專利名稱：：一種肺炎支原體快速鑒定培養藥敏試劑盒及檢測方法
技術領域：
：本發明屬于體外診斷
技術領域：
，具體涉及一種肺炎支原體快速鑒定培養藥敏試劑盒，本發明還涉及利用該試劑盒進行檢測的方法。
背景技術：
：肺炎支原體(M尸"e柳o"/")是一種特殊的微生物，是人類支原體肺炎的病原體。肺炎支原體既不是病毒，也不是細菌，而是介于病毒與細菌之間的一種微生物。支原體肺炎的病理改變以間質性肺炎為主，有時并發支氣管肺炎，稱為原發性非典型性肺炎。主要經飛沫傳染，潛伏期23周，發病率以青少年最高。臨床癥狀較輕，甚至根本無癥狀，若有也只是頭痛、咽痛、發熱、咳嗽等一般的呼吸道癥狀，但也有個別死亡報道。一年四季均可發生，多在秋冬時節。除呼吸道感染外，MP還可引起腦炎、腎炎、心肌炎、免疫性溶血性貧血等多種肺外疾病，對兒童健康有很大^害性。由于肺炎支原體對一般藥物耐藥，所以及時輛診可特效治療，縮短療程，減少并發癥。目前，國內支原體肺炎的診斷主要依靠血清學檢測。血清學檢測特異性高，但在發病714天后才可檢測到特異性抗體，故對早期診斷價值不大。若要明確診斷，需要進行病原體的檢測。比較常見的傳統診斷方法是，通過平板培養大約7天后，觀察菌落形態，通過鏡鑒和生化反應確定是否為肺炎支原體，再用紙片法分析其耐藥性，前后完成診斷大約需要30天的時間。對操作人員有較高要求，而且費時'費力，不適合臨陣快速診斷的要求，對臨床診斷的意義不大。'
發明內容本發明的目的是提供一種肺爽支原體快速鑒定if養藥敏試劑盒，解決了現有的診斷方法存在的費時費力問題。本發明的另一目的是提供利用該藥敏試劑盒進行檢測的方法。本發明所采用的技術方案是，一種肺炎支原體快速鑒定培養藥敏試劑盒，包括試劑盒和藥敏板，試劑盒包括盒體，盒體內放置有超純水試劑、石蠟油試劑、生理鹽水試劑和肺炎支原體快速鑒定培養基，藥敏板包括板體和板蓋，板體上設置有陰性檢測孔和陽性檢測孔，對應于陰性檢測孔和陽性檢測孔設置有若干個藥性對比孔，和te性檢測孔對應的藥性對比孔內裝有檢測藥物。'本發明所采用的另一技術方案是，利用該藥敏試劑盒進行檢測的方法，按以下步驟進行，步驟l:取超純水試劑和肺炎支原體快速鑒定培養基，把超純水試劑加入到肺炎支原體快速鑒定培養基中，完全溶解后，得到培養液；步驟2.:取上步得到的培養液50100^1,加入到板體上的陰性檢測孔中；'.步驟3:取一支生理鹽水試劑，用棉拭子吸附生理鹽水，在病變部位捻轉數次，取出棉拭子，立即置于步驟l得到的培養液內，攪動棉拭子提取其中液體，用加樣器吹打或用震蕩器震蕩混合得到混合后的培養液；步驟4:取上步得到的混合后的培養液，分別加入到板體上的陽性檢測孔和藥性對比孔中，每個孔中加50100pl;步驟5;取石蠟油試劑，在板體上的每個孔內滴加5(^1石蠟油，蓋上板蓋，把藥敏板置于3537。C孵箱地養；.步驟6:624小時內觀察讀取結果，檢測標準如下若陰性檢測孔不變色，陽性檢測孔不變色，則表明無肺炎支原體生長，余下孔不做判斷；若陰性檢測孔變色，則表明污染，試驗無效；若陰性檢測孔不變色，陽性檢測孔變色，表明樣品中有肺炎支原體，判斷余下各孔結果；a:和陰性檢測孔對應的藥性對比孔不變色，和陽性檢測孔對應的藥性對比孔不變色，表示對該藥性對比孔對應的藥物敏感；b:和陰性檢測孔對應的藥性對比孔不變色，和陽性檢測孔對應的藥性對比孔變色，表示對該藥性對比孔對應的藥物中等敏感；c:和陰性檢測孔對應的藥性對比孔變色，和陽性檢測孔對應的藥性對比孔變色，表示對該藥性對比孔對應的藥物不敏感。本發明的有益效果是，(1)改進肺炎支原體培養基，在其中添加快速增長因子，使得肺炎支原體的培養突破了傳統培養法的大約7天的時間限制，在624小時內即可完成肺炎支原體的培養，其成分主要包括蛋白胨、葡萄糖、酵母抽提物、指示劑、快速增長因子等。另外，.將培養基加工為干粉狀態，有利于產品的長期保存，用配套的超純水溶解后即可使用。同時配套有超純水，既為了方便使用，也為了避免不同地區水質的不同而導致的不可預期的結果，在最大限度上保證了本實用新型的產品穩定性。還配備有無菌生理鹽水，用于在采集樣本時濕潤棉拭子，可保證采集到的樣本短時間內的不會因為環境的改變而死亡，保證樣本培養結果的準確性。(2)藥敏檢測板所采用的方法原理，是在國際標準的NCCLS的微量液體稀釋法原理的基礎上改進而成。常規的微量液體稀釋法是將經過鏡鑒篩選的菌落進行擴大培養，再將培養好的培養液加入到事先稀釋好的抗生素的濃度梯度中，培養觀察結果。由于該.法操作步驟較多，完成一個病例的藥敏試驗大約需要78天左右的時間，并且培養成功率較低，且需要專門實驗人員進行操作。