉蜀黍(Zea mays)、北美洲野生稻(Zizania palustris)、棗屬物種(Ziziphus spp.)等等。
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的特征，所述植物為農(nóng)作物植物，如大豆、向日葵、蕓苔、苜蓿、油菜籽或棉花。本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的植物是單子葉植物，如甘蔗，更優(yōu)選的植物是谷類，如稻、玉米、小麥、粟、大麥、黑麥、燕麥或高粱。
可以通過提高HKT多肽的水平，例如通過提高編碼HKT蛋白的核苷酸水平來增加HKT蛋白或其同源物的活性。備選地，當(dāng)HKT水平?jīng)]有改變，或者甚至當(dāng)HKT水平降低的時(shí)候，其活性也可以增加。這種情況出現(xiàn)在多肽固有特性發(fā)生改變的時(shí)候，例如，通過制備比野生型多肽更具活性的突變體或選擇這樣的變體。
本文定義的術(shù)語“HKT蛋白或其同源物”指具有HKT活性的多肽且該多肽包括四個(gè)單位的跨膜結(jié)構(gòu)域-孔形成結(jié)構(gòu)域-跨膜結(jié)構(gòu)域。優(yōu)選的，HKT蛋白具有SEQ ID NO2所代表的序列，或?yàn)槠渫次锇凑赵黾拥钠庙樞蚺cSEQ ID NO2所代表的氨基酸序列具有至少35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％總體序列同一性?？傮w序列同一性利用可執(zhí)行全局比對(duì)的比對(duì)算法進(jìn)行確定，例如GAP程序(GCG Wisconsin Package，Accelrys)中的Needleman Wunsch算法。
可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的常規(guī)技術(shù)容易地鑒定落入上述定義范圍內(nèi)的“HKT蛋白或其同源物”。例如，可以用本領(lǐng)域眾所周知的技術(shù)在體內(nèi)或體外容易地測(cè)定HKT作為陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的活性。例如，可如Uozumi等(2000)所述測(cè)定將HKT基因克隆進(jìn)大腸桿菌菌株LB2003(K+吸收系統(tǒng)Trk、Kup和Kdp缺陷株)后對(duì)K+吸收的互補(bǔ)作用和效果。類似地，釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌株CYl62(高親和力吸收系統(tǒng)trk1和trk2缺陷株)可通過克隆入HKT基因而得到互補(bǔ)，而酵母菌株G19(Na+外排ATPase基因ENA1至ENA4缺陷株)或野生型酵母菌株在克隆入HKT基因之后將表現(xiàn)出生長(zhǎng)抑制作用(Horie等，2001)。可選地，可利用非洲爪蟾(Xenopus laevis)卵母細(xì)胞進(jìn)行電壓鉗測(cè)定(參見例如Horie等，2001)，或如Garciadeblas等(Plant J.34，788-801，2003)和Banuelos等(PlantPhysiol.130，784-795，2002)所述在根或酵母中進(jìn)行陽離子吸收/消耗試驗(yàn)。至少一種上述測(cè)定(或本領(lǐng)域公知的其他測(cè)定)將證明HKT蛋白或其同源物的陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)活性。可選地，與相應(yīng)的野生型植物相比，當(dāng)這樣的“HKT蛋白或其同源物”在稻(Oryza sativa)栽培種日本晴(Nipponbare)中處于WSI18啟動(dòng)子的控制下表達(dá)時(shí)，能夠增加種子產(chǎn)率。種子產(chǎn)率的增加可以通過多種方式衡量，例如飽滿種子數(shù)量的增加。從而增加HKT活性涵蓋至少如下之一增加HKT蛋白或其同源物編碼核酸的水平、增加HKT蛋白或其同源物的水平、增加轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性或增加種子產(chǎn)率。
衡量HKT編碼核酸水平增加的技術(shù)本領(lǐng)域公知，并且包括例如Northern印跡、實(shí)時(shí)PCR或定量PCR。HKT蛋白水平的增加可利用例如Western印跡、通過在粗蛋白樣品凝膠電泳后估計(jì)帶/斑的強(qiáng)度、或者通過測(cè)試酶活(可行的話)進(jìn)行測(cè)定。
HKT蛋白的多種結(jié)構(gòu)域可利用專門的數(shù)據(jù)庫加以鑒定，如SMART(Schultz等(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95，5857-5864；Letunic等(2002)Nucleic Acids Res 30，242-244；http://smart.embl-heidelberg.de/)，InterPro(Mulder等，(2003)Nucl.Acids.Res.31，315-318；http://www.ebi.ac.uk/interpro/)、Prosite(Bucher和Bairoch(1994)，Ageneralized profile syntax for biomolecular sequences motifs and itsfunction in automatic sequence interpretation.(In)ISMB-94；Proceedings2nd International Conference on Intelligent Systems for Molecular Biology.Altman R.，Brutlag D.，Karp P.，Lathrop R.，Searls D.編輯，53-61頁，AAAIPress，Menlo Park；Hulo等，Nucl.Acids.Res.32D134-D137，(2004)，http://www.expasy.org/prosite/)或Pfam(Bateman等，Nucleic AcidsResearch 30(1)276-280(2002)，http://www.sanger.ac.uk/Software/Pfam/).
HKT蛋白的結(jié)構(gòu)域?yàn)楸绢I(lǐng)域公知，且其拓?fù)淠Ｐ偷玫綄?shí)驗(yàn)證據(jù)的支持(Kato等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 98，6488-6493，2001)。HKT型蛋白質(zhì)包括這樣的蛋白質(zhì)其含有四個(gè)“跨膜結(jié)構(gòu)域-孔結(jié)構(gòu)域-跨膜結(jié)構(gòu)域”單位(MPM)。四個(gè)孔形成結(jié)構(gòu)域中的每一個(gè)都含有保守的甘氨酸或絲氨酸殘基。第一個(gè)孔形成結(jié)構(gòu)域中的保守甘氨酸(或絲氨酸)殘基(在圖1的結(jié)構(gòu)域A中標(biāo)示為星號(hào))決定陽離子特異性。每個(gè)MPM單位包含如Durell等(1999)所表征的MPM基序。例如，AtHKT1中的四個(gè)MPM單位(SEQ IDNO2)包含基序GLIVSQLSFLTICIFLSITERQNLQRDPINFNVLNITLEVISAYGNVGFTTGYSCERRLDISDGGCKDASYGFAGRWSPMGKFVLIIVMFYGRFKQFTAKSGRAWILYPSS(SEQ ID NO7)，其中，黑體標(biāo)下劃線的序列部分代表跨膜基序，而斜體標(biāo)下劃線的部分表示孔形成環(huán)基序，其中保守甘氨酸殘基為黑斜體。
HKT蛋白如SEQ ID NO2還包含TrkH結(jié)構(gòu)域(Pfam登錄號(hào)PF02386，Interpro登錄號(hào)IPR003445)(對(duì)于SEQ ID NO2而言起始于G145而終止于Y502)，這是如下的一類蛋白所特有的這類蛋白包括鉀轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Trk)和V型鈉ATP合酶亞基J或易位ATPase J。
優(yōu)選地，可用于本發(fā)明的HKT蛋白在第4個(gè)孔形成結(jié)構(gòu)域中包含相應(yīng)于EVISAYGNVGFTTGY(SEQ ID NO8)的共有序列，其中黑體顯示的殘基總是保守的，而其他殘基可以變化(參見例如圖2)。優(yōu)選地，第4個(gè)孔形成結(jié)構(gòu)域中的共有序列相應(yīng)于E(V，I)(I，V)SA(Y，F(xiàn))G(N，T)(V，A，I)G(F，L，Y)(T，S)(T，I，L，V，M)GY(SEQ ID NO9)。更優(yōu)選地，第4個(gè)孔形成結(jié)構(gòu)域中的共有序列相應(yīng)于E(V，I)(I，V)SA(Y，F(xiàn))GNVG(F，L，Y)(T，S)(T，L，V)GY。
可選地，可用于本發(fā)明方法的HKT蛋白在第4個(gè)孔形成結(jié)構(gòu)域中包含SA(Y，F(xiàn))GN序列標(biāo)簽和DP(I，L)N(Y，F(xiàn)，L)序列標(biāo)簽(SEQ ID NO10)。優(yōu)選地，SEQ ID NO10的標(biāo)簽序列為DP(I，L)NF。
可以通過序列比對(duì)容易地確定多肽與SEQ ID NO2代表的氨基酸是否具有至少35％的同一性。搜索和鑒定HKT同源物的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。這類方法包括將計(jì)算機(jī)可讀形式SEQ ID NO1或SEQ IDNO2所代表的序列與公共數(shù)據(jù)庫如MIPS(http://mips.gsf.de/)、GenBank(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Genbank/index.html)或EMBL核苷酸數(shù)據(jù)庫(http://www.ebi.ac.uk/embl/index.html)中可用的的序列進(jìn)行比較，使用本領(lǐng)域公知的序列比對(duì)或比較算法，如GAP(Needleman和Wunsch，J.Mol.Biol.48；443-453(1970))、BESTFIT(使用Smith和Waterman的局部同源性算法(Advances in Applied Mathematics 2；482-489(1981)))、BLAST(Altschul，S.F.，Gish，W.，Miller，W.，Myers，E.W.&Lipman，D.J.，J.Mol.Biol.215403-410(1990))、FASTA和TFASTA(W.R.Pearson和D.J.Lipman Proc.Natl.Acad.Sci.USA 852444-2448(1988))，或使用例如VNTI AlignX多重比對(duì)程序，基于修改的clustal W算法(InforMax，Bethesda，MD，http://www.informaxinc.com)，采用缺省設(shè)置，空位開放罰分為10且空位延伸為0.05。執(zhí)行BLAST分析的軟件可從生物技術(shù)信息國家中心(NCBI)公開地獲得。下面所述同源物使用BLAST缺省參數(shù)(帶有空位開放罰分為11以及空位延伸為1)鑒定，優(yōu)選此分析中采用全長(zhǎng)序列。
落入“HKT或其同源物”定義的多肽的實(shí)例包括兩個(gè)赤桉同源物(SEQ ID NO16，GenBank登錄號(hào)AAF97728和SEQ ID NO18，GenBank登錄號(hào)AAD53890)；來自冰葉日中花的兩個(gè)同源物(SEQ ID NO14，GenBank登錄號(hào)AAK52962和SEQ ID NO12，GenBank登錄號(hào)AAO73474)。適用于實(shí)施本發(fā)明方法的其他同源物包括GenBank登錄號(hào)AAG37274(OsHKT1，SEQ ID NO20)、BAB61791(OsHKT2，SEQ ID NO22)、CAD37187(OsHKT3，SEQ ID NO24)、CAD37183(OsHKT4，SEQ IDNO26)、CAD37185(OsHKT6，SEQ ID NO28)、CAD37197(OsHKT7，SEQ ID NO30)、BAB93392(OsHKT8，SEQ ID NO32)和CAD37199(OsHKT9，SEQ ID NO34)所代表的稻同源物以及小麥同源物(GenBank登錄號(hào)AAA52749，SEQ ID NO36)。不過可以預(yù)期，與SEQ ID NO2序列同一性低于35％的HKT同源物仍可以適用于本發(fā)明的方法，這類蛋白質(zhì)的實(shí)例為海濱堿蓬(Suaeda maritima)同源物(SEQ ID NO38，GenBank登錄號(hào)AY530754)、或非植物同源物如酵母TRK1(SEQ ID NO40，GenBank登錄號(hào)NP_012406)或TRK2(SEQ ID NO42，GenBank登錄號(hào)CAA82128)或葡萄汁酵母(Sacharomyces uvarum)TRK1(GenBank登錄號(hào)JU0466或AAA34661)。
表1列舉了來自其他生物的HKT蛋白和同源物、蛋白質(zhì)長(zhǎng)度及其與SEQ ID NO2的序列同一性。
表1


At，擬南芥；Mc，冰葉日中花；Ec，，赤桉；Ta，小麥(Triticum aestivum)；Os，稻；Sc，釀酒酵母；Sm，海濱堿蓬；Su，葡萄汁酵母。
盡管看起來與SEQ ID NO2的序列同源性相對(duì)低(低至大約35％)，HTK蛋白在結(jié)構(gòu)上高度保守，全長(zhǎng)蛋白質(zhì)具有四個(gè)“跨膜結(jié)構(gòu)域-孔結(jié)構(gòu)域-跨膜結(jié)構(gòu)域”(MPM)單位，并且優(yōu)選在第4個(gè)孔形成結(jié)構(gòu)域中包含相應(yīng)于EVISAYGNVGFTTGY(SEQ ID NO8)的共有序列，其中黑體顯示的殘基總是保守，而其他殘基可以變化。優(yōu)選地，第4個(gè)孔形成結(jié)構(gòu)域中的共有序列相應(yīng)于SEQ ID NO9。更優(yōu)選地，第4個(gè)孔形成結(jié)構(gòu)域中的共有序列相應(yīng)于E(V，I)(I，V)SA(Y，F(xiàn))GNVG(F，L，Y)(T，S)(T，L，V)GY。可選地，可用于本發(fā)明的HKT蛋白在第4個(gè)孔形成結(jié)構(gòu)域中包含SA(Y，F(xiàn))GN序列和DP(I，L)N(Y，F(xiàn)，L)序列。此外，當(dāng)比較不同來源的HKT序列時(shí)，貫穿整個(gè)序列都可以鑒定到保守氨基酸(圖2，并不表示限制性的HKT蛋白列表)，而且不同物種之間第4個(gè)MPM單位中的序列同一性高達(dá)70％。因此可以容易地在其他植物物種中找到HKT基因。因此應(yīng)當(dāng)理解，術(shù)語“HKT多肽或其同源物”并不局限于SEQ ID NO2所代表的序列或者上文所列的SEQ ID NO12至36，相反，滿足具有HKT活性、具有如上文所列的HKT拓?fù)鋵W(xué)且與SEQ ID NO2具有至少35％序列同一性標(biāo)準(zhǔn)的任何多肽都可以適用于本發(fā)明的方法。不過，正如上文所指出的那樣，可以預(yù)期具有上述HKT拓?fù)鋵W(xué)但與SEQ ID NO2具有低于35％序列同一性的蛋白質(zhì)仍然可以用于本發(fā)明的方法。
編碼HKT多肽或其同源物的核酸可以是任何天然或合成的核酸。如上文所定義的HKT多肽或其同源物由HKT核酸/基因編碼。因此如本文所定義的術(shù)語“HKT核酸/基因”是編碼如上文所定義的HKT多肽或其同源物的任何核酸/基因。HKT核酸的實(shí)例包括編碼SEQ ID NO2的那些核酸以及SEQ ID NO1所代表的序列，或SEQ ID NO12至36(GenBank登錄號(hào)為AAF97728、AAD53890、AAK52962、AAO73474、AAG37274、BAB61791、CAD37187、CAD37183、CAD37185、CAD37197、BAB93392、CAD37199或AAA52749)所代表的蛋白質(zhì)的編碼核酸。不過，具有上述HKT拓?fù)鋵W(xué)但與SEQ ID NO2具有低于35％序列同一性的蛋白質(zhì)的編碼核酸仍然可以用于本發(fā)明的方法；實(shí)例包括SEQ ID NO38至44。HKT核自基因及其功能性變體可適用于實(shí)施本發(fā)明的方法。功能性變體HKT核酸/基因包括HKT核酸/基因的部分和/或能夠與HKT核酸/基因雜交的核酸。就功能性變體而言的術(shù)語“功能性”是指編碼多肽的變體(即部分或雜交序列)，所述多肽具有HKT活性且包含四個(gè)單位的跨膜結(jié)構(gòu)域-孔形成結(jié)構(gòu)域-跨膜結(jié)構(gòu)域，其中第4個(gè)孔形成結(jié)構(gòu)域優(yōu)選包含相應(yīng)于EVISAYGNVGFTTGY(SEQ ID NO8)的共有序列，其中黑體顯示的殘基總是保守的，而其他殘基可以變化。優(yōu)選地，第4個(gè)孔形成結(jié)構(gòu)域中的共有序列相應(yīng)于SEQ ID NO9。更優(yōu)選地，第4個(gè)孔形成結(jié)構(gòu)域中的共有序列相應(yīng)于E(V，I)(I，V)SA(Y，F(xiàn))GNVG(F，L，Y)(T，S)(T，L，V)GY?？蛇x地，變體HKT蛋白在第4個(gè)孔形成結(jié)構(gòu)域中可以包含SA(Y，F(xiàn))GN序列和DP(I，L)N(Y，F(xiàn)，L)序列。
本文定義的術(shù)語“部分”指包括至少80個(gè)或以上核苷酸的DNA片段，優(yōu)選至少330個(gè)核苷酸，該部分編碼具有HKT活性的多肽，且該多肽包含至少一個(gè)單位的跨膜結(jié)構(gòu)域-孔形成結(jié)構(gòu)域-跨膜結(jié)構(gòu)域。可以，例如，通過在HKT核酸中產(chǎn)生一個(gè)或多個(gè)缺失來制備部分。部分可以以分離的形式應(yīng)用，或者它們可以與其他編碼(或非編碼)序列融合以，例如，產(chǎn)生組合數(shù)種活性的蛋白質(zhì)，其中之一是HKT活性，例如陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)活性。當(dāng)與其他編碼序列融合時(shí)，翻譯產(chǎn)生的多肽產(chǎn)物可能大于預(yù)測(cè)的HKT片斷。優(yōu)選地，功能性部分是由SEQ ID NO1所代表的核酸的部分，或上述定義蛋白質(zhì)的編碼核酸的部分，并且該部分編碼具有HKT活性的多肽。
另一類變體HKT是在降低的嚴(yán)格條件下，優(yōu)選在嚴(yán)格條件下能夠與上文所定義的HKT核酸/基因雜交的核酸，該雜交序列編碼具有HKT活性的多肽，且該多肽包含至少一個(gè)單位的跨膜結(jié)構(gòu)域-孔形成結(jié)構(gòu)域-跨膜結(jié)構(gòu)域。雜交序列長(zhǎng)度優(yōu)選至少80核苷酸，更優(yōu)選至少330個(gè)核苷酸。優(yōu)選地，雜交序列能與由SEQ ID NO1所代表的核酸雜交，或與上文所定義蛋白質(zhì)的編碼核酸，例如SEQ ID NO2或SEQ ID NO12至SEQ IDNO36所代表蛋白質(zhì)的編碼核酸雜交。
本文定義的術(shù)語“雜交”指其中基本同源互補(bǔ)的核酸序列彼此退火的過程，從而一種核酸物質(zhì)的有義鏈將與另一種核酸物質(zhì)的反義鏈退火。雜交過程能夠完全在溶液中發(fā)生，即互補(bǔ)的核酸都在溶液中。雜交過程也可以在這種情況下進(jìn)行，即互補(bǔ)核酸之一固定于基質(zhì)上，如磁珠、瓊脂糖珠或任何其他樹脂上。此外，雜交過程也可以如此進(jìn)行，即其中互補(bǔ)核酸之一固定在固相支持物如硝酸纖維素或尼龍膜上，或者如用照相平板印刷固定在硅質(zhì)玻璃支持物上(后者稱之為核酸陣列或微陣列，或稱之為核酸芯片)。為了使雜交發(fā)生，通常使核酸分子熱變性或化學(xué)變性，以使雙鏈解鏈成兩條單鏈，和/或除去單鏈核酸中的發(fā)夾結(jié)構(gòu)或其他二級(jí)結(jié)構(gòu)。雜交的嚴(yán)格性受諸如溫度、鹽濃度、離子強(qiáng)度和雜交緩沖液組成等條件的影響。
在核酸雜交實(shí)驗(yàn)(如Southern和Northern雜交)的情況中，“嚴(yán)格雜交條件”和“嚴(yán)格雜交洗滌條件”取決于序列，并且在不同的環(huán)境參數(shù)下不同。熟練的技術(shù)人員知曉多種參數(shù)可以在雜交和洗滌過程中進(jìn)行改變，從而保持或者改變嚴(yán)格條件。
Tm是在確定的離子強(qiáng)度和pH值下，50％的靶序列與完全匹配的探針雜交的溫度。Tm依賴于溶液條件和探針的堿基組成及長(zhǎng)度。例如，較長(zhǎng)的序列在較高溫度下特異性雜交。在低于Tm值16℃到32℃獲得最大雜交率。在雜交溶液中存在一價(jià)陽離子會(huì)減少兩核酸鏈之間的靜電排斥作用，從而促進(jìn)雜合體形成；當(dāng)鈉濃度高達(dá)0.4M時(shí)，這一作用明顯。每個(gè)百分點(diǎn)的甲酰胺可使DNA-DNA和DNA-RNA雙鏈體的解鏈溫度降低0.6-0.7℃，加入50％甲酰胺使雜交在30-45℃完成，盡管這將降低雜交率。堿基對(duì)錯(cuò)配降低雜交率和雙鏈體的熱穩(wěn)定性。平均而言，對(duì)于大的探針，每個(gè)百分點(diǎn)堿基錯(cuò)配使Tm值下降約1℃。Tm值可以用取決于雜合體類型的下列方程式計(jì)算·DNA-DNA雜合體(Meinkoth和Wahl，Anal.Biochem.，138267-284，1984)Tm＝81.5℃+16.6×log[Na+]a+0.41×％[G/Cb]-500×[Lc]-1-0.61×％甲酰胺·DNA-RNA或RNA-RNA雜合體Tm＝79.8+18.5(log10[Na+]a)+0.58(％G/Cb)+11.8(％G/Cb)2-820/Lc·寡DNA或寡RNAd雜合體＜20個(gè)核苷酸Tm＝2(ln)20-35個(gè)核苷酸Tm＝22+1.46(ln)a或?qū)τ谄渌粌r(jià)陽離子，但是僅在0.01-0.4M范圍內(nèi)精確。
b僅對(duì)于在30％到75％范圍內(nèi)的％GC精確。
cL＝雙鏈體的堿基對(duì)長(zhǎng)度。
d寡，寡核苷酸；ln，引物的有效長(zhǎng)度＝2×(G/C數(shù))+(A/T數(shù))。
注釋對(duì)于每1％甲酰胺，Tm值降低約0.6-0.7℃，而6M尿素的存在可使Tm值降低約30℃。
雜交特異性通常是雜交后洗滌的函數(shù)。為了除去非特異雜交產(chǎn)生的背景，用稀釋的鹽溶液洗滌樣品。這類洗滌的關(guān)鍵因素包括最終洗滌溶液的離子強(qiáng)度和溫度鹽濃度越低、洗滌溫度越高，洗滌的嚴(yán)格性就越高。洗滌條件通常在等于或低于雜交嚴(yán)格性條件下進(jìn)行。一般地，如上設(shè)置適用于核酸雜交測(cè)定或基因擴(kuò)增檢測(cè)操作的嚴(yán)格條件。也可以選擇更高或更低的嚴(yán)格性條件。通常，對(duì)于在確定的離子強(qiáng)度和pH值下的特定序列，選擇比熱解鏈溫度(Tm)低約50℃的低嚴(yán)格條件。中等嚴(yán)格條件是溫度比Tm低20℃，高嚴(yán)格條件是溫度比Tm低10℃。例如，嚴(yán)格條件是至少像如條件A-L一樣嚴(yán)格；降低的嚴(yán)格條件是至少像如條件M-R一樣嚴(yán)格?？梢酝ㄟ^許多已知技術(shù)中的任一來控制非特異性結(jié)合，所述技術(shù)諸如，例如用含蛋白質(zhì)的溶液封閉膜，在雜交緩沖液中添加異源RNA、DNA和SDS，以及用RNA酶處理。
在下表2中列出了雜交和洗滌條件的實(shí)例。
表2雜交和洗滌條件的實(shí)例


_“雜交長(zhǎng)度”是雜交核酸的預(yù)期長(zhǎng)度。當(dāng)已知序列的核酸雜交時(shí)，可以通過比對(duì)序列及鑒定本文所述的保守區(qū)域來確定雜合體長(zhǎng)度。
_在雜交和洗滌緩沖液中，可以用SSPE(1×SSPE是0.15M NaCl，10mM NaH2PO4和1.25mM EDTA，pH7.4)代替SSC(1×SSC是0.15MNaCl和15mM檸檬酸鈉)；雜交完成后洗滌15分鐘。雜交和洗滌可以另外地包括5×Denhardt′s試劑、0.5-1.0％SDS、100μg/ml變性的片段化的鮭精DNA、0.5％焦磷酸鈉和高達(dá)50％的甲酰胺。
*Tb-Tr對(duì)于預(yù)期長(zhǎng)度小于50個(gè)堿基對(duì)的雜合體，雜交溫度應(yīng)該比雜合體的解鏈溫度Tm低5-10℃；根據(jù)上述方程式確定Tm。
±本發(fā)明還包括以PNA或修飾的核酸代替任一或多個(gè)DNA或RNA雜交配偶體。
為了定義嚴(yán)格性水平，可以便利地參考Sambrook等(2001)的分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)，第三版，冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版，冷泉港，紐約，或者CurrentProtocols in Molecular Biology，John Wiley&Sons，N.Y.(1989)。
例如，在雜交實(shí)驗(yàn)中可使用編碼SEQ ID NO2或其同源物的核酸?；蛘呖梢岳闷淦巫鳛樘结槨８鶕?jù)待鑒定HKT蛋白的起始序列庫，可以選擇不同的片段進(jìn)行雜交。例如，當(dāng)期望與HKT具有高度序列同一性的有限數(shù)量的同源物時(shí)，可使用不太保守的片段進(jìn)行雜交。通過比對(duì)SEQID NO2和其同源物，有可能設(shè)計(jì)可作為探針進(jìn)行雜交的等同核酸片段。
在雜交和洗滌之后，可通過放射自顯影或通過化學(xué)發(fā)光、免疫檢測(cè)、通過熒光或顯色檢測(cè)(使用放射性標(biāo)記探針的情況下)來檢測(cè)雙鏈體，這取決于探針標(biāo)記類型?；蛘?，可進(jìn)行核糖核酸酶保護(hù)測(cè)定以檢測(cè)RNARNA雜合體。
HKT核酸或其變體可以來自任何天然或人工的來源。核酸/基因或其變體可以分離自微生物來源，如細(xì)菌、酵母或真菌，或分離自植物、藻類或動(dòng)物(包括人類)?？梢酝ㄟ^仔細(xì)的人為操作在組成和/或基因組環(huán)境方面修飾所述核酸的天然形式。優(yōu)選植物來源的核酸，無論來源于同一植物物種(例如對(duì)于其被引入的物種而言)或來源于不同植物物種?？梢詮碾p子葉物種，優(yōu)選從十字花科(Brassicaceae)，更優(yōu)選從擬南芥分離所述核酸。更優(yōu)選地，從擬南芥中分離的HKT核酸表示為SEQ ID NO1，并且HKT氨基酸序列表示為SEQ ID NO2。
可以通過引入遺傳修飾(優(yōu)選在HKT基因座)提高HKT多肽或其同源物的活性。本文所定義的基因座意指基因組區(qū)，其包括目的基因和編碼區(qū)上游或下游的10KB。
可以通過任一(或多種)如下方法引入遺傳修飾，所述方法包括TDNA激活、TILLING、定點(diǎn)誘變、同源重組、定向進(jìn)化或通過在植物中引入和表達(dá)編碼HKT多肽或其同源物的核酸，條件是每種方法要求認(rèn)為干預(yù)。引入遺傳修飾之后的步驟是選擇活性增加的HKT多肽，其活性的增加使植物具有改良的生長(zhǎng)特性。
T-DNA激活標(biāo)記(Hayashi等Science(1992)1350-1353)包括將通常含有啟動(dòng)子(也可以是翻譯增強(qiáng)子或內(nèi)含子)的T-DNA插入在目的基因的基因組區(qū)或基因編碼區(qū)上游或下游10KB，從而在構(gòu)型上使啟動(dòng)子能夠指導(dǎo)靶向基因的表達(dá)。通常破壞天然啟動(dòng)子對(duì)靶基因表達(dá)的調(diào)控，基因由新引入的啟動(dòng)子控制。啟動(dòng)子一般包含于T-DNA中。例如，通過農(nóng)桿菌(Agrobacterium)感染將此T-DNA隨機(jī)插入植物基因組并導(dǎo)致在插入T-DNA附近的基因過表達(dá)。得到的轉(zhuǎn)基因植物由于引入的啟動(dòng)子附近基因過表達(dá)而表現(xiàn)出顯性表型。引入的啟動(dòng)子可以是任意能夠在期望生物體內(nèi)(在本案中是植物)指導(dǎo)基因表達(dá)的啟動(dòng)子。例如，組成型、組織特異性、細(xì)胞類型特異性和誘導(dǎo)型啟動(dòng)子都適用于T-DNA激活。
也可以通過TILLING(定向誘導(dǎo)的基因組局部突變)技術(shù)將遺傳修飾引入HKT基因座。這是一種誘變技術(shù)，用于產(chǎn)生和/或鑒定以及最后分離誘變的能呈現(xiàn)HKT活性的HKT核酸變體。TILLING還允許選擇攜帶此種突變變體的植物。這些突變變體甚至可能比其天然形式基因呈現(xiàn)更高的HKT活性。TILLING結(jié)合了高密度誘變和高通量篩選方法。TILLING一般遵循的步驟有(a)EMS誘變(Redei和Koncz，1992；InC Koncz，N-HChua，J Schell編輯，Methods in Arabidopsis Research.World Scientific，Singapore，16-82頁；Feldmann等，1994；InEM Meyerowitz，CRSomerville編輯，Arabidopsis.Cold Spring Harbor Laboratory Press，ColdSpring Harbor，NY，137-172頁；Lightner和Caspar，1998；InJMartinez-Zapater，J Salinas編輯，Methods on Molecular Biology，Vol.82.Humana Press，Totowa，NJ，91-104頁)；(b)DNA制備和個(gè)體合并；(c)目的區(qū)域的PCR擴(kuò)增；(d)變性和退火以形成雜雙鏈體；(e)DHPLC，其中庫中存在的雜雙鏈體會(huì)在色譜圖上檢測(cè)到額外的峰；(f)突變個(gè)體的鑒定；和(g)突變PCR產(chǎn)物的測(cè)序。TILLING的方法是本領(lǐng)域內(nèi)眾所周知的(McCallum Nat Biotechnol.2000年4月；18(4)455-7，Stemple，Nature RevGenet.5，145-50 2004)。
定點(diǎn)誘變可用于產(chǎn)生HKT核酸或其部分的變體，其保留HKT活性，例如陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)活性。可以通過若干方法來完成定點(diǎn)誘變，最常見的是基于PCR的方法(例如見Ausubel等，current protocols in molecular biology.Wiley編輯http://www.4ulr.com/products/currentprotocols/index.html)。
定向進(jìn)化也可以用于產(chǎn)生編碼HKT多肽或同源物的HKT核酸分子的功能性變體，或其具有增加的上述生物活性的部分的變體。定向進(jìn)化包括DNA改組的重復(fù)，繼之以適當(dāng)篩選和/或選擇(Castle等，(2004)Science304(5674)1151-4；美國專利5,811,238和6,395,547)。
TDNA激活、TILLING、定點(diǎn)誘變和定向進(jìn)化是能產(chǎn)生新的HKT等位基因和變體的技術(shù)的實(shí)例，所述HKT等位基因和變體保留HKT功能，從而可用于本發(fā)明的方法。
同源重組允許向基因組中的指定選擇位置引入所選的核酸。同源重組是生物科學(xué)中常規(guī)使用的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，其用于低等有機(jī)體如酵母或小立碗蘚(physcomitrella)。在植物中執(zhí)行同源重組的方法已經(jīng)不僅在模式植物中描述(Offringa等1990 EMBO J.93077-84)，而且也在作物植物如稻中描述(Terada等(2002)Nature Biotechnol.20，1030-1034；或Iida和Terada(2004)Curr Opin Biotechnol.15132-8)。所靶向的核酸(其可以是上文中定義的HKT核酸分子或其變體)不需靶向HKT基因座，但是可以被引入例如高表達(dá)的區(qū)域。所靶向的核酸可以是改良的等位基因，其用于替換內(nèi)源基因或額外引入到內(nèi)源基因中。
根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，通過在植物中引入和表達(dá)分離的編碼HKT多肽或其同源物的核酸，可以改良植物的生長(zhǎng)特性。
引入遺傳修飾(在本案中不需引入HKT基因座中)的優(yōu)選方法是在植物中引入和表達(dá)編碼HKT多肽或其同源物的核酸。上文所述的HKT多肽或其同源物具有HKT活性和四個(gè)單位的跨膜結(jié)構(gòu)域-孔形成結(jié)構(gòu)域-跨膜結(jié)構(gòu)域。所述HKT多肽按照增加的偏好次序與SEQ ID NO2所代表的氨基酸序列具有至少35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％的序列同一性，或如SEQ ID NO2所示。
蛋白質(zhì)的“同源物”包括肽、寡肽、多肽、蛋白質(zhì)和酶，其相對(duì)于所討論的未修飾蛋白質(zhì)具有氨基酸取代、缺失和/或插入，并且具有與衍生其的未修飾形式蛋白質(zhì)相似的生物學(xué)活性和功能活性。
術(shù)語“同源物”也包括兩種具體形式的同源物，其包括直系同源序列和旁系同源序列，其涵蓋用于描述基因祖先關(guān)系的進(jìn)化概念。術(shù)語“旁系同源”涉及在物種基因組內(nèi)部的基因復(fù)制產(chǎn)生的旁系基因。術(shù)語“直系同源”涉及由于物種形成產(chǎn)生的不同有機(jī)體中的同源基因。
例如，可以通過所謂的交互(reciprocal)blast搜索容易地找到例如在單子葉植物種中的直系同源物。這可以通過使用所研究序列(例如來自擬南芥的SEQ ID NO1或SEQ ID NO2)針對(duì)任何序列數(shù)據(jù)庫——如可在http://www.ncbi.nlm.nih.gov找到的公共可獲得的NCBI數(shù)據(jù)庫——進(jìn)行一次blast而實(shí)現(xiàn)。例如，如果尋找稻中的直系同源物，對(duì)研究序列的blast應(yīng)該在可從NCBI獲得的針對(duì)日本晴稻的28,469個(gè)全長(zhǎng)cDNA克隆中進(jìn)行。當(dāng)從核苷酸開始時(shí)可使用具有標(biāo)準(zhǔn)缺省值的BLASTn或tBLASTX，或當(dāng)從蛋白質(zhì)開始時(shí)可使用具有標(biāo)準(zhǔn)缺省值的BLASTP或TBLASTN?？梢赃^濾Blast結(jié)果。接著使用過濾結(jié)果或者未過濾結(jié)果中的全長(zhǎng)序列針對(duì)所研究序列源自的生物體如擬南芥的序列進(jìn)行反向blast(二次blast)。然后比較第一次和第二次blast的結(jié)果。例如，當(dāng)所述二次blast結(jié)果給出與查詢的HKT核酸或HKT多肽具有最高相似性序列時(shí)，則找到了旁系同源物。如果一次blast結(jié)果之一來自相同的生物體，則找到了旁系同源物。認(rèn)為這樣的旁系同源物也是HKT同源物，條件是此同源物具有HKT活性，并包含四個(gè)單位的跨膜結(jié)構(gòu)域-孔形成結(jié)構(gòu)域-跨膜結(jié)構(gòu)域，優(yōu)選地還包含上文所定義的保守序列。大家族的情況下可以使用Clustal W，繼之以鄰近連接樹來輔助聚類可視化。
同源物可能是蛋白質(zhì)的“取代變體”的形式，即在氨基酸序列中至少有一個(gè)殘基被去除，并且在這一位置插入不同的殘基。氨基酸取代通常是單個(gè)殘基的取代，但是視施加于多肽的功能性限制而定也可能是成簇取代；插入通常在1到10個(gè)氨基酸殘基數(shù)量級(jí)。優(yōu)選地，氨基酸取代包括保守的氨基酸取代(表3)。為了產(chǎn)生這樣的同源物，蛋白質(zhì)的氨基酸可以由具有相似性質(zhì)(如相似的疏水性、親水性、抗原性、形成或打破α螺旋結(jié)構(gòu)或β片層結(jié)構(gòu)的傾向)的其他氨基酸替換。保守取代表是本領(lǐng)域內(nèi)眾所周知的(例如見Creighton(1984)Proteins.W.H.Freeman and Company)。
表3保守氨基酸取代的實(shí)例


在上述氨基酸性質(zhì)不太關(guān)鍵的情況下，可以進(jìn)行不太保守的取代。
同源物也可能是蛋白質(zhì)的“插入變體”的形式，即在蛋白質(zhì)的預(yù)定位置引入一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基。插入可以包括氨基端和/或羧基端的融合，以及單個(gè)或多個(gè)氨基酸的內(nèi)部序列插入。一般氨基酸序列內(nèi)部的插入將小于氨基或羧基端的融合，數(shù)量級(jí)在約1到10個(gè)殘基。氨基或羧基端融合蛋白質(zhì)或肽的實(shí)例包括在酵母雙雜交系統(tǒng)中應(yīng)用的轉(zhuǎn)錄激活因子的結(jié)合結(jié)構(gòu)域或激活結(jié)構(gòu)域、噬菌體外殼蛋白質(zhì)、(組氨酸)6標(biāo)簽、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶標(biāo)簽、蛋白質(zhì)A、麥芽糖結(jié)合蛋白、二氫葉酸還原酶、Tag·100表位、c-myc表位、FLAG_表位、laeZ、CMP(鈣調(diào)蛋白結(jié)合肽)、HA表位、蛋白質(zhì)C表位和VSV表位。
蛋白質(zhì)“缺失變體”形式的同源物特征在于從蛋白質(zhì)中除去一個(gè)或多個(gè)氨基酸。
可通過本領(lǐng)域內(nèi)眾所周知的肽合成技術(shù)，如固相肽合成法等，或通過重組DNA操作容易地得到蛋白質(zhì)的氨基酸變體。用于產(chǎn)生蛋白質(zhì)的取代、插入或缺失變體的DNA序列操作方法是本領(lǐng)域眾所周知的。例如，本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知在DNA預(yù)定位置產(chǎn)生取代突變的技術(shù)，其包括M13誘變、T7-Gen體外誘變(USB，Cleveland，OH)、QuickChange定點(diǎn)誘變(Stratagene，San Diego，CA)、PCR介導(dǎo)的定點(diǎn)誘變或其他定點(diǎn)誘變方案。
HKT多肽或其同源物可以是衍生物?！把苌铩卑?、寡肽、多肽、蛋白質(zhì)和酶，與天然產(chǎn)生形式的蛋白質(zhì)，例如SEQ ID NO2所代表的氨基酸序列相比，其可以包括取代、缺失或添加的天然的和非天然產(chǎn)生的氨基酸殘基。蛋白質(zhì)的“衍生物”包括肽、寡肽、多肽、蛋白質(zhì)和酶，與天然產(chǎn)生形式多肽的氨基酸序列相比，其可以包括天然產(chǎn)生的改變的、糖基化、?；陌被釟埢蚍翘烊划a(chǎn)生的氨基酸殘基。衍生物還可以包括相對(duì)于其源自的氨基酸序列的一個(gè)或多個(gè)非氨基酸取代基，例如共價(jià)或非共價(jià)地結(jié)合于氨基酸序列的報(bào)告分子或其他配體，例如與之結(jié)合有利于衍生物檢測(cè)的報(bào)告分子，以及相對(duì)于天然存在蛋白質(zhì)的氨基酸序列而言非天然產(chǎn)生的氨基酸殘基。
HKT多肽或其同源物可能由HKT核酸/基因的可選剪接變體編碼。本文所用的術(shù)語“可性剪接變體”包括其中選擇的內(nèi)含子和/或外顯子已被切除、替換或添加的核酸序列的變體。這樣的變體保留了蛋白質(zhì)的生物活性，這可能通過選擇性地保留蛋白質(zhì)的功能性片段來實(shí)現(xiàn)。這樣的剪接變體可以是天然的或人工的。產(chǎn)生這類剪接變體的方法是本領(lǐng)域內(nèi)眾所周知的。優(yōu)選的剪接變體是衍生自SEQ ID NO3所代表核酸的剪接變體。更優(yōu)選編碼多肽的剪接變體，所述多肽具有HKT活性，并包含至少一個(gè)、優(yōu)選四個(gè)單位的跨膜結(jié)構(gòu)域-孔形成結(jié)構(gòu)域-跨膜結(jié)構(gòu)域。優(yōu)選的剪接變體如SEQ ID NO1所示。
