專利名稱：一種制備皮膚長壽因子肽的工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種制備具有多種生理活性的皮膚長壽因子肽的工藝，尤其是，一種 制備天然的促進皮膚健康長壽的新型肽類產品的工藝。
背景技術：
追求健康也許是人類唯一沒有時間與疆界藩籬的共同理想，對于無往而不勝的人 來說，唯一無法征服的大概就是健康了。人體是一個有機的整體，要想擁有健康的身體，就 必須要使人體的最大器官一一皮膚獲得健康。皮膚在身體的最外一層覆蓋著，它直接接觸外界各種物質，包括陽光、灰塵、空氣 中的化學物質、化妝品，感受溫度及濕度的變化，因此，皮膚很容易受到外界的刺激或影響。 而這些物質有些對身體有益，有些也會對身體機能造成一定危害。為了保持皮膚的健康長 壽，人們正不斷從各種化妝品成分的改進過程中尋求解決的辦法。目前，國際市場銷售的化 妝品用的蛋白質類原料近50種。作為化妝品原料，一種含有53個氨基酸的肽類物質——表皮生長因子是備受推崇 的，然而它目前主要采用基因工程合成，IOOyg約為100美金，價格昂貴，極大地限制了它 的應用。因此，亟待提出一種新型的肽類物質的制造工藝，以解決現有技術中的缺點。

發明內容
有鑒于此，本發明的一個目的在于提供一種制備具有多種生理活性的皮膚長壽因 子肽的工藝。為達到上述目的，本發明采用的技術方案是一種制備皮膚長壽因子肽的工藝，其 包括有以下步驟?；罨霭l菌(CoL2-21)種子液15 30小時。配制發酵培養基“1. 0 4. 0% PTS多肽1. 0 3. 0%葡萄糖”。發酵培養基滅菌后降溫至15 40°C，接入活化好 的種子液。間歇攪拌，15 40°C培養1 4天后停止發酵，發酵液沸水浴10 40分鐘破 壁，離心收集上清液。上清液濃縮、噴霧干燥，制得成品。進一步的，在不同實施方式中，活化出發菌(CoL2_21)種子液15 30小時。進一步的，在不同實施方式中，配制的發酵培養基中的成分比例為“1. 0 4. 0% PTS多肽1.0 3.0%葡萄糖”。進一步的，在不同實施方式中，發酵培養基在發酵罐中滅菌后降溫至15 40°C。進一步的，在不同實施方式中，間歇攪拌，15 40°C培養1 4天后停止發酵。進一步的，在不同實施方式中，發酵液沸水浴10 40分鐘破壁。進一步的，有本發明涉及的皮膚長壽因子肽的制備工藝獲得的皮膚長壽因子肽， 其具體屬性如下物理性質淡黃色，粉末，具有甜鮮口味，溶液澄清透明；主要成分為多肽含量彡85%，羥脯氨酸彡6.0%, GSH含量彡0.9% ；多糖含量
3^ 0. 7% ；分子量范圍為200 lOOODa。為評估本發明涉及的皮膚長壽因子肽的制備工藝獲得的皮膚長壽因子肽產品的 性能，進行了以下實驗。1體表保濕功能實驗按照1 4的料液比配制受試物溶液，通過SK-II水分測定儀測定其體表保濕效 果，結果證明皮膚長壽因子肽的體表保濕效果遠強于市售多肽產品。2體外保濕功能實驗按照1 4的料液比配制受試物溶液，通過干燥器模擬恒溫恒濕環境；用3M膠布 模擬人體皮膚涂抹受試物溶液；單位時間測量失水量，折算失水率；結果證明皮膚長壽因 子肽的體外失水率遠低于市售多肽產品，有良好的保濕效果。3清除自由基DPPH能力的測定方法測定相同濃度的皮膚長壽因子肽和GSH的DPPH自由基清除率，結果如下表1皮膚長壽因子肽DPPH自由基清除率(X士S，n = 6) 由表1可見皮膚長壽因子具有與GSH相當的DPPH自由基清除率。相對于現有技術，本發明涉及的皮膚長壽因子肽制造工藝，利用發酵法對含多肽 的溶液進行發酵，通過發酵過程中產生的GSH，可以有效地彌補PTS多肽抗氧化能力的不 足，在使得皮膚長壽因子肽擁有優良的保濕效果的同時也具有了抗氧化能力。