本發明藥敏板包括藥敏板體和板蓋，在藥敏板的左側第一列設有對照孔，包括陽性和陰性對照反應孔，從第二列開始的每列反應孔均對應于一種目前常用的抗生素藥物，包括羅紅霉素、紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素、乙酰螺旋霉素、克林霉素、環丙沙星、左氧氟沙星、加替沙星、交沙霉素、麥迪霉素、麥白霉素、泰利霉素、莫昔沙星。且每種抗生素在藥敏板上都有對應的高低兩個濃度反應L.,所有抗生素均采用熱包被法預先包被進藥敏板反應孔中。每個藥敏板體都有一個藥敏板蓋對應，可以防止外界的灰塵或其它雜物落入藥敏孔或者劃傷藥敏反應孔，影響藥敏試驗的準確性。同時配備了滅菌后的石蠟油，用于在藥敏試驗過程中，封閉藥敏反應孔，最大限度防止液體的揮發，影響結果的判斷。圖1是本發明藥敏試劑盒中試劑盒的結構示意圖；圖2是本發明藥敏試劑盒中藥.敏板的結構示意圖；圖3是本發明藥敏試劑盒中板蓋的結構示意圖。'圖中，l.盒體，2.超純水試劑，3.石蠟油試劑，4.生理鹽水試劑，5.肺炎支原體快速鑒定干粉培養基，6.陰性檢測孔，7.陽性檢測孔，8.藥性對比孔，9.板體，IO.板蓋。具體實施例方式下面結合附圖和具體實施方式對本發明進行詳細說明。本發明肺炎支原體快速鑒定培養藥敏試劑盒包括試劑盒部分和藥敏板部分，試劑盒的結構如圖1所示，包括盒體1，盒體1內放置有兩個超純水試劑2、一個石蠟油試劑3、一個生理鹽水試劑4和一個肺炎支原體快速鑒定培養基5，藥敏板的結構如圖2及圖3所示，包括板體9和板蓋10，板體9上設置有陰性檢測孔6和陽性檢測孔7，對應于陰性檢測孔6和陽性檢測孔7設置有兩行藥性對比孔8，和陽性檢測孔7對應的一行藥性對比孔8內裝有檢測藥物。利用本發明藥敏試劑盒進行檢測的方法，具體按照以下步驟實施步驟l:取一支超純水試劑2和一支肺炎支原體快速鑒定培養基5，把超純水加入到肺炎支原體快速鑒定培養基5中，完全溶解后，得到培養液；步驟2:取上步得到的培養液.5010(Hd,加入到藥敏板上的陰性檢測孔6中；步驟3:取一支生理鹽水試劑4,用棉拭子吸附生理鹽水，在病變部位捻轉數次，取出棉拭子，立即置于步驟1得到的培養液內，攪動棉拭子數次，提取棉拭子，對著瓶壁盡量擠壓出其中液體，取出棉拭子，用加樣器吹打數次或用震蕩器震蕩混勻，得到混合后的培養液；步驟4:取上步得到的混合后的培養液50100jil，分別加入到藥敏板上的陽性檢測孔7和藥性對比孔8-中；步驟5:取石蠟油試劑3，在藥敏板上的每個孔內滴加50pil石蠟油，蓋上板蓋IO，把藥敏板置于3537'C孵箱培養；步驟6:624小時內觀察讀取結果，檢測標準如下(1)若陰性檢測孔6不變色，陽性檢測孔7不變色，則表明無肺炎支原體生長，余下孔不做判斷；(2)若陰性檢測孔6變色，則表明污染，試驗無效；(3)若陰性檢測孔6不變色，陽性檢測孔7變色，表明樣品中有肺炎支原體，判斷余下各孔結果；a:和陰性檢測孔6對應的藥性對比孔8不變色，和陽性檢測孔7對應的藥性對比孔8不變色，表示對該列對應的藥物敏感；b:和陰性檢測孔6對應的藥性對比孔8不變色，和陽性檢測孔7對應的藥性對比孔8變色，表示對該列對應的藥物中等敏感；c:和陰性檢測孔6對應的藥性對比孔8變色，和陽性檢測孔7對應的藥性對比孔8變色，表示對該列對應的藥物不敏感。實施例取一支超純水試劑2和一支肺炎支原體快速鑒定培養基5，把1.5ml超純水加入到肺炎支原體快速鑒定培'養基5中，完全溶解后，得到培養液；取上步得到的培養液5(HU，加入到藥敏板上的陰性檢測孔6中；取一支生理鹽水試劑4，用棉拭子吸附生理鹽水，在病變部位捻轉數次，取出棉拭子，立即置于步驟l得到的培養液內，攪動棉拭子數次，提取棉拭子，對著瓶壁盡量擠壓出其中液體，取出棉拭子，用加樣器吹打數次或用震蕩器震蕩混勻，得到混合后的培養液；取上步得到的混合后的培養液50^11,分別加入到藥敏板上的陽性檢測孔7和藥性對比孔8中；取石蠟油試劑3，在藥敏板上的每個孔內滴加50Kil石蠟油，蓋上板蓋IO,把藥敏板置于3537'C孵箱培養；6-24小時內觀察讀取結果，'其中藥敏板藥物英文縮寫及中文對照<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>檢測結果如下-陰性檢測孔6為紅色或草綠色，陽性檢測孔為7黃色，表明樣品中有肺炎支原體，判斷余下各孔結果ERY藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對ERY藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對ERY藥物中等敏感;藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對ERY藥物不敏感；ROX藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表，該肺炎支原體對ROX藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