同源物還可以由HKT多肽或其同源物的編碼核酸的等位基因變體所編碼，優(yōu)選由SEQ ID NO1所代表核酸的等位基因變體編碼。更優(yōu)選由等位基因變體編碼的多肽具有HKT活性，并包含至少一個(gè)、優(yōu)選四個(gè)單位的跨膜結(jié)構(gòu)域-孔形成結(jié)構(gòu)域-跨膜結(jié)構(gòu)域。同源物還可以由SEQ ID NO11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、35或37所代表核酸的等位基因變體編碼。等位基因變體天然存在，并且這些天然等位基因的用途包含于本發(fā)明的方法中。等位基因變體包括單核苷酸多態(tài)性(SNP)，以及小型插入/缺失多態(tài)性(INDEL)。INDEL的大小通常小于100bp。SNP和INDEL在大多數(shù)生物體天然存在的多態(tài)性品系中形成最大的一組序列變體。
根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選方面，HKT核酸分子或其變體的表達(dá)有所提高或增加。獲得提高或增加的基因或基因產(chǎn)物表達(dá)的方法在本領(lǐng)域內(nèi)有充分的記錄，其包括，例如由適當(dāng)?shù)膯?dòng)子驅(qū)動(dòng)的過表達(dá)、轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子或翻譯增強(qiáng)子的使用。可以將用作啟動(dòng)子或增強(qiáng)子元件的分離的核酸引入到非異源形式多核苷酸的適當(dāng)位置(一般是上游)，從而上調(diào)HKT核酸或其變體的表達(dá)。例如，可以通過突變、缺失和/或取代，在體內(nèi)改變內(nèi)源啟動(dòng)子(見Kmiec，美國專利No.5,565,350；Zarling等，PCT/US93/03868)，或者將分離的啟動(dòng)子在本發(fā)明基因的適當(dāng)方向和距離引入植物細(xì)胞中，從而控制基因的表達(dá)。
如果期望多肽表達(dá)，通常要在多肽編碼區(qū)域的3’末端包括多腺苷酸化區(qū)域。多腺苷酸化區(qū)域可以源自天然基因、多種其他植物基因或T-DNA。例如，加入的3’末端序列可以源自胭脂堿合酶或章魚堿合酶基因、或可選地源自其他植物基因、或次優(yōu)選地源自任何其他真核基因。
也可以在5’非翻譯區(qū)或部分編碼序列的編碼序列中加入內(nèi)含子序列，來增加在胞質(zhì)中累積的成熟信使的數(shù)量。已顯示，在植物和動(dòng)物表達(dá)構(gòu)建體的轉(zhuǎn)錄單位中包含的可剪接的內(nèi)含子均可以在mRNA和蛋白質(zhì)水平使基因表達(dá)提高至高達(dá)1000倍(Buchman和Berg，Mol.Cell biol.84395-4405(1988)；Callis等，Genes Dev.11183-1200(1987))。通常這種內(nèi)含子被放置在轉(zhuǎn)錄單位5’末端附近時(shí)，其提高基因表達(dá)的作用達(dá)到最大。玉米內(nèi)含子Adh1-S內(nèi)含子1、2和6以及Bronze-1內(nèi)含子的使用是本領(lǐng)域公知的。通常見The Maize Handbook，第116章，F(xiàn)reeling和Walbot編輯，Springer，N.Y.(1994)。
本發(fā)明還提供遺傳構(gòu)建體和載體，以促進(jìn)用于本發(fā)明方法中的核苷酸序列的引入和/或表達(dá)。
因此，提供的基因構(gòu)建體包含(i)HKT核酸分子或其功能性變體；(ii)一個(gè)或多個(gè)能驅(qū)動(dòng)(i)中核酸序列表達(dá)的控制序列；和任選的
(iii)轉(zhuǎn)錄終止序列。
優(yōu)選的，基因勾踐體中所使用的控制序列為種子特異性控制序列。
可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的重組DNA技術(shù)構(gòu)建用于本發(fā)明方法的構(gòu)建體。可以將基因構(gòu)建體插入載體中，所述載體可商購獲得，適合于轉(zhuǎn)化進(jìn)入植物并在轉(zhuǎn)化的細(xì)胞中表達(dá)目的基因。
使用包括目的序列(即HKT核酸或其變體)的載體轉(zhuǎn)化植物。將目的序列有效連接于一個(gè)或多個(gè)控制序列(至少連接于啟動(dòng)子)。術(shù)語“調(diào)控元件”、“控制序列”和“啟動(dòng)子”在文中都可互換使用，從廣義上是指能夠影響其連接序列表達(dá)的調(diào)控核酸序列。上述術(shù)語包括源自典型真核生物基因組基因(包括具有或沒有CCAAT盒序列的TATA盒，其對(duì)于精確的轉(zhuǎn)錄起始是必需的)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列，以及另外的調(diào)控元件(即上游激活序列、增強(qiáng)子和沉默子)，其通過應(yīng)答發(fā)育刺激和/或外部刺激或通過組織特異性的方式改變基因表達(dá)。該術(shù)語還包括了經(jīng)典原核生物基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列，在此情況下可以包括-35盒序列和/或-10盒轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列。術(shù)語“調(diào)控元件”也包含合成的融合分子或衍生物，其賦予、激活或提高細(xì)胞、組織或器官中核酸分子的表達(dá)。本文所用的術(shù)語“有效連接”指在啟動(dòng)子序列和目的基因之間的功能性連接，以使啟動(dòng)子序列能起始目的基因的轉(zhuǎn)錄。
有利地，可以使用任意類型的啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)核酸序列的表達(dá)。啟動(dòng)子可以是誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，即應(yīng)答發(fā)育、化學(xué)、環(huán)境或物理刺激，具有誘導(dǎo)的或增加的轉(zhuǎn)錄起始。誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的實(shí)例是脅迫誘導(dǎo)型啟動(dòng)子。此外，或者可選地，啟動(dòng)子可以是組成型啟動(dòng)子。本文所用術(shù)語“組成型”是指在至少一種組織或器官中最顯著表達(dá)、并且在植物的任何生命階段最顯著表達(dá)的啟動(dòng)子。優(yōu)選的組成型啟動(dòng)子在整個(gè)植物中最顯著表達(dá)。另外或備選的，所述啟動(dòng)子可以是組織特異性的啟動(dòng)子，即能夠在某些組織，如在葉、根、種子等組織中優(yōu)先地起始轉(zhuǎn)錄。
優(yōu)選的，HKT核酸或其變體有效的連接于種子特異性啟動(dòng)子。還優(yōu)選種子特異性啟動(dòng)子為胚特異性及糊粉特異性，并且主要在胚胎發(fā)生晚期有活性。本文所用術(shù)語“種子特異性”是指在植物種子中最顯著表達(dá)的啟動(dòng)子。優(yōu)選地，所述啟動(dòng)子在胚和/或糊粉層中最顯著表達(dá)。更優(yōu)選種子特異性啟動(dòng)子的表達(dá)模式與WSI18啟動(dòng)子相當(dāng)。更優(yōu)選種子特異性啟動(dòng)子為稻W(wǎng)SI18啟動(dòng)子(WO2004/070039)，如SEQ ID NO45所示(對(duì)應(yīng)于SEQID NO4的核苷酸1至1828)。稻W(wǎng)SI18啟動(dòng)子應(yīng)答于脫落酸(ABA)，在包含ABA如種子干燥的條件下高度誘導(dǎo)。因此，優(yōu)選的用于本發(fā)明的啟動(dòng)子還可以是由ABA和/或脅迫條件如干旱所誘導(dǎo)的任何其他啟動(dòng)子。應(yīng)該明確的是本發(fā)明的應(yīng)用不限于SEQ ID NO1代表的HKT核酸，也不限于由WSI18啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)時(shí)HKT核酸的表達(dá)。應(yīng)該明確的是本發(fā)明的應(yīng)用并不限于SEQ ID NO1代表的HKT核酸，也不限于由WSI18啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的HKT核酸的表達(dá)。其他可用于驅(qū)動(dòng)HKT核酸表達(dá)的種子特異性啟動(dòng)子的實(shí)例顯示于以下表4中。
表4用于實(shí)施本發(fā)明的種子特異性啟動(dòng)子的實(shí)例



任選的，還可以在引入植物的構(gòu)建體中使用一個(gè)或多個(gè)終止子序列。術(shù)語“終止子”包括控制序列，其為位于轉(zhuǎn)錄單位末端的DNA序列，傳遞信號(hào)引發(fā)原始轉(zhuǎn)錄物的3’加工和多腺苷酸化以及轉(zhuǎn)錄的終止。另外的調(diào)控元件可以包括轉(zhuǎn)錄和翻譯的增強(qiáng)子。本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員將知道適合用于實(shí)施本發(fā)明的終止子和增強(qiáng)子的序列。這種序列為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，或者可以容易地獲得。
本發(fā)明的遺傳構(gòu)建體還可以包括復(fù)制起點(diǎn)序列，這是在特定細(xì)胞類型中維持和/或復(fù)制所必需的。一個(gè)實(shí)例是當(dāng)需要將遺傳構(gòu)建體作為附加型遺傳元件(如質(zhì)粒或粘粒分子)在細(xì)菌細(xì)胞中維持時(shí)。優(yōu)選的復(fù)制起點(diǎn)包括(但不限于)f1-ori和colE1。
遺傳構(gòu)建體可以任選地包括可選擇的標(biāo)記基因。如本文所用，術(shù)語“可選擇的標(biāo)記基因”包括賦予細(xì)胞表型的任意基因，該基因在細(xì)胞中的表達(dá)有利于鑒定和/或選擇經(jīng)本發(fā)明的核酸構(gòu)建體轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。適當(dāng)?shù)臉?biāo)記可以選自帶有抗生素或除草劑抗性、引入新的代謝性狀或允許可視選擇的標(biāo)記。可選擇的標(biāo)記基因的實(shí)例包括賦予抗生素抗性的基因(例如磷酸化新霉素和卡那霉素的npt II，或磷酸化潮霉素的hpt)，賦予除草劑抗性的基因(例如bar提供對(duì)Basta的抗性；aroA或gox提供對(duì)草甘膦的抗性)，或提供代謝特性的基因(如允許植物使用甘露糖作為唯一碳源的manA)?？梢暤臉?biāo)記致使形成顏色(例如β-葡糖醛酸糖苷酶，GUS)、發(fā)光(例如熒光素酶)或熒光(綠色熒光蛋白GFP及其衍生物)。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，上文提及的遺傳構(gòu)建體含有HKT核酸，其以有義方向偶聯(lián)于啟動(dòng)子，啟動(dòng)子優(yōu)選為種子特異性啟動(dòng)子，如稻W(wǎng)SI18啟動(dòng)子。因此，本發(fā)明另一方面為載體構(gòu)建體，其攜帶與SEQ ID NO 4基本上相似的表達(dá)盒，包含WSI18啟動(dòng)子，稻HKT基因和T-玉米醇溶蛋白+T-核酮糖二磷酸羧化酶δGA(T-rubisco deltaGA)轉(zhuǎn)錄終止序列。與SEQID NO 4基本上相似的序列包含第一核酸序列，其編碼與SEQ ID NO 2同源的蛋白質(zhì)或者與SEQ ID NO 1雜交，所述第一核酸有效連接于WSI18啟動(dòng)子或具有相似表達(dá)模式的啟動(dòng)子，另外地或可選地，所述第一核酸連接于轉(zhuǎn)錄終止序列。
本發(fā)明還包括由本發(fā)明方法可獲得的植物或部分(包括植物細(xì)胞)。本發(fā)明因此提供可由本發(fā)明方法獲得的植物或其部分(包括植物細(xì)胞)，該植物中引入了分離的HKT核酸或其變體，或該植物中，優(yōu)選在HKT基因座，引入了遺傳修飾。
本發(fā)明還提供產(chǎn)生具有改良生長(zhǎng)特性的轉(zhuǎn)基因植物的方法，其包括在植物中引入和表達(dá)分離的HKT核酸或其變體。
更具體地，本發(fā)明提供產(chǎn)生具有改良生長(zhǎng)特性的轉(zhuǎn)基因植物的方法，該方法包括(i)向植物或植物細(xì)胞中引入分離的HKT核酸或其變體；和
(ii)在促進(jìn)植物生長(zhǎng)和發(fā)育的條件下培養(yǎng)植物細(xì)胞。
可以將核酸直接引入植物細(xì)胞或植物本身(包括引入組織、器官或植物的任何其他部分)。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選方面，優(yōu)選通過轉(zhuǎn)化將核酸引入植物。
本文所提及的術(shù)語“轉(zhuǎn)化”包含將外源多核苷酸轉(zhuǎn)移進(jìn)宿主細(xì)胞，不考慮轉(zhuǎn)移所用的方法。無論是通過器官發(fā)生還是胚胎發(fā)生，能夠隨即克隆增殖的植物組織都可以使用本發(fā)明的遺傳構(gòu)建體轉(zhuǎn)化并從其再生整個(gè)植物。具體的組織選擇將因可提供和最適于轉(zhuǎn)化的具體物種的克隆增殖系統(tǒng)而改變。示例性的靶組織包括葉盤、花粉、胚、子葉、下胚軸、雌配子、愈傷組織、既有的分生組織(例如頂端分生組織、腋芽和根分生組織)以及誘導(dǎo)的分生組織(例如子葉分生組織和下胚軸分生組織)。可以將多核苷酸瞬時(shí)地或穩(wěn)定地引入宿主細(xì)胞，并且可以保持非整合的狀態(tài)，例如作為質(zhì)粒。備選地，其可以整合進(jìn)入宿主基因組。得到的轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞可以接著用于以本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方式再生為轉(zhuǎn)化的植物。
植物物種的轉(zhuǎn)化目前是一種相當(dāng)常規(guī)的技術(shù)。有利地，可以使用幾種轉(zhuǎn)化方法的任一向適當(dāng)?shù)淖嫦燃?xì)胞引入目的基因。轉(zhuǎn)化方法包括用脂質(zhì)體、電穿孔、增強(qiáng)游離DNA攝取的化學(xué)物質(zhì)、直接向植物注射DNA、粒子槍轟擊、用病毒或花粉轉(zhuǎn)化和顯微投影(microprojection)。方法可以選自用于原生質(zhì)體的鈣/聚乙二醇方法(Krens等，1882，Nature 296，72-74；Negrutiu等，June 1987，Plant Mol.Biol.8，363-373)；原生質(zhì)體的電穿孔法(Shillito等，1985 Bio/Technol 3，1099-1102)；植物材料的顯微注射(Crossway等，1986，Mol.Gen Genet 202，179-185)；DNA或RNA包被的粒子轟擊(Klein等，1987，Nature 327，70)；(非整合型)病毒感染等等。優(yōu)選使用任何熟知的稻轉(zhuǎn)化方法通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化的產(chǎn)生表達(dá)HTK蛋白的轉(zhuǎn)基因稻類植物，例如在任何以下文獻(xiàn)中描述的方法公開的歐洲專利申請(qǐng)EP 1198985 A1，Aldemita和Hodges(Planta，199，612-617，1996)；Chan等(Plant Mol.Biol.22(3)491-506，1993)，Hiei等(Plant J.6(2)271-282，1994)，其公開的內(nèi)容如同其陳述的全部?jī)?nèi)容那樣并入本文作為參考。至于谷物轉(zhuǎn)化優(yōu)選的方法如Ishida等(Nat.Biotechnol.1996，14(6)745-50)或Frame等(Plant Physiol.2002，129(1)13-22)中所述，其公開的內(nèi)容如同其陳述的全部?jī)?nèi)容那樣并入本文作為參考。
通常在轉(zhuǎn)化以后，選出存在一個(gè)或多個(gè)標(biāo)記的植物細(xì)胞或細(xì)胞組，所述標(biāo)記由與目的基因共轉(zhuǎn)移的植物可表達(dá)基因編碼，繼之轉(zhuǎn)化的材料再生成整個(gè)植物。
DNA轉(zhuǎn)移和再生之后，可評(píng)估推定的轉(zhuǎn)化植物，例如用Southern分析目的基因的存在、拷貝數(shù)和/或基因組組成。備選的或額外的，可用Northern和/或Western分析監(jiān)測(cè)新引入基因的表達(dá)水平，這兩種技術(shù)都是本領(lǐng)域內(nèi)普通技術(shù)人員熟知的。從而，將轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞培養(yǎng)為成熟的植物可能包括選擇和/或再生和/或成長(zhǎng)至成熟的步驟。
產(chǎn)生的轉(zhuǎn)化植物可以通過多種方式繁殖，如用克隆繁殖或經(jīng)典的育種技術(shù)。例如，第一代(或T1)轉(zhuǎn)化的植物可自交得到純合的第二代(或T2)轉(zhuǎn)化體，T2植物進(jìn)一步通過經(jīng)典育種技術(shù)繁殖。
產(chǎn)生的轉(zhuǎn)化生物體可以有多種形式。例如，它們可以是轉(zhuǎn)化細(xì)胞和非轉(zhuǎn)化細(xì)胞的嵌合體；克隆的轉(zhuǎn)化體(例如經(jīng)過轉(zhuǎn)化包含表達(dá)盒的所有細(xì)胞)；轉(zhuǎn)化和非轉(zhuǎn)化組織的嫁接體(例如在植物中，轉(zhuǎn)化的根莖嫁接到非轉(zhuǎn)化的接穗上)。
本發(fā)明顯然延及由本文所述方法產(chǎn)生的任何植物細(xì)胞或植物，以及所有植物的部分和其繁殖體。本發(fā)明還涵蓋由任意上述方法產(chǎn)生的原代轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、組織、器官或整個(gè)植物的后代，所述后代的唯一要求是與本發(fā)明方法產(chǎn)生的親本呈現(xiàn)同樣的基因型和/或表型特性。本發(fā)明也包括含有分離的HKT核酸或其變體的宿主細(xì)胞。本發(fā)明優(yōu)選的宿主細(xì)胞是植物細(xì)胞。本發(fā)明也延及植物可收獲的部分，例如，但不限于種子、葉、果實(shí)、花、莖培養(yǎng)物、根莖、塊莖和球莖。此外本發(fā)明還涉及由這樣的植物的可收獲部分直接衍生的產(chǎn)品，如干?；蚋煞邸⒂?、脂肪和脂肪酸、淀粉或蛋白質(zhì)。
本發(fā)明還包括HKT核酸或其變體的用途以及HKT多肽或其同源物的用途。
一種這樣的用途涉及改良植物的生長(zhǎng)特性，特別是改良產(chǎn)率，尤其是種子產(chǎn)率。種子產(chǎn)率可能包括如下的一項(xiàng)或多項(xiàng)增加的(飽滿)種子數(shù)、增加的種子重量、增加的收獲指數(shù)、增加的千粒重、種子飽滿度等等。
可以在育種程序中使用HKT核酸或其變體，或者HKT多肽或其同源物，其中鑒定可以遺傳地連接于HKT基因或其變體的DNA標(biāo)記?？梢允褂肏KT或其變體，或者HKT多肽或其同源物界定分子標(biāo)記。接著可以將此DNA或蛋白質(zhì)標(biāo)記在育種程序中使用，以選擇具有改良的生長(zhǎng)特性的植物。例如，HKT基因或其變體可以是由SEQ ID NO1所代表的核酸，或者是編碼上述任何同源物的核酸。
HKT等位基因變體也可以用于標(biāo)記輔助的育種程序。這類育種程序有時(shí)需要使用，例如EMS誘變，通過植物誘變處理引入等位基因變體；備選的，此程序可以以收集無意產(chǎn)生的所謂“天然”起源的等位基因變體開始。然后通過例如PCR鑒定等位基因變體。隨后是選擇步驟用以選擇所討論序列的較好等位基因變體，所述等位基因變體賦予植物改良的生長(zhǎng)特性。一般通過監(jiān)測(cè)含有所研究序列的不同等位基因變體植物的生長(zhǎng)行為來進(jìn)行選擇，所述研究序列的不同等位基因變體是例如SEQ ID NO1或是上述任何植物同源物編碼核酸的不同等位基因變體?？梢栽跍厥一蛱锏刂斜O(jiān)測(cè)生長(zhǎng)行為。更多任選的步驟包括，將經(jīng)鑒定含有較好等位基因變體的植物與另一植物雜交。例如，可使用這種方法產(chǎn)生目的表型特征的組合。
HKT核酸或其變體還可以作為探針，用于對(duì)其為基因一部分的基因進(jìn)行遺傳和物理的作圖，以及作為那些基因連鎖性狀的標(biāo)記。這些信息可以在植物育種中使用，以得到具有期望表型的品系。HKT核酸或其變體的這類應(yīng)用僅需要至少10個(gè)核苷酸長(zhǎng)的一段核酸序列。HKT核酸或其變體也可以用作限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)標(biāo)記?？捎肏KT核酸或其變體探測(cè)限制酶切消化的植物基因組DNA的Southern印跡。隨后使用計(jì)算機(jī)程序如MapMaker(Lander等，(1987)Genomics 1，174-181)對(duì)產(chǎn)生的帶型進(jìn)行遺傳分析，以構(gòu)建遺傳圖譜。此外，可以使用核酸在含有一組個(gè)體的限制性內(nèi)切酶處理的基因組DNA中探測(cè)Southern印跡，所述一組個(gè)體為代表明確的遺傳雜交的親本和子代的一組個(gè)體。記錄DNA多態(tài)性的分離，并用于計(jì)算在先前用此群體獲得的遺傳圖譜中HKT核酸或其變體的位置(Botstein等(1980)Am.J.Hum.Genet.32314-331)。
在遺傳作圖中使用的植物基因衍生探針的產(chǎn)生和用途描述于Bematzky和Tanksley(Plant Mol.Biol.Reporter 437-41，1986)中。很多出版物中描述過用上述方法或其變通形式對(duì)特定cDNA克隆進(jìn)行遺傳作圖。例如，可以使用F2雜交群體、回交群體、隨機(jī)交配群體、近親同基因系和其他個(gè)體組作圖。這類方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。
核酸探針也可以用于物理作圖(即在物理圖譜上安置序列；見Hoheisel等InNon-mammalian Genomic AnalysisA Practical Guide，Academicpress 1996，第319-346頁，及其中引用的參考文獻(xiàn))。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，核酸探針用于直接熒光原位雜交(FISH)作圖(Trask(1991)Trends Genet.7149-154)。盡管目前FISH作圖的方法傾向用于大的克隆(幾個(gè)到幾百個(gè)KB；見Laan等(1995)Genome Res.513-20)，但是靈敏度的提高允許在FISH作圖中應(yīng)用較短的探針。
用于遺傳和物理作圖的多種基于核酸擴(kuò)增的方法可以使用所述核酸進(jìn)行。實(shí)例包括等位基因特異性擴(kuò)增(Kazazian(1989)J.Lab.Clin.Med 11，95-96)、PCR擴(kuò)增片段的多態(tài)性(CAPS；Sheffield等(1993)Genomics 16，325-332)、等位基因特異性連接(Landegren等(1988)Science 241，1077-1080)、核苷酸延伸反應(yīng)(Sokolov(1990)Nucleic Acid Res.18，3671)、放射雜交作圖(Walter等(1997)Nat.Genet.7，22-28)和Happy作圖(Dear和Cook(1989)Nucleic Acid Res.17，6795-6807)。為實(shí)施這些方法，使用核酸序列設(shè)計(jì)和產(chǎn)生用于擴(kuò)增反應(yīng)或引物延伸反應(yīng)的引物對(duì)。這類引物的設(shè)計(jì)是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。使用基于PCR的遺傳作圖的方法，可能需要鑒定跨越相應(yīng)于本發(fā)明核酸序列區(qū)域作圖的親本之間DNA序列的差異。不過，這對(duì)作圖方法通常不是必要的。
以這種方式，可以實(shí)施具有增加HKT活性、表現(xiàn)出改良生長(zhǎng)特性的植物的產(chǎn)生、鑒定和/或分離。
HKT核酸或其變體，或者HKT多肽或其同源物還可用為生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。由于這些分子已顯示在促進(jìn)植物生長(zhǎng)特性中有用，所以它們也是有用的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，如除草劑或生長(zhǎng)刺激物。因此，本發(fā)明提供用作生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，優(yōu)先用作生長(zhǎng)促進(jìn)劑的組合物，其包括HKT或其變體或者HKT多肽或其同源物，以及適當(dāng)?shù)妮d體、稀釋劑或賦形劑。
實(shí)施根據(jù)本發(fā)明的方法得到如前所述具有改良生長(zhǎng)特性的植物。這些有利的生長(zhǎng)特性還可以組合其他經(jīng)濟(jì)上有利的性狀，如進(jìn)一步提高產(chǎn)率的性狀、對(duì)多種脅迫的耐受性、改變各種構(gòu)造特征和/或生化和/或生理學(xué)特征的性狀，前提是GenBank登錄號(hào)U16709所代表的序列并不用于修飾植物鹽耐受或用于積累堿金屬。


現(xiàn)參考以下附圖描述本發(fā)明，其中圖1為HKT蛋白的示意圖(M_ser等，2002)。跨膜結(jié)構(gòu)域以羅馬數(shù)字I至VIII標(biāo)記，而四個(gè)孔形成結(jié)構(gòu)域以字母A至D標(biāo)示。比對(duì)顯示了與釀酒酵母Trk1(M21328)、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)TrkH(AAG06598)、溶藻性弧菌(Vibrio alginolyticus)KtrB(BAA32063)以及果蠅(Drosophila)Shaker通道(S00479)的孔形成結(jié)構(gòu)域進(jìn)行比較的多種植物HKT的孔形成結(jié)構(gòu)域A。對(duì)應(yīng)于K+通道GYG基序中第一個(gè)甘氨酸的殘基以星號(hào)標(biāo)記。
圖2為多種HKT蛋白序列的多重比對(duì)。給出了數(shù)據(jù)庫登錄號(hào)，所用的縮寫為At，擬南芥；Mc，冰葉日中花；Ec，，赤桉；Os，稻。JU0466代表葡萄汁酵母的TRK1序列，而CAA82128為釀酒酵母的TRK2序列。
圖3為進(jìn)入克隆(entry clone)p036的示意圖，在來自Gateway_的AttL1和AttL2位點(diǎn)之間含有克隆至pDONR201骨架中的CDS1532。CDS1532為擬南芥HKT編碼序列的內(nèi)部密碼子。該載體還含有細(xì)菌卡那霉素抗性盒以及細(xì)菌復(fù)制起點(diǎn)。
圖4顯示了用于在稻中表達(dá)擬南芥HKT基因(內(nèi)參CDS1532)的二元載體，該基因處于稻W(wǎng)SI18啟動(dòng)子(內(nèi)參PRO0151)的控制之下。此載體含有衍生子Ti質(zhì)粒的T-DNA，受左邊界(LB重復(fù)，LB Ti C58)和右邊界(RB重復(fù)，RB Ti C58)限制。該T-DNA自左邊界至右邊界的順序含有用于抗生素選擇轉(zhuǎn)化植物的盒；組成型啟動(dòng)子-可選擇標(biāo)記-NOS終止子；用于可視篩選轉(zhuǎn)化植物的盒；PRO0151-CDS1532構(gòu)建體-玉米醇溶蛋白和rbcS-deltaGA雙終止子；擬南芥HKT基因的表達(dá)盒。此載體還含有用于細(xì)菌復(fù)制的pBR322復(fù)制起點(diǎn)和用于進(jìn)行細(xì)菌壯觀霉素和鏈霉素選擇的可選擇標(biāo)記(Spe/SmeR)。
圖5詳述了用于實(shí)施本發(fā)明方法的序列實(shí)例。
實(shí)施例現(xiàn)參考以下實(shí)施例描述本發(fā)明，所述實(shí)施例僅意在舉例說明。
DNA操作除非另外說明，重組DNA技術(shù)根據(jù)描述于(Sambrook(2001)分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)，第三版，冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版，CSH，紐約或者Ausubel等(1994)，分子生物學(xué)最新指南的第一卷和第二卷)的標(biāo)準(zhǔn)方法執(zhí)行。植物分子操作的標(biāo)準(zhǔn)材料和方法由R.D.D.Croy描述于PlantMolecular Biology Labfase(1993)，由BIOS Scientific Publications Ltd(UK)和Blackwell Scientific Publications(UK)出版。
實(shí)施例1基因克隆使用擬南芥幼苗cDNA文庫(Invitrogen，Paisley，UK)作為模板通過PCR擴(kuò)增擬南芥HKT基因(CDS1523)。從幼苗提取的RNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄后，將cDNA克隆進(jìn)pCMV Sport 6.0中。該庫平均插入大小為1.5kb，并且原始克隆數(shù)的數(shù)量級(jí)在1.59×107cfu。在6×1011cfu/ml的第一次擴(kuò)增之后，確定原始滴度為9.6×105cfu/ml。提取質(zhì)粒之后，將200ng模板用于50μlPCR混合物中。PCR擴(kuò)增所用引物(其包括Gateway重組的AttB位點(diǎn))為prm3283(SEQ ID NO5)和prm8443(SEQ ID NO6)。在標(biāo)準(zhǔn)條件下使用Hifi Taq DNA聚合酶進(jìn)行PCR。同樣用標(biāo)準(zhǔn)方法擴(kuò)增和純化1613 bp的PCR片段。接著進(jìn)行Gateway過程的第一步，BP反應(yīng)，在此期間將PCR片段與pDONR201質(zhì)粒體內(nèi)重組以產(chǎn)生(根據(jù)Gateway術(shù)語)“進(jìn)入克隆”，p036(圖3)。作為Gateway_技術(shù)一部分的質(zhì)粒pDONR201購自Invitrogen。
實(shí)施例2載體構(gòu)建接著，使用進(jìn)入克隆p036和用于稻轉(zhuǎn)化的指定載體p56一起進(jìn)行LR反應(yīng)。此載體在T-DNA邊界內(nèi)包含以下部分作為功能性元件植物可選擇的標(biāo)記；可視標(biāo)記；旨在與已克隆到進(jìn)入克隆中的目的序列進(jìn)行體內(nèi)重組的LR的Gateway表達(dá)盒。用于組成型表達(dá)的稻W(wǎng)SI18啟動(dòng)子(PRO0151)位于此Gateway盒的上游。LR重組步驟之后，產(chǎn)生的表達(dá)載體p060(圖4)包含SEQ ID NO4的表達(dá)盒，將其轉(zhuǎn)化進(jìn)入農(nóng)桿菌菌株LBA4044，隨后轉(zhuǎn)化進(jìn)入稻植物。使轉(zhuǎn)化的稻類植物生長(zhǎng)，隨后檢測(cè)實(shí)施例3中描述的參數(shù)。
實(shí)施例3轉(zhuǎn)化評(píng)估大約產(chǎn)生了15到20個(gè)獨(dú)立的T0轉(zhuǎn)化體。初級(jí)轉(zhuǎn)化體由組織培養(yǎng)室轉(zhuǎn)移到溫室生長(zhǎng)并收獲T1種子。5個(gè)事件得以保留，其中T1后代發(fā)生轉(zhuǎn)基因存在/缺乏的3∶1分離。通過可視標(biāo)記篩選，在每一事件中選出10個(gè)含轉(zhuǎn)基因(雜合子和純合子)的T1幼苗，和10個(gè)缺少轉(zhuǎn)基因(無效合子)的T1幼苗。將所選的T1植物轉(zhuǎn)移到溫室中。每個(gè)植物給予一個(gè)獨(dú)特的條形標(biāo)記，以將表型數(shù)據(jù)與對(duì)應(yīng)植物明確聯(lián)系起來。所選擇的T1植物在10cm直徑花盆的土壤中在下列環(huán)境情況下生長(zhǎng)光周期＝11.5小時(shí)、日光強(qiáng)度＝30,000勒克斯或以上、日間溫度＝28℃或更高、夜間溫度＝22℃、相對(duì)濕度＝60-70％。轉(zhuǎn)基因植物和相應(yīng)的無效合子在隨機(jī)位置上并排生長(zhǎng)。從播種期到成熟期，使植物幾次通過數(shù)字成像箱。在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上對(duì)每株植物從至少6個(gè)不同的角度取得數(shù)字圖像(2048×1536像素，1千6百萬色)。
收獲成熟的初級(jí)圓錐花序、裝袋并貼上條形碼標(biāo)記，然后在37℃烤箱中干燥三天。隨后將圓錐花序脫粒并且收集所有的種子。使用鼓風(fēng)裝置將飽滿谷殼和空殼分開。在分離后，使用可商購的計(jì)數(shù)儀器對(duì)兩批種子進(jìn)行計(jì)數(shù)。棄去空殼。在分析天平上稱重飽滿的外殼并且使用數(shù)字成像測(cè)量種子的截面積。此方法得到一組下面描述的種子相關(guān)參數(shù)。
這些參數(shù)是使用圖像分析軟件，以自動(dòng)方式從數(shù)字圖像中得到并且進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析的。將對(duì)不平衡設(shè)計(jì)進(jìn)行修正的雙因素ANOVA(方差分析)用作統(tǒng)計(jì)模型，用于植物表型特征的全面評(píng)估。對(duì)用本發(fā)明基因轉(zhuǎn)化的所有植株的所有事件的所有測(cè)量參數(shù)進(jìn)行F測(cè)驗(yàn)。進(jìn)行F檢驗(yàn)以檢查基因?qū)λ修D(zhuǎn)化事件的效應(yīng)，并檢驗(yàn)基因的總效應(yīng)，亦稱之為整體基因效應(yīng)。如果F檢驗(yàn)的值顯示數(shù)據(jù)具有顯著性，那么結(jié)論是有“基因”效應(yīng)，這意味著基因的存在或定位引起了效應(yīng)。真實(shí)整體基因效應(yīng)的顯著性閾值設(shè)置為F檢驗(yàn)的5％概率水平。
為了檢查基因在事件中的效應(yīng)，即品系特異性效應(yīng)，在每一事件中使用來自轉(zhuǎn)基因植物和相應(yīng)無效植物的數(shù)據(jù)集進(jìn)行t檢驗(yàn)?！盁o效植物”或“無效分離子”或“無效合子”是以與轉(zhuǎn)基因植物相同的方式處理的，但是轉(zhuǎn)基因已經(jīng)從中分離的植物。也可以將無效植物描述為純合的陰性轉(zhuǎn)化植物。將t檢驗(yàn)顯著性的閾值設(shè)定為10％概率水平。一些事件的結(jié)果可以高于此閾值或低于此閾值。這是基于這種假設(shè)，即基因可以僅在基因組中的某些位置中具有效應(yīng)，且這種位置依賴性效應(yīng)的發(fā)生不是罕見的。本文中此類基因效應(yīng)也稱為“基因的線性效應(yīng)(line effect of the gene)”。通過將t值與t分布比較得到p值，或者通過將F值與F分布比較得到p值。p值給出了無效假設(shè)(即不存在轉(zhuǎn)基因效應(yīng))正確的概率。
在第一個(gè)實(shí)驗(yàn)中得到的數(shù)據(jù)在使用T2植物的第二個(gè)實(shí)驗(yàn)中得到證實(shí)。選擇了具有正確表達(dá)模式的3個(gè)品系用于進(jìn)一步分析。通過監(jiān)控標(biāo)記表達(dá)來篩選T1中來自陽性植物(雜合子和純合子)的一批種子。對(duì)于每一個(gè)所選事件，隨后保存幾批雜合種子用于進(jìn)行T2評(píng)估。在每批種子中，在溫室中種植等量的陽性和陰性植物用于評(píng)估。
在T2代中評(píng)估了總計(jì)120個(gè)HKT轉(zhuǎn)化植物，即每個(gè)事件的30個(gè)植物中，有15個(gè)為轉(zhuǎn)基因陽性而15個(gè)為陰性。
由于進(jìn)行了具有重疊事件的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)，因此進(jìn)行組合分析。這可用于檢查兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中效應(yīng)的一致性，并且如果情況果真如此，其可用于從兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中收集證據(jù)從而增加結(jié)論的可信性。使用的方法是考慮到數(shù)據(jù)的多級(jí)結(jié)構(gòu)(即實(shí)驗(yàn)-事件-分離子)的混合模型方法。通過對(duì)比卡方分布的似然比測(cè)試獲得p值。
實(shí)施例4轉(zhuǎn)化體的評(píng)估產(chǎn)率相關(guān)參數(shù)的測(cè)量當(dāng)如上所述對(duì)種子進(jìn)行分析時(shí)，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，與無效合子植物相比，用AtHKT基因構(gòu)建體轉(zhuǎn)化的植物在數(shù)種產(chǎn)量參數(shù)上得分更高，包括飽滿種子數(shù)、總產(chǎn)率和收獲指數(shù)?？偖a(chǎn)率通過稱重從植物重收獲的所有飽滿谷殼來測(cè)量。飽滿種子數(shù)通過計(jì)數(shù)在分離步驟之后剩下的飽滿谷殼數(shù)來測(cè)定。收獲指數(shù)在本發(fā)明中定義為種子總產(chǎn)率與地上面積(以mm2計(jì))之間的比率。
選擇了四個(gè)事件進(jìn)行T2植物評(píng)價(jià)。T2代中同樣存在增產(chǎn)結(jié)果。個(gè)體品系收獲指數(shù)的增加在8-20％之間變動(dòng)，種子總重量的增加在12-24％之間變動(dòng)，而飽滿種子數(shù)的增加為15％左右。