圖1是本發明涉及皮膚長壽因子肽制造工藝的流程框圖。
具體實施例方式化妝品原料中，最早廣泛應用的是膠原蛋白，這類產品性能溫和、功能多、使用安 全、符合當代化妝品的潮流，成為高檔化妝品的重要原料。如，美國CTFA化妝品原料手冊錄 用的天然物質和日本《功能性化妝品原料》中選用的天然物質中都有膠原蛋白或其水解產 物(羥脯氨酸。脯氨酸、絲氨酸)。隨著生物酶工程技術的發展，人們對由膠原蛋白降解得到的小分子肽有了深入地 認識，并逐步熱衷于開發含有小分子肽的外用及內服的化妝品。而化妝品原料市場中有些膠原肽就是從深海魚皮、魚鱗、魚骨中提取的。而且國內很多知名的化妝品商家，在其生產 的高檔化妝品中都添加了水產膠原肽作為它的功效因子。經對比實驗證明皮膚原蛋白對 皮膚具有良好的親和性和保濕性。能滋潤肌膚，賦予其平滑感覺，加入護膚類化妝品中，與 其它原料配伍性佳。協同效應良好，能對受損肌膚有較好的修復效果.使用1個月后，使用 者普遍反應膚感細膩、潤滑、細小皺紋得到很好的舒展，膚色有所增白。酵母是世界上研究最多的微生物之一，是當今生物技術產品研究開發的熱點和現 代生物技術發展、基因組研究的模式系統。由于酵母已傳統地應用于食品工業的面包制作 和釀造領域，它有著非常天然良好的標簽形象，所以也把酵母抽提物作為水解植物蛋白和 味精的替代品。國外的酵母抽提物應用非常廣泛，市場也比較成熟，年產銷量超過10萬噸。 歐洲和日本的抽提物產品有一定的差別。歐洲的產品除了普通的純酵母抽提物以外，還有 一些特殊的風味型產品，是采用酵母抽提物加上合適的香精制成，往往具有肉類、煙熏味等 特有的風味特征。在應用上，歐洲通常將酵母抽提物作為酸水解植物蛋白和MSG的替代品。 日本的產品一般顏色較淺、溶解性很好，并且在營養上作了強化，例如高谷胱甘肽含量的酵 母抽提物。在國內，高純度的谷胱甘肽主要用來做藥品，國家的食品添加劑目錄中并未明確 將其列入，只稱其為一種功效因子。然而，高谷胱甘肽含量的酵母抽提物已列入國家允許使 用的食品添加劑目錄。為皮膚長壽因子肽的應用鋪平了道路。而本發明就是利用發酵法對含多肽的溶液進行發酵來制備皮膚長壽因子肽，本發 明涉及的流程框圖請參閱圖1所示。以下涉及的各實施例均是根據圖1所示的流程完成的。 而通過下述實施實例將有助于理解本發明，但不限制本發明的內容。實施實例1 500ml培養基(3. 0% PTS多肽，2. 0%葡萄糖)，分裝到17個300ml三角瓶中(約 30ml/瓶)滅菌降溫后接入CoL2-21，30°C搖床培養活化20小時制備種子液。135gPTS多肽90g葡萄糖3. 5L水配制優化培養基，轉入發酵罐121°C滅菌20 分鐘后降溫至30°C左右，接入活化20小時的種子液，間歇攪拌發酵2天。2天后，發酵罐夾套通入蒸汽升溫至100攝氏度左右，維持10分鐘后取出發酵液 5300ml，離心收集上清液濃縮干燥，得產物169. 2g。