對ROX藥物中等敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對ROX藥物不敏感；CLA藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對CLA藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對CLA藥物中等敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對CLA藥物不敏感；AZI藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對AZI藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對AZI藥物中等敏感;藥物對，比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對AZI藥物不敏感；ACE藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對ACE藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對ACE藥物中等敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對ACE藥物不敏感；CLI藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對CLI藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對CLI藥物中等敏感;藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對CLI藥物不敏感；LEV藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對LEV藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對LEV藥物中等敏感;藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對LEV藥物不敏感；SPA藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對SPA藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對SPA藥物中等敏感;藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對SPA藥物不敏感；GAT藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對GAT藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對GAT藥物中等敏感;藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對GAT藥物不敏感；JOS藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表辨該肺炎支原體對JOS藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對JOS藥物中等敏感;藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對JOS藥物不敏感；MID藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對MID藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對MID藥物中等熟感;藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對MID藥物不敏感；MEL藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對MEL藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對MEL藥物中等敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，.表明該肺炎支原體對MEL藥物不敏感；TEL藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對TEL藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對TEL藥物中等敏感;藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對TEL藥物不敏感；MOX藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為紅色或草綠色，表明該肺炎支原體對MOX藥物敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為紅色或草綠色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對MOX藥物中等敏感；藥物對比孔8對應于陰性檢測孔6為黃色，對應于陽性檢測孔7為黃色，表明該肺炎支原體對MOX藥物不敏感。本發明肺炎支原體快速鑒定培養藥敏試劑盒及檢測方法，操作簡單且檢測周期短。權利要求1.一種肺炎支原體快速鑒定培養藥敏試劑盒，其特征在于，包括試劑盒和藥敏板，所述試劑盒包括盒體(1)，盒體(1)內放置有超純水試劑(2)、石蠟油試劑(3)、生理鹽水試劑(4)和肺炎支原體快速鑒定培養基(5)，所述藥敏板包括板體(9)和板蓋(10)，板體(9)上設置有陰性檢測孔(6)和陽性檢測孔(7)，對應于陰性檢測孔(6)和陽性檢測孔(7)設置有若干個藥性對比孔(8)，和陽性檢測孔(7)對應的藥性對比孔(8)內裝有檢測藥物。2.—種利用權利要求1所述的肺炎支原體快速鑒定培養藥敏試劑盒進行檢測的方法，其特征在于，包括試劑盒初藥敏板，所述試劑盒包括盒體(l)，盒體(1)內放置有超純水試劑(2)、石蠟油試劑(3)、生理鹽水試劑(4)和肺炎支原體快速鑒定培養基(5)，所述藥敏板包括板體(9)和板蓋(10)，板體(9)上設置有陰性檢測孔(6.)和陽性檢測孔(7)，對應于陰性檢測孔(6)和陽性檢測孔(7)設置有若干個藥性對比孔(.8)，和陽性檢測孔(7)對應的藥性對比孔(8)內裝有檢測藥物，具體按照以下步驟實施，步驟1:取超純水試劑(2)和肺炎i原體快速鑒定培養基(5)，把超純水試劑(2)加入到肺炎支原體快速鑒定培養基(5)中，完全溶解后，得到培養液；步驟2:取上步得到的培養液.50100nl，加入到板體(9)上的陰性檢測孔(6)中；步驟3:取一支生理鹽水試劑(4)，用棉拭子吸附生理鹽水，在病變部位捻轉數次，取出棉拭子，立即置于步驟l得到的培養液內，攪動棉拭子提取其中液體，用加樣器吹打或用震蕩器震蕩混合得到混合后的培養液；步驟4:取上步得到的混合后的培養液，分別加入到板體(9)上的陽性檢測孔(7)和藥性對比孔(8)中，每個孔中加50100pl;步驟5:取石蠟油試劑(3)，在板#(9)上的每個孔內滴加50^1石蠟油，蓋上板蓋(10)，把藥敏板置于3537"C孵箱培養；步驟6:624小時內觀察讀取結果，檢測標準如下若陰性檢測孔(6)不變色，陽性檢測孔(7)不變色，則表明無肺炎支原體生長，余下孔不做判斷;.'若陰性檢測孔(6)變色，則表明污染，試驗無效；若陰性檢測孔(6)不變色，陽性檢測孔(7)變色，表明樣品中有肺炎支原體，判斷余下各孔結果；'a:和陰性檢測孔(6)對應的藥性對比孔(8)不變色，和陽性檢測孔(7)對應的藥性對比孔(8)不變色，表示對該藥性對比孔(8)對應的藥物敏感；.b:和陰性檢測孔(6)對應的藥性對比孔(8)'不變色，和陽性檢測孔(7)對應的藥性對比孔(8)變色，表示對該藥性對比孔(8)對應的藥物中等敏感；c:和陰性檢測孔(6)對應的藥性對比孔(8)變色，和陽性檢測孔(7)對應的藥性對比孔(8)變色，表示對該藥性對比孔(8)對應的藥物不敏感。全文摘要本發明公開了一種肺炎支原體快速鑒定培養藥敏試劑盒，包括試劑盒和藥敏板，試劑盒包括盒體，盒體內放置有超純水試劑、石蠟油試劑、生理鹽水試劑和肺炎支原體快速鑒定培養基，藥敏板包括板體和板蓋，板體上設置有陰性檢測孔和陽性檢測孔，對應于陰性檢測孔和陽性檢測孔設置有若干個藥性對比孔，和陽性檢測孔對應的藥性對比孔內裝有檢測藥物。本發明還公開了一種檢測方法，首先制備培養液，將培養液加入陰性檢測孔中，提取病變溶液加入到培養液中制得混合溶液，將混合溶液加入到陽性檢測孔和藥性對比孔中進行培養，后讀取結果。本發明肺炎支原體快速鑒定培養藥敏試劑盒及檢測方法，操作簡單且檢測周期短。文檔編號C12R1/35GK101555517SQ20091002255公開日2009年10月14日申請日期2009年5月15日優先權日2009年5月15日發明者敏王,錢葉林申請人:錢葉林;王敏