序列表<110>克羅普迪塞恩股份有限公司<120>具有改良生長(zhǎng)特性的植物及其制備方法<130>CD-125-PCT<150>EP 04105406.5<151>2004-10-29<150>US 60/624,892<151>2004-11-04<160>45<170>PatentIn vers ion 3.3<210>1<211>1521<212>DNA<213>擬南芥(Arabidopsis thaliana)<400>1atggacagag tggtggcaaa aatagcaaaa atccgttcgc agcttactaa attacgttca 60ctattcttcc tttacttcat ctacttcttg ttcttctcct ttttagggtt tttggcactc120aagatcacaa agccaagaac cacttcacgt cctcatgact ttgacctttt cttcacttct180gtctctgcca tcaccgtctc ttccatgtct accgtcgaca tggaagtctt ctccaacacc240caacttatct tcctcactat cctcatgttc ctcggtggcg aaatcttcac ctcctttctc300aacctctacg tctcctattt caccaagttc gtcttccctc ataacaagat tagacatatt360ttgggatctt ataattcgga cagttccatc gaggatcgct gtgacgttga gactgttact420gattatcgcg agggtcttat caagatcgat gaaagggcat ctaagtgctt gtactcggtg480gttcttagtt accatcttgt tactaaccta gttggctctg tgttgcttct tgtgtacgta540aattttgtta aaacggcgag agatgttctt agttccaaag aaatctcacc tctcactttc600tccgtcttca caactgtttc cacgtttgca aactgcggat ttgtccccac gaatgagaac660atgatcatct ttcgcaagaa ctctggtctc atctggctcc taatccctca agtactgatg720ggaaacactt tgttcccttg cttcttggtt ttgctcatat ggggacttta taagatcaca780aagcgtgacg agtatggtta cattctcaag aaccacaata agatgggata ctctcatcta840ctctcggttc gtctatgtgt tcttcttgga gtgacggtgc tagggtttct gataatacag900cttcttttct tctgcgcctt tgaatggacc tctgagtctc tagaaggaat gagttcgtac960gagaagttgg ttggatcgtt gtttcaagtg gtgaattcgc gacacaccgg agaaactata 1020gtagacctct ctacactttc cccagctatc ttggtactct ttattcttat gatgtatctt 1080cctccataca ctttatttat gccgttgacg gaacaaaaga cgatagagaa agaaggagga 1140gatgatgatt ccgaaaatgg aaagaaagtt aaaaagagtg gactcatcgt gtcacaactt 1200tcctttttga cgatatgtat ctttctcatt tcaatcaccg aaaggcaaaa tctacaacgt 1260gatccgataa atttcaacgt ccttaacatc actctcgaag ttatcagtgc atatggaaac 1320gttggtttca ctaccgggta cagctgtgaa cggcgtgtgg acatcagcga tggtggctgc 1380aaagacgcga gttatgggtt tgcaggacga tggagtccaa tgggaaaatt cgtactaata 1440atagtaatgt tttatggtag gtttaagcag ttcacagcca aatctggccg cgcatggatt 1500ctttacccct cgtcttccta a 1521
<210>2<211>506<212>PRT<213>擬南芥<400>2Met Asp Arg Val Val Ala Lys Ile Ala Lys Ile Arg Ser Gln Leu Thr1 5 10 15Lys Leu Arg Ser Leu Phe Phe Leu Tyr Phe Ile Tyr Phe Leu Phe Phe20 25 30Ser Phe Leu Gly Phe Leu Ala Leu Lys Ile Thr Lys Pro Arg Thr Thr35 40 45Ser Arg Pro His Asp Phe Asp Leu Phe Phe Thr Ser Val Ser Ala Ile50 55 60Thr Val Ser Ser Met Ser Thr Val Asp Met Glu Val Phe Ser Asn Thr65 70 75 80Gln Leu Ile Phe Leu Thr Ile Leu Met Phe Leu Gly Gly Glu Ile Phe85 90 95Thr Ser Phe Leu Asn Leu Tyr Val Ser Tyr Phe Thr Lys Phe Val Phe100 105 110Pro His Asn Lys Ile Arg His Ile Leu Gly Ser Tyr Asn Ser Asp Ser115 120 125Ser Ile Glu Asp Arg Cys Asp Val Glu Thr Val Thr Asp Tyr Arg Glu130 135 140Gly Leu Ile Lys Ile Asp Glu Arg Ala Ser Lys Cys Leu Tyr Ser Val145 150 155 160Val Leu Ser Tyr His Leu Val Thr Asn Leu Val Gly Ser Val Leu Leu165 170 175Leu Val Tyr Val Asn Phe Val Lys Thr Ala Arg Asp Val Leu Ser Ser180 185 190Lys Glu Ile Ser Pro Leu Thr Phe Ser Val Phe Thr Thr Val Ser Thr195 200 205Phe Ala Asn Cys Gly Phe Val Pro Thr Asn Glu Asn Met Ile Ile Phe210 215 220Arg Lys Asn Ser Gly Leu Ile Trp Leu Leu Ile Pro Gln Val Leu Met225 230 235 240
Gly Asn Thr Leu Phe Pro Cys Phe Leu Val Leu Leu Ile Trp Gly Leu245 250 255Tyr Lys Ile Thr Lys Arg Asp Glu Tyr Gly Tyr Ile Leu Lys Asn His260 265 270Asn Lys Met Gly Tyr Ser His Leu Leu Ser Val Arg Leu Cys Val Leu275 280 285Leu Gly Val Thr Val Leu Gly Phe Leu Ile Ile Gln Leu Leu Phe Phe290 295 300Cys Ala Phe Glu Trp Thr Ser Glu Ser Leu Glu Gly Met Ser Ser Tyr305 310 315 320Glu Lys Leu Val Gly Ser Leu Phe Gln Val Val Asn Ser Arg His Thr325 330 335Gly Glu Thr Ile Val Asp Leu Ser Thr Leu Ser Pro Ala Ile Leu Val340 345 350Leu Phe Ile Leu Met Met Tyr Leu Pro Pro Tyr Thr Leu Phe Met Pro355 360 365Leu Thr Glu Gln Lys Thr Ile Glu Lys Glu Gly Gly Asp Asp Asp Ser370 375 380Glu Asn Gly Lys Lys Val Lys Lys Ser Gly Leu Ile Val Ser Gln Leu385 390 395 400Ser Phe Leu Thr Ile Cys Ile Phe Leu Ile Ser Ile Thr Glu Arg Gln405 410 415Asn Leu Gln Arg Asp Pro Ile Asn Phe Asn Val Leu Asn Ile Thr Leu420 425 430Glu Val Ile Ser Ala Tyr Gly Asn Val Gly Phe Thr Thr Gly Tyr Ser435 440 445Cys Glu Arg Arg Val Asp Ile Ser Asp Gly Gly Cys Lys Asp Ala Ser450 455 460Tyr Gly Phe Ala Gly Arg Trp Ser Pro Met Gly Lys Phe Val Leu Ile465 470 475 480Ile Val Met Phe Tyr Gly Arg Phe Lys Gln Phe Thr Ala Lys Ser Gly485 490 495Arg Ala Trp Ile Leu Tyr Pro Ser Ser Ser500 505
<210>3<211>3817<212>DNA<213>擬南芥<400>3gcttaaaccg actcgagaac taaaatggac agagtggtgg caaaaatagc aaaaatccgt 60tcgcagctta ctaaattacg ttcactattc ttcctttact tcatctactt cttgttcttc120tcctttttag ggtttttggc actcaagatc acaaagccaa gaaccacttc acgtcctcat180gactttgacc ttttcttcac ttctgtctct gccatcaccg tctcttccat gtctaccgtc240gacatggaag tcttctccaa cacccaactt atcttcctca ctatcctcat gttcctcggt300ggcgaaatct tcacctcctt tctcaacctc tacgtctcct atttcaccaa gttcgtcttc360cctcataaca agattagaca tattttggga tcttataatt cggacagttc catcgaggat420cgctgtgacg ttgagactgt tactgattat cgcgagggtc ttatcaagat cgatgaaagg480gcatctaagt gcttgtactc ggtggttctt agttaccatc ttgttactaa cctagttggc540tctgtgttgc ttcttgtgta cgtaaatttt gttaaaacgg cgagagatgt tcttagttcc600aaagaaatct cacctctcac tttctccgtc ttcacaactg tttccacgtt tgcaaactgc660ggatttgtcc ccacgaatga gaacatgatc atctttcgca agaactctgg tctcatctgg720ctcctaatcc ctcaagtact gatgggaaac actttgttcc cttgcttctt ggttttgctc780atatggggac tttataagat cacaaagcgt gacgagtatg gttacattct caagaaccac840aataagatgg gatactctca tctactctcg gttcgtctat gtgttcttct tggagtgacg900gtgctagggt ttctgataat acagcttctt ttcttctgcg cctttgaatg gacctctgag960tctctagaag gaatgagttc gtacgagaag ttggttggat cgttgtttca agtggtgaat 1020tcgcgacaca ccggagaaac tatagtagac ctctctacac tttccccagc tatcttggta 1080ctctttattc ttatgatgta agtttctttc aatcctctcc tcatatatcg aatcatttgc 1140atgaactcga aatatttaga tcgaaaggtg cacttatttc gacataattt tcacatatga 1200ggtgatatgc atgcacacat aggtgcagtt ttacgaatac attaaactaa aacaattgag 1260atatagtgaa attaaatggt tgacatttca ctacagaaac aataaaaagt caccgcatga 1320attaaagttg gttgacattt cacaacagaa acaccaaaca tattattatc tcacgtaatg 1380tagtttggaa aattatcaaa tcatttacct aatttttttt tttatgaagc aaacattttc 1440ctaactatta ttgtttattc cataccaaaa aaaaaaacgt ttatgattta tttaaggatt 1500tttttaatta ctacgtaaag gccaatcatg catgagtggg gtggtagaac catagatttg 1560cattagtttt agtgctattc ttttggctga atccaccaat taatcagctt agcaattgaa 1620agcatatttt attaaccaaa attaatttta acatatctaa cgtggtccat ttggttaaag 1680tattcactcc catggattga ggaagtaaga tttaagttat aaccatgctt ggcaattata 1740catttaatga atagtttgaa taccaagcta atttataatt tttggagatt aattagtatt 1800tatttcggta aatcattctt gtaacaaaaa aaatactaat aatataaaaa attgagattg 1860tgaagtttat tttttcacca caaacacaaa tttcatagaa tttttcaagg tttccacaaa 1920ttagtttacg ctcttaaaat aacaaacaaa acaaaaagta gtatgcttgt caaactttcc 1980acaaaaacat taacgccgga aaacttaaaa caaatagtca taatacatct ttattaaata 2040aataaaaaga aggcataata catatataag ttgataaaac tctccatcac ttaagagtaa 2100ttttttgatg ttttcactta gaagaattta tatatatcta tattaaccat taattaagga 2160acctacaaga gaatgtggta gctagacaag atttgataga gtgaatcaga atatatgtcc 2220atggttttag attcagtaaa aaaaaaatgt cccttcaatg tagtggagac tggagaatgt 2280cccttcatca tattcacaaa gcattattct ctgtttttcc ataaaaactt ctttggacta 2340attaaaaagt aaaatataat tgcgtttcca aggtatcttc ctccatacac tttatttatg 2400ccgttgacgg aacaaaagac gatagagaaa gaaggaggag atgatgattc cgaaaatgga 2460aagaaagtta aaaagagtgg actcatcgtg tcacaacttt cctttttgac gatatgtatc 2520tttctcattt caatcaccga aaggcaaaat ctacaacgtg atccgataaa tttcaacgtc 2580cttaacatca ctctcgaagt tatcaggtat gtttctatat ctcaagattc tttaaccaaa 2640accaaataaa aaaattgttt cagcaatata taaatctcta tattacatat catgcatcca 2700taataactaa aaatttcaaa atattttcaa acaaaatacg tcatctaggt gatacattat 2760
tctacaattt gacaacccaa gtattcgtaa ttcacctaac aaaaaaagag gacgtgaata 2820aaatcgtata agaaacatat atacagtaaa atctctataa attaataatg ttgggactgc 2880aaaattttat taatttagag agatttttta cttatcgata aattaataaa ttaatagaga 2940gatcttcata atttaataac tttgaaaaaa tttctcatta tagaaaatat ctttctaaaa 3000tcaattacaa gtaaaaaata atatcatgta tagaaaacaa caccaatatg ttttgatata 3060gtaaaatatt agaactaaat ttcaaataag aatatataca aatttaagca aaaaaatatc 3120agaaatatat ttttaagaaa tttcttacat ataatgtata tatatagttg atatatttgt 3180gcaattatta atttctgata ttgatggacc atatatttac ataggacttt caaaaaaatt 3240attatctaat taatttatcg atttatgtca ttttttatac tactcccaac tcgggaccgg 3300aagaatttat taatttatag aggttattaa tttatcgagt ataaatttat aaaataaaaa 3360gaaacatata tatatatata atatatatat atatatataa ttcactcatt atgaattgat 3420tgtgaattag aagttaagaa ttatcaacaa aataagtttt gtaatggcag tgcatatgga 3480aacgttggtt tcactaccgg gtacagctgt gaacggcgtg tggacatcag cgatggtggc 3540tgcaaagacg cgagttatgg gtttgcagga cgatggagtc caatgggaaa attcgtacta 3600ataatagtaa tgttttatgg taggtttaag cagttcacag ccaaatctgg ccgcgcatgg 3660attctttacc cctcgtcttc ctaacatatt tcgatcatat ataaatgtta tattaaaatt 3720agtcactttt agcattcctt ttctgtgagt gatgtacaat aagtttgtat gtagtttgca 3780tcatcgttaa tcctcgttaa tattatgata atgtatg 3817<210>4<211>4308<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>表達(dá)盒<400>4aatccgaaaa gtttctgcac cgttttcacc ccctaactaa caatataggg aacgtgtgct 60aaatataaaa tgagacctta tatatgtagc gctgataact agaactatgc aagaaaaact120catccaccta ctttagtggc aatcgggcta aataaaaaag agtcgctaca ctagtttcgt180tttccttagt aattaagtgg gaaaatgaaa tcattattgc ttagaatata cgttcacatc240tctgtcatga agttaaatta ttcgaggtag ccataattgt catcaaactc ttcttgaata300aaaaaatctt tctagctgaa ctcaatgggt aaagagagag atttttttta aaaaaataga360atgaagatat tctgaacgta ttggcaaaga tttaaacata taattatata attttatagt420ttgtgcattc gtcatatcgc acatcattaa ggacatgtct tactccatcc caatttttat480ttagtaatta aagacaattg acttattttt attatttatc ttttttcgat tagatgcaag540gtacttacgc acacactttg tgctcatgtg catgtgtgag tgcacctcct caatacacgt600tcaactagca acacatctct aatatcactc gcctatttaa tacatttagg tagcaatatc660tgaattcaag cactccacca tcaccagacc acttttaata atatctaaaa tacaaaaaat720aattttacag aatagcatga aaagtatgaa acgaactatt taggtttttc acatacaaaa780aaaaaaagaa ttttgctcgt gcgcgagcgc caatctccca tattgggcac acaggcaaca840acagagtggc tgcccacaga acaacccaca aaaaacgatg atctaacgga ggacagcaag900tccgcaacaa ccttttaaca gcaggctttg cggccaggag agaggaggag aggcaaagaa960aaccaagcat cctcctcctc ccatctataa attcctcccc ccttttcccc tctctatata 1020ggaggcatcc aagccaagaa gagggagagc accaaggaca cgcgactagc agaagccgag 1080cgaccgcctt cttcgatcca tatcttccgg tcgagttctt ggtcgatctc ttccctcctc 1140cacctcctcc tcacagggta tgtgcccttc ggttgttctt ggatttattg ttctaggttg 1200tgtagtacgg gcgttgatgt taggaaaggg gatctgtatc tgtgatgatt cctgttcttg 1260gatttgggat agaggggttc ttgatgttgc atgttatcgg ttcggtttga ttagtagtat 1320ggttttcaat cgtctggaga gctctatgga aatgaaatgg tttagggtac ggaatcttgc 1380
gattttgtga gtaccttttg tttgaggtaa aatcagagca ccggtgattt tgcttggtgt1440aataaaagta cggttgtttg gtcctcgatt ctggtagtga tgcttctcga tttgacgaag1500ctatcctttg tttattccct attgaacaaa aataatccaa ctttgaagac ggtcccgttg1560atgagattga atgattgatt cttaagcctg tccaaaattt cgcagctggc ttgtttagat1620acagtagtcc ccatcacgaa attcatggaa acagttataa tcctcaggaa caggggattc1680cctgttcttc cgatttgctt tagtcccaga attttttttc ccaaatatct taaaaagtca1740ctttctggtt cagttcaatg aattgattgc tacaaataat gcttttatag cgttatccta1800gctgtagttc agttaatagg taatacccct atagtttagt caggagaaga acttatccga1860tttctgatct ccatttttaa ttatatgaaa tgaactgtag cataagcagt attcatttgg1920attatttttt ttattagctc tcaccccttc attattctga gctgaaagtc tggcatgaac1980tgtcctcaat tttgttttca aattcacatc gattatctat gcattatcct cttgtatcta2040cctgtagaag tttctttttg gttattcctt gactgcttga ttacagaaag aaatttatga2100agctgtaatc gggatagtta tactgcttgt tcttatgatt catttccttt gtgcagttct2160tggtgtagct tgccactttc accagcaaag ttcatttaaa tcaactaggg atatcacaag2220tttgtacaaa aaagcaggct tcacaatgga cagagtggtg gcaaaaatag caaaaatccg2280ttcgcagctt actaaattac gttcactatt cttcctttac ttcatctact tcttgttctt2340ctccttttta gggtttttgg cactcaagat cacaaagcca agaaccactt cacgtcctca2400tgactttgac cttttcttca cttctgtctc tgccatcacc gtctcttcca tgtctaccgt2460cgacatggaa gtcttctcca acacccaact tatcttcctc actatcctca tgttcctcgg2520tggcgaaatc ttcacctcct ttctcaacct ctacgtctcc tatttcacca agttcgtctt2580ccctcataac aagattagac atattttggg atcttataat tcggacagtt ccatcgagga2640tcgctgtgac gttgagactg ttactgatta tcgtgagggt cttatcaaga tcgatgaaag2700ggcatctaag tgcttgtact cggtggttct tagttaccat cttgttacta acctagttgg2760ctctgtgttg cttcttgtgt acgtaaattt tgttaaaacg gcgagagatg ttcttagttc2820caaagaaatc tcacctctca ctttctccgt cttcacaaca gtttccacgt ttgcaaactg2880cggatttgtc cccacgaatg agaacatgat catctttcgc aaaaactctg gtctcatctg2940gctcctaatc cctcaagtac tgatgggaaa cactttgttc ccttgcttct tggttttgct3000catatgggga ctttataaga tcacaaagcg tgacgagtat ggttacattc tcaagaacca3060caataagatg ggatactctc atctactctc ggttcgtcta tgtgttcttc ttggagtgac3120ggtgctaggg tttctgataa tacagcttct tttcttctgc gcctttgaat ggacctctga3180gtctctagaa ggaatgagtt cgtacgagaa gttggttgga tcgttgtttc aagtggtgaa3240ttcgcgacac accggagaaa ctatagtaga cctctctaca ctttccccag ctatcttggt3300actctttatt cttatgatgt atcttcctcc atacacttta tttatgccgt tgacggaaca3360aaagacgata gagaaagaag gaggagatga tgattccgaa aatggaaaga aagttaaaaa3420gagtggactc atcgtgtcac aactttcctt tttgacgata tgtatctttc tcatttcaat3480caccgaaagg caaaatctac aacgtgatcc gataaatttc aacgtcctta acatcactct3540cgaagttatc agtgcatatg gaaacgtggg tttcactacc gggtacagct gtgaacggcg3600tctggacatc agcgatggtg gctgcaaaga cgcgagttat gggtttgcag gacgatggag3660tccaatggga aaattcgtac taataatagt aatgttttat ggtaggttta agcagttcac3720agtcaaatct ggccgcgcat ggatacttta cccctcgtct tcctaacaac ccagctttct3780tgtacaaagt ggtgatatca caagcccggg cggtcttcta gggataacag ggtaattata3840tccctctaga tcacaagccc gggcggtctt ctacgatgat tgagtaataa tgtgtcacgc3900atcaccatgg gtggcagtgt cagtgtgagc aatgacctga atgaacaatt gaaatgaaaa3960gaaaaaaagt actccatctg ttccaaatta aaattcattt taacctttta ataggtttat4020acaataattg atatatgttt tctgtatatg tctaatttgt tatcatccgg gcggtcttct4080agggataaca gggtaattat atccctctag acaacacaca acaaataaga gaaaaaacaa4140ataatattaa tttgagaatg aacaaaagga ccatatcatt cattaactct tctccatcca4200tttccatttc acagttcgat agcgaaaacc gaataaaaaa cacagtaaat tacaagcaca4260acaaatggta caagaaaaac agttttccca atgccataat actcgaac 4308<210>5
<211>52<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物prm3283<400>5ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggctt cacaatggac agagtggtgg ca52<210>6<211>52<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物prm3286<400>6ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtg aaatatgtta ggaagacgag gg52<210>7<211>112<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>結(jié)構(gòu)域<400>7Gly Leu Ile Val Ser Gln Leu Ser Phe Leu Thr Ile Cys Ile Phe Leu1 5 10 15Ile Ser Ile Thr Glu Arg Gln Asn Leu Gln Arg Asp Pro Ile Asn Phe20 25 30Asn Val Leu Asn Ile Thr Leu Glu Val Ile Ser Ala Tyr Gly Asn Val35 40 45Gly Phe Thr Thr Gly Tyr Ser Cys Glu Arg Arg Leu Asp Ile Ser Asp50 55 60Gly Gly Cys Lys Asp Ala Ser Tyr Gly Phe Ala Gly Arg Trp Ser Pro65 70 75 80Met Gly Lys Phe Val Leu Ile Ile Val Met Phe Tyr Gly Arg Phe Lys85 90 95Gln Phe Thr Ala Lys Ser Gly Arg Ala Trp Ile Leu Tyr Pro Ser Ser100 105 110
<210>8<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>結(jié)構(gòu)域<400>8Glu Val Ile Ser Ala Tyr Gly Asn Val Gly Phe Thr Thr Gly Tyr1 5 10 15<210>9<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>共有序列<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(2)..(2)<223>Xaa可以是Val或Ile<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(3)..(3)<223>Xaa可以是Ile或Val<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(6)..(6)<223>Xaa可以是Tyr或Phe<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(8)..(8)<223>Xaa可以是Asn或Thr<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(9)..(9)<223>Xaa可以是Val、Ala或Thr<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(11)..(11)<223>Xaa可以是Phe、Leu或Tyr
<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(12)..(12)<223>Xaa可以是Thr或Ser<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(13)..(13)<223>Xaa可以是Thr、Ile、Leu、Val或Met<400>9Glu Xaa Xaa Ser Ala Xaa Gly Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Gly Tyr1 5 10 15<210>10<211>5<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>標(biāo)簽<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(3)..(3)<223>Xaa可以是Ile或Leu<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(5)..(5)<223>Xaa可以是Tyr、Phe或Leu<400>10Asp Pro Xaa Asn Xaa1 5<210>11<211>1632<212>DNA<213>冰葉日中花(Mesembryanthemum crystallinum)<400>11atggggagat ttgggtttct taaggagaaa gttcagcaac tttatggttg tctttgtgta 60ggcttatttt accttcttag tactttgttt tgggtatcca acaaaattta tgactttatt120acctatcgta tgagtcattt ttccattgaa gtgtgttact tcatctttgt gtcgtgttta180gggttcttaa tcttgaggaa tataaagcct aggacgtatc cggttaaacc tggagaatta240gatatgttct ttacctcggt ctcggccgca acagtttcat ccatggctac tgttgaaatg300gaggtatttt cagatgccca actccatatt atgaccattt tgatgttcat aggaggggag360gttttcactt ccatggtagg ccttcatttt aaggcctcta ggcttgggaa tacaccctta420
ggtgtaaaaa gtagggctaa ttctgtggct agtttaccat gcccaccaga agattttgat480cacattgagt taggcatcat cactaccaca accaccacaa caacaacaac cacaaccaca540ttgcaaaaaa ctaaatcaga aattgatttc ctcttaaagt ctagatcaat tagggttttg600ggttttgtag ttttggccta cctactaata gttcatgtct taggcacaat aatggtctat660gcatacctta gaattgagcc tagtgcgaag agggttctag agactaaagg gttaaaatct720atcacattcg cgattttcac tagtgtttca acattttcaa gctgtgggtt cgtccctacc780aatgaaaaca tgatcatttt tcgacaaaat tccggcctcc tcttgatgct aatccctcaa840gtcctcctag gaaacacatt gttaccatct ttcttaagat taacaatttg ggtcctggga900aaatttacaa agaaggatga atctaagtat cttatgagga acacaaagga gattgcatac960catcatttgc tccctaccaa gcactctaag tatgtggttg tgaccgtttt cgggttcatt 1020ttggcgtcac tcattatgtt ttgctcaatg gattggaact tgaagggatt aagtgatctt 1080aatgtttacc aaaaactggt gggtgcattg ttccaatgtg tgaatgcaag acatactggt 1140gaaactattg ttgatctctc aactattgcc tcagctgtct tggttgtttt cgtcataatg 1200atgtatcttc ccccttatac atcatttctg ccaacaaaag atggagaaga agaataccca 1260ctagtataca aaggagaaaa gacaaagggg aagttgattt tggacaatgt ggtattctca 1320caactctcct accttgtcat cttcatcatc cttgtttgca tcacagagag aaaaagcatg 1380aaagaagatc ccctcaattt caatgttctc aacattgttg ttgaagttat tagtgcatat 1440ggaaatgttg gattttcaac tggctacagt tgttcaaggc aattaaaacc agatgcaaat 1500tgtgtagata aatggtatgg atttgtagga aaatggagtg accaagggaa gatcatcctc 1560atttttgtca tgttctttgg aaggctcaag aaattcaaca tgaaaggagg cagagcatgg 1620aagctcctat aa 1632<210>12<211>543<212>PRT<213>冰葉日中花<400>12Met Gly Arg Phe Gly Phe Leu Lys Glu Lys Val Gln Gln Leu Tyr Gly1 5 10 15Cys Leu Cys Val Gly Leu Phe Tyr Leu Leu Ser Thr Leu Phe Trp Val20 25 30Ser Asn Lys Ile Tyr Asp Phe Ile Thr Tyr Arg Met Ser His Phe Ser35 40 45Ile Glu Val Cys Tyr Phe Ile Phe Val Ser Cys Leu Gly Phe Leu Ile50 55 60Leu Arg Asn Ile Lys Pro Arg Thr Tyr Pro Val Lys Pro Gly Glu Leu65 70 75 80Asp Met Phe Phe Thr Ser Val Ser Ala Ala Thr Val Ser Ser Met Ala85 90 95Thr Val Glu Met Glu Val Phe Ser Asp Ala Gln Leu His Ile Met Thr100 105 110Ile Leu Met Phe Ile Gly Gly Glu Val Phe Thr Ser Met Val Gly Leu115 120 125