所制備的皮膚長壽因子產品指標如下 實施實例2 500ml培養基(3. 0% PTS多肽，3. 0%葡萄糖)，分裝到17個300ml三角瓶中(約 30ml/瓶)滅菌降溫后接入CoL2-21，30°C搖床培養活化24小時制備種子液。135gPTS多肽135g葡萄糖3. 5L水配制優化培養基，轉入發酵罐121°C滅菌 30min后降溫至30°C左右，接入活化24小時的種子液，間歇攪拌發酵3天。3天后發酵罐夾套通入蒸汽升溫至100攝氏度左右，維持20分鐘后取出發酵液 5410ml，離心收集上清液濃縮干燥，得產物165. 9g。所制備的皮膚長壽因子產品指標如下
實施實例3 500ml優化培養基(2. 0% PTS多肽，3. 0%葡萄糖)，分裝到17個300ml三角瓶中 (約30ml/瓶)滅菌降溫后接入CoL2-21，28°C搖床培養活化22h制備種子液。90gPTS多肽135g葡萄糖3. 5L水配制優化培養基，轉入發酵罐121°C滅菌20 分鐘后降溫至30°C左右，接入活化22小時的種子液，間歇攪拌發酵3天。3天后發酵罐夾套通入蒸汽升溫至100攝氏度左右，維持30分鐘后取出發酵液 5300ml，離心收集上清液濃縮干燥，得產物167. 4g。所制備的皮膚長壽因子產品指標如下
權利要求
一種制備皮膚長壽因子肽的工藝，依次包括下述步驟活化出發菌(CoL2-21)種子液15～30小時；配制發酵培養基“1.0～4.0％PTS多肽1.0～3.0％葡萄糖”；發酵培養基滅菌后，降溫至15～40℃，接入活化好的種子液；間歇攪拌，15～40℃培養1～4天后停止發酵，發酵液沸水浴10～40分鐘破壁，離心收集上清液；對上清液進行濃縮、噴霧干燥，制得成品。
2.根據權利要求1所述的制備工藝，其特征在于制備獲得的皮膚長壽因子肽，其中多 肽含量彡85%、羥脯氨酸彡6.0%、GSH含量彡0.9%、多糖含量彡0.7%。
3.根據權利要求1所述的制備工藝，其特征在于制備獲得的皮膚長壽因子肽，其中分 子量范圍為200 lOOODa。
4.根據權利要求1所述的制備工藝，其特征在于活化出發菌(CoL2-21)種子液15 30小時。
5.根據權利要求1所述的制備工藝，其特征在于所述配制的發酵培養基中的成分比 例為“1. 0 4. 0% PTS多肽1. 0 3. 0%葡萄糖”。
6.根據權利要求1所述的制備工藝，其特征在于所述發酵培養基在發酵罐中滅菌后 降溫至15 40°C。
7.根據權利要求1所述的制備工藝，其特征在于間歇攪拌，15 40°C培養1 4天 后停止發酵。
8.根據權利要求1所述的制備工藝，其特征在于所述發酵液沸水浴10 40分鐘破壁。
全文摘要
本發明公開一種制備皮膚長壽因子肽的工藝，其包括有以下步驟，將種子液搖床活化15～30小時，然后接種到含有PTS多肽的發酵液中。發酵液15～40℃間隙攪拌培養1～4天。然后將發酵液沸水浴破壁10～40分鐘，離心收集上清液。對其濃縮干燥得到蛋白質含量高，功能活性好的皮膚長壽因子肽。本發明通過發酵法制備皮膚長壽因子肽，使得其具有抗氧化、保濕等多種活性功能。
文檔編號C12R1/645GK101870996SQ200910061718
公開日2010年10月27日 申請日期2009年4月21日 優先權日2009年4月21日
發明者陳棟梁 申請人:陳棟梁