His Phe Lys Ala Ser Arg Leu Gly Asn Thr Pro Leu Gly Val Lys Ser130 135 140Arg Ala Asn Ser Val Ala Ser Leu Pro Cys Pro Pro Glu Asp Phe Asp145 150 155 160His Ile Glu Leu Gly Ile Ile Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr165 170 175Thr Thr Thr Thr Leu Gln Lys Thr Lys Ser Glu Ile Asp Phe Leu Leu180 185 190Lys Ser Arg Ser Ile Arg Val Leu Gly Phe Val Val Leu Ala Tyr Leu195 200 205Leu Ile Val His Val Leu Gly Thr Ile Met Val Tyr Ala Tyr Leu Arg210 215 220Ile Glu Pro Ser Ala Lys Arg Val Leu Glu Thr Lys Gly Leu Lys Ser225 230 235 240Ile Thr Phe Ala Ile Phe Thr Ser Val Ser Thr Phe Ser Ser Cys Gly245 250 255Phe Val Pro Thr Asn Glu Asn Met Ile Ile Phe Arg Gln Asn Ser Gly260 265 270Leu Leu Leu Met Leu Ile Pro Gln Val Leu Leu Gly Asn Thr Leu Leu275 280 285Pro Ser Phe Leu Arg Leu Thr Ile Trp Val Leu Gly Lys Phe Thr Lys290 295 300Lys Asp Glu Ser Lys Tyr Leu Met Arg Asn Thr Lys Glu Ile Ala Tyr305 310 315 320His His Leu Leu Pro Thr Lys His Ser Lys Tyr Val Val Val Thr Val325 330 335Phe Gly Phe Ile Leu Ala Ser Leu Ile Met Phe Cys Ser Met Asp Trp340 345 350Asn Leu Lys Gly Leu Ser Asp Leu Asn Val Tyr Gln Lys Leu Val Gly355 360 365Ala Leu Phe Gln Cys Val Asn Ala Arg His Thr Gly Glu Thr Ile Val370 375 380Asp Leu Ser Thr Ile Ala Ser Ala Val Leu Val Val Phe Val Ile Met385 390 395 400
Met Tyr Leu Pro Pro Tyr Thr Ser Phe Leu Pro Thr Lys Asp Gly Glu405 4l0 415Glu Glu Tyr Pro Leu Val Tyr Lys Gly Glu Lys Thr Lys Gly Lys Leu420 425 430lle Leu Asp Asn Val Val Phe Ser Gln Leu Ser Tyr Leu Val Ile Phe435 440 445Ile Ile Leu Val Cys Ile Thr Glu Arg Lys Ser Met Lys Glu Asp Pro450 455 460Leu Asn Phe Asn Val Leu Asn Ile Val Val Glu Val Ile Ser Ala Tyr465 470 475 480Gly Asn Val Gly Phe Ser Thr Gly Tyr Ser Cys Ser Arg Gln Leu Lys485 490 495Pro Asp Ala Asn Cys Val Asp Lys Trp Tyr Gly Phe Val Gly Lys Trp500 505 510Ser Asp Gln Gly Lys Ile Ile Leu Ile Phe Val Met Phe Phe Gly Arg515 520 525Leu Lys Lys Phe Asn Met Lys Gly Gly Arg Ala Trp Lys Leu Leu530 535 540<210>13<211>1518<212>DNA<213>冰葉日中花<400>13atggagaaat atttggctct cttccacaag aaattagatc aattttttaa tttttgttat 60acaaaagctt tatcatatat tagctccttg tatgagtaca taatcttcca agttcaccca 120ttttggcatc acctctttta ttatatcata gtttctctct tgggttactt ctccttgaag 180gccacttcaa gaaagcagag gagctcccct gttttctctg atccccgcca cgatgacctc 240gacctcttct tcacctctgt ctccgccacc accatctcga gcatgtcgac aatcgagatg 300gaggatttct cgagtcccca gctcgtcgtt ctcatcatcc tcatgctttc tggtggggaa 360gtcttccttt ccctccttgg cctccagctc cgtaaatcca agcataggaa gagggagcaa 420aagaacatcc tcttgaactc gccctccgaa ggtatgaaat ataagtcact ggtggcacta 480ggacatgttg ttttgggcta cctcttggtg tgccatataa ttgggtacag tctagcttcc 540ttgtacataa gcatttctag aagtgcaagc aatgtgctcg agagaaaaca cattgagatg 600catctcttct ccctcttcgt caccgtctcc acattctcca actgtggatt catcccaaca 660aatgagaaca tgatggtctt taagggaaat tcaggattgc tattgatcct catcccacaa 720atcctcctag ggaacaaact gtacccatct tgcctaaggc tagttctttg ggtgctcgaa 780aagctaaccg gcaaagccga gttcagctac atattgaaga aaaatgatga gcttggttat 840gggttgtttt tctcgcaagt cgatgcgttg ctcttggctg tgactgcggt tggattggtt 900atggttcagt ttgtggtgtt ttgcatcttg gagtggaatt cggtagcgtt gatggatctt 960aattggcatc aaaaactggt cggatctctc tttcaaactg tcaattctag gcacagtgga 1020gaatctatca ttgatctctc ccttatttcc cctgccacca tggttctctt cgttgtcatg 1080
atgtatcttc catcctatac cacatttata cctgttggat acgacaaaga aatatcgcca 1140gaaatgagca gcaagaagag caaaaagcaa ggttgcagca ttgcagaaaa tcteaaattc 1200tctcagcttt cttacttggc tatctttgtt atgattgttt gcatcactga aaggagaaat 1260ttagtggaag accctctcaa cttcaacgtc ttcaacatta tcgtagaagt cataagtgca 1320tatggaaatg ttggattctc catgggttat agttgtaaaa gaagacttgg agacattgga 1380acttgcaagg atgcaggata tggcttcgtg ggtcgatgga gtagacaagg gaaaatggtt 1440atcatcttgg tcatgctttt tggtaggctt aagagattta attttaaagg cggaaaagct 1500tggaaacttt ctctttaa1518<210>14<211>505<212>PRT<213>冰葉日中花<400>14Met Glu Lys Tyr Leu Ala Leu Phe His Lys Lys Leu Asp Gln Phe PheI 5 10 15Asn Phe Cys Tyr Thr Lys Ala Leu Ser Tyr Ile Ser Ser Leu Tyr Glu20 25 30Tyr Ile Ile Phe Gln Val His Pro Phe Trp His His Leu Phe Tyr Tyr35 40 45Ile Ile Val Ser Leu Leu Gly Tyr Phe Ser Leu Lys Ala Thr Ser Arg50 55 60Lys Gln Arg Ser Ser Pro Val Phe Ser Asp Pro Arg His Asp Asp Leu65 70 75 80Asp Leu Phe Phe Thr Ser Val Ser Ala Thr Thr Ile Ser Ser Met Ser85 90 95Thr Ile Glu Met Glu Asp Phe Ser Ser Pro Gln Leu Val Val Leu Ile100 105 110Ile Leu Met Leu Ser Gly Gly Glu Val Phe Leu Ser Leu Leu Gly Leu115 120 125Gln Leu Arg Lys Ser Lys His Arg Lys Arg Glu Gln Lys Asn Ile Leu130 135 140Leu Asn Ser Pro Ser Glu Gly Met Lys Tyr Lys Ser Leu Val Ala Leu145 150 155 160Gly His Val Val Leu Gly Tyr Leu Leu Val Cys His Ile Ile Gly Tyr165 170 175Ser Leu Ala Ser Leu Tyr Ile Ser Ile Ser Arg Ser Ala Ser Asn Val180 185190
Leu Glu Arg Lys His Ile Glu Met His Leu Phe Ser Leu Phe Val Thr195 200 205Val Ser Thr Phe Ser Asn Cys Gly Phe Ile Pro Thr Asn Glu Asn Met210 215 220Met Val Phe Lys Gly Asn Ser Gly Leu Leu Leu Ile Leu Ile Pro Gln225 230 235 240Ile Leu Leu Gly Asn Lys Leu Tyr Pro Ser Cys Leu Arg Leu Val Leu245 250 255Trp Val Leu Glu Lys Leu Thr Gly Lys Ala Glu Phe Ser Tyr Ile Leu260 265 270Lys Lys Asn Asp Glu Leu Gly Tyr Gly Leu Phe Phe Ser Gln Val Asp275 280 285Ala Leu Leu Leu Ala Val Thr Ala Val Gly Leu Val Met Val Gln Phe290 295 300Val Val Phe Cys Ile Leu Glu Trp Asn Ser Val Ala Leu Met Asp Leu305 310 315 320Asn Trp His Gln Lys Leu Val Gly Ser Leu Phe Gln Thr Val Asn Ser325 330 335Arg His Ser Gly Glu Ser Ile Ile Asp Leu Ser Leu Ile Ser Pro Ala340 345 350Thr Met Val Leu Phe Val Val Met Met Tyr Leu Pro Ser Tyr Thr Thr355 360 365Phe Ile Pro Val Gly Tyr Asp Lys Glu Ile Ser Pro Glu Met Ser Ser370 375 380Lys Lys Ser Lys Lys Gln Gly Cys Ser Ile Ala Glu Asn Leu Lys Phe385 390 395 400Ser Gln Leu Ser Tyr Leu Ala Ile Phe Val Met Ile Val Cys Ile Thr405 410 415Glu Arg Arg Asn Leu Val Glu Asp Pro Leu Asn Phe Asn Val Phe Asn420 425 430Ile Ile Val Glu Val Ile Ser Ala Tyr Gly Asn Val Gly Phe Ser Met435 440 445Gly Tyr Ser Cys Lys Arg Arg Leu Gly Asp Ile Gly Thr Cys Lys Asp450 455 460
Ala Gly Tyr Gly Phe Val Gly Arg Trp Ser Arg Gln Gly Lys Met Val465 470 475 480Ile Ile Leu Val Met Leu Phe Gly Arg Leu Lys Arg Phe Asn Phe Lys485 490 495Gly Gly Lys Ala Trp Lys Leu Ser Leu500 505<210>15<211>1653<212>DNA<213>赤桉(Eucalyptus camaldulensis)<400>15atgatgagct ttttttcgtc tttaggcaaa gaggttgcgt tcctttgtag cgcttcatgg 60atcaaactag cctgcatctg caggtccctt tgcttcctcc tttcttgctg tttccgcttc120ttgctcctcc gagtcaattc cttctgcatc caagtttttt acttcgtctt cctctcgttc180ctcggcttct gggtcctcaa ggccctaggg ccgcggaccg attcctttag gcctagggac240ttggatctgt tcttcacttc cgtctctgcg acgaccgtct cgagcatgtc cacggtcgag300atggaagtct tctccaactc acagcttgtc gtgatgaccg tcctgatgtt catcggagga360gaggtcttca tttccctcgt tgggcttcat cttaggaaat ccaagctccg gtggcgcatc420agaaccgaag acaaagtcgc ctctgccgat ggcaatctct gcccttccgc cccaacaaat480gacattgttg accacataga gttaggtgta gtggcgaaaa cagattgcct gaactcgcag540gtagagcctc aattttacag accgcaagac aagtcctcag atcttgacta tttgaaatat600tgttcggtta ggtttttgtg ttatgtagtg ttaggttacc ttctggtagt ccaagttcta660ggagttgccg cagtttcgct ctatatcaca ctagttccta gcgccagaga tgtgctaaag720aagaaaggtc tcaaaatggt gaccttttcc gtcttcacca ccgtgtcgac ctttgccagt780tgtgggtttg tcccgaccaa tgaaaacatg attatcttca gcaaaaactc tggcctcctc840ctgattctca tccctcaggc ccttcttggg aacatgctgt tcccatcgag cctacgtttg900acgctttggc tcatcgggag attcagcgag aaagatgaaa tcgggtactt gttgagcagg960acaagtgaaa ttggttacaa gcacttgctt ccgagcctct actcgtcgct actgggggtc 1020acggtgttgg ggttcgtcgg tattcagttt ataatgtttt gctcgatgca gtgggattcg 1080gaatcgttga atggactaag ctcctgtgag aaaatcgtgg gcgcgctgtt tcagtgcgtg 1140aacagcagac ataccggcga gacggtcgtc gatctgtcca cagttgctcc cgccatcttg 1200gtgctattcg tggtcatgat gtaccttccg ccttacacgt cgttccttcc ggtgaaaggc 1260aatgagaggt tccctgaaaa cggcgaaaga agaaagccga aacagagtta tagactgctt 1320ttggagaatc tcaaattttc acagctttcc tacctggcca tctttatcat cgtgatttgc 1380atcaccgaga ggaaaaagat gaaggaagat cccctcaatt tcaacgtgtt gaacatcgtg 1440gtcgaagtgg taagcgcata tggaaatgtg gggtttacga caggatacag ttgcgaacgc 1500caactaaggc ctgtcaaagg ctgcgaggac aagtggtatg gattctctgg gaaatggagc 1560gatgaaagca aaatcatcct catcgtagtc atgtttttcg gaagattaaa gaagttcaac 1620atgaagggcg gccgagcttg gatactcttg tag1653<210>16<211>550<212>PRT<213>赤桉<400>16
Met Met Ser Phe Phe Ser Ser Leu Gly Lys Glu Val Ala Phe Leu Cys1 5 10 15Ser Ala Ser Trp Ile Lys Leu Ala Cys Ile Cys Arg Ser Leu Cys Phe20 25 30Leu Leu Ser Cys Cys Phe Arg Phe Leu Leu Leu Arg Val Asn Ser Phe35 40 45Cys Ile Gln Val Phe Tyr Phe Val Phe Leu Ser Phe Leu Gly Phe Trp50 55 60Val Leu Lys Ala Leu Gly Pro Arg Thr Asp Ser Phe Arg Pro Arg Asp65 70 75 80Leu Asp Leu Phe Phe Thr Ser Val Ser Ala Thr Thr Val Ser Ser Met85 90 95Ser Thr Val Glu Met Glu Val Phe Ser Asn Ser Gln Leu Val Val Met100 105 110Thr Val Leu Met Phe Ile Gly Gly Glu Val Phe Ile Ser Leu yal Gly115 120 125Leu His Leu Arg Lys Ser Lys Leu Arg Trp Arg Ile Arg Thr Glu Asp130 135 140Lys Val Ala Ser Ala Asp Gly Asn Leu Cys Pro Ser Ala Pro Thr Asn145 150 155 160Asp Ile Val Asp His Ile Glu Leu Gly Val Val Ala Lys Thr Asp Cys165 170 175Leu Asn Ser Gln Val Glu Pro Gln Phe Tyr Arg Pro Gln Asp Lys Ser180 185 190Ser Asp Leu Asp Tyr Leu Lys Tyr Cys Ser Val Arg Phe Leu Cys Tyr195 200 205Val Val Leu Gly Tyr Leu Leu Val Val Gln Val Leu Gly Val Ala Ala210 215 220Val Ser Leu Tyr Ile Thr Leu Val Pro Ser Ala Arg Asp Val Leu Lys225 230 235 240Lys Lys Gly Leu Lys Met Val Thr Phe Ser Val Phe Thr Thr Val Ser245 250 255Thr Phe Ala Ser Cys Gly Phe Val Pro Thr Asn Glu Asn Met Ile Ile260 265 270
Phe Ser Lys Asn Ser Gly Leu Leu Leu Ile Leu Ile Pro Gln Ala Leu275 280 285Leu Gly Asn Met Leu Phe Pro Ser Ser Leu Arg Leu Thr Leu Trp Leu290 295 300Ile Gly Arg Phe Ser Glu Lys Asp Glu Ile Gly Tyr Leu Leu Ser Arg305 310 315 320Thr Ser Glu Ile Gly Tyr Lys His Leu Leu Pro Ser Leu Tyr Ser Ser325 330 335Leu Leu Gly Val Thr Val Leu Gly Phe Val Gly Ile Gln Phe Ile Met340 345 350Phe Cys Ser Met Gln Trp Asp Ser Glu Ser Leu Asn Gly Leu Ser Ser355 360 365Cys Glu Lys Ile Val Gly Ala Leu Phe Gln Cys Val Asn Ser Arg His370 375 380Thr Gly Glu Thr Val Val Asp Leu Ser Thr Val Ala Pro Ala Ile Leu385 390 395 400Val Leu Phe Val Val Met Met Tyr Leu Pro Pro Tyr Thr Ser Phe Leu405 410 415Pro Val Lys Gly Asn Glu Arg Phe Pro Glu Asn Gly Glu Arg Arg Lys420 425 430Pro Lys Gln Ser Tyr Arg Leu Leu Leu Glu Asn Leu Lys Phe Ser Gln435 440 445Leu Ser Tyr Leu Ala Ile Phe Ile Ile Val Ile Cys Ile Thr Glu Arg450 455 460Lys Lys Met Lys Glu Asp Pro Leu Asn Phe Asn Val Leu Asn Ile Val465 470 475 480Val Glu Val Val Ser Ala Tyr Gly Asn Val Gly Phe Thr Thr Gly Tyr485 490 495Ser Cys Glu Arg Gln Leu Arg Pro Val Lys Gly Cys Glu Asp Lys Trp500 505 510Tyr Gly Phe Ser Gly Lys Trp Ser Asp Glu Ser Lys Ile Ile Leu Ile515 520 525Val Val Met Phe Phe Gly Arg Leu Lys Lys Phe Asn Met Lys Gly Gly530 535 540
Arg Ala Trp Ile Leu Leu545 550<210>17<211>1650<212>DNA<213>赤桉<400>17atgatgcgct ttccttgttt aggcaaagaa gtcgtgtgtc tttgtattgc ttcatgcctc 60aaaatagccc gcctcttcag gtccttctgc ttcctctttt cttggtactt ccgcttcctg120ctcctccgag tcaactcctt ttgtgtccag cttttgtact tcgtcttcct ctcgctcctt180ggcttctggg tccttaaggc atcgaggccg ctaacccatt ccttcaggcc tagggacttg240gatctgttct tcacctctgt ctccttggct actgtctcga gcatgtccac ggtggagatg300gaggtcctct ccgactccca gctcgtcgtg atgaccgtcc tgatgttcgt cggaggggaa360gtcttcacct ctcttgccgg gcttcacttc aggaaactga aactccagtc gctcctgaaa420accgaagaaa cagtcgcctc cgtccatacc aatctttgcc cttcgaaccc aaccaacggt480gttgttgacc acgtagagtt agctgtagta acgaattcag attgcctgaa ctctcgagta540gaacctcagt tgcacggacc gcgagacgag tccccagatc tcgactattt gaaatatcgt600tccgctaacg ttttgtgtct tgtagtgtta ggttaccttc tgggagtcaa tgttctcggt660gtcgccgcag tttcactcta tatgatactt gtttccagcg cgagagacgt gctaaagcgg720aagggcctca aaatgatgac attttccatc ttcaccactg tgtcgacctt cgccagttgc780gggttcgtcc cgacgaacga aaacatggct gtcttcaaca agaactccgg cctcctccta840attctcatcc ctcaggtcct tctcgggaac acgctgttcc cgtcgacctt acggctggta900ctttggctct tgggaaaatt cagcaagaaa gcagaaatcg attatttgtt gagcagaaca960ggtgaaattg gttacaagca cttgcttccg agcctctact cgtcgctcct ggtggtaacg 1020gtgttggggt ttattggtgt tcagttcata atgttttgct caatgcagtg ggattcagaa 1080tcgttagatg gactaaactc gtacgagaaa attgtggccg tgctctttca gtgcgtgaac 1140accagatata cgggcgagac gatcgttaat ctgtccaaag tatctcctgc catcttggtg 1200ttattcgtcg tcatgatgta ccttccgcca tacacgtcct tccttccggc gataggtggt 1260gaggagctcc tgggaaatgg ggaaagaaaa aaggcgaaac gaagtcataa actaatgttg 1320aagagtctca tattctcaca gccctcctac ttggccatct ttatcatcac gatttgcata 1380acggagaagg aaaagatgaa gaaagatcct ctcaacttta atgtgttcaa catcgtggtc 1440gaagtgataa gtgcatatgg gaatgtgggg ttcacgatag gttacaattg cgatcggcaa 1500ctaagacgta ttgaaggctg cgaggacaag tggtacggat tctctgggaa atggagcgat 1560gagggcaaaa ttatcctcat tgccgtcatg attttcggaa gattaaagaa gttcaacatg 1620aaaggtggcc gaaattggat actcttgtga1650<210>18<211>549<212>PRT<213>赤桉<400>18Met Met Arg Phe Pro Cys Leu Gly Lys Glu Val Val Cys Leu Cys Ile1 5 10 15Ala Ser Cys Leu Lys Ile Ala Arg Leu Phe Arg Ser Phe Cys Phe Leu20 25 30
Phe Ser Trp Tyr Phe Arg Phe Leu Leu Leu Arg Val Asn Ser Phe Cys35 40 45Val Gln Leu Leu Tyr Phe Val Phe Leu Ser Leu Leu Gly Phe Trp Val50 55 60Leu Lys Ala Ser Arg Pro Leu Thr His Ser Phe Arg Pro Arg Asp Leu65 70 75 80Asp Leu Phe Phe Thr Ser Val Ser Leu Ala Thr Val Ser Ser Met Ser85 90 95Thr Val Glu Met Glu Val Leu Ser Asp Ser Gln Leu Val Val Met Thr100 105 110Val Leu Met Phe Val Gly Gly Glu Val Phe Thr Ser Leu Ala Gly Leu115 120 125His Phe Arg Lys Leu Lys Leu Gln Ser Leu Leu Lys Thr Glu Glu Thr130 135 140Val Ala Ser Val His Thr Asn Leu Cys Pro Ser Asn Pro Thr Asn Gly145 150 155 160Val Val Asp His Val Glu Leu Ala Val Val Thr Asn Ser Asp Cys Leu165 170 175Asn Ser Arg Val Glu Pro Gln Leu His Gly Pro Arg Asp Glu Ser Pro180 185 190Asp Leu Asp Tyr Leu Lys Tyr Arg Ser Ala Asn Val Leu Cys Leu Val195 200 205Val Leu Gly Tyr Leu Leu Gly Val Asn Val Leu Gly Val Ala Ala Val210 215 220Ser Leu Tyr Met Ile Leu Val Ser Ser Ala Arg Asp Val Leu Lys Arg225 230 235 240Lys Gly Leu Lys Met Met Thr Phe Ser Ile Phe Thr Thr Val Ser Thr245 250 255Phe Ala Ser Cys Gly Phe Val Pro Thr Asn Glu Asn Met Ala Val Phe260 265 270Asn Lys Asn Ser Gly Leu Leu Leu Ile Leu Ile Pro Gln Val Leu Leu275 280 285Gly Asn Thr Leu Phe Pro Ser Thr Leu Arg Leu Val Leu Trp Leu Leu290 295 300
Gly Lys Phe Ser Lys Lys Ala Glu Ile Asp Tyr Leu Leu Ser Arg Thr305 310 315 320Gly Glu Ile Gly Tyr Lys His Leu Leu Pro Ser Leu Tyr Ser Ser Leu325 330 335Leu Val Val Thr Val Leu Gly Phe Ile Gly Val Gln Phe Ile Met Phe340 345 350Cys Ser Met Gln Trp Asp Ser Glu Ser Leu Asp Gly Leu Asn Ser Tyr355 360 365Glu Lys Ile Val Ala Val Leu Phe Gln Cys Val Asn Thr Arg Tyr Thr370 375 380Gly Glu Thr Ile Val Asn Leu Ser Lys Val Ser Pro Ala Ile Leu Val385 390 395 400Leu Phe Val Val Met Met Tyr Leu Pro Pro Tyr Thr Ser Phe Leu Pro405 4l0 415Ala Ile Gly Gly Glu Glu Leu Leu Gly Asn Gly Glu Arg Lys Lys Ala420 425 430Lys Arg Ser His Lys Leu Met Leu Lys Ser Leu Ile Phe Ser Gln Pro435 440 445Ser Tyr Leu Ala Ile Phe Ile Ile Thr Ile Cys Ile Thr Glu Lys Glu450 455 460Lys Met Lys Lys Asp Pro Leu Asn Phe Asn Val Phe Asn Ile Val Val465 470 475 480Glu Val Ile Ser Ala Tyr Gly Asn Val Gly Phe Thr Ile Gly Tyr Asn485 490 495Cys Asp Arg Gln Leu Arg Arg Ile Glu Gly Cys Glu Asp Lys Trp Tyr500 505 510Gly Phe Ser Gly Lys Trp Ser Asp Glu Gly Lys Ile Ile Leu Ile Ala515 520 525Val Met Ile Phe Gly Arg Leu Lys Lys Phe Asn Met Lys Gly Gly Arg530 535 540Asn Trp Ile Leu Leu545<210>19<211>1593<212>DNA
<213>稻(Oryza sativa)<400>19atgacgagca tttaccatga tttcattcat aacaagctgc agagcttcgg aaggatcggt 60agatattttg ttaattttgt tgttctagcc catagattca ttgccttgca tattcaccca120ttctggattc agttgtccta cttccttctc attagcatcc taggttcagt tctattgatg180ttcctgaagc caagcaaccc agaattcaga ccaggttaca ttgacatgct gttcttgtca240acctctgctc tgacactttc cagcctcatc accatcgaaa tggaggttct ctcaagctca300caaattgtgg ttattacact gctgatgctt ctcgggggtg aagtctttgt ttctttcctg360ggcctcatgc ttagactgaa ccataagcac aacccagagt tttcagggga caaggtcagt420tcagttccta tcgagcttga tacaatcaac tcggcaagca ctgtgataag ttgtgaagag480ctgcagctgg aagcagcaat tcctgaagtt ccatcttcca ccattaagga tttgaagagg540agcaagcgcc tgaggtggtt cttaggattt gtagtcttca gctattttgt tgtgatccat600gtcgctggct ttctgctggt tctctggtac ataagtcgtg tctcatctgc aaaagctcca660ctgaagaaga aagggatcaa cattgcactc ttctcattct cggtcacggt ctcctcgttt720gcgaatgtgg ggctcgtgcc gacaaatgag aacatggcaa tcttctccaa gaacccgggc780ctcctcctcc tgttcatcgg ccagattctt gcaggcaata cactttaccc tctcttccta840aggctattga tatggttcct ggggaaggtg accaagttga gagaactgaa gctcatgatc900aagaaccctg aggagctaca gtatgattat ttgcttccta agttgccaac ggcgtttctg960gcatcaactg tcattggcct tatggcttcc ttggtcacac tgttcggtgc tgtcgactgg 1020aattcttcag tctttgatgg actcagctct taccagaaga ttatcaatgc attgttcatg 1080gcagtgaacg caaggcactc gggggagaac tccatcgact gctcactcat cgcccctgct 1140gttctagtac tgttcatcat cttaatgtac ttaccaccat cgacaacatt tgcactgtcc 1200aatggagatg aaaaaactgc aaataagaaa gcgaaaagaa aattaggttt agtggtgcag 1260aacttggcat tttcacagct tgcctgcatc tcagtctttg tgatagttgc attcatcact 1320gagaggagtc gtctcagaaa tgatccactc aacttctctg ctctgaacat gatatttgaa 1380atcatcagtg catatgggaa tgtagggcta tccactggtt acagctgttc gaggttgcag 1440aaactgcacc cggggagcat ctgccaggac aagccgtaca gcttgtccgg atggtggagt 1500gatgaaggaa agttgctgct agtctttgtg atgctctatg gaaggctcaa ggccttcaca 1560aaaggtacag gtgaatattg gaggctatgg taa1593<210>20<211>530<212>PRT<213>稻<400>20Met Thr Ser Ile Tyr His Asp Phe Ile His Asn Lys Leu Gln Ser Phe1 5 10 15Gly Arg Ile Gly Arg Tyr Phe Val Asn Phe Val Val Leu Ala His Arg20 25 30Phe Ile Ala Leu His Ile His Pro Phe Trp Ile Gln Leu Ser Tyr Phe35 40 45Leu Leu Ile Ser Ile Leu Gly Ser Val Leu Leu Met Phe Leu Lys Pro50 55 60Ser Asn Pro Glu Phe Arg Pro Gly Tyr Ile Asp Met Leu Phe Leu Ser65 70 75 80
Thr Ser Ala Leu Thr Leu Ser Ser Leu Ile Thr Ile Glu Met Glu Val85 90 95Leu Ser Ser Ser Gln Ile Val Val Ile Thr Leu Leu Met Leu Leu Gly100 105 110Gly Glu Val Phe Val Ser Phe Leu Gly Leu Met Leu Arg Leu Asn His115 120 125Lys His Asn Pro Glu Phe Ser Gly Asp Lys Val Ser Ser Val Pro Ile130 135 140Glu Leu Asp Thr Ile Asn Ser Ala Ser Thr Val Ile Ser Cys Glu Glu145 150 155 160Leu Gln Leu Glu Ala Ala Ile Pro Glu Val Pro Ser Ser Thr Ile Lys165 170 175Asp Leu Lys Arg Ser Lys Arg Leu Arg Trp Phe Leu Gly Phe Val Val180 185 190Phe Ser Tyr Phe Val Val Ile His Val Ala Gly Phe Leu Leu Val Leu195 200 205Trp Tyr Ile Ser Arg Val Ser Ser Ala Lys Ala Pro Leu Lys Lys Lys210 215 220Gly Ile Asn Ile Ala Leu Phe Ser Phe Ser Val Thr Val Ser Ser Phe225 230 235 240Ala Asn Val Gly Leu Val Pro Thr Asn Glu Asn Met Ala Ile Phe Ser245 250 255Lys Asn Pro Gly Leu Leu Leu Leu Phe Ile Gly Gln Ile Leu Ala Gly260 265 270Asn Thr Leu Tyr Pro Leu Phe Leu Arg Leu Leu Ile Trp Phe Leu Gly275 280 285Lys Val Thr Lys Leu Arg Glu Leu Lys Leu Met Ile Lys Asn Pro Glu290 295 300Glu Leu Gln Tyr Asp Tyr Leu Leu Pro Lys Leu Pro Thr Ala Phe Leu305 310 315 320Ala Ser Thr Val Ile Gly Leu Met Ala Ser Leu Val Thr Leu Phe Gly325 330 335Ala Val Asp Trp Asn Ser Ser Val Phe Asp Gly Leu Ser Ser Tyr Gln340 345 350
Lys Ile Ile Asn Ala Leu Phe Met Ala Val Asn Ala Arg His Ser Gly355 360 365Glu Asn Ser Ile Asp Cys Ser Leu Ile Ala Pro Ala Val Leu Val Leu370 375 380Phe Ile Ile Leu Met Tyr Leu Pro Pro Ser Thr Thr Phe Ala Leu Ser385 390 395 400Asn Gly Asp Glu Lys Thr Ala Asn Lys Lys Ala Lys Arg Lys Leu Gly405 410 415Leu Val Val Gln Asn Leu Ala Phe Ser Gln Leu Ala Cys Ile Ser Val420 425 430Phe Val Ile Val Ala Phe Ile Thr Glu Arg Ser Arg Leu Arg Asn Asp435 440 445Pro Leu Asn Phe Ser Ala Leu Asn Met Ile Phe Glu Ile Ile Ser Ala450 455 460Tyr Gly Asn Val Gly Leu Ser Thr Gly Tyr Ser Cys Ser Arg Leu Gln465 470 475 480Lys Leu His Pro Gly Ser Ile Cys Gln Asp Lys Pro Tyr Ser Leu Ser485 490 495Gly Trp Trp Ser Asp Glu Gly Lys Leu Leu Leu Val Phe Val Met Leu500 505 510Tyr Gly Arg Leu Lys Ala Phe Thr Lys Gly Thr Gly Glu Tyr Trp Arg515 520 525Leu Trp530<210>21<211>1593<212>DNA<213>稻<400>21atgacgagca tttaccaaga attcattcat accaagtgtc agagcttcag aagcattggt 60agatatgttc ttcattcaat tgtcctcatc tatagattcg tttccttgca tgttcaccca120ttctggatcc aactgtccta cttcctcctc attagcatcc taggttcagt tctattaatg180tttctgaagc caagcagccc agagttcaag ccaggttaca ttgacatgtt gttcttgtca240acctctgcta tgaccgtttc cggcctcagc accatcgaaa tggaggttct ctcaagctca300caaatcgtgg tccttacact gctgatgctt gttgggggtg aagtctttgt ttctttcctt360ggcctcatgc ttagactgaa gcataagcac aatccagaat tctcagggga cagggtcagt420tcagttccta tcgagctcga tacgatcgag ccgacaagaa ctgtgatgag cagtgaagag480ttgcagatag aagcagcagc tccagatgtt ccatcttcca ccattaagga tctgaagagg540
agcaagcgcc tgaggtggtt cttaggattt gtggtcttca gctattttgt tgtcatccat 600gtcgttggct ttctgctggt tctctggtac ataagccgtg tctcatctgc aaaggctcca 660ctgaagaaga aagggatcaa cattgcactc ttctcattct cggtcaccgt ctcctcgttt 720gcgaatgggg ggctcgtgcc gacgaatgag aacatggcaa tcttctccaa gaacccgggc 780ctcctcctcc tgttcatcgg ccagattctt gcaggcaaca cactttaccc tctcttccta 840aggatactga tatggttcct gggaaaggtg accaagttga aagacctgaa gctcatgatc 900aagaactctg atgagctaca gtatgattat ttgcttccta agttgccgac tgcgtttctc 960gcatcaactg tcattggcct tatggcttcc ttggtcacac tgttcggttc tgtcgactgg1020aattcttcag tctttgatgg actcagctct taccagaaga ttatcaatgc attgttcatg1080gcagtgaacg caaggcactc gggggagaac tccatcgact gctcactcat cgcccctgct1140gttctagtac tgttcatcat cttaatgtac ttaccaccat cgacaacatt tgcactgtcc1200aatggagatg aaaaaactgc aaataagaaa gcgaaaagaa aattaggttt agtggtgcgg1260aacctggcat tttcacagct tgcctgcaac gcggtctttg tgatagttgc gctcatcact1320gagaggagtc gtctcagaaa tgatccactc aacttctctg ctctgaacat gatatttgaa1380gtcatcagtg catatgggaa tgtaggacta accactggtt acagctgttc gaggttgcaa1440aaactgcacc cggggagcat ctgccaggac aagccgtaca gcttgtccgg atggtggagc1500gatgaaggaa agttgctgct agtctctgtg atgctctatg gaaggctcaa ggccttcacc1560aaaggtacgg gtgaatattg gaggctatgg tag 1593<210>22<211>530<212>PRT<213>稻<400>22Met Thr Ser Ile Tyr Gln Glu Phe Ile His Thr Lys Cys Gln Ser Phe1 5 10 15Arg Ser Ile Gly Arg Tyr Val Leu His Ser Ile Val Leu Ile Tyr Arg20 25 30Phe Val Ser Leu His Val His Pro Phe Trp Ile Gln Leu Ser Tyr Phe35 40 45Leu Leu Ile Ser Ile Leu Gly Ser Val Leu Leu Met Phe Leu Lys Pro50 55 60Ser Ser Pro Glu Phe Lys Pro Gly Tyr Ile Asp Met Leu Phe Leu Ser65 70 75 80Thr Ser Ala Met Thr Val Ser Gly Leu Ser Thr Ile Glu Met Glu Val85 90 95Leu Ser Ser Ser Gln Ile Val Val Leu Thr Leu Leu Met Leu Val Gly100 105 110Gly Glu Val Phe Val Ser Phe Leu Gly Leu Met Leu Arg Leu Lys His115 120 125Lys His Asn Pro Glu Phe Ser Gly Asp Arg Val Ser Ser Val Pro Ile130 135 140
Glu Leu Asp Thr Ile Glu Pro Thr Arg Thr Val Met Ser Ser Glu Glu145 150 155 160Leu Gln Ile Glu Ala Ala Ala Pro Asp Val Pro Ser Ser Thr Ile Lys165 170 175Asp Leu Lys Arg Ser Lys Arg Leu Arg Trp Phe Leu Gly Phe Val Val180 185 190Phe Ser Tyr Phe Val Val Ile His Val Val Gly Phe Leu Leu Val Leu195 200 205Trp Tyr Ile Ser Arg Val Ser Ser Ala Lys Ala Pro Leu Lys Lys Lys210 215 220Gly Ile Asn Ile Ala Leu Phe Ser Phe Ser Val Thr Val Ser Ser Phe225 230 235 240Ala Asn Gly Gly Leu Val Pro Thr Asn Glu Asn Met Ala Ile Phe Ser245 250 255Lys Asn Pro Gly Leu Leu Leu Leu Phe Ile Gly Gln Ile Leu Ala Gly260 265 270Asn Thr Leu Tyr Pro Leu Phe Leu Arg Ile Leu Ile Trp Phe Leu Gly275 280 285Lys Val Thr Lys Leu Lys Asp Leu Lys Leu Met Ile Lys Asn Ser Asp290 295 300Glu Leu Gln Tyr Asp Tyr Leu Leu Pro Lys Leu Pro Thr Ala Phe Leu305 310 315 320Ala Ser Thr Val Ile Gly Leu Met Ala Ser Leu Val Thr Leu Phe Gly325 330 335Ser Val Asp Trp Asn Ser Ser Val Phe Asp Gly Leu Ser Ser Tyr Gln340 345 350Lys Ile Ile Asn Ala Leu Phe Met Ala Val Asn Ala Arg His Ser Gly355 360 365Glu Asn Ser Ile Asp Cys Ser Leu Ile Ala Pro Ala Val Leu Val Leu370 375 380Phe Ile Ile Leu Met Tyr Leu Pro Pro Ser Thr Thr Phe Ala Leu Ser385 390 395 400Asn Gly Asp Glu Lys Thr Ala Asn Lys Lys Ala Lys Arg Lys Leu Gly405 410 415
Leu Val Val Arg Asn Leu Ala Phe Ser Gln Leu Ala Cys Asn Ala Val420 425 430Phe Val Ile Val Ala Leu Ile Thr Glu Arg Ser Arg Leu Arg Asn Asp435 440 445Pro Leu Asn Phe Ser Ala Leu Asn Met Ile Phe Glu Val Ile Ser Ala450 455 460Tyr Gly Asn Val Gly Leu Thr Thr Gly Tyr Ser Cys Ser Arg Leu Gln465 470 475 480Lys Leu His Pro Gly Ser Ile Cys Gln Asp Lys Pro Tyr Ser Leu Ser485 490 495Gly Trp Trp Ser Asp Glu Gly Lys Leu Leu Leu Val Ser Val Met Leu500 505 510Tyr Gly Arg Leu Lys Ala Phe Thr Lys Gly Thr Gly Glu Tyr Trp Arg515 520 525Leu Trp530<210>23<211>1530<212>DNA<213>稻<400>23atgcctattc ggctgcatat ctttgtcaat tctgcaaggc atgccatcaa ctcatcggca 60ttcatttgtc ggttcatcgc ataccatctt agcccgcttt tgattcactt atcctatttt120cttatcattg atatacttgg ttttgtttcc ttggtggtgc tcaggccaag caaccacaag180tacaatcctc gctatgttga tatgtttttc ctatcgacat ctgcagttac agtcatagga240ttagccacca tacaaatgga ggatctttcc agctctcaga tagctatcct gactctcttg300atgttcttag acagtaagat gttcctttcc tttcttggcc ttgtccttga gtcaagcaag360caaaacaagc atgatcctga aaaccgtaga gtcagttcag ttactgtgtg caagcaatca420cagctagaag aggcgactcc ccaaactcca tccatgaact ccattgatat caagaagaga480tgcctcaaat acttagtgtt tgtggtgctg gcatacatga tcattattct tgtcactggt540tctctattgg tgttcatgta catagctcat gtttcaagtg ctagagatgt gctaacaagg600aaaagcatca acaaagctct cttctcgata tcggtcacag tctcctcatt cacaaatgga660gggttattgc cgacaaatga gagtatggtt gtattctcct caaacaatgg cctcctgttg720ctactcattg gccagattct tgcaggcagc acactgttcc ctgtgtttct gaggttggtg780atatgggcat tgagaggact aagattagca aaagctgaag agcctgactt catgatgaac840aacagcagcg cagtaggttt cagtcacctg ctgcctaact tgcagacaat atttcttgca900gttgtggagg ttgcttttgt agccatgaca gtcatcctct tctgctgctt gaactgggat960tctgtagtgt ttgcagggct cagctccctc cagaagataa ccaatgcatt gttcatggca 1020gtgaatgcaa ggcaggcagg agaaaattcc attgattgtt cccttgttgc gccagcggct 1080ttagtactat tcatggtcat gatgtacact ccatccttga caaagttgtt ctcagcatgt 1140caagatcaca aacgaatcgg cccagaaagc gacgatagaa caagcaaggg gaaaccattc 1200ctgaagatga tggcattttc accactcggc ttcaacacca cagtgataat gctggtctgc 1260
atcactgaaa ggagatcact ctccactgac cctctcaatt tatccacatt taacatcatc1320tttgaggtga taagtgccta cgggaacatt gggttgtcca ctggctacag ctgctcgagg1380cagctgcagc accaggaggg gattgcctgc catgagaagg cgtacaactt ctcggggtgg1440tggagtgaac cagggaaact gattcttgtt cttgcaatgc tctgcgggag gctcaactca1500aaggattcca caagcgcacg aactaggtga 1530<2l0>24<211>509<212>PRT<213>稻<400>24Met Pro Ile Arg Leu His Ile Phe Val Asn Ser Ala Arg His Ala Ile1 5 10 15Asn Ser Ser Ala Phe Ile Cys Arg Phe Ile Ala Tyr His Leu Ser Pro20 25 30Leu Leu Ile His Leu Ser Tyr Phe Leu Ile Ile Asp Ile Leu Gly Phe35 40 45Val Ser Leu Val Val Leu Arg Pro Ser Asn His Lys Tyr Asn Pro Arg50 55 60Tyr Val Asp Met Phe Phe Leu Ser Thr Ser Ala Val Thr Val Ile Gly65 70 75 80Leu Ala Thr Ile Gln Met Glu Asp Leu Ser Ser Ser Gln Ile Ala Ile85 90 95Leu Thr Leu Leu Met Phe Leu Asp Ser Lys Met Phe Leu Ser Phe Leu100 105 ll0Gly Leu Val Leu Glu Ser Ser Lys Gln Asn Lys His Asp Pro Glu Asn115 120 125Arg Arg Val Ser Ser Val Thr Val Cys Lys Gln Ser Gln Leu Glu Glu130 135 140Ala Thr Pro Gln Thr Pro Ser Met Asn Ser Ile Asp Ile Lys Lys Arg145 150 155 160Cys Leu Lys Tyr Leu Val Phe Val Val Leu Ala Tyr Met Ile Ile Ile165 170 175Leu Val Thr Gly Ser Leu Leu Val Phe Met Tyr Ile Ala His Val Ser180 185 190Ser Ala Arg Asp Val Leu Thr Arg Lys Ser Ile Asn Lys Ala Leu Phe195 200 205
Ser Ile Ser Val Thr Val Ser Ser Phe Thr Asn Gly Gly Leu Leu Pro210 215 220Thr Asn Glu Ser Met Val Val Phe Ser Ser Asn Asn Gly Leu Leu Leu225 230 235 240Leu Leu Ile Gly Gln Ile Leu Ala Gly Ser Thr Leu Phe Pro Val Phe245 250 255Leu Arg Leu Val Ile Trp Ala Leu Arg Gly Leu Arg Leu Ala Lys Ala260 265 270Glu Glu Pro Asp Phe Met Met Asn Asn Ser Ser Ala Val Gly Phe Ser275 280 285His Leu Leu Pro Asn Leu Gln Thr Ile Phe Leu Ala Val Val Glu Val290 295 300Ala Phe Val Ala Met Thr Val Ile Leu Phe Cys Cys Leu Asn Trp Asp305 3l0 315 320Ser Val Val Phe Ala Gly Leu Ser Ser Leu Gln Lys Ile Thr Asn Ala325 330 335Leu Phe Met Ala Val Asn Ala Arg Gln Ala Gly Glu Asn Ser Ile Asp340 345 350Cys Ser Leu Val Ala Pro Ala Ala Leu Val Leu Phe Met Val Met Met355 360 365Tyr Thr Pro Ser Leu Thr Lys Leu Phe Ser Ala Cys Gln Asp His Lys370 375 380Arg Ile Gly Pro Glu Ser Asp Asp Arg Thr Ser Lys Gly Lys Pro Phe385 390 395 400Leu Lys Met Met Ala Phe Ser Pro Leu Gly Phe Asn Thr Thr Val Ile405 410 415Met Leu Val Cys Ile Thr Glu Arg Arg Ser Leu Ser Thr Asp Pro Leu420 425 430Asn Leu Ser Thr Phe Asn Ile Ile Phe Glu Val Ile Ser Ala Tyr Gly435 440 445Asn Ile Gly Leu Ser Thr Gly Tyr Ser Cys Ser Arg Gln Leu Gln His450 455 460Gln Glu Gly Ile Ala Cys His Glu Lys Ala Tyr Asn Phe Ser Gly Trp465 470 475 480
Trp Ser Glu Pro Gly Lys Leu Ile Leu Val Leu Ala Met Leu Cys Gly485 490 495Arg Leu Asn Ser Lys Asp Ser Thr Ser Ala Arg Thr Arg500 505<210>25<211>1659<212>DNA<213>稻<400>25atgcatccac caagtttagt gctagatacc ttgaagcgta tcaaactata catagccatg 60aagctcctgt taccgaattc ggaggtgcct cggatctatt gggagaaagc tcagcatctc120tgtgggttcc tgtccatgaa gctcatttcc agagccagat gtgtggcaag ttctgtcaaa180caatcttata gttttctggt ttgcaaaagt aaccctttgg tagttcagct cgtttacttt240gtgataatct catttgctgg tttccttgct ctgaagaatc tcaagcccca gggtaagcca300ggtccaaagg atttggacct attgttcacc tctgtgtcta cacttactgt ctcgagcatg360gcaacagtag agatggaaga cttatctgac aggcaactct gggttctgat ccttctgatg420ctaatgggag gagaggtgtt cacatcaatg ctagggctct acttcaacaa tgccaatgcc480aacagaaatg agaacagcca gagaagttta ccttcaatca gcttggacat tgaattcaac540agtcctgcaa acaatgggga tcacaaaatt acggaatgtg gccaatcaga agaaactatg600tcgcaaaacc aggtacagca aaacaaaagc ataacatata atccttgcgc tgtgttggtt660cgcatagtga caggttattt cgtagctact gtcatttcca gttctgtcat cattattatt720tacttttgga ttgattcaga tgcaagaaat gtactgaaaa gtaaggagat caatatgtat780accttttgca tcttcacagc agtgtcctcg ttcgcaaact gtggcttcac gccactaaat840agtaacatgc aacccttcag aaagaactgg gtccttttgc tcctagtgat cccgcagatt900ctagcaggca acaccttgtt ttcaccactc ttgcggctat gcgtatgggt tttggggaag960gtcagtggaa aagcagagta tgcttacatc cttcagcatc ctggggagac tggctacaaa 1020catttgcatg tgaggagaaa ttctgtttac attgttctga gtgttactgg actgattcta 1080ctgcaagtaa tgtttatttg ctcgtttgag tggaactcag agagcttaga gggaatgaat 1140tggttacaga aattggtagg attattattc cagagtgtta atacaagaca agccggtgaa 1200tctatccttg atatatcaac actttctcca tcaactctgt tgctatttgc agtcgtcatg 1260taccttcctt ccgatgcttc atttctcact gccaatgctg ataaccagcc cttgacagat 1320aaaaagacaa actcgattag cagagcactg tggaggaatt ttaccgttaa caagctttct 1380tgtttagcaa tgttcacatt cctggcatgc ataacagaaa ggaagtcaat ttcttctgat 1440ccactaaatt tcaacatctt cagcatagtt tttgagataa tcagcgcttt cggcaatgta 1500ggctactcac taggatacag ttgccagaag ttgttgaagc ctgatgccac ttgcaaagat 1560gcttcctacg ggttcgtcgg caggtggacc gaggagggta agctgatagt tatcctggtg 1620atgttcctgg ggaggctcaa ggagttcatc ctgaaatga 1659<210>26<211>552<212>PRT<213>稻<400>26Met His Pro Pro Ser Leu Val Leu Asp Thr Leu Lys Arg Ile Lys Leu1 5 10 15
Tyr Ile Ala Met Lys Leu Leu Leu Pro Asn Ser Glu Val Pro Arg Ile20 25 30Tyr Trp Glu Lys Ala Gln His Leu Cys Gly Phe Leu Ser Met Lys Leu35 40 45Ile Ser Arg Ala Arg Cys Val Ala Ser Ser Val Lys Gln Ser Tyr Ser50 55 60Phe Leu Val Cys Lys Ser Asn Pro Leu Val Val Gln Leu Val Tyr Phe65 70 75 80Val Ile Ile Ser Phe Ala Gly Phe Leu Ala Leu Lys Asn Leu Lys Pro85 90 95Gln Gly Lys Pro Gly Pro Lys Asp Leu Asp Leu Leu Phe Thr Ser Val100 105 110Ser Thr Leu Thr Val Ser Ser Met Ala Thr Val Glu Met Glu Asp Leu115 120 125Ser Asp Arg Gln Leu Trp Val Leu Ile Leu Leu Met Leu Met Gly Gly130 135 140Glu Val Phe Thr Ser Met Leu Gly Leu Tyr Phe Asn Asn Ala Asn Ala145 150 155 160Asn Arg Asn Glu Asn Ser Gln Arg Ser Leu Pro Ser Ile Ser Leu Asp165 170 175Ile Glu Phe Asn Ser Pro Ala Asn Asn Gly Asp His Lys Ile Thr Glu180 185 190Cys Gly Gln Ser Glu Glu Thr Met Ser Gln Asn Gln Val Gln Gln Asn195 200 205Lys Ser Ile Thr Tyr Asn Pro Cys Ala Val Leu Val Arg Ile Val Thr210 215 220Gly Tyr Phe Val Ala Thr Val Ile Ser Ser Ser Val Ile Ile Ile Ile225 230 235 240Tyr Phe Trp Ile Asp Ser Asp Ala Arg Asn Val Leu Lys Ser Lys Glu245 250 255Ile Asn Met Tyr Thr Phe Cys Ile Phe Thr Ala Val Ser Ser Phe Ala260 265 270Asn Cys Gly Phe Thr Pro Leu Asn Ser Asn Met Gln Pro Phe Arg Lys275 280 285
Asn Trp Val Leu Leu Leu Leu Val Ile Pro Gln Ile Leu Ala Gly Asn290 295 300Thr Leu Phe Ser Pro Leu Leu Arg Leu Cys Val Trp Val Leu Gly Lys305 310 315 320Val Ser Gly Lys Ala Glu Tyr Ala Tyr Ile Leu Gln His Pro Gly Glu325 330 335Thr Gly Tyr Lys His Leu His Val Arg Arg Asn Ser Val Tyr Ile Val340 345 350Leu Ser Val Thr Gly Leu Ile Leu Leu Gln Val Met Phe Ile Cys Ser355 360 365Phe Glu Trp Asn Ser Glu Ser Leu Glu Gly Met Asn Trp Leu Gln Lys370 375 380Leu Val Gly Leu Leu Phe Gln Ser Val Asn Thr Arg Gln Ala Gly Glu385 390 395 400Ser Ile Leu Asp Ile Ser Thr Leu Ser Pro Ser Thr Leu Leu Leu Phe405 410 415Ala Val Val Met Tyr Leu Pro Ser Asp Ala Ser Phe Leu Thr Ala Asn420 425 430Ala Asp Asn Gln Pro Leu Thr Asp Lys Lys Thr Asn Ser Ile Ser Arg435 440 445Ala Leu Trp Arg Asn Phe Thr Val Asn Lys Leu Ser Cys Leu Ala Met450 455 460Phe Thr Phe Leu Ala Cys Ile Thr Glu Arg Lys Ser Ile Ser Ser Asp465 470 475 480Pro Leu Asn Phe Asn Ile Phe Ser Ile Val Phe Glu Ile Ile Ser Ala485 490 495Phe Gly Asn Val Gly Tyr Ser Leu Gly Tyr Ser Cys Gln Lys Leu Leu500 505 510Lys Pro Asp Ala Thr Cys Lys Asp Ala Ser Tyr Gly Phe Val Gly Arg515 520 525Trp Thr Glu Glu Gly Lys Leu Ile Val Ile Leu Val Met Phe Leu Gly530 535 540Arg Leu Lys Glu Phe Ile Leu Lys545 550
<210>27<211>1596<212>DNA<213>稻<400>27atgaatcatt gtcttgtagt atcccacaaa aaactccaaa ctttccgcac atttgcagct 60agcaagttct cttcttttac caaatctgca cagaagtcta taaaatactc cttccagttc120atctaccaaa acaatccact ctttgtccat gtagcttact ttgccctgat ctcctttgct180ggatatggat ctctaaaggt cctcaagcca cgagacaagt caaatactct gaaagacttg240gacgtgctat ttacttccgt atctgcatca actgtttcaa gcatggctac tgttgaaatg300gaggatttct caagcgctca actctgggtt ttgactattt taatgctgat tggtggtgag360gtattcactt caatgcttgg cattcacttt atgagagccg aatttggtac aaaagagtca420gtcagcacaa gggatcactc accttgcatt gatattgagt ctattacttc cacaaaattt480ggtcccagca cccagggcac aaaagttaca gtttcatttt ctgaactccg catggaaaat540ggaggacatg tagagcccaa gacgattaaa tttttaggtt ttgtagtgat gggatatctt600ctaataacaa acttaggcgg ctccctactt atttacctct accttaacct ggtaccaagt660gcacataaaa ttctaaagag aaaaggcatt gggatcatcg tattctcagt atttacagcc720atctcctcag ttggaaattg tggcttcact ccagtaaatg agaatatgat tatctttcag780aagaactcca ttcttctatt gctaattctt cctcagatac tagcaggaaa tacattattt840gcaccatgct tgagattaat ggtgtggtca cttgagaaga ttaccggaaa aaaggattgt900cgttacattc ttgaatatcc aaaggccatt ggatataaac atcttatgag taccagggaa960agtgtttatt tgactttaac agttgtgagc ttgatcattc tgcaaaccgt attgttcctc 1020tctttggagt ggagctcggt agctttggat ggaatgagca actatcaaaa gatagtatcc 1080gctctatttc agtcggtcaa tgctaggcat gcaggtgaat ctgttacaga tctgtcaaac 1140ctctcttcag caatcctagt cctatacacc atcatgatgt atctccctgg ttacacttcg 1200tttttaccca gacatgatgg tgaggattct aagaccgaga agataaacaa aagaaaaggg 1260ctattggaga actggatctt ctcacatatg tcttatttgg ctatctttgt aatgctaatt 1320tgcatcacag aacgggactc gatggctaca gatccactta atttcaatgt tttcagcata 1380ttgtttgaag tcgtcagtgc atatggaaat gtggggttct cggttggcta cagctgcaag 1440aggctactga accatgatgc acgctgcaag gatgcctcgt acgggtttgc ggggaaatgg 1500agcgacaatg ggaaagcgat cctgatcatc gtcatgcttt tcgggaggct taaaacgttt 1560aacatgaagg gtggaagagc ctggaagctt agataa 1596<210> 28<211>531<212>PRT<213>稻<400>28Met Asn His Cys Leu Val Val Ser His Lys Lys Leu Gln Thr Phe Arg1 5 10 15Thr Phe Ala Ala Ser Lys Phe Ser Ser Phe Thr Lys Ser Ala Gln Lys20 25 30Ser Ile Lys Tyr Ser Phe Gln Phe Ile Tyr Gln Asn Asn Pro Leu Phe35 40 45Val His Val Ala Tyr Phe Ala Leu Ile Ser Phe Ala Gly Tyr Gly Ser50 55 60
Leu Lys Val Leu Lys Pro Arg Asp Lys Ser Asn Thr Leu Lys Asp Leu65 70 75 80Asp Val Leu Phe Thr Ser Val Ser Ala Ser Thr Val Ser Ser Met Ala85 90 95Thr Val Glu Met Glu Asp Phe Ser Ser Ala Gln Leu Trp Val Leu Thr100 105 110Ile Leu Met Leu Ile Gly Gly Glu Val Phe Thr Ser Met Leu Gly Ile115 120 125His Phe Met Arg Ala Glu Phe Gly Thr Lys Glu Ser Val Ser Thr Arg130 135 140Asp His Ser Pro Cys Ile Asp Ile Glu Ser Ile Thr Ser Thr Lys Phe145 150 155 160Gly Pro Ser Thr Gln Gly Thr Lys Val Thr Val Ser Phe Ser Glu Leu165 170 175Arg Met Glu Asn Gly Gly His Val Glu Pro Lys Thr Ile Lys Phe Leu180 185 190Gly Phe Val Val Met Gly Tyr Leu Leu Ile Thr Asn Leu Gly Gly Ser195 200 205Leu Leu Ile Tyr Leu Tyr Leu Asn Leu Val Pro Ser Ala His Lys Ile210 215 220Leu Lys Arg Lys Gly Ile Gly Ile Ile Val Phe Ser Val Phe Thr Ala225 230 235 240Ile Ser Ser Val Gly Asn Cys Gly Phe Thr Pro Val Asn Glu Asn Met245 250 255Ile Ile Phe Gln Lys Asn Ser Ile Leu Leu Leu Leu Ile Leu Pro Gln260 265 270Ile Leu Ala Gly Asn Thr Leu Phe Ala Pro Cys Leu Arg Leu Met Val275 280 285Trp Ser Leu Glu Lys Ile Thr Gly Lys Lys Asp Cys Arg Tyr Ile Leu290 295 300Glu Tyr Pro Lys Ala Ile Gly Tyr Lys His Leu Met Ser Thr Arg Glu305 310 315 320Ser Val Tyr Leu Thr Leu Thr Val Val Ser Leu Ile Ile Leu Gln Thr325 330 335
Val Leu Phe Leu Ser Leu Glu Trp Ser Ser Val Ala Leu Asp Gly Met340 345 350Ser Asn Tyr Gln Lys Ile Val Ser Ala Leu Phe Gln Ser Val Asn Ala355 360 365Arg His Ala Gly Glu Ser Val Thr Asp Leu Ser Asn Leu Ser Ser Ala370 375 380Ile Leu Val Leu Tyr Thr Ile Met Met Tyr Leu Pro Gly Tyr Thr Ser385 390 395 400Phe Leu Pro Arg His Asp Gly Glu Asp Ser Lys Thr Glu Lys Ile Asn405 410 415Lys Arg Lys Gly Leu Leu Glu Asn Trp Ile Phe Ser His Met Ser Tyr420 425 430Leu Ala Ile Phe Val Met Leu Ile Cys Ile Thr Glu Arg Asp Ser Met435 440 445Ala Thr Asp Pro Leu Asn Phe Asn Val Phe Ser Ile Leu Phe Glu Val450 455 460Val Ser Ala Tyr Gly Asn Val Gly Phe Ser Val Gly Tyr Ser Cys Lys465 470 475 480Arg Leu Leu Asn His Asp Ala Arg Cys Lys Asp Ala Ser Tyr Gly Phe485 490 495Ala Gly Lys Trp Ser Asp Asn Gly Lys Ala Ile Leu Ile Ile Val Met500 505 510Leu Phe Gly Arg Leu Lys Thr Phe Asn Met Lys Gly Gly Arg Ala Trp515 520 525Lys Leu Arg530<210>29<211>1503<212>DNA<213>稻<400>29atgcccacgt cgcggcgcgc gctcgccggc ggcgctttgt ccatgcacgt cgcctacttc 60ctcgccatct cctgcctcgg ctacggcctc ctcggggtgc tcaaggtgcg ggagcccggc120gccgcgccgc gccgcatcga ccgcttcttc accgccgtgt cggccgccac ggtgtcgagc180atgtccaccg tcgagatgga ggtgttctcc aacggccagc tcgtggtgct caccgtcctg240atgctcctcg gcggcgaggt gttcgtctcg ctcgtggggc tcgcgtccaa gtggtccaag300ctgcggagcg acgccatgga cagatcccgg cgcgtcgaga gccacggcga cgtcgcgctc360
gccgacatcg acggcggcga cgtcgagaac ccgacgtcgt cgggagagga ggcggcgagc420cgacgccgcc cgatggacgc ggacacgctg cggcacaatg cggtgcgcgc gctgttctac480atcgtgctcg ccatcttcgc ggtggtgcac gtcgtcggcg ccgtggccgt cgcggcgtac540gtgctcgcgt cgccgggcgc gaggcggacg ctgggggaca agtcgctgaa cacgtggacg600ttcgcggtgt tcacgacggt gtcgacgttc tccaactgcg ggttcatgcc gacgaacgag660aacatggtgg tgttcaagcg ggacgcgccg ctgcagctgc tgctggtgcc gcaggtgctg720gcggggaaca cgctgttcgc gccgctgctg gcggcgtgcg tgtgggcggc ggcggcggcg780acgcggcggg aggagctcgt ggagatggcg agggaggggg gcagggcggc ggcggccggg840tacgcgcacc tgatgccggc gcggcggtgc tggatgctgg cggcgacggt ggcggcgttc900gtcgccgtgc tgatggcgct ggtgtgcggc atggagtggg gcggggcgct gcaggggatg960agcccgtggg agaaggtggt gaacgcgctg ttcctcgccg tgaacgcccg gcacaccggc 1020gagtccaccg tcgacctctc catcctcgcg ccggccatcc tcgtgctctt cgtcctcatg 1080atgtatctac ctccgtacac gacgtggttc ccatttgaag agaattccac tactaaggat 1140agtaatgcag agaaccaggg aatcagactg ctcgagagta cacttttgtc acaactctcc 1200tacctgacca tctttgtcat tgccatctgc atcaccgaga gaagaaagct caaagaagac 1260cccctcaact tcagtgtgct aagcattgtt gtcgaagttg tcagtgcata tggaaatgtg 1320gggttctcaa tgggctacag ttgcagtaga cagatcaatc cagaccatct ctgcacagat 1380aaatggactg gtttcgtagg gagatggagc gactctggca aactgatact catttttgtg 1440atgttctttg ggaggctcaa gaagttcagc atgaaaggag gcaaagcctg gaaacttagt 1500tag 1503<210>30<211>500<212>PRT<213>稻<400>30Met Pro Thr Ser Arg Arg Ala Leu Ala Gly Gly Ala Leu Ser Met His1 5 10 15Val Ala Tyr Phe Leu Ala Ile Ser Cys Leu Gly Tyr Gly Leu Leu Gly20 25 30Val Leu Lys Val Arg Glu Pro Gly Ala Ala Pro Arg Arg Ile Asp Arg35 40 45Phe Phe Thr Ala Val Ser Ala Ala Thr Val Ser Ser Met Ser Thr Val50 55 60Glu Met Glu Val Phe Ser Asn Gly Gln Leu Val Val Leu Thr Val Leu65 70 75 80Met Leu Leu Gly Gly Glu Val Phe Val Ser Leu Val Gly Leu Ala Ser85 90 95Lys Trp Ser Lys Leu Arg Ser Asp Ala Met Asp Arg Ser Arg Arg Val100 105 110Glu Ser His Gly Asp Val Ala Leu Ala Asp Ile Asp Gly Gly Asp Val115 120 125
Glu Asn Pro Thr Ser Ser Gly Glu Glu Ala Ala Ser Arg Arg Arg Pro130 135 140Met Asp Ala Asp Thr Leu Arg His Asn Ala Val Arg Ala Leu Phe Tyr145 150 155 160Ile Val Leu Ala Ile Phe Ala Val Val His Val Val Gly Ala Val Ala165 170 175Val Ala Ala Tyr Val Leu Ala Ser Pro Gly Ala Arg Arg Thr Leu Gly180 185 190Asp Lys Ser Leu Asn Thr Trp Thr Phe Ala Val Phe Thr Thr Val Ser195 200 205Thr Phe Ser Asn Cys Gly Phe Met Pro Thr Asn Glu Asn Met Val Val210 215 220Phe Lys Arg Asp Ala Pro Leu Gln Leu Leu Leu Val Pro Gln Val Leu225 230 235 240Ala Gly Asn Thr Leu Phe Ala Pro Leu Leu Ala Ala Cys Val Trp Ala245 250 255Ala Ala Ala Ala Thr Arg Arg Glu Glu Leu Val Glu Met Ala Arg Glu260 265 270Gly Gly Arg Ala Ala Ala Ala Gly Tyr Ala His Leu Met Pro Ala Arg275 280 285Arg Cys Trp Met Leu Ala Ala Thr Val Ala Ala Phe Val Ala Val Leu290 295 300Met Ala Leu Val Cys Gly Met Glu Trp Gly Gly Ala Leu Gln Gly Met305 310 315 320Ser Pro Trp Glu Lys Val Val Asn Ala Leu Phe Leu Ala Val Asn Ala325 330 335Arg His Thr Gly Glu Ser Thr Val Asp Leu Ser Ile Leu Ala Pro Ala340 345 350Ile Leu Val Leu Phe Val Leu Met Met Tyr Leu Pro Pro Tyr Thr Thr355 360 365Trp Phe Pro Phe Glu Glu Asn Ser Thr Thr Lys Asp Ser Asn Ala Glu370 375 380Asn Gln Gly Ile Arg Leu Leu Glu Ser Thr Leu Leu Ser Gln Leu Ser385 390 395 400
Tyr Leu Thr Ile Phe Val Ile Ala Ile Cys Ile Thr Glu Arg Arg Lys405 410 415Leu Lys Glu Asp Pro Leu Asn Phe Ser Val Leu Ser Ile Val Val Glu420 425 430Val Val Ser Ala Tyr Gly Asn Val Gly Phe Ser Met Gly Tyr Ser Cys435 440 445Ser Arg Gln Ile Asn Pro Asp His Leu Cys Thr Asp Lys Trp Thr Gly450 455 460Phe Val Gly Arg Trp Ser Asp Ser Gly Lys Leu Ile Leu Ile Phe Val465 470 475 480Met Phe Phe Gly Arg Leu Lys Lys Phe Ser Met Lys Gly Gly Lys Ala485 490 495Trp Lys Leu Ser500<210>31<211>1665<212>DNA<213>稻<400>31atgagttctc tggatgccac tactcctaga tatgacgagt ttaaaaggat ctaccacctt60ttccttttcc atgcacaccc attctggctc caactgctgt acttcctctt catctccctc120ttgggtttct tgatgctgaa agctctgccg atgaagacca gcatggtgcc gaggcccatg180gacttggacc tgatcttcac gtcggtgtcg gcgacgacgg tgtcgagcat ggtcgccgtc240gagatggagt ccttctccaa ctcccagctc ctcctcatca ccctcctcat gctgcttggt300ggtgaggtct tcaccagcat ccttggcctc tacttcacca acgccaagta ctcctccaag360atgatagcaa ccttacctga tgatgacgac catggtggca gtggcaaacc accaccacca420acgacgtcac cttcgtctac cctagtggag ctcgagctcg ctcctcccat ggacgtcgtc480gtcgtcaacc ctaccaccac tgcgacgacg cacgacgagg tagagctagg gttaggacgt540cggaacaagc gcggctgcac ctgcactact actcacacgt cgtcgtcatc atcggcatcg600aagacgacga cgacgaggct actgatgttc gtggtgatgg ggtaccacgc ggtggtgcac660gtcgccgggt acacggccat cgtcgtgtac ctcagcgccg tcggcggcgc gggggcggtg720gtcgccggga aggggatcag cgcgcacacg ttcgccatct tcaccgtcgt ctcgacgttc780gccaactgcg ggttcgtgcc gacgaacgaa gggatggtgt cgttcaggtc gttcccgggg840ctcctcctcc tcgtcatgcc gcacgtcctc ctcgggaaca cgctcttccc ggtcttcctc900aggctggcca tcgccgcgct cgagagggtc accgggtggc cggagctcgg cgagctcctg960atccggcggc ggaggggcgg cggcgagggc taccaccagc tgttgccgag ctcgcgcacg 1020cggttcctgg ccctcaccgt ggccgtgctc gtggtggcgc agctggcgct cttctgcgcc 1080atggagtggg gctccgacgg gctgcggggg ctcaccgcgg gccagaagct cgtcggcgcg 1140ctcttcatgg cggtcaactc gaggcactcc ggtgagatgg tgctcgacct ctccaccgtg 1200tcgtcggccg tcgtcgtgct ctacgtggtg atgatgtacc tgccacctta caccactttt 1260gtacctgtcc aagacaaaca ccagcaaacg ggagcacagt ccgggcagga gggcagcagc 1320agcagcagca tatggcagaa gctgctcatg tcgccgctct cgtgcctagc catcttcatc 1380gtcgtcatct gcatcacgga gcggcggcaa atcgccgacg accccatcaa ctacagcgtc 1440
ctcaacatcg tcgtcgaggt tatcagtgcg tatggcaatg tggggttcag cacggggtac1500agctgcgcga ggcaggtgag gcccgacggc agctgcagag acctgtgggt tggcttctca1560gggaagtgga gcaaacaagg gaagctcact ctcatggccg tcatgttcta cggcaggctc1620aagaagttca gcctgcacgg tggtcaggca tggaagatag aataa1665<210>32<211>554<212>PRT<213>稻<400>32Met Ser Ser Leu Asp Ala Thr Thr Pro Arg Tyr Asp Glu Phe Lys Arg1 5 10 15Ile Tyr His Leu Phe Leu Phe His Ala His Pro Phe Trp Leu Gln Leu20 25 30Leu Tyr Phe Leu Phe Ile Ser Leu Leu Gly Phe Leu Met Leu Lys Ala35 40 45Leu Pro Met Lys Thr Ser Met Val Pro Arg Pro Met Asp Leu Asp Leu50 55 60Ile Phe Thr Ser Val Ser Ala Thr Thr Val Ser Ser Met Val Ala Val65 70 75 80Glu Met Glu Ser Phe Ser Asn Ser Gln Leu Leu Leu Ile Thr Leu Leu85 90 95Met Leu Leu Gly Gly Glu Val Phe Thr Ser Ile Leu Gly Leu Tyr Phe100 105 110Thr Asn Ala Lys Tyr Ser Ser Lys Met Ile Ala Thr Leu Pro Asp Asp115 120 125Asp Asp His Gly G1y Ser Gly Lys Pro Pro Pro Pro Thr Thr Ser Pro130 135 140Ser Ser Thr Leu Val Glu Leu Glu Leu Ala Pro Pro Met Asp Val Val145 150 155 160Val Val Asn Pro Thr Thr Thr Ala Thr Thr His Asp Glu Val Glu Leu165 170 175Gly Leu Gly Arg Arg Asn Lys Arg Gly Cys Thr Cys Thr Thr Thr His180 185 190Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ala Ser Lys Thr Thr Thr Thr Arg Leu Leu195 200 205
Met Phe Val Val Met Gly Tyr His Ala Val Val His Val Ala Gly Tyr210 215 220Thr Ala Ile Val Val Tyr Leu Ser Ala Val Gly Gly Ala Gly Ala Val225 230 235 240Val Ala Gly Lys Gly Ile Ser Ala His Thr Phe Ala Ile Phe Thr Val245 250 255Val Ser Thr Phe Ala Asn Cys Gly Phe Val Pro Thr Asn Glu Gly Met260 265 270Val Ser Phe Arg Ser Phe Pro Gly Leu Leu Leu Leu Val Met Pro His275 280 285Val Leu Leu Gly Asn Thr Leu Phe Pro Val Phe Leu Arg Leu Ala Ile290 295 300Ala Ala Leu Glu Arg Val Thr Gly Trp Pro Glu Leu Gly Glu Leu Leu305 310 315 320Ile Arg Arg Arg Arg Gly Gly Gly Glu Gly Tyr His His Leu Leu Pro325 330 335Ser Ser Arg Thr Arg Phe Leu Ala Leu Thr Val Ala Val Leu Val Val340 345 350Ala Gln Leu Ala Leu Phe Cys Ala Met Glu Trp Gly Ser Asp Gly Leu355 360 365Arg Gly Leu Thr Ala Gly Gln Lys Leu Val Gly Ala Leu Phe Met Ala370 375 380Val Asn Ser Arg His Ser Gly Glu Met Val Leu Asp Leu Ser Thr Val385 390 395 400Ser Ser Ala Val Val Val Leu Tyr Val Val Met Met Tyr Leu Pro Pro405 4l0 415Tyr Thr Thr Phe Val Pro Val Gln Asp Lys His Gln Gln Thr Gly Ala420 425 430Gln Ser Gly Gln Glu Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ile Trp Gln Lys Leu435 440 445Leu Met Ser Pro Leu Ser Cys Leu Ala Ile Phe Ile Val Val Ile Cys450 455 460Ile Thr Glu Arg Arg Gln Ile Ala Asp Asp Pro Ile Asn Tyr Ser Val465 470 475 480
Leu Asn Ile Val Val Glu Val Ile Ser Ala Tyr Gly Asn Val Gly Phe485 490 495Ser Thr Gly Tyr Ser Cys Ala Arg Gln Val Arg Pro Asp Gly Ser Cys500 505 510Arg Asp Leu Trp Val Gly Phe Ser Gly Lys Trp Ser Lys Gln Gly Lys515 520 525Leu Thr Leu Met Ala Val Met Phe Tyr Gly Arg Leu Lys Lys Phe Ser530 535 540Leu His Gly Gly Gln Ala Trp Lys Ile Glu545550<2l0>33<211>1530<212>DNA<213>稻<400>33atgcctattc ggctgcatat ctttgtcagt tctgcaaggc atgccatcaa ctcgtcggca 60ttgatttgtc ggttcatcgc attccatctt agcccgcttt tgattcacct gtcctatttt120cttatcattg atgtacttgg ttttgttgcc ttggtggtgc tcaggccaag caaccacaag180tacaatcctc gctatatcga tatgtttttc ctatcgacat ctgcagttac agtcacagga240ttagccacca cacaaatgga ggatctttct agctctcaga tagctgtcct gactctcttg300atgttcttag gaagtgagat gttcctttcc tttcttggcc ttgtccttga gtcgagcaag360caaaacaagc atgatcctga aaaccgtaga gtaagttcag ttaccgtgtg tgagcagtca420catctagaag aggcaattcc acaaactcca tccatgaact ccactgatat caagaggagc480tgccacaaat acttagtgtt tgtggtgttg gcatacatga ttattattct tgtcactggt540tctctattgg tgttcatgta catagctcat gtttcaagtg ctagagatgt gctaacaagg600aaaagcatca acaaagctct cttctcgata tcggtcacag tctcctcatt tacaaatgga660gggttattgc cgacaaatga gagtatggct gtattctcct caaacaatgg cctcctgttg720ctactcatcg gccagattct tgcaggcagc acactgctcc ctatgtttct gaggttggtg780atatgggcat tgagaggact aagattagca aaagctgaag agccagactt catgatgaac840aacagcagct cagtaggttt cagtcacctg ctacctaact tgcagacaat atttcttgca900gctgtggagg ttgcttttgt aggcatgaca gtcatcctct tctgctgctt gaactgggat960tctgcagtgt ttgcagggct aacctccctc cagaagataa ccaatgcatt gttcatggca 1020gtgagtgcaa ggcaggcagg agaaaattcc attgattgtt cccttgttgc gccagcggct 1080ttagtactat tcatggtcat gatgtacact ccatccttga caaagttgtt ctcagcatgt 1140caagatcaca aacaaatcgg cccggaaagc gacgatagaa caagcaaggg gaaaccattc 1200ctgaagacga tggcattttc accactagcc ttcaacacca cagtgataat gctggtctgc 1260atcactgaaa ggagatcgat ctccactgac cctctcaatt tctccacatt taacatcatc 1320tttgaggtga taagtgccta cgggaacatt gggttgtcca ctggctacag ctgctcgaga 1380cagctacagc accaggatgg gattgcttgc catgagaagc catacagctt ctcggggtgg 1440tggagtgaac cagggaagct gattcttgtt cttgcgatgc tctacgggag gctcaactca 1500aaggattcca caagcgcacg aactaggtga1530<210>34<211>509
<212>PRT<213>稻<400>34Met Pro Ile Arg Leu His Ile Phe Val Ser Ser Ala Arg His Ala Ile1 5 10 15Asn Ser Ser Ala Leu Ile Cys Arg Phe Ile Ala Phe His Leu Ser Pro20 25 30Leu Leu Ile His Leu Ser Tyr Phe Leu Ile Ile Asp Val Leu Gly Phe35 40 45Val Ala Leu Val Val Leu Arg Pro Ser Asn His Lys Tyr Asn Pro Arg50 55 60Tyr Ile Asp Met Phe Phe Leu Ser Thr Ser Ala Val Thr Val Thr Gly65 70 75 80Leu Ala Thr Thr Gln Met Glu Asp Leu Ser Ser Ser Gln Ile Ala Val85 90 95Leu Thr Leu Leu Met Phe Leu Gly Ser Glu Met Phe Leu Ser Phe Leu100 105 110Gly Leu Val Leu Glu Ser Ser Lys Gln Asn Lys His Asp Pro Glu Asn115 120 125Arg Arg Val Ser Ser Val Thr Val Cys Glu Gln Ser His Leu Glu Glu130 135 140Ala Ile Pro Gln Thr Pro Ser Met Asn Ser Thr Asp Ile Lys Arg Ser145 150 155 160Cys His Lys Tyr Leu Val Phe Val Val Leu Ala Tyr Met Ile Ile Ile165 170 175Leu Val Thr Gly Ser Leu Leu Val Phe Met Tyr Ile Ala His Val Ser180 185 190Ser Ala Arg Asp Val Leu Thr Arg Lys Ser Ile Asn Lys Ala Leu Phe195 200 205Ser Ile Ser Val Thr Val Ser Ser Phe Thr Asn Gly Gly Leu Leu Pro210 215 220Thr Asn Glu Ser Met Ala Val Phe Ser Ser Asn Asn Gly Leu Leu Leu225 230 235 240Leu Leu Ile Gly Gln Ile Leu Ala Gly Ser Thr Leu Leu Pro Met Phe245 250 255
Leu Arg Leu Val Ile Trp Ala Leu Arg Gly Leu Arg Leu Ala Lys Ala260 265 270Glu Glu Pro Asp Phe Met Met Asn Asn Ser Ser Ser Val Gly Phe Ser275 280 285His Leu Leu Pro Asn Leu Gln Thr Ile Phe Leu Ala Ala Val Glu Val290 295 300Ala Phe Val Gly Met Thr Val Ile Leu Phe Cys Cys Leu Asn Trp Asp305 310 315 320Ser Ala Val Phe Ala Gly Leu Thr Ser Leu Gln Lys Ile Thr Asn Ala325 330 335Leu Phe Met Ala Val Ser Ala Arg Gln Ala Gly Glu Asn Ser Ile Asp340 345 350Cys Ser Leu Val Ala Pro Ala Ala Leu Val Leu Phe Met Val Met Met355 360 365Tyr Thr Pro Ser Leu Thr Lys Leu Phe Ser Ala Cys Gln Asp His Lys370 375 380Gln Ile Gly Pro Glu Ser Asp Asp Arg Thr Ser Lys Gly Lys Pro Phe385 390 395 400Leu Lys Thr Met Ala Phe Ser Pro Leu Ala Phe Asn Thr Thr Val Ile405 410 415Met Leu Val Cys Ile Thr Glu Arg Arg Ser Ile Ser Thr Asp Pro Leu420 425 430Asn Phe Ser Thr Phe Asn Ile Ile Phe Glu Val Ile Ser Ala Tyr Gly435 440 445Asn Ile Gly Leu Ser Thr Gly Tyr Ser Cys Ser Arg Gln Leu Gln His450 455 460Gln Asp Gly Ile Ala Cys His Glu Lys Pro Tyr Ser Phe Ser Gly Trp465 470 475 480Trp Ser Glu Pro Gly Lys Leu Ile Leu Val Leu Ala Met Leu Tyr Gly485 490 495Arg Leu Asn Ser Lys Asp Ser Thr Ser Ala Arg Thr Arg500 505<210>35<211>1602<212>DNA
<213>小麥(Triticum aestivum)<400>35atgggccggg tgaaaagatt ttaccaggat ttcatccata tcaagctgca tagcttctgc 60cgtatcagtg gatatgttgt cgattcaata gcttttgtct atagatttgt tgcattgcat120gttcacccct tctggatcca actgtcctac ttccttgcca ttgctatact tggttcagtc180ctcttgatgt cgctgaaacc aagcaaccct gacttcagcc ctccttacat tgacatgtta240ttcttgtcaa cttctgctct aacagtttct ggcctcagca ccatcacgat ggaggatctc300tcaagctctc aaattgtggt tttgacattg ctcatgctta taggagggga gatctttgtt360tcactcttag ggctcatgct tagagtgaac catcaagaca tgcaagatct tccaagcgtg420aagatcagct cggttcctgt cgagcttgaa gagctagact tgcccaacag catggcacta480tgtgatgagt cgcagcttga agaagcagct catgcaattc cacccaagaa atgtacagag540ttgaagagga gtaggtctgt caagtgctta ggatatgtgg tctttgggta ctttgccatg600atccatgtct tgggctttct gctggttttt ctgtatataa ctcatgtgcc aactgcaagt660gccccactga acaagaaagg gatcaacatc gtgctcttct cactatcagt caccgttgcc720tcctgtgcga atgcaggact cgtgcccaca aatgagaaca tggtcatctt ctcaaagaat780tcaggcctct tgttgctgct gagtggccag atgctcgcag gcaatacatt gttccctctc840ttcctgaggc tactggtgtg gttcctgggg aggatcacaa aggtgaagga gctgaggctc900atgatcaata accccgagga agtgcgtttt gctaatttgc ttgctaggtt gccaactgtg960tttctctcct caacggtcgt tggccttgta gcagctgggg tcacgatgtt ctgcgctgtt 1020gattggaatt cttcagtctt tgatgggctc agctcttatc agaagactgt caatgcattc 1080ttcatggtgg tgaatgcgag gcactcaggg gagaattcca tcgactgctc gctcatgtcc 1140cctgccatta tagtactatt catcgtcatg atgtatttgc catcatcagc aacatttgca 1200ccacccagtg gagatactaa aaccaccaat gagaacacga aagggaaagt caagagaggg 1260tcgttggtgc agaatttggc attctcaccg ctcgggtgta acatcatctt tgtgatggtt 1320gcctgcatca cggaaaggag aaggctcaga aacgatccac tcaacttctc caccttgaac 1380atgatatttg aggtcatcag cgcatatggc aatgcagggt tatccactgg ttacagttgt 1440tctagactgc atcagctgca cccagagatc atctgccagg acaaaccata cagcttttct 1500ggatggtgga gtgacggagg aaagtttgtg ctaatattgg tcatgctcta tggaaggctt 1560aaggctttca cactggccac gggtaaatcc tggaaagtat ga 1602<210>36<211>533<212>PRT<213>小麥<400>36Met Gly Arg Val Lys Arg Phe Tyr Gln Asp Phe Ile His Ile Lys Leu1 5 10 15His Ser Phe Cys Arg Ile Ser Gly Tyr Val Val Asp Ser Ile Ala Phe20 25 30Val Tyr Arg Phe Val Ala Leu His Val His Pro Phe Trp Ile Gln Leu35 40 45Ser Tyr Phe Leu Ala Ile Ala Ile Leu Gly Ser Val Leu Leu Met Ser50 55 60Leu Lys Pro Ser Asn Pro Asp Phe Ser Pro Pro Tyr Ile Asp Met Leu65 70 75 80
Phe Leu Ser Thr Ser Ala Leu Thr Val Ser Gly Leu Ser Thr Ile Thr85 90 95Met Glu Asp Leu Ser Ser Ser Gln Ile Val Val Leu Thr Leu Leu Met100 105 110Leu Ile Gly Gly Glu Ile Phe Val Ser Leu Leu Gly Leu Met Leu Arg115 120 125Val Asn His Gln Asp Met Gln Asp Leu Pro Ser Val Lys Ile Ser Ser130 135 140Val Pro Val Glu Leu Glu Glu Leu Asp Leu Pro Asn Ser Met Ala Leu145 150 155 160Cys Asp Glu Ser Gln Leu Glu Glu Ala Ala His Ala Ile Pro Pro Lys165 170 175Lys Cys Thr Glu Leu Lys Arg Ser Arg Ser Val Lys Cys Leu Gly Tyr180 185 190Val Val Phe Gly Tyr Phe Ala Met Ile His Val Leu Gly Phe Leu Leu195 200 205Val Phe Leu Tyr Ile Thr His Val Pro Thr Ala Ser Ala Pro Leu Asn210 215 220Lys Lys Gly Ile Asn Ile Val Leu Phe Ser Leu Ser Val Thr Val Ala225 230 235 240Ser Cys Ala Asn Ala Gly Leu Val Pro Thr Asn Glu Asn Met Val Ile245 250 255Phe Ser Lys Asn Ser Gly Leu Leu Leu Leu Leu Ser Gly Gln Met Leu260 265 270Ala Gly Asn Thr Leu Phe Pro Leu Phe Leu Arg Leu Leu Val Trp Phe275 280 285Leu Gly Arg Ile Thr Lys Val Lys Glu Leu Arg Leu Met Ile Asn Asn290 295 300Pro Glu Glu Val Arg Phe Ala Asn Leu Leu Ala Arg Leu Pro Thr Val305 310 315 320Phe Leu Ser Ser Thr Val Val Gly Leu Val Ala Ala Gly Val Thr Met325 330 335Phe Cys Ala Val Asp Trp Asn Ser Ser Val Phe Asp Gly Leu Ser Ser340 345 350
Tyr Gln Lys Thr Val Asn Ala Phe Phe Met Val Val Asn Ala Arg His355 360 365Ser Gly Glu Asn Ser Ile Asp Cys Ser Leu Met Ser Pro Ala Ile Ile370 375 380Val Leu Phe Ile Val Met Met Tyr Leu Pro Ser Ser Ala Thr Phe Ala385 390 395 400Pro Pro Ser Gly Asp Thr Lys Thr Thr Asn Glu Asn Thr Lys Gly Lys405 410 415Val Lys Arg Gly Ser Leu Val Gln Asn Leu Ala Phe Ser Pro Leu Gly420 425 430Cys Asn Ile Ile Phe Val Met Val Ala Cys Ile Thr Glu Arg Arg Arg435 440 445Leu Arg Asn Asp Pro Leu Ash Phe Ser Thr Leu Asn Met Ile Phe Glu450 455 460Val Ile Ser Ala Tyr Gly Asn Ala Gly Leu Ser Thr Gly Tyr Ser Cys465 470 475 480Ser Arg Leu His Gln Leu His Pro Glu Ile Ile Cys Gln Asp Lys Pro485 490 495Tyr Ser Phe Ser Gly Trp Trp Ser Asp Gly Gly Lys Phe Val Leu Ile500 505 510Leu Val Met Leu Tyr Gly Arg Leu Lys Ala Phe Thr Leu Ala Thr Gly515 520 525Lys Ser Trp Lys Val530<210>37<211>1458<212>DNA<213>海濱堿蓬鹽地亞種(Suaeda maritima subsp.Salsa)<400>37atgttgagtt tcaaatttat agtagaaaaa tgcaaacatt tttatacttc tctttatcta 60cttcttgtct atgtttttac atccttatat tggttaattt caaaaatcta tgattttatt 120atggtttatg tttgccactt gattattgag ttatgttact tcattcttgt atcttctttt 180ggattcttgt ttttaaaaac cctaattcca aaatcatcta ataatagtaa taacaataat 240aattcaataa atggtttaga tttgtttttc acctcggttt ccgccacaac cgtctcaagc 300atgtcaaccc tagagatgga ggtattctca aattcccaac tcattgtttt aaccattttg 360atgttcatag gaggtgaggt ctttacctcc atggtaggtc tccatttttc ggcctcgaaa 420cttgtgtaca ctcccctgca agcaaggagt agagtaaact cagtggctag cttaccactt 480cctcctgaaa gtattgagtt aggaatcatt attccatcat caacaacaac aacacaagaa 540
attagggttt catcaaccat tgaaaaaaca aaatcagaaa tagatttcct aataaaatca 600aaatcaatta gggttttagg ctttgtggtt ttgtcttact taatcatagt tcatttccta 660ggaatttcaa tggtattaac atacattaat acaatcccaa atgctaaaaa tgttttagac 720aaaaaaggtc ttaaaacatt cactttttca attttttcag ttgtttcaac ttttgcaagt 780tgtggtttca cccctacaaa tgaaaacatg caagttttta gcaaaaactc tggcctcttg 840ttgatgctaa tccctcaaat cctccttggg aacacattgt ttccttcgtt tcttcgattt 900tcgatatgga tgctaggaaa atttgtcaaa aaagacgaaa ccaagtatct aatgagaaac 960tcaaaggaaa ttgagtacca tcatttgctc tctagcaaac actctaggtt tttaattgtg 1020acggttttag ggttcatttt ggtgcaattt ataatgtttt gttcaatgga atggaatttc 1080gatggtctga ataatgatca taatatttat caaaaattag tgggaatatt atttcaatgt 1140gttaattcaa gacatacagg tgaaagcatt gttgatcttt cctccattaa ttcagctatg 1200ttggtgattt tcatcgttat gatgtacctt ccaccatata cttcctttct gccaataaag 1260gatgaagaaa aagaatatcc aaacatggta ttatttcaca aaggagaaaa gaaacggaag 1320aagattttga agaatttcct attttcacag cttggccata ttgccatttc atcattatta 1380tttgcatcac agagaagcaa aagattaaag atgatcccct caatttcaac gttttcaaca 1440ttgcctttga ggttctaa1458<210>38<211>485<212>PRT<213>海濱堿蓬鹽地亞種<400>38Met Leu Ser Phe Lys Phe Ile Val Glu Lys Cys Lys His Phe Tyr Thr1 5 10 15Ser Leu Tyr Leu Leu Leu Val Tyr Val Phe Thr Ser Leu Tyr Trp Leu20 25 30Ile Ser Lys Ile Tyr Asp Phe Ile Met Val Tyr Val Cys His Leu Ile35 40 45Ile Glu Leu Cys Tyr Phe Ile Leu Val Ser Ser Phe Gly Phe Leu Phe50 55 60Leu Lys Thr Leu Ile Pro Lys Ser Ser Asn Asn Ser Asn Asn Asn Asn65 70 75 80Asn Ser Ile Asn Gly Leu Asp Leu Phe Phe Thr Ser Val Ser Ala Thr85 90 95Thr Val Ser Ser Met Ser Thr Leu Glu Met Glu Val Phe Ser Asn Ser100 105 110Gln Leu Ile Val Leu Thr Ile Leu Met Phe Ile Gly Gly Glu Val Phe115 120 125Thr Ser Met Val Gly Leu His Phe Ser Ala Ser Lys Leu Val Tyr Thr130 135 140
Pro Leu Gln Ala Arg Ser Arg Val Asn Ser Val Ala Ser Leu Pro Leu145 150 155 160Pro Pro Glu Ser Ile Glu Leu Gly Ile Ile Ile Pro Ser Ser Thr Thr165 170 175Thr Thr Gln Glu Ile Arg Val Ser Ser Thr Ile Glu Lys Thr Lys Ser180 185 190Glu Ile Asp Phe Leu Ile Lys Ser Lys Ser Ile Arg Val Leu Gly Phe195 200 205Val Val Leu Ser Tyr Leu Ile Ile Val His Phe Leu Gly Ile Ser Met210 215 220Val Leu Thr Tyr Ile Asn Thr Ile Pro Asn Ala Lys Asn Val Leu Asp225 230 235 240Lys Lys Gly Leu Lys Thr Phe Thr Phe Ser Ile Phe Ser Val Val Ser245 250 255Thr Phe Ala Ser Cys Gly Phe Thr Pro Thr Asn Glu Asn Met Gln Val260 265 270Phe Ser Lys Asn Ser Gly Leu Leu Leu Met Leu Ile Pro Gln Ile Leu275 280 285Leu Gly Asn Thr Leu Phe Pro Ser Phe Leu Arg Phe Ser Ile Trp Met290 295 300Leu Gly Lys Phe Val Lys Lys Asp Glu Thr Lys Tyr Leu Met Arg Asn305 310 315 320Ser Lys Glu Ile Glu Tyr His His Leu Leu Ser Ser Lys His Ser Arg325 330 335Phe Leu Ile Val Thr Val Leu Gly Phe Ile Leu Val Gln Phe Ile Met340 345 350Phe Cys Ser Met Glu Trp Asn Phe Asp Gly Leu Asn Asn Asp His Asn355 360 365Ile Tyr Gln Lys Leu Val Gly Ile Leu Phe Gln Cys Val Asn Ser Arg370 375 380His Thr Gly Glu Ser Ile Val Asp Leu Ser Ser Ile Asn Ser Ala Met385 390 395 400Leu Val Ile Phe Ile Val Met Met Tyr Leu Pro Pro Tyr Thr Ser Phe405 4l0 415
Leu Pro Ile Lys Asp Glu Glu Lys Glu Tyr Pro Asn Met Val Leu Phe420 425 430His Lys Gly Glu Lys Lys Arg Lys Lys Ile Leu Lys Ash Phe Leu Phe435 440 445Ser Gln Leu Gly His Ile Ala Ile Ser Ser Leu Leu Phe Ala Ser Gln450 455 460Arg Ser Lys Arg Leu Lys Met Ile Pro Ser Ile Ser Thr Phe Ser Thr465 470 475 480Leu Pro Leu Arg Phe485<210>39<211>3708<212>DNA<213>釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)<400>39atgcatttta gaagaacgat gagtagagtg cccacattgg catctcttga aatacgatat 60aaaaaatctt tcggccataa atttcgtgat tttattgctc tatgtggtca ctattttgct120ccagttaaaa aatatatctt ccccagtttt atcgcggttc actacttcta cacgatatcc180ctgacattaa taacttcaat cctgctatat cccattaaga ataccagata cattgataca240ttgtttttag cagcgggcgc agttacacaa ggtggcttaa atactgtgga tatcaacaat300ctaagcttat accaacaaat tgttctgtat atcgtatgct gcatatcaac accaattgca360gttcatagtt gcttggcatt tgtacggctt tactggtttg agcgctactt cgatggtatt420agagactctt ctagacgaaa ttttaagatg agaagaacga aaacaatctt agaaagggaa480ctaacagcaa gaaccatgac caagaataga acaggtaccc aaagaacgtc ttatcctagg540aaacaagcta aaacagatga tttccaagaa aaattgttca gcggagaaat ggttaataga600gatgagcagg actcagttca cagcgaccag aattctcatg acattagtag ggacagcagc660aataataata cgaatcacaa tggtagcagt ggcagtttag atgatttcgt taaggaagac720gaaacggatg acaatggaga atatcaggag aacaactcct actcgacggt aggtagttcg780tctaacacag ttgcagacga aagtttaaat cagaagccca agccaagcag tcttcggttt840gatgagccac acagcaaaca aagacccgca agagttccct cagagaaatt tgcaaaaaga900aggggttcaa gagatattag cccagccgat atgtatcgat ccattatgat gctacaaggt960aagcatgaag caactgctga agatgaaggt ccccctttag tcatcgggtc ccctgcggat 1020ggcacaagat ataaaagtaa tgtcaataag ctaaagaagg ccaccggcat aaatggtaac 1080aaaatcaaga ttcgagataa gggaaatgaa agtaacactg atcaaaattc cgtgtcaagt 1140gaagcaaaca gtacggcgag cgtttcggac gaaagctcgt tacacacaaa ttttggtaac 1200aaagtacctt cattaagaac aaatactcat agatcaaatt cgggcccgat agccattact 1260gataacgcag aaacagacaa aaagcatggg ccatcaattc aattcgatat aactaaacct 1320cctagaaaaa tttcaaaaag agtttcaacc ttcgatgatt tgaacccaaa atcttccgtt 1380ctttatcgaa aaaaagcatc gaagaagtac ctcatgaaac attttcctaa agcgcggcga 1440atacggcaac aaattaagag aaggctttct actggttcaa ttgagaaaaa cagcagtaac 1500aatgtttcag atagaaaacc tattactgat atggatgatg atgatgatga cgatgacaac 1560gacggcgata acaacgaaga atactttgct gacaacgaaa gcggcgatga agatgaacga 1620gtacagcagt ctgaaccaca ttctgattca gaactcaaat cgcaccaaca acagcaagaa 1680aaacaccaac tgcagcagaa cctgcaccgc atgtataaaa ccaaatcatt tgatgataat 1740cgttcaagag cagttcctat ggaacgttcc aggaccatcg atatggcaga ggctaaggat 1800
ctaaatgagc tcgcaaggac gcctgatttt caaaaaatgg tctatcaaaa ttggaaagcc 1860catcatagaa aaaaaccgaa ctttaggaag aggggatgga ataacaagat atttgaacat 1920ggtccctatg catctgacag cgatcgcaat tatcctgata atagtaatac tggaaacagt 1980attcttcatt acgcagagtc tattttacat catgatggct ctcataaaaa tggaagcgaa 2040gaagcctctt ccgactctaa tgagaatatc tattccacga atggaggaag cgaccacaat 2100ggtcttaaca actatcctac ttacaacgac gatgaagaag gctattatgg tttacatttc 2160gataccgatt atgacctaga tcctcgtcat gatttatcta aaggcagtgg taaaacgtat 2220ctatcatggc aaccaactat tggacgtaac tcaaacttcc ttggattaac aagagcccag 2280aaagatgaat taggtggtgt cgagtacaga gcaatcaaac ttttatgcac catattggtt 2340gtctactacg ttggatggca tattgttgct tttgttatgt tagtaccttg gattattttg 2400aaaaagcatt atagtgaagt tgttagagat gatggtgttt cacctacatg gtggggattt 2460tggacagcaa tgagtgcatt taatgattta ggtttgacat taactccaaa ttcaatgatg 2520tcgtttaaca aagctgtata cccattgatc gttatgattt ggtttatcat tatcggaaat 2580acagggtttc ccatccttct tagatgcatc atttggataa tgtttaaaat ttctcctgat 2640ttatcacaga tgagagaaag tttaggtttt ctcttagacc atccacgtcg ttgtttcacc 2700ttgctatttc ctaaggcagc tacatggtgg ctacttttaa cgcttgcagg attgaatata 2760actgattgga ttttatttat tattctagat tttggctcaa cagttgtgaa atcattatcg 2820aaaggctata gagtccttgt cggcctgttt caatctgtta gcacaagaac tgctggattc 2880agcgttgtcg atttaagtca actgcatcct tctatccaag tctcctatat gctaatgatg 2940tatgtctccg tattaccatt ggccatctct attcgacgga caaatgttta cgaggagcaa 3000tctttaggac tatatggaga tatgggggga gaaccagaag atacggatac tgaagacgat 3060ggtaacgatg aagatgacga cgaggaaaac gagagtcacg aaggtcaaag tagtcaaaga 3120agtagttcga acaacaacaa caataacaac aggaaaaaga aaaagaaaaa gaaaactgaa 3180aatccaaatg aaatatctac aaaatccttt atcggtgccc atttaaggaa acagctttca 3240tttgacttgt ggtttctatt tttagggtta tttatcattt gcatttgtga aggggacaag 3300ataaaggacg tacaagaacc aaactttaat atatttgcaa ttctttttga aattgttagc 3360gcttacggta cagttgggct atcgctaggt tatccggaca ccaaccaatc gttttcaaga 3420cagtttacta cattatctaa gttggtgatc atagctatgc tgatcagagg caagaataga 3480ggtctaccat actcactgga tcgtgcaatt atcttgccta gtgatagact tgaacatatt 3540gaccaccttg agggcatgaa attgaagaga caggctagaa ccaatacaga agacccaatg 3600acggaacatt tcaagagaag tttcactgat gtgaaacatc gttggggagc tcttaagcgt 3660aagaccacac attcccgaaa tcctaaaagg agcagcacaa cgctctaa 3708<210>40<211>1235<212>PRT<213>釀酒酵母<400>40Met His Phe Arg Arg Thr Met Ser Arg Val Pro Thr Leu Ala Ser Leu1 5 10 15Glu Ile Arg Tyr Lys Lys Ser Phe Gly His Lys Phe Arg Asp Phe Ile20 25 30Ala Leu Cys Gly His Tyr Phe Ala Pro Val Lys Lys Tyr Ile Phe Pro35 40 45Ser Phe Ile Ala Val His Tyr Phe Tyr Thr Ile Ser Leu Thr Leu Ile50 55 60
Thr Ser Ile Leu Leu Tyr Pro Ile Lys Asn Thr Arg Tyr Ile Asp Thr65 70 75 80Leu Phe Leu Ala Ala Gly Ala Val Thr Gln Gly Gly Leu Asn Thr Val85 90 95Asp Ile Asn Asn Leu Ser Leu Tyr Gln Gln Ile Val Leu Tyr Ile Val100 105 110Cys Cys Ile Ser Thr Pro Ile Ala Val His Ser Cys Leu Ala Phe Val115 120 125Arg Leu Tyr Trp Phe Glu Arg Tyr Phe Asp Gly Ile Arg Asp Ser Ser130 135 140Arg Arg Asn Phe Lys Met Arg Arg Thr Lys Thr Ile Leu Glu Arg Glu145 150 155 160Leu Thr Ala Arg Thr Met Thr Lys Asn Arg Thr Gly Thr Gln Arg Thr165 170 175Ser Tyr Pro Arg Lys Gln Ala Lys Thr Asp Asp Phe Gln Glu Lys Leu180 185 190Phe Ser Gly Glu Met Val Asn Arg Asp Glu Gln Asp Ser Val His Ser195 200 205Asp Gln Asn Ser His Asp Ile Ser Arg Asp Ser Ser Asn Asn Asn Thr210 215 220Asn His Asn Gly Ser Ser Gly Ser Leu Asp Asp Phe Val Lys Glu Asp225 230 235 240Glu Thr Asp Asp Asn Gly Glu Tyr Gln Glu Asn Asn Ser Tyr Ser Thr245 250 255Val Gly Ser Ser Ser Asn Thr Val Ala Asp Glu Ser Leu Asn Gln Lys260 265 270Pro Lys Pro Ser Ser Leu Arg Phe Asp Glu Pro His Ser Lys Gln Arg275 280 285Pro Ala Arg Val Pro Ser Glu Lys Phe Ala Lys Arg Arg Gly Ser Arg290 295 300Asp Ile Ser Pro Ala Asp Met Tyr Arg Ser Ile Met Met Leu Gln Gly305 310 315 320Lys His Glu Ala Thr Ala Glu Asp Glu Gly Pro Pro Leu Val Ile Gly325 330 335
Ser Pro Ala Asp Gly Thr Arg Tyr Lys Ser Asn Val Asn Lys Leu Lys340 345 350Lys Ala Thr Gly Ile Asn Gly Asn Lys Ile Lys Ile Arg Asp Lys Gly355 360 365Asn Glu Ser Asn Thr Asp Gln Asn Ser Val Ser Ser Glu Ala Asn Ser370 375 380Thr Ala Ser Val Ser Asp Glu Ser Ser Leu His Thr Asn Phe Gly Asn385 390 395 400Lys Val Pro Ser Leu Arg Thr Asn Thr His Arg Ser Asn Ser Gly Pro405 410 415Ile Ala Ile Thr Asp Asn Ala Glu Thr Asp Lys Lys His Gly Pro Ser420 425 430Ile Gln Phe Asp Ile Thr Lys Pro Pro Arg Lys Ile Ser Lys Arg Val435 440 445Ser Thr Phe Asp Asp Leu Asn Pro Lys Ser Ser Val Leu Tyr Arg Lys450 455 460Lys Ala Ser Lys Lys Tyr Leu Met Lys His Phe Pro Lys Ala Arg Arg465 470 475 480Ile Arg Gln Gln Ile Lys Arg Arg Leu Ser Thr Gly Ser Ile Glu Lys485 490 495Asn Ser Ser Asn Asn Val Ser Asp Arg Lys Pro Ile Thr Asp Met Asp500 505 510Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asn Asp Gly Asp Asn Asn Glu Glu Tyr515 520 525Phe Ala Asp Asn Glu Ser Gly Asp Glu Asp Glu Arg Val Gln Gln Ser530 535 540Glu Pro His Ser Asp Ser Glu Leu Lys Ser His Gln Gln Gln Gln Glu545 550 555 560Lys His Gln Leu Gln Gln Asn Leu His Arg Met Tyr Lys Thr Lys Ser565 570 575Phe Asp Asp Asn Arg Ser Arg Ala Val Pro Met Glu Arg Ser Arg Thr580 585 590Ile Asp Met Ala Glu Ala Lys Asp Leu Asn Glu Leu Ala Arg Thr Pro595 600 605
Asp Phe Gln Lys Met Val Tyr Gln Asn Trp Lys Ala His His Arg Lys610 615 620Lys Pro Asn Phe Arg Lys Arg Gly Trp Asn Asn Lys Ile Phe Glu His625 630 635 640Gly Pro Tyr Ala Ser Asp Ser Asp Arg Asn Tyr Pro Asp Asn Ser Asn645 650 655Thr Gly Asn Ser Ile Leu His Tyr Ala Glu Ser Ile Leu His His Asp660 665 670Gly Ser His Lys Asn Gly Ser Glu Glu Ala Ser Ser Asp Ser Asn Glu675 680 685Asn Ile Tyr Ser Thr Asn Gly Gly Ser Asp His Asn Gly Leu Asn Asn690 695 700Tyr Pro Thr Tyr Asn Asp Asp Glu Glu Gly Tyr Tyr Gly Leu His Phe705 710 715 720Asp Thr Asp Tyr Asp Leu Asp Pro Arg His Asp Leu Ser Lys Gly Ser725 730 735Gly Lys Thr Tyr Leu Ser Trp Gln Pro Thr Ile Gly Arg Asn Ser Asn740 745 750Phe Leu Gly Leu Thr Arg Ala Gln Lys Asp Glu Leu Gly Gly Val Glu755 760 765Tyr Arg Ala Ile Lys Leu Leu Cys Thr Ile Leu Val Val Tyr Tyr Val770 775 780Gly Trp His Ile Val Ala Phe Val Met Leu Val Pro Trp Ile Ile Leu785 790 795 800Lys Lys His Tyr Ser Glu Val Val Arg Asp Asp Gly Val Ser Pro Thr805 810 815Trp Trp Gly Phe Trp Thr Ala Met Ser Ala Phe Asn Asp Leu Gly Leu820 825 830Thr Leu Thr Pro Asn Ser Met Met Ser Phe Asn Lys Ala Val Tyr Pro835 840 845Leu Ile Val Met Ile Trp Phe Ile Ile Ile Gly Asn Thr Gly Phe Pro850 855 860Ile Leu Leu Arg Cys Ile Ile Trp Ile Met Phe Lys Ile Ser Pro Asp865 870 875 880
Leu Ser Gln Met Arg Glu Ser Leu Gly Phe Leu Leu Asp His Pro Arg885 890 895Arg Cys Phe Thr Leu Leu Phe Pro Lys Ala Ala Thr Trp Trp Leu Leu900 905 910Leu Thr Leu Ala Gly Leu Asn Ile Thr Asp Trp Ile Leu Phe Ile Ile915 920 925Leu Asp Phe Gly Ser Thr Val Val Lys Ser Leu Ser Lys Gly Tyr Arg930 935 940Val Leu Val Gly Leu Phe Gln Ser Val Ser Thr Arg Thr Ala Gly Phe945 950 955 960Ser Val Val Asp Leu Ser Gln Leu His Pro Ser Ile Gln Val Ser Tyr965 970 975Met Leu Met Met Tyr Val Ser Val Leu Pro Leu Ala Ile Ser Ile Arg980 985 990Arg Thr Asn Val Tyr Glu Glu Gln Ser Leu Gly Leu Tyr Gly Asp Met995 1000 1005Gly Gly Glu Pro Glu Asp Thr Asp Thr Glu Asp Asp Gly Asn Asp101010151020Glu Asp Asp Asp Glu Glu Asn Glu Ser His Glu Gly Gln Ser Ser102510301035Gln Arg Ser Ser Ser Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Arg Lys Lys104010451050Lys Lys Lys Lys Lys Thr Glu Asn Pro Asn Glu Ile Ser Thr Lys105510601065Ser Phe Ile Gly Ala His Leu Arg Lys Gln Leu Ser Phe Asp Leu107010751080Trp Phe Leu Phe Leu Gly Leu Phe Ile Ile Cys Ile Cys Glu Gly108510901095Asp Lys Ile Lys Asp Val Gln Glu Pro Asn Phe Asn Ile Phe Ala110011051110Ile Leu Phe Glu Ile Val Ser Ala Tyr Gly Thr Val Gly Leu Ser111511201125Leu Gly Tyr Pro Asp Thr Asn Gln Ser Phe Ser Arg Gln Phe Thr113011351140
Thr Leu Ser Lys Leu Val Ile Iie Ala Met Leu Ile Arg Gly Lys114511501155Asn Arg Gly Leu Pro Tyr Ser Leu Asp Arg Ala Ile Ile Leu Pro116011651170Ser Asp Arg Leu Glu His Ile Asp His Leu Glu Gly Met Lys Leu117511801185Lys Arg Gln Ala Arg Thr Asn Thr Glu Asp Pro Met Thr Glu His119011951200Phe Lys Arg Ser Phe Thr Asp Val Lys His Arg Trp Gly Ala Leu120512101215Lys Arg Lys Thr Thr His Ser Arg Asn Pro Lys Arg Ser Ser Thr122012251230Thr Leu1235<210>41<211>2670<212>DNA<213>釀酒酵母<400>41atgccaacag ctaagaggac gtcatccagg gcttcgttgg cactgccctt ccagttacgg 60ttggtgcaca agaaatcatg gggccatcgg ctaagagact tcatttccgg gttcttaaaa120tcatgcagac ccattgctaa atacgttttc cccaacttca tcgtggtgca ctatatctac180ctgatcacgc tgtcgattat cgggtccatt ctgttatatc cgtgcaagaa cacggcgttc240atcgatgtgc tatttctggc tgctggagcg tctacacagg gcgggctggc caccaagagc300actaacgatt tcaacctgta ccagcagata gtggtgtacg tcattacatt gctgtccacg360cctatactta ttcatgggtt tttggccttt gtcaggctgt attggtttga aaggtacttc420gacaacatta gggatatctc caaacagaat tttaaactaa gaaggaccat gacgttgcaa480caaagggaac tatcgggcag cagtggcaat gccgctcgaa gtaggagttt caaggacaac540ctgttccgtg ggaagtttgt ttccagagaa gacccacgac aatccgcttc agatgtgccg600atggactctc ctgacacgtc cgcattgtcc tcaatctcac cgttgaatgt ttcctcctct660aaggaggaat ccagtgacac gcaaagctcg cctccaaact tctcaagtaa gcgccaaccc720tcagacgttg acccaagaga catttacaaa tcgataatga tgctacaaaa acaacaagag780aagagcaacg caaactccac ggattctttt tcgagcgaga ccaatggacc cgctttcatt840gtgcaggaac gtcatgagag aagagccccc cactgctcac tgaaacgcca ttctgtcctg900ccatcttctc aggaattgaa caagctagcc cagacgaaaa gtttccagaa attgcttggc960ttgcggagag atgaaggtga ccatgactac tttgacggtg ctcctcacaa atatatggtc 1020accaagaaga aaaaaatatc tagaacgcaa tcatgtaaca tcccaacgta tactgcttca 1080ccgagtccta aaacctcagg ccaagtagtt gaaaatcata gaaacttggc caagtcggcg 1140ccttcatctt ttgttgatga ggagatgagc ttttcaccgc aagagtcttt gaatttacag 1200ttccaagcgc acccgcccaa accaaaacga cgtgaaggtg atataggcca ccccttcacc 1260agaacaatga gcaccaacta tctatcgtgg cagccaacct ttggcagaaa ctccgtcttc 1320attggactca caaagcaaca aaaggaggaa ctcggcggtg tcgaatatcg tgctttgaga 1380ttgctgtgct gcattctcat ggtatactac atcggattca acattttggc gtttgtgacc 1440
atcgttccat gggcctgtac gaggcaccac tactcagaga ttattagacg aaatggagtt 1500tctccaacct ggtgggggtt tttcactgca atgagtgcat tcagcaactt gggtctgtct 1560ttgaccgctg attcaatggt ttcctttgat actgcgccgt atccgctgat tttcatgatg 1620ttcttcatca tcataggcaa tacaggcttc ccaattatgt tacgatttat catttggatc 1680atgttcaaga cctcgagaga cctatctcag tttaaggaaa gtcttgggtt tctcttggat 1740catccgcgca ggtgttttac gttgctgttc cccagcggcc ccacatggtg gctgtttaca 1800actttagtcg tcttaaacgc tacggattgg attcttttca taattctgga tttcaactcc 1860gctgtagtaa ggcaggttgc taaaggttat cgagctctca tgggcctctt ccagtctgta 1920tgcacaagaa ctgctggatt caacgttgtt gacttaagta aattacaccc gtccattcag 1980gtgtcttata tgctaatgat gtacgtttcg gtcctgccgc tggcgatttc cattagaaga 2040acgaatgttt atgaggagca atcgttggga ctatacgata gtggacaaga tgacgaaaat 2100atcacccacg aagacgatat aaaggaaaca gaccatgatg gcgaatccga agagcgagac 2160actgtatcta caaagtccaa gccgaagaaa cagtccccaa aatcgtttgt tggtgctcat 2220ttgaggaggc aactctcttt tgatttatgg tacctattcc ttggattatt tataatatgc 2280atatgcgagg gcagaaaaat cgaagacgtt aataaacctg atttcaatgt ctttgctata 2340ttgtttgaag ttgttagcgc ttatggtaca gtgggtttgt cattgggtta cccaaacacc 2400aacacatcac tatctgccca gttcaccgta ttatcgaagc tagtcataat tgccatgcta 2460ataagaggaa gaaatagagg tttaccatac actttggatc gtgccatcat gctgccaagt 2520gacaaactgg aacaaattga tcgtttacaa gatatgaaag ctaagggtaa gttgttagcc 2580aaagttggtg aggatccaat gactacttac gtcaaaaaga gatcccacaa actgaaaaaa 2640atagcaacaa agttttgggg gaagcattaa 2670<210>42<211>889<212>PRT<213>釀酒酵母<400>42Met Pro Thr Ala Lys Arg Thr Ser Ser Arg Ala Ser Leu Ala Leu Pro1 5 10 15Phe Gln Leu Arg Leu Val His Lys Lys Ser Trp Gly His Arg Leu Arg20 25 30Asp Phe Ile Ser Gly Phe Leu Lys Ser Cys Arg Pro Ile Ala Lys Tyr35 40 45Val Phe Pro Asn Phe Ile Val Val His Tyr Ile Tyr Leu Ile Thr Leu50 55 60Ser Ile Ile Gly Ser Ile Leu Leu Tyr Pro Cys Lys Ash Thr Ala Phe65 70 75 80Ile Asp Val Leu Phe Leu Ala Ala Gly Ala Ser Thr Gln Gly Gly Leu85 90 95Ala Thr Lys Ser Thr Asn Asp Phe Asn Leu Tyr Gln Gln Ile Val Val100 105 110Tyr Val Ile Thr Leu Leu Ser Thr Pro Ile Leu Ile His Gly Phe Leu115 120 125
Ala Phe Val Arg Leu Tyr Trp Phe Glu Arg Tyr Phe Asp Asn Ile Arg130 135 140Asp Ile Ser Lys Gln Asn Phe Lys Leu Arg Arg Thr Met Thr Leu Gln145 150 155 160Gln Arg Glu Leu Ser Gly Ser Ser Gly Asn Ala Ala Arg Ser Arg Ser165 170 175Phe Lys Asp Asn Leu Phe Arg Gly Lys Phe Val Ser Arg Glu Asp Pro180 185 190Arg Gln Ser Ala Ser Asp Val Pro Met Asp Ser Pro Asp Thr Ser Ala195 200 205Leu Ser Ser Ile Ser Pro Leu Asn Val Ser Ser Ser Lys Glu Glu Ser210 215 220Ser Asp Thr Gln Ser Ser Pro Pro Asn Phe Ser Ser Lys Arg Gln Pro225 230 235 240Ser Asp Val Asp Pro Arg Asp Ile Tyr Lys Ser Ile Met Met Leu Gln245 250 255Lys Gln Gln Glu Lys Ser Asn Ala Asn Ser Thr Asp Ser Phe Ser Ser260 265 270Glu Thr Asn Gly Pro Ala Phe Ile Val Gln Glu Arg His Glu Arg Arg275 280 285Ala Pro His Cys Ser Leu Lys Arg His Ser Val Leu Pro Ser Ser Gln290 295 300Glu Leu Asn Lys Leu Ala Gln Thr Lys Ser Phe Gln Lys Leu Leu Gly305 310 315 320Leu Arg Arg Asp Glu Gly Asp His Asp Tyr Phe Asp Gly Ala Pro His325 330 335Lys Tyr Met Val Thr Lys Lys Lys Lys Ile Ser Arg Thr Gln Ser Cys340 345 350Asn Ile Pro Thr Tyr Thr Ala Ser Pro Ser Pro Lys Thr Ser Gly Gln355 360 365Val Val Glu Asn His Arg Asn Leu Ala Lys Ser Ala Pro Ser Ser Phe370 375 380Val Asp Glu Glu Met Ser Phe Ser Pro Gln Glu Ser Leu Asn Leu Gln385 390 395 400
Phe Gln Ala His Pro Pro Lys Pro Lys Arg Arg Glu Gly Asp Ile Gly405 410 415His Pro Phe Thr Arg Thr Met Ser Thr Asn Tyr Leu Ser Trp Gln Pro420 425 430Thr Phe Gly Arg Asn Ser Val Phe Ile Gly Leu Thr Lys Gln Gln Lys435 440 445Glu Glu Leu Gly Gly Val Glu Tyr Arg Ala Leu Arg Leu Leu Cys Cys450 455 460Ile Leu Met Val Tyr Tyr Ile Gly Phe Asn Ile Leu Ala Phe Val Thr465 470 475 480Ile Val Pro Trp Ala Cys Thr Arg His His Tyr Ser Glu Ile Ile Arg485 490 495Arg Asn Gly Val Ser Pro Thr Trp Trp Gly Phe Phe Thr Ala Met Ser500 505 510Ala Phe Ser Asn Leu Gly Leu Ser Leu Thr Ala Asp Ser Met Val Ser515 520 525Phe Asp Thr Ala Pro Tyr Pro Leu Ile Phe Met Met Phe Phe Ile Ile530 535 540Ile Gly Asn Thr Gly Phe Pro Ile Met Leu Arg Phe Ile Ile Trp Ile545 550 555 560Met Phe Lys Thr Ser Arg Asp Leu Ser Gln Phe Lys Glu Ser Leu Gly565 570 575Phe Leu Leu Asp His Pro Arg Arg Cys Phe Thr Leu Leu Phe Pro Ser580 585 590Gly Pro Thr Trp Trp Leu Phe Thr Thr Leu Val Val Leu Asn Ala Thr595 600 605Asp Trp Ile Leu Phe Ile Ile Leu Asp Phe Asn Ser Ala Val Val Arg610 615 620Gln Val Ala Lys Gly Tyr Arg Ala Leu Met Gly Leu Phe Gln Ser Val625 630 635 640Cys Thr Arg Thr Ala Gly Phe Asn Val Val Asp Leu Ser Lys Leu His645 650 655Pro Ser Ile Gln Val Ser Tyr Met Leu Met Met Tyr Val Ser Val Leu660 665 670
Pro Leu Ala Ile Ser Ile Arg Arg Thr Asn Val Tyr Glu Glu Gln Ser675 680 685Leu Gly Leu Tyr Asp Ser Gly Gln Asp Asp Glu Asn Ile Thr His Glu690 695 700Asp Asp Ile Lys Glu Thr Asp His Asp Gly Glu Ser Glu Glu Arg Asp705 710 715 720Thr Val Ser Thr Lys Ser Lys Pro Lys Lys Gln Ser Pro Lys Ser Phe725 730 735Val Gly Ala His Leu Arg Arg Gln Leu Ser Phe Asp Leu Trp Tyr Leu740 745 750Phe Leu Gly Leu Phe Ile Ile Cys Ile Cys Glu Gly Arg Lys Ile Glu755 760 765Asp Val Asn Lys Pro Asp Phe Asn Val Phe Ala Ile Leu Phe Glu Val770 775 780Val Ser Ala Tyr Gly Thr Val Gly Leu Ser Leu Gly Tyr Pro Asn Thr785 790 795 800Ash Thr Ser Leu Ser Ala Gln Phe Thr Val Leu Ser Lys Leu Val Ile805 810 815Ile Ala Met Leu Ile Arg Gly Arg Asn Arg Gly Leu Pro Tyr Thr Leu820 825 830Asp Arg Ala Ile Met Leu Pro Ser Asp Lys Leu Glu Gln Ile Asp Arg835 840 845Leu Gln Asp Met Lys Ala Lys Gly Lys Leu Leu Ala Lys Val Gly Glu850 855 860Asp Pro Met Thr Thr Tyr Val Lys Lys Arg Ser His Lys Leu Lys Lys865 870 875 880Ile Ala Thr Lys Phe Trp Gly Lys His885<210>43<211>3726<212>DNA<213>葡萄汁酵母(Saccharomyces uvarum)<400>43atgcacatta gagggaccat gagcagagtg cccacattag catcgttcga agtacgatac 60aaaaaatcct tcggccacaa atttcgtgat ttcattgctc tatgtggcca ctattgctcc120ccaattaaaa aatatatttt ccctaatttt atcgcagtcc attatttcta tacgatagtc180
ctcacgctaa taacctctat tctgttgtat ccagttaaga acatcagata tatcgacgct 240ttgtttttgg cagcaggtgc ggtcactcaa ggtggtttga atactgtgga tgtcaacaat 300ctaaccttat atcaacagat tattttgtac attatatgct gcatatcaac gcccattgcc 360gttcatagtt gtttggcatt cgtaagactc tattggtttg aacgttattt tgacggtatt 420agagactcgt ccaggctaaa tttcaaaatg agaagaacaa agacaatctt ggaaagggaa 480ctaaccgcta gaaccatgac caaaagtaag acaggaggga ctcaaagagt gtcacgtccc 540gggaaatcag acaagagaga cgatttccaa gaaaaattgt ttaatggaga aatggttaat 600agagatgagc aggactcggt tcatagtagc cacaattctc gtgatagtaa tagcaatgcc 660aataccaata gtagcaacaa taatagcatc aaccacaatg gtagtagtgg cagtttggat 720gattatgtta gggaagacaa agcggatgag gtcgaaaaat accacggaaa taagtcctat 780tcaagtgtag gtagttcgtc caatacagcc acagatgaaa atataagtca aaaattaaag 840ccaagtagtc ttcgattcga tgagtcgcaa aataaaagaa aacgtacggg agccccttca 900gaaaaatttg ccaaaaggag aggttcaaga gatatcactc ctgaagatat gtatcgatcc 960attatgatgc tacaaggtga gcacgagggt actgcagaag atgaaggtcc acctttagtt1020attggatcgc ctacggatgg tacaagaaat atggacaacg gtagtgagtc aaagtctgct1080cccacgatga atgagagtaa aatcaggatt caggataaag gagctaaaat tagccttgac1140caggactccg tattacatag ttcaaattct tccgcatgca cttcggatga ggattctcta1200cctacaaatt ttggaggcac aacaccttca ttgagcgcaa agccacggga atcaagttca1260ggcccaatag cgttcactga aggggaaaat gctgatagaa aacaaggccc atcgattcag1320ttcaatatca ctaaaccgcc aaggaaggct tctaaatcga agagggtttc tactatggat1380gacttgaacc caagatcaat ttttccgcat caaaaaaaat catcgaaagg atacataatg1440aaacatttgc cgaaagcccg tcgaatacgg cagcagatta aaagaagact ttccacgggt1500tcgatcgata aaaacagtag cagtgacgct ctcgatagag ggctcatttc tggtctaaat1560gatgatgatg atggcaacga aggtgataac atggaagagt actttgccga caacgaaagt1620ggggatgaag atgaccgaat gcagcaatct gaaccacagt ctggatcaga acttaaattg1680aaacaacagc aacagcacca attgcagcaa aacctgcatc gtatgtacaa gacgaaatct1740tttgacgata atcgttcaaa acctgtcctc atggaaaggt ctaagactat cgatatggct1800gaagctagag atttaaatga acttgccagg actcctgact ttcaaaaaat ggtttataag1860aattggaaag cccatcatag aaataaacct aacttcaaaa gaaggggctg gaatggcaag1920atgtttgaac atggtcctta tacatctgac agcgaccata attatcagga taatggaaat1980aatagtaata gtatagttca ctacgcagaa tctattctac atcgtgataa ttctcataga2040aatggaagcg aagatgtttc ttcagattct aatgagacca cctatccttt gaatggaaac2100aatgatcaca gccaaaacga tgctaatggc tatcccacct acaacgatga agaggaaggc2160tattacggtt tacatttcga ttctgattat aacttggatc ctcaccatgc tctatccagt2220aacgctagca aaaactactt gtcatggcaa ccaaccattg gacgtaattc aaactttctt2280gggttgacaa gagcccaaaa ggacgaattg ggtggtgtcg agtacagagc catcaaacta2340ctatgtacca tattggttgt ctattatgtt ggatggcaca tcgtctcttt tgttatgttg2400gtgccttgga ttaacttgaa aaagcactat agcgatattg tcagaagcga tggcgtttca2460cctacatggt ggggtttttg gacagcaatg agtgccttca acgatttggg attaacatta2520accccggact caatgatgtc atttgataaa gctgtatatc ccttgatcgt tatgatttgg2580tttatcatta ttggaaatac agggtttccc atccttctta gatgcattat ttggataatg2640ttcaaacttt cccctgattt gtcacagatg agagagagtt taggctttct tttagatcac2700ccgcgtcgtt gttttactct attatttcca aaggctgcca catggtggct gcttttgacg2760cttgtgggac taaattttac agattggatc ttatttatta ttttggattt tggatcaact2820gtagttaaat cgttatcaaa aggttataga gttcttgttg gtttattcca atctgtcagt2880acgaggaccg ccggtttcag tgtcgttgat ttgagtcagt tacacccctc tatccaagtc2940tcctatatgc ttatgatgta tgtctccgtg ttgccattag ctatttctat tagacggaca3000aatgtttacg aggagcaatc tttgggactg tatggagaaa tgggaggtaa accagaagat3060actgatactg aagaggacgg cgactgcgat gatgaagatg acgacaacga agaagaggag3120agccatgaag gtggaagtag ccaaaggggc aaatcaaaga aagaaacaaa aaagaaaaaa3180aagagaaaag aaaatgagaa ccccaacgaa gaatcaacca agtccttcat tggtgcgcat3240ttaagaagac agctatcttt tgatttatgg tttttgtttc ttgggctatt tatcatttgt3300
atctgcgaac gtgacaagat aaaagacatc cagagaccga acttcaatgt atttacaatt 3360ctttttgaga ttgtaagcgc ttatggtaca gtcggactat cattgggcta tccgaacact 3420aaccaatcat tttcaagaca gttaaccaca ttatctaaat taatcatcat agctatgctg 3480attagaggta agaatagagg tctgccctat tctttggacc gtgctattat cctgccaagt 3540gatagacttg aacatattga tcacattgag gacttgaaat tgaagagaca ggccagaacc 3600gatacggatg atccgatgac ggagcatctc aagagaagca ttagcgatgc caaacatcgt 3660tgggacgaac ttaaacacaa gagaagcctt tcccggagtt cgaaaagaag caccaaaacc 3720aactaa 3726<210>44<211>1241<212>PRT<213>葡萄汁酵母<400>44Met His Ile Arg Gly Thr Met Ser Arg Val Pro Thr Leu Ala Ser Phe1 5 10 15Glu Val Arg Tyr Lys Lys Ser Phe Gly His Lys Phe Arg Asp Phe Ile20 25 30Ala Leu Cys Gly His Tyr Cys Ser Pro Ile Lys Lys Tyr Ile Phe Pro35 40 45Asn Phe Ile Ala Val His Tyr Phe Tyr Thr Ile Val Leu Thr Leu Ile50 55 60Thr Ser Ile Leu Leu Tyr Pro Val Lys Asn Ile Arg Tyr Ile Asp Ala65 70 75 80Leu Phe Leu Ala Ala Gly Ala Val Thr Gln Gly Gly Leu Asn Thr Val85 90 95Asp Val Asn Asn Leu Thr Leu Tyr Gln Gln Ile Ile Leu Tyr Ile Ile100 105 110Cys Cys Ile Ser Thr Pro Ile Ala Val His Ser Cys Leu Ala Phe Val115 120 125Arg Leu Tyr Trp Phe Glu Arg Tyr Phe Asp Gly Ile Arg Asp Ser Ser130 135 140Arg Leu Asn Phe Lys Met Arg Arg Thr Lys Thr Ile Leu Glu Arg Glu145 150 155 160Leu Thr Ala Arg Thr Met Thr Lys Ser Lys Thr Gly Gly Thr Gln Arg165 170 175Val Ser Arg Pro Gly Lys Ser Asp Lys Arg Asp Asp Phe Gln Glu Lys180 185 190
Leu Phe Asn Gly Glu Met Val Asn Arg Asp Glu Gln Asp Ser Val His195 200 205Ser Ser His Asn Ser Arg Asp Ser Asn Ser Asn Ala Asn Thr Asn Ser210 215 220Ser Asn Asn Asn Ser Ile Asn His Asn Gly Ser Ser Gly Ser Leu Asp225 230 235 240Asp Tyr Val Arg Glu Asp Lys Ala Asp Glu Val Glu Lys Tyr His Gly245 250 255Asn Lys Ser Tyr Ser Ser Val Gly Ser Ser Ser Asn Thr Ala Thr Asp260 265 270Glu Asn Ile Ser Gln Lys Leu Lys Pro Ser Ser Leu Arg Phe Asp Glu275 280 285Ser Gln Asn Lys Arg Lys Arg Thr Gly Ala Pro Ser Glu Lys Phe Ala290 295 300Lys Arg Arg Gly Ser Arg Asp Ile Thr Pro Glu Asp Met Tyr Arg Ser305 310 315 320Ile Met Met Leu Gln Gly Glu His Glu Gly Thr Ala Glu Asp Glu Gly325 330 335Pro Pro Leu Val Ile Gly Ser Pro Thr Asp Gly Thr Arg Asn Met Asp340 345 350Asn Gly Ser Glu Ser Lys Ser Ala Pro Thr Met Asn Glu Ser Lys Ile355 360 365Arg Ile Gln Asp Lys Gly Ala Lys Ile Ser Leu Asp Gln Asp Ser Val370 375 380Leu His Ser Ser Asn Ser Ser Ala Cys Thr Ser Asp Glu Asp Ser Leu385 390 395 400Pro Thr Asn Phe Gly Gly Thr Thr Pro Ser Leu Ser Ala Lys Pro Arg405 410 415Glu Ser Ser Ser Gly Pro Ile Ala Phe Thr Glu Gly Glu Asn Ala Asp420 425 430Arg Lys Gln Gly Pro Ser Ile Gln Phe Asn Ile Thr Lys Pro Pro Arg435 440 445Lys Ala Ser Lys Ser Lys Arg Val Ser Thr Met Asp Asp Leu Asn Pro450 455 460
Arg Ser Ile Phe Pro His Gln Lys Lys Ser Ser Lys Gly Tyr Ile Met465 470 475 480Lys His Leu Pro Lys Ala Arg Arg Ile Arg Gln Gln Ile Lys Arg Arg485 490 495Leu Ser Thr Gly Ser Ile Asp Lys Asn Ser Ser Ser Asp Ala Leu Asp500 505 510Arg Gly Leu Ile Ser Gly Leu Asn Asp Asp Asp Asp Gly Asn Glu Gly515 520 525Asp Asn Met Glu Glu Tyr Phe Ala Asp Asn Glu Ser Gly Asp Glu Asp530 535 540Asp Arg Met Gln Gln Ser Glu Pro Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Leu545 550 555 560Lys Gln Gln Gln Gln His Gln Leu Gln Gln Asn Leu His Arg Met Tyr565 570 575Lys Thr Lys Ser Phe Asp Asp Asn Arg Ser Lys Pro Val Leu Met Glu580 585 590Arg Ser Lys Thr Ile Asp Met Ala Glu Ala Arg Asp Leu Asn Glu Leu595 600 605Ala Arg Thr Pro Asp Phe Gln Lys Met Val Tyr Lys Asn Trp Lys Ala610 615 620His His Arg Asn Lys Pro Asn Phe Lys Arg Arg Gly Trp Asn Gly Lys625 630 635 640Met Phe Glu His Gly Pro Tyr Thr Ser Asp Ser Asp His Asn Tyr Gln645 650 655Asp Asn Gly Asn Asn Ser Asn Ser Ile Val His Tyr Ala Glu Ser Ile660 665 670Leu His Arg Asp Asn Ser His Arg Asn Gly Ser Glu Asp Val Ser Ser675 680 685Asp Ser Asn Glu Thr Thr Tyr Pro Leu Asn Gly Asn Asn Asp His Ser690 695 700Gln Asn Asp Ala Asn Gly Tyr Pro Thr Tyr Asn Asp Glu Glu Glu Gly705 7l0715 720Tyr Tyr Gly Leu His Phe Asp Ser Asp Tyr Asn Leu Asp Pro His His725 730 735
Ala Leu Ser Ser Asn Ala Ser Lys Asn Tyr Leu Ser Trp Gln Pro Thr740 745 750Ile Gly Arg Asn Ser Asn Phe Leu Gly Leu Thr Arg Ala Gln Lys Asp755 760 765Glu Leu Gly Gly Val Glu Tyr Arg Ala Ile Lys Leu Leu Cys Thr Ile770 775 780Leu Val Val Tyr Tyr Val Gly Trp His Ile Val Ser Phe Val Met Leu785 790 795 800Val Pro Trp Ile Asn Leu Lys Lys His Tyr Ser Asp Ile Val Arg Ser805 810 815Asp Gly Val Ser Pro Thr Trp Trp Gly Phe Trp Thr Ala Met Ser Ala820 825 830Phe Asn Asp Leu Gly Leu Thr Leu Thr Pro Asp Ser Met Met Ser Phe835 840 845Asp Lys Ala Val Tyr Pro Leu Ile Val Met Ile Trp Phe Ile Ile Ile850 855 860Gly Asn Thr Gly Phe Pro Ile Leu Leu Arg Cys Ile Ile Trp Ile Met865 870 875 880Phe Lys Leu Ser Pro Asp Leu Ser Gln Met Arg Glu Ser Leu Gly Phe885 890 895Leu Leu Asp His Pro Arg Arg Cys Phe Thr Leu Leu Phe Pro Lys Ala900 905 910Ala Thr Trp Trp Leu Leu Leu Thr Leu Val Gly Leu Asn Phe Thr Asp915 920 925Trp Ile Leu Phe Ile Ile Leu Asp Phe Gly Ser Thr Val Val Lys Ser930 935 940Leu Ser Lys Gly Tyr Arg Val Leu Val Gly Leu Phe Gln Ser Val Ser945 950 955 960Thr Arg Thr Ala Gly Phe Ser Val Val Asp Leu Ser Gln Leu His Pro965 970 975Ser Ile Gln Val Ser Tyr Met Leu Met Met Tyr Val Ser Val Leu Pro980 985 990Leu Ala Ile Ser Ile Arg Arg Thr Asn Val Tyr Glu Glu Gln Ser Leu995 1000 1005
Gly Leu Tyr Gly Glu Met Gly Gly Lys Pro Glu Asp Thr Asp Thr10l010151020Glu Glu Asp Gly Asp Cys Asp Asp Glu Asp Asp Asp Asn Glu Glu102510301035Glu Glu Ser His Glu Gly Gly Ser Ser Gln Arg Gly Lys Ser Lys104010451050Lys Glu Thr Lys Lys Lys Lys Lys Arg Lys Glu Asn Glu Asn Pro105510601065Asn Glu Glu Ser Thr Lys Ser Phe Ile Gly Ala His Leu Arg Arg107010751080Gln Leu Ser Phe Asp Leu Trp Phe Leu Phe Leu Gly Leu Phe Ile108510901095Ile Cys Ile Cys Glu Arg Asp Lys Ile Lys Asp Ile Gln Arg Pro110011051110Asn Phe Asn Val Phe Thr Ile Leu Phe Glu Ile Val Ser Ala Tyr111511201125Gly Thr Val Gly Leu Ser Leu Gly Tyr Pro Asn Thr Asn Gln Ser113011351140Phe Ser Arg Gln Leu Thr Thr Leu Ser Lys Leu Ile Ile Ile Ala114511501155Met Leu Ile Arg Gly Lys Asn Arg Gly Leu Pro Tyr Ser Leu Asp116011651170Arg Ala Ile Ile Leu Pro Ser Asp Arg Leu Glu His Ile Asp His117511801185Ile Glu Asp Leu Lys Leu Lys Arg Gln Ala Arg Thr Asp Thr Asp119011951200Asp Pro Met Thr Glu His Leu Lys Arg Ser Ile Ser Asp Ala Lys120512101215His Arg Trp Asp Glu Leu Lys His Lys Arg Ser Leu Ser Arg Ser122012251230Ser Lys Arg Ser Thr Lys Thr Asn12351240<210>45<211>1828<212>DNA
<213>稻<400>45gcttgagtca tagggagaaa acaaatcgat catatttgac tcttttccct ccatctctct 60taccggcaaa aaaagtagta ctggtttata tgtaaagtaa gattctttaa ttatgtgaga120tccggcttaa tgcttttctt ttgtcacata tactgcattg caacaattgc catatattca180cttctgccat cccattatat agcaactcaa gaatggattg atatatcccc tattactaat240ctagacatgt taaggctgag ttgggcagtc catcttccca acccaccacc ttcgtttttc300gcgcacatac ttttcaaact actaaatggt gtgtttttta aaaatatttt caatacaaaa360gttgctttaa aaaattatat tgatccattt ttttaaaaaa aatagctaat acttaattaa420tcacgtgtta aaagaccgct ccgttttgcg tgcaggaggg ataggttcac atcctgcatt480accgaacaca gcctaaatct tgttgtctag attcgtagta ctggatatat taaatcatgt540tctaagttac tatatactga gatgaataga ataagtaaaa ttagacccac cttaagtctt600gatgaagtta ctactagctg cgtttgggag gacttcccaa aaaaaaaagt attagccatt660agcacgtgat taattaagta ctagtttaaa aaacttaaaa aataaattaa tatgattctc720ttaagtaact ctcctataga aaacttttac aaaattacac cgtttaatag tttggaaaat780atgtcagtaa aaaataagag agtagaagtt atgaaagtta gaaaaagaat tgttttagta840gtatacagtt ataaactatt ccctctgttc taaaacataa gggattatgg atggattcga900catgtaccag taccatgaat cgaatccaga caagtttttt atgcatattt attctactat960aatatatcac atctgctcta aatatcttat atttcgaggt ggagactgtc gctatgtttt 1020tctgcccgtt gctaagcaca cgccaccccc gatgcgggga cgcctctggc cttcttgcca 1080cgataattga atggaacttc cacattcaga ttcgataggt gaccgtcgac tccaagtgct 1140ttgcacaaaa caactccggc ctcccggcca ccagtcacac gactcacggc actaccaccc 1200ctgactccct gaggcggacc tgccactgtt ctgcatgcga agctatctaa aattctgaag 1260caaagaaagc acagcacatg ctccgggaca cgcgccaccc ggcggaaaag ggctcggtgt 1320ggcgatctca cagccgcata tcgcatttca caagccgccc atctccaccg gcttcacgag 1380gctcatcgcg gcacgaccgc gcacggaacg cacgcggccg acccgcgcgc ctcgatgcgc 1440gagcccatcc gccgcgtcct ccctttgcct ttgccgctat cctctcggtc gtatcccgtt 1500tctctgtctt ttgctccccg gcgcgcgcca gttcggagta ccagcgaaac ccggacacct 1560ggtacacctc cgccggccac aacgcgtgtc ccccctacgt ggccgcgcag cacatgccca 1620tgcgcgacac gtgcacctcc tcatccaaac tctcaagtct caacggtcct ataaatgcac 1680ggatagcctc aagctgctcg tcacaaggca agaggcaaga ggcaagagca tccgtattaa 1740ccagcctttt gagacttgag agtgtgtgtg actcgatcca gcgtagtttc agttcgtgtg 1800ttggtgagtg attccagcca agtttgcg 1828
權(quán)利要求
1.改良相對(duì)于相應(yīng)野生型植物的植物生長(zhǎng)特性的方法，包括增加植物中HKT蛋白或其同源物的活性，和任選地選擇具有改良的生長(zhǎng)特性的植物。
2.權(quán)利要求1的方法，其中通過優(yōu)選地在編碼HKT多肽或其同源物的基因座引入遺傳修飾來產(chǎn)生所述增加的活性。
3.權(quán)利要求2的方法，其中通過定點(diǎn)誘變、定向進(jìn)化、同源重組、TILLING和T-DNA激活中之一產(chǎn)生所述遺傳修飾。
4.改良相對(duì)于相應(yīng)野生型植物的植物生長(zhǎng)特性的方法，包括在植物中引入和表達(dá)HKT核酸分子或其功能性變體。
5.權(quán)利要求4的方法，其中所述功能性變體是分離的HKT核酸分子的部分或是能與HKT核酸分子雜交的序列。
6.權(quán)利要求4或5的方法，其中所述分離的HKT核酸分子或其功能性變體在植物中過表達(dá)。
7.根據(jù)權(quán)利要求4到6中任一項(xiàng)的方法，其中所述分離的HKT核酸分子或其功能性變體是植物來源的，優(yōu)選來自雙子葉植物，進(jìn)一步優(yōu)選來自十字花科，更加優(yōu)選核酸來自擬南芥。
8.根據(jù)權(quán)利要求4到7中任一項(xiàng)的方法，其中所述功能性變體編碼HKT直系同源物或旁系同源物。
9.根據(jù)權(quán)利要求4到8中任一項(xiàng)的方法，其中所述分離的HKT核酸分子或其功能性變體有效連接于種子特異性啟動(dòng)子。
10.根據(jù)權(quán)利要求4到9中任一項(xiàng)的方法，其中所述分離的HKT核酸分子或其功能性變體有效連接于胚和/或糊粉特異性啟動(dòng)子。
11.根據(jù)權(quán)利要求9或10的方法，其中所述啟動(dòng)子的表達(dá)模式與WSI18啟動(dòng)子相當(dāng)。
12.根據(jù)權(quán)利要求1到11中任一項(xiàng)的方法，其中所述改良的植物生長(zhǎng)特性是相對(duì)于相應(yīng)的野生型植物而言增加的產(chǎn)率。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述增加的產(chǎn)率是增加的生物量和/或增加的種子產(chǎn)率。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中所述增加的種子產(chǎn)率選自以下的一項(xiàng)或多項(xiàng)(i)增加的種子生物量；(ii)增加的種子數(shù)；(ii)增加的飽滿種子數(shù)；(iv)增加的種子大??；(v)增加的種子體積；(vi)增加的收獲指數(shù)(HI)和(vii)增加的千粒重(TKW)。
15.可根據(jù)權(quán)利要求1到14中任一項(xiàng)的方法獲得的植物或植物細(xì)胞。
16.構(gòu)建體，其包含(i)分離的HKT核酸分子或其功能性變體；(ii)能夠驅(qū)動(dòng)(i)中核酸序列表達(dá)的一個(gè)或多個(gè)種子特異性控制序列；和任選的(iii)轉(zhuǎn)錄終止序列。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的構(gòu)建體，其中所述種子特異性控制序列是胚和/或糊粉特異性啟動(dòng)子。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的構(gòu)建體，其中所述啟動(dòng)子的表達(dá)模式與WSI18啟動(dòng)子相當(dāng)。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的構(gòu)建體，其中所述啟動(dòng)子如SEQ IDNO45所示。
20.構(gòu)建體，含有與SEQ ID NO4基本上相似的表達(dá)盒。
21.使用根據(jù)權(quán)利要求15到20中任一項(xiàng)的構(gòu)建體轉(zhuǎn)化的植物或植物細(xì)胞。
22.產(chǎn)生具有改良生長(zhǎng)特性的轉(zhuǎn)基因植物的方法，該方法包括(i)向植物中引入分離的HKT核酸分子或其功能性變體；(ii)在促進(jìn)植物生長(zhǎng)和發(fā)育的條件下培養(yǎng)植物細(xì)胞。
23.相對(duì)于野生型植物具有改良生長(zhǎng)特性的轉(zhuǎn)基因植物或植物細(xì)胞，其中所述改良的生長(zhǎng)特性通過在所述植物或植物細(xì)胞中引入分離的HKT核酸分子或其功能性變體產(chǎn)生。
24.根據(jù)權(quán)利要求15、20或22的轉(zhuǎn)基因植物或植物細(xì)胞，其中所述植物是單子葉植物，如甘蔗，或其中所述植物是谷類，如稻、玉米、小麥、大麥、粟、黑麥、燕麥或高粱；或者其中所述植物細(xì)胞來自單子葉植物，如甘蔗，或其中所述植物細(xì)胞來自谷類，如稻、玉米、小麥、大麥、粟、黑麥、燕麥或高粱。
25.根據(jù)權(quán)利要求15、20、22或23中任一項(xiàng)的植物的可收獲部分和/或由所述植物或可收獲部分直接衍生的產(chǎn)品。
26.根據(jù)權(quán)利要求24的可收獲部分和/或由所述植物或可收獲部分直接衍生的產(chǎn)品，其中所述可收獲部分是種子。
27.分離的HKT核酸分子或其功能性變體或HKT多肽或其同源物在改良植物生長(zhǎng)特性，特別是增加產(chǎn)率，尤其是生物量和/或種子產(chǎn)率中的用途。
28.根據(jù)權(quán)利要求26的用途，其中所述增加的種子產(chǎn)率至少包括增加的飽滿種子數(shù)。
29.分離的HKT核酸分子或其功能性變體作為分子標(biāo)記的用途。
30.組合物，其包含分離的HKT核酸分子或其功能性變體，用于改良植物生長(zhǎng)及發(fā)育，優(yōu)選用作生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，更優(yōu)選用作生長(zhǎng)促進(jìn)劑。
31.組合物，其包含HKT蛋白或其同源物，用于改良植物生長(zhǎng)及發(fā)育，優(yōu)選用作生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，更優(yōu)選用作生長(zhǎng)促進(jìn)劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及通過增加植物中HKT蛋白或其同源物的活性來改良植物生長(zhǎng)特性的方法。一種這樣的方法包括向植物中引HKT核酸分子或其功能性變體。本發(fā)明還涉及具有改良生長(zhǎng)特性的轉(zhuǎn)基因植物，所述植物中HKT蛋白編碼核酸的表達(dá)增加。本發(fā)明也涉及在本發(fā)明方法中有用的構(gòu)建體。
文檔編號(hào)C12N15/29GK101090972SQ200580045195
公開日2007年12月19日 申請(qǐng)日期2005年10月27日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月29日
發(fā)明者A·I·桑茲莫林納羅 申請(qǐng)人:克羅普迪塞恩股份